单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转染联合药物对卵巢癌细胞的杀伤效应

目的：探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ＴＫ）基因转染联合抗病毒药物羟基无环鸟苷（ＧＣＶ）对人卵巢癌细胞系的杀伤效应。方法：采用基因工程技术，将ＨＳＶ－ＴＫ基因的ＤＮＡ序列插入逆转录病毒载体ｐＬＮＳＸ的ＨｉｎｄⅢ位点，构建重组体ｐＬＮＳ／ＨＳＶ－ＴＫ，并采用磷酸钙介导贴壁细胞基因转染法将重组体导入ＰＡ３１７包装细胞，建立重组逆转录病毒载体分泌细胞株ＰＡ３１７／ＴＫ。并采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ系统对人类卵巢癌ＡＯ细胞系的生长抑制率。结果：重组逆转录病毒载体ｐＬＮＳ／ＨＳＶ－ＴＫ能有效地将ＨＳＶ－ＴＫ基因导入ＡＯ细胞系内并使其获得对ＧＣＶ的敏感性。当培养液内ＧＣＶ达４０μｍｏｌ时，其对转ＨＳＶ－ＴＫ基因后ＡＯ细胞的生长抑制率为９８．０％。结论：ＡＯ细胞转染ＨＳＶ－ＴＫ基因后，能有效地被ＧＣＶ杀灭。     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转染联合药物对卵巢癌细胞的杀伤…

目的：探讨包疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ＴＫ）基因转染联合抗病毒药物羟基无环鸟苷（ＧＣＶ）对人卵巢癌细胞系的杀伤效应。方法：采用基因工程技术，将ＨＳＶ－ＴＫ基因的ＤＮＡ序列插入逆洋病毒载体ｐＬＮＳＸ的ＨｉｎｄⅢ位点，构建重组体ｐＬＮＳ／ＨＳＶ＝ＴＫ，并采用磷酸钙介导贴壁细胞基因转染法将重组体导入ＰＡ３１７我装细胞，建立重组逆转录病毒载体分泌细胞株ＰＡ３１７／ＴＫ。并采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测ＨＳＶ－     

Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转染人卵巢癌细胞株后联合抗肿瘤药物诱导该细胞株凋亡的研究

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病毒蛋白22增强单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦基因治疗系统杀伤卵巢癌细胞的体内研究

目的　探讨病毒蛋白 2 2 (VP2 2 )的细胞间传递作用 ,以及其促进单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV TK ) 更昔洛韦 (GCV)基因治疗系统对卵巢癌移植瘤细胞的体内杀伤效应。方法　用慢病毒感染卵巢癌 3AO细胞 ,形成携带HSV TK基因的 3AO细胞 (3AO TK)及携带HSV VP2 2 TK融合基因的3AO细胞 (3AO VP2 2 TK)。分别在裸鼠皮下接种 10 %含卵巢癌 3AO TK(3AO TK组 )或 3AO VP2 2 TK(3AO VP2 2 TK组 )的混合细胞 ,并以接种单纯 3AO细胞裸鼠为对照 (3AO组 ) ,每组裸鼠 10只。当肿瘤体积达 15 0mm3后 ,分别于腹腔注射GCV 10mg kg、5 0mg kg。结果　注射 10mg kgGCV后 ,3AO TK组与 3AO VP2 2 TK组肿瘤体积、重量比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ,3AO VP2 2 TK组肿瘤生长明显受到抑制 ;注射 5 0mg kgGCV后 ,两组肿瘤体积、重量比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。注射GCV 10mg kg后 ,3AO TK组肿瘤抑制率为 37 7% ,3AO VP2 2 TK组肿瘤抑制率为 91 5 % ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ;注射GCV 5 0mg kg后 ,3AO TK组肿瘤抑制率为 81 8% ,3AO VP2 2 TK组肿瘤抑制率为 96 7% ,两组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　VP2 2介导的自杀基因产物细胞间扩散作用 ,可明显加强对体内肿瘤细胞的杀伤效应。     

逆转录病毒介导Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因转导卵巢癌细胞的研究

目的：探讨将Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）／丙氧鸟苷基因治疗系统应用于卵巢癌的治疗。方法：应用产病毒包装细胞（ＶＰＣ）／ＨＳＶ－ｔｋａ和ＶＰＣ／ＨＳＶ－ｔｋｃ的培养液分别感染卵巢上皮癌细胞系ＡＯ和３ＡＯ，以Ｇ－４１８筛选转导阳性克隆，并以丙氧乌苷杀伤阳性克隆。结果：ＶＰＣ／ＨＳＶ－ｔｋｃ培养液对ＡＯ细胞的感染滴度为９．３×１０００００；以１∶１０００稀释度的ＶＰＣ／ＨＳＶ－ｔｋｃ培养液与以１∶１０稀释度的ＶＰＣ／ＨＳＶ－ｔｋａ培养液作转导所获得的阳性克隆数相近；且所有阳性克隆在含有１０μｇ／ｍｌ丙氧鸟苷的培养液中均发生完全死亡。结论：ＨＳＶ－ｔｋ／丙氧鸟苷系统在卵巢癌治疗中具有良好的应用前景     

单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因/羟甲基无环鸟苷系统对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的作用

目的观察单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因（ＨＳＶ１ｔｋ）／羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）系统对人卵巢癌的体内治疗作用。方法先将人卵巢癌细胞ＡＯ及携有ＨＳＶ１ｔｋ基因的ＡＯ细胞（ＡＯ／ＨＳＶ１ｔｋｃ）注射于裸鼠皮下,形成肿瘤后再移植于裸鼠网膜,并以病毒生产细胞（ＶＰＣ／ＨＳＶ１ｔｋｃ）的培养液对ＡＯ网膜移植瘤进行体内转染,然后以ＧＣＶ对体外ＡＯ／ＨＳＶ１ｔｋｃ转移的肿瘤及经体内转染的ＡＯ肿瘤进行治疗。结果ＨＳＶ１ｔｋ／ＧＣＶ基因治疗系统对ＡＯ裸鼠网膜移植瘤的抑制率为４６．８％,而ＡＯ／ＨＳＶ１ｔｋｃ裸鼠网膜移植瘤经ＧＣＶ治疗后,多数仅残留显微镜下可见的癌灶。结论ＧＣＶ在腹腔内对携有ＨＳＶ１ｔｋ基因的肿瘤具有更为显著的杀伤效应;ＨＳＶ１ｔｋ／ＧＣＶ基因治疗系统在卵巢癌的治疗上可能具有良好的应用前景。     

羟甲基无环鸟苷对携有Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶基因的卵巢癌细胞的体外杀伤作用

目的　观察羟甲基无环鸟苷(GCV) 对转导携有Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶基因( HSV1 - tk) 的AO、3AO 细胞外杀伤作用。方法　分别在携有HSV1 - tk 基因的AO、3AO 细胞培养液中加入不同浓度的GCV,绘制剂量效应曲线,并以荧光细胞激活分选仪(FACS) 测定凋亡细胞比例及细胞周期比例,以光镜及电镜观察细胞形态变化,以DNA 荧光染色观察细胞核内染色质变化。结果　GCV 在体外对于携有HSV1 - tk 基因的AO、3AO 细胞的半数抑制浓度均介于10 - 1 ～10 - 2μg/ml 之间,用药后S 期细胞比例显著增高。结论　GCV 在体外可高效杀伤携有HSV1 - tk 基因的卵巢癌细胞。