γ-晶状体蛋白致先天性白内障机制研究

晶状体蛋白是晶状体的最主要结构蛋白,其中γ-晶状体蛋白在总的晶状体蛋白中占1/4.近年来,定位于γ-晶状体蛋白基因簇上的突变在先天性显性白内障家系中的报告迅速增多,使其成为研究先天性白内障发生发展机制的一个热点.这些γ-晶状体蛋白的突变,主要通过构象改变,溶解度降低,自我聚集以及与其它晶状体蛋白的相互作用改变,最终导致先天性白内障发生.本文归纳γ-晶状体蛋白基因突变类型,并对γ-晶状体蛋白致先天性白内障的机制研究进展作一综述.     

特殊表型先天性白内障小鼠晶状体中细胞缝隙连接蛋白的表达

目的观察γD-晶状体蛋白点突变导致的小鼠先天性白内障表型,检测该特殊表型先天性白内障小鼠晶状体中细胞缝隙连接蛋白（Cx）的表达。方法观察突变小鼠出生后不同时间晶状体的形态学变化;应用免疫荧光染色法分析晶状体内Cx46和Cx50的表达和分布。结果突变小鼠模型呈稳定一致的显性遗传,出生后7 d即表现为明显的核性白内障,出生后21 d纯合子小鼠晶状体混浊严重,后囊膜自然破裂;免疫荧光染色分析发现突变小鼠晶状体内Cx46和Cx50的表达均出现下降,越靠近晶状体中心部下降越明显。结论γD-晶状体蛋白点突变可导致晶状体后囊膜破裂这种特殊表型的先天性白内障,白内障的形成和后囊膜破裂的产生与晶状体内Cx46和Cx50的表达下降有关。     

先天性核性白内障家族的γ晶状体蛋白基因筛查

目的 在一例国人常染色体显性遗传的先天性核性白内障家族进行γ晶状体蛋白基因筛查,探讨基因与该家族发病的相关性.方法 运用直接测序的方法,在一例国人常染色体显性遗传的先天性核性白内障家族进行CRYGA、CRYGB、CRYGC、CRYGD的基因筛查,确定基因变异与该家族的关系.结果 在该家族中发现了9种,核苷酸序列改变,它们分别是:CRYGA的1986→A、196T→C(L48P)、CRYGB的2218→2219insC、2437C→T、5391C→A(L111I)、CRYGC的18782T→G和CRYGD的286T→C、517→、570C→T,其中两种导致了氨基酸的改变.但这些基因突变并没有在该家族中和疾病共分离.结论 初步排除γ晶状体蛋白基因与该先天性核性白内障家族有关.该家族白内障的发生可能由其他位置的基因突变引起.     

晶状体蛋白基因与先天性白内障

晶状体蛋白是晶状体的结构蛋白,其在晶状体中的丰富含量以及自身特殊的空间结构,对维持晶状体透明起着重要作用。近年来,研究发现多种晶状体蛋白编码基因的突变参与遗传性先天性白内障的形成与发展。本文通过比较多个人类白内障家系和小鼠先天性白内障模型晶状体蛋白基因突变形式,试图对其致病特征和致病机制及其相关方面的研究进展作一综述。     

先天性白内障一家系晶状体蛋白突变基因筛查

目的对先天性白内障一家系进行晶状体蛋白致病基因的初步筛查。方法通过聚合酶链反应（PCR）对先天性白内障一家系中4代8例患者进行CRYAA、CRYAB、CRYA1／A3、CRYBB2、CRYGC和CRYGD6个候选基因的外显子及内含子扩增,扩增产物进行直接测序,测序结果与GeneBank中原始序列进行BLAST比对分析。结果该家系每代均有先天性白内障患者,遗传方式为常染色体显性遗传。该家系的CRYAA、CRYAB、CRYA1／A3、CRYBB2、CRYGC和CRYGD6个晶状体蛋白候选基因的外显子及其邻近的内含子与基因库对照未发现任何突变。结论CRYAA、CRYAB、CRYA1／A3、CRYBB2、CRYGC和CRYGD为该先天性白内障家系的非致病基因。     

