二甲基亚砜与羟乙基淀粉对血小板的冷冻保护作用

目的 观察二甲基亚砜(DMSO)与羟乙基淀粉(HES)联用保护剂冷冻保护血小板的效果,探寻更适合冷冻血小板的保护剂.方法 实验设未冷冻组,DMSO组,HES组,DMSO与HES联用组.各组加血小板混匀后置-80℃冰箱保存,38℃水浴融化,检测血小板回收率,MPV值,观察血小板超微结构,测定CD42b、CD62p的表达水平.结果 HES单独使用对血小板的保护作用不强;DMSO单独使用组与DMSO与HES联用组对血小板的外部形态和内部结构的保护及CD62p的表达水平,MPV增加值,后者优于前者,CD42b表达水平DMSO组优于DMSO与HES连用组.结论 DMSO与HES联用对血小板的冷冻保护有一定协同作用,它与DMSO联用可作为冷冻血小板的保护剂进一步研究.     

DMSO在人血小板冻干前负载海藻糖过程中对血小板的保护作用

目的研究人血小板冻干保存前负载海藻糖至细胞内过程中DMSO的作用,优化血小板负载缓冲液配方。方法实验设对照组(负载缓冲液中未添加DMSO)和实验组(负载缓冲液中添加DMSO),使用流式细胞仪检测血小板负载海藻糖4h后膜表面糖蛋白分子CD62p、PAC-1的表达,通过激光共聚焦荧光显微镜观察血小板负载荧光物质LYCH4h后其胞内LYCH的分布,同时检测实验组和对照组负载海藻糖4h后血小板平均体积(MPV)。结果两组结果比较,实验组CD62p、PAC-1的表达显著低于对照组(P<0.05),实验组LYCH均匀分布在血小板胞质中,而对照组LYCH大部分分布在几个有限细胞器内,两组MPV未有显著性差别(P>0.05)。结论DMSO在血小板负载海藻糖过程中可有效抑制血小板体外激活,并使胞质内海藻糖均匀分布,更好发挥海藻糖对细胞的保护作用。     

血细胞分离机对血小板膜糖蛋白影响的观察

目的　了解血小板经血细胞分离机单采后膜糖蛋白的变化。方法　利用流式细胞仪及CD41a、CD41b、CD42a、CD61、CD62 p、PAC 1单克隆抗体对 2 1份机采血小板前后的膜糖蛋白表达率和平均荧光强度 (meanfluores cenceintension ,MFI)进行检测。结果　血小板经血细胞分离机单采后 ,CD41a、CD41b、CD42a的阳性表达率和MFI、CD61的阳性表达率和CD62 p、PAC 1的MFI与采集前比较无明显变化 (均为P >0 .0 5 ) ;CD6 2 p、PAC 1的阳性表达率增高 (均为P <0 .0 5 ) ,CD61的MFI降低 (P <0 .0 1)。结论　血小板经血细胞分离机单采后仍保存了膜糖蛋白的完整性 ,虽有一定比率的血小板活化 ,但MFI无明显改变     

二甲亚砜对血小板冻存中功能保护作用的实验研究

本研究探讨二甲亚砜（DMSO）对血小板冻干保存中激活的抑制作用。以CD62p和PAC-1表达作为血小板的激活标志，CD62p和PAC-1再表达和血小板最大聚集率作为评价血小板功能的指标。对血小板经离心、洗涤及海藻糖负载等顸处理过程中加与不加DMSO的实验组，分别进行血小板膜表面糖蛋白CD62p和PAC-1表达及再表达的流式细胞术（FCMs）分析，血小板最大聚集率和血小板平均体积（MPV）的测定，研究DMSO对血小板激活抑制作用的可逆性。结果显示，血小板经预处理后，不含DMSO组的CD62p和PAC-1表达率显著增高，分别达30．37％和15．01％；含DMSO的组，CD62p表达率为10．72％，PAC．1几乎不表达（0．11％），显著低于不含DMSO组（P〈0．01）。DMSO稀释后，血小板CD62p再表达为54．39％，显著低于对照组（71．69％）和高于不含DMSO组（35．98％）（P均〈0．01）；PAC-1再表达率为49．28％，与对照组（54．48％）无显著差异，显著高于不含DMSO组（P〈0．叭）。在含DMSO组，血小板用原血浆稀释后，血小板聚集功能恢复，对restocetin，thrombin和propylgallate诱导的血小板聚集率分别为92．76％，91．24％和89．66％，与对照组和无DMSO组比无显著性差异，对ADP诱导的聚集率有34．33％，显著高于无DMSO组（P〈0．01），但仍显著低于对照组（P〈0．01）。结论：DMSO对体外处理所致的血小板膜表面CD62p和PAC-1表达具有抑制作用，且该抑制作用是可逆的，DMSO稀释后血小板仍具有CD62p和PAC．1表达能力和聚集反应功能，提示DMSO具有抑制激活损伤和低温保护的双重功能，这一生物学特性使DMSO在血小板的冻干保存中发挥重要作用。     