先天性白内障与晶状体蛋白的相关性研究

晶状体蛋白是人晶状体内主要的结构蛋白。晶状体蛋白结构和功能的改变可以引起晶状体混浊。晶状体蛋白基因不同位点的突变可以导致晶状体蛋白结构和功能相应的改变,从而表现为不同类型的晶状体混浊。本文就先天性白内障的表现型与各晶状体蛋白基因突变的相关性及其可能作用机制作一综述。     

晶状体蛋白基因与先天性白内障

晶状体蛋白是晶状体的结构蛋白，其在晶状体中的丰富含量以及自身特殊的空间结构，对维持晶状体透明起着重要作用。近年来，研究发现多种晶状体蛋白编码基因的突变参与遗传性先天性白内障的形成与发展。本通过比较多个人类白内障家系和小鼠先天性白内障模型晶状体蛋白基因突变形式，试图对其致病特征和致病机制及其相关方面的研究进展作一综述。     

αβ-晶状体蛋白在先天性白内障大鼠晶状体中免疫活性的变化

目的观察正常以及先天性白内障大鼠晶状体中出晶状体蛋白的免疫活性变化，探讨其与白内障发病的关系。方法分别摘取8周龄、10周龄、12周龄、14周龄正常对照组以及先天性白内障大鼠晶状体，应用抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合体法，观察不同时期大鼠晶状体中αβ-晶状体蛋白的免疫活性变化。结果αβ-晶状体蛋白在各周龄正常大鼠晶状体上皮细胞及纤维部具有较高的表达。在8周龄、10周龄先天性白内障大鼠晶状体上皮细胞及纤维部可观察到与正常对照组相同的较强的免疫活性，而12周龄、14周龄鼠的白内障晶状体纤维部毋晶状体蛋白的免疫活性明显低于正常对照组。结论在12周龄、14周龄先天性白内障大鼠晶状体纤维部，出晶状体蛋白的免疫活性减弱，在白内障形成过程中出晶状体蛋白可能被一些蛋白酶水解分化，从而促进白内障的形成。     

先天性全白内障晶状体和透明晶状体蛋白双向电泳差异比较

目的 应用双向电泳（2-DE）技术分析先天性全白内障晶状体和正常透明晶状体蛋白质组成的差异.方法 采用固相pH梯度（IPG）等电聚焦2-DE技术分离全白内障组和正常对照组的晶状体蛋白后,比较两组蛋白质的组成差异.结果 人眼晶状体蛋白的主要分布在等电点（pI）5～9,相对分子质量14 000～90 000的范围内,高丰度的蛋白主要集中在pI 6～8,相对分子质量14 000～30 000之间.在pI 5.0～7.25,相对分子质量50 000～80 000的高分子量区间全白内障组具有较多的蛋白表达,在pI 6.7～7.7,相对分子质量19 000～29 000间的区域,全白内障组的部分正常蛋白点消失,在pI 7.1～7.6,相对分子质量15 000～17 000区间存在一些新的小分子量的蛋白点.结论 应用2-DE技术能够较好地分离人眼晶状体蛋白,全白内障组高分子量的蛋白质成分明显多于正常对照组,全白内障组的部分正常晶状体蛋白发生缺失,出现新的小分子量的蛋白成分.     

先天性白内障相关晶状体蛋白基因突变的研究进展

先天性白内障是全世界儿童视力障碍和失明的最常见原因,约四分之一与遗传相关。迄今已在遗传相关先天性白内障中发现了100多个基因的突变,而晶状体蛋白作为晶状体中最主要的成分,其编码基因的突变与先天性白内障的发生密切相关。大量研究证实,与先天性白内障相关的致病基因包括α、 β、γ晶状体蛋白基因、膜蛋白基因、细胞骨架蛋白基因和调节眼球发育的基因等,其中约一半的突变发生在晶状体蛋白基因中。晶状体蛋白基因的突变可能影响蛋白质的稳定性、溶解性和寡聚性,干扰晶状体的有序排列,导致晶状体混浊。本文就近年来先天性白内障相关的晶状体蛋白基因的研究进展作一简要综述。     

Reliability of Chinese web-based ocular surface disease index questionnaire in dry eye patients: a randomized, crossover study

AIM: To investigate the causal gene mutation and clinical characteristics in two Chinese families with autosomal dominant congenital coralliform cataracts. METHODS: Two unrelated Chinese pedigrees with congenital cataract were investigated. Routine ophthalmic examinations were performed on all patients and non-affected family members. Peripheral blood samples were collected, and the genomic DNAs were extracted. The coding regions of probands’ DNAs were analyzed with cataract gene panel. The identified gene was amplified by polymerase chain reaction and sequenced in other members of two families to verify if the mutated gene was co-segregated with the disease. RESULTS: Congenital coralliform cataract was inherited in an autosomal dominant mode in both pedigrees. For each family, more than half of the family members were affected. All patients presented with severe visual impairment after birth as a result of bilateral symmetric coralliform lens opacification. An exact same defect in the same gene, heterozygous mutation of c.70C>A (p. P24T) in exon 2 of γD-crystallin CRYGD gene, was identified in both probands from each family. Sanger sequencing analysis demonstrated that the mutated CRYGD was co-segregated in these two families. CONCLUSION: A known substitution c.70C>A (p. P24T) in CRYGD gene appears to be the disease-causing gene in these two Chinese families. It is known that mutated CRYGD caused most of the congenital coralliform cataracts, suggesting that the CRYGD gene are associated with phenotype of congenital coralliform cataract.     

先天性后极性白内障超微结构分析及突变基因筛查

目的 探讨一先天性后极性白内障家系晶状体的超微结构改变,并初步筛查其致病基因.方法 收集一常染色体显性遗传性先天性后极性白内障家系资料,对家系成员行眼部检查;在透射电镜下观察晶状体细胞超微结构的改变;选择CRYAB、CRYBA1/A3、CRYBB2、GJA8、CHMP4B、PITX3和EPHA2这7个热点基因进行突变位点筛查.结果 根据家系图分析该家系为垂直遗传,符合单基因常染色体显性遗传特点.裂隙灯显微镜下检查示全部患者晶状体混浊形态完全相同.透射电镜下发现患者前囊面晶状体上皮细胞排列紧密,结构完整,未见特异性病理变化;前皮质晶状体纤维细胞排列紧密,细胞内密度均一一致,但后皮质晶状体纤维细胞内出现斑驳状中高密度异常颗粒沉着.热点基因筛查显示:7个候选基因的外显子及其邻近内含子序列与基因库对照未发现任何突变.结论 本研究将后极性白内障病变定位于后皮质晶状体纤维细胞,排除了前囊面晶状体上皮细胞及前皮质晶状体纤维细胞.此家系携带的遗传突变位点位于尚未见报道的与后极性白内障相关的致病基因上.     

Change of Water—Soluble—Protein,Urea—Soluble—Protein and Membrane Intrinsic Protein in Human Senile Cataract

Purpose:To analyze the change of water-soluble-protein(WSP),urea-soluble-protein(USP)and membrane intrinsic protein(MIP)in human senile catarct.Methods:The water-soluble-fractions(WSF)were prepared basically according to the method of Kibbelear,et al.But in this study,5mmol/LB-mercaptoethanol was added to the buffer solution.The urea-soluble-fractions(USF)were pre-pared basically according to the method of Kibbelear,et al.Lens fiber cell mem-branes were purified basically according to the method of Russell,et al.SDS-PAGE were performed according to the procedure of Laemmili,et al.using re-solving gel13%and3%stacking gel.Results:The WSPwas fractionated intoHM^ α^-,β1-3^-andγ-crystallin compo-nents.In nuclear cataractous lenses HM^ α^-and B-crystallin increase,while r-crystallin decrease.The USP from clear lenses contains mainlyαβchains of22KD,whereas in cataractous lenses,especially in nuclear cataractous lenses,the relative amount of the 28-and23KDpolypeptide(the components of β-crys-tallin)increased markedly.Lens fiber cell MIP,clear lens and cataract lens con-tained the main polypeptide of 27KD(MIP)and23KD(MP23).Conclusion:The water-insolube protein,whether in quantity or in quality,plays an important role in cataract formation.Eye Science 1995,11:124-127.     