血小板冷冻保存的实验研究

本研究研制新型的血小板冷冻保存液,观察血小板在不同保存液冻存前、后的形态改变,以及体外受凝血酶作用下的活化状态,同时比较添加UDP-Gal对保存液保存效果的影响。在以往单一应用较高浓度的DMSO为血小板低温保存液的基础上,自行研制新型保存液：2%DMSO＋thrombosol＋UDP-Gal,在不同时间分别观察血小板形态及测定血小板膜表面糖蛋白CD62P的表达。结果显示,在圆形、树突形、不规则形态的百分比方面冷冻保存对血小板形态有显著影响,2%DMSO＋thrombosol组和2%DMSO＋thrombosol＋UDP-Gal组保护作用优于5%DM-SO组;与新鲜血小板相比,冻存后血小板表达CD62P明显下降,保存1月与3月时CD62P表达无明显差异,3种保存液组之间CD62P表达无明显差异。结论：3种冷冻保存液中2%DMSO＋thrombosol和2%DMSO＋thrombosol＋UDP-Gal对血小板形态的保持效果相似,均优于5%DMSO组。冷冻保存后血小板对凝血酶的反应下降,3种保存液组之间无明显差异。在保存液中添加UDP-Gal对保存效果没有明显影响。     

脑出血患者血小板CD42b,CD62p的表达与脑水肿形成的相关性

目的分析比较脑出血患者与健康人血小板CD42b,CD62p的表达差异及急性期脑出血患者血小板CD42b,CD62p的表达量与脑水肿体积的相关性,探讨急性期脑出血患者血小板表面糖蛋白CD42b,CD62p的表达及其与血肿周围脑水肿形成的关系。方法选自2002-01/08华中科技大学同济医学院附属同济医院神经科住院治疗的脑出血患者20例。健康者选自2002-01/08华中科技大学同济医学院附属同济医院神经科住院患者家属,共15例,利用流式细胞术(FCM)测定20例脑出血患者和15例健康人血小板CD42b和CD62p的表达,根据头颅CT测量脑出血患者血肿周围脑水肿带的大小,并对脑出血患者血小板CD42b和CD62p的表达与血肿周围脑水肿带的大小进行相关性分析。结果与健康人犤(9.7±1.1)%,(81.6±3.1)%犦比较,急性期脑出血患者血小板CD42b的表达(74.2±6.4)%减少,CD62p的表达(4.7±4.8)%增加(tCD42b=4.328,P<0.01;tCD62p=4.017,P<0.01);急性期脑出血患者血小板CD42b和CD62p表达量与血肿周围脑水肿带的大小有相关性(rCD42b=-0.489,P<0.05;rCD62p=0.646,P<0.01)。结论脑出血急性期血小板活化,活化的血小板参与了血肿周围脑水肿形成这一病理损伤过程。     

冷冻自体血小板在自体干细胞移植患者中的应用

目的观察行自体干细胞移植的淋巴瘤患者输注冷冻自体血小板的效果。方法选择6例行干细胞移植患者,移植前使用血细胞分离机采集患者自体血小板13次。在血小板中加入终浓度5％DMSO,于-80℃保存。当患者血小板小于20×10^9／L时,于37℃水浴箱快速解冻复苏后输注。分别测定冷冻前后血小板回收率以及22℃保存5d血小板的CD42b、CD62p及输注后1h血小板校正增加值（CCI）。结果血小板复苏后回收率为58％～85％,平均回收率为72．5％土8．2％。血小板CD42b由冷冻前的93．2％±6．0％下降到复苏后的80．1％±4．6%,CD62p由冷冻前的1．9oA±0．9％上升到18．1％土10．1％（P〈0．05）,但与22℃保存5d的血小板CD42b、CD62p比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）,在可接受的范围内。13例次的血小板输注中,11次1hCCI〉7．5。结论造血干细胞移植患者输注自体血小板是安全且可行的,可替代异体血小板输注,有助于节约血源、避免输血传播疾病及减少输血引起的同种免疫。     