增强型绿色荧光蛋白基因在人胚胎视网膜前体细胞中的表达

目的:研究增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)转染人胚胎视网膜前体细胞的转染效率及瞬时表达情况,建立人胚胎视网膜前体细胞的示踪方法,为视网膜前体细胞移植提供示踪依据。方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP-N1质粒,通过磷酸钙介导法转染人胚胎视网膜前体细胞．应用流式细胞仪检测其转染效率,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其瞬时表达情况。结果:pEGFP-N1在基因转染24 h细胞转染率为28．98％,48 h为32．45％,72 h为30．40％,对照未转染细胞24 h、48 h分别为2．50％和2．04％:体外观察培养细胞转染24 h已有绿荧光表达,48-72 h细胞荧光强度最强,96 h荧光强度减弱。结论:pEGFP-N1质粒能有效转染人胚胎视网膜前体细胞,其转染效率可达到30％,是人胚胎视网膜前体细胞较为理想的瞬时表达载体和细胞示踪报告分子。     

基因突变导致的mRNA异常剪接与先天性白内障

先天性白内障约1/3是遗传性的,研究发现基因突变不仅可直接改变蛋白质序列,也可导致mRNA异常剪接而致病.突变位点可以通过干扰组成性剪接位点和选择性剪接位点,影响剪接体组分及选择性剪接调节因子而导致mRNA的异常剪接.目前的研究发现,突变位点可以干扰组成性剪接位点而导致mRNA的异常剪接,进而造成先天性白内障.本文就先天性白内障与选择性剪接的关系作一综述.     

年龄相关性皮质性白内障波形蛋白基因外显子突变的研究

目的探讨波形蛋白(vimentin)基因外显子序列突变与年龄相关性皮质性白内障的关系。方法选择年龄相关性皮质性白内障患者110例(病例组)及同一地区正常对照100例(对照组)进行以医院病例资料为基础的对照研究。以外周血基因组DNA为模板,通过PCR扩增vimentin基因全部外显子,并将PCR产物纯化后测序。测序结果与GenBank公布的vimentin基因正常序列比对。结果病例组的血尿酸含量为(344.00±79.91)μmol·L-1较对照组(309.00±72.75)μmol·L-1显著增高(P=0.001),病例组的血肌酐含量为(59.20±13.57)μmol·L-1较对照组(55.24±13.61)μmol·L-1增高(P=0.04);2组测序结果显示vimentin基因全部外显子序列中,并未发现突变。结论年龄相关性皮质性白内障的发病机制与vimentin基因外显子序列突变无关,其致病基因有待进一步试验确定。     

两种白内障摘出术治疗硬核白内障的疗效比较

目的　寻求一种安全有效的治疗硬核白内障的手术方法。方法　选择Ⅲ级以上核老年性白内障患者 89例 89眼随机分为 2组 ,分别进行无缝线非超声乳化白内障摘出术 (47例 4 7眼 )和超声乳化白内障摘出术 (42例 4 2眼 ) ,均联合人工晶状体植入术。术后进行视力、角膜散光、角膜内皮检查 ,对比观察。结果　 2组术后 1d、14d、90d视力 (分别为非超生乳化组 0 .6 3D± 0 .12D ,0 .74D± 0 .2 1D ,0 .81D± 0 2 4D ;超生乳化组 0 .5 8D± 0 .2 3D ,0 .71D± 0 .2 2D ,0 .2 9D± 0 .2 3D)及术后 14d散光 (超生乳化组 1.6 5D± 0 .6 5D ,非超生乳化组 1.72D± 0 .4 3D)比较均无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;术后 1d内皮细胞损失百分率中位数比较 ,超生乳化组 (14 .6 3% )明显大于非超生乳化组 (8.5 1% )。无 1例发生角膜内皮失代偿。结论　无缝线非超声乳化白内障摘出术具备超生乳化的优点 ,并减少角膜内皮损伤 ,是治疗硬核白内障的理想选择。     

表麻及球周麻醉下白内障超声乳化摘出联合人工晶状体植入术的比较

目的 评价表麻下白内障超声乳化摘出及人工晶状体植入术的安全性和效果。方法 ２组共３７５例（４００只眼）白内障分别在表麻下及球周麻醉下施行超声乳化摘出及人工晶状体植入术,对术后视力,术中及术后并发症进行分析。结果 ２组术后１ｄ、１ｗｋ,３ｍｏ视力无显著差异,并发症：后囊破裂及角膜水肿发生率,２组间相差不显著;球周麻醉组发生眶内出血２只眼,暂时性上睑下垂２６只眼,暂时性复视９只眼。结论 表麻下超声乳化