冷冻干燥保存血小板的实验研究

本研究探讨冷冻干燥保存血小板的方法,以获得可长期冻干保存的血小板制品,使之能在常温条件下保存、占用空间小、重量轻、便于长距离运输,能够满足突发事件和战伤救治的需要。在冷冻干燥保存过程中添加血小板可逆性激活抑制剂、DMSO和海藻糖等低温保护剂,进行预处理、冷冻、一级干燥、二级干燥,再水化,并同时测定血小板回收率,凝血酶聚集反应,促凝血功能,CD62p表达率和PAC-1表达率等。结果表明:血小板回收率为56.29%,其对凝血酶的聚集反应与对照组无明显差异,对ADP和丙基没食子酸诱导的聚集反应较对照组分别降低49.34%和26.25%,促凝血功能与对照组比较也无统计学差异;冻干血小板CD62p表达率为42.36%,PAC-1表达率为2.12%,凝血酶激活后CD62p再表达率为50.88%,PAC-1再表达率为54.55%。结论:添加血小板可逆性激活抑制剂,海藻糖和DMSO后的冻干血小板,其聚集活性和促凝血功能与新鲜血小板无明显差异,血小板可逆性激活抑制剂降低了冻干血小板的CD62p表达,增强了冻干血小板的生存能力,因而延长了其生存时间,因此可以该冻干方法为基础进一步提高冻干保存血小板的效率。     

复方丹参滴丸对自发性高血压大鼠血小板CD62 p和CD63表达的影响

目的：观察复方丹参滴丸对自发性高血压大鼠（SHR）血小板CD62p和CD63表达的影响。方法按所给药物不同,将80只SHR随机分为复方丹参滴丸加阿司匹林组、复方丹参滴丸组、阿司匹林组和生理盐水对照组各20只,各组持续给药4周,于实验12周末采用流式细胞仪检测治疗后SHR血小板CD62p和CD63的表达水平,并对各组结果进行比较。结果第12周末复方丹参滴丸组血小板CD62p、CD63表达水平低于对照组（P＜0.05）,复方丹参滴丸加阿司匹林组CD62p、CD63表达水平较阿司匹林组或复方丹参滴丸组低（P＜0.05）。结论复方丹参滴丸具有抑制血小板CD62p、CD63表达的作用,复方丹参滴丸与阿司匹林合用治疗效果更显著。     

2型糖尿病下肢动脉硬化病变部位和程度与血小板膜糖蛋白表达的相关性研究

目的:探讨血小板膜糖蛋白在2型糖尿病下肢动脉硬化闭塞症(ASO)患者不同部位和不同严重程度的表达及其相关性。方法:80例2型糖尿病合并下肢动脉硬化闭塞症患者,分别检测血小板膜糖蛋白CD62p、CD63、CD61、CD41a、CD42b、纤维蛋白原及血小板黏附、聚集试验,根据影像学资料和临床踝肱指数(ABI)检查区分不同部位和严重程度,并比较其差异。结果:2型糖尿病ASO患者髂股动脉端狭窄闭塞患者的血小板膜糖蛋白CD62p、CD63较腘动脉以下闭塞患者明显升高,CD62p、CD63与ABI无相关性。结论:检测血小板膜糖蛋白对于判断2型糖尿病病变部位有一定临床意义。     

不同冷冻保护剂对低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存造血干细胞效果的影响

背景：非程序降温-80℃低温冰箱保存方便快捷,程序降温-196℃液氮保存可靠长久,将两者合二为一简化流程已成功用于临床。目的：观察不同冷冻保护剂对-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存造血干细胞效果的影响。方法：分设10%二甲亚砜组、5%二甲亚砜联合3%羟乙基淀粉组、5%二甲亚砜联合0.25mol/L海藻糖组、5%二甲亚砜联合3%羟乙基淀粉及0.25mol/L海藻糖组。采用-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法对单采外周造血干细胞进行冷冻保存,通过透射电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞仪观察Annexin-V、PI、Caspase-3水平。结果与结论：4组冷冻保存细胞的存活率、凋亡率和死亡率差异均无显著性意义（P〉0.05）。透射电镜下各组细胞超微结构变化差异不明显。单个核细胞群落冷冻保存后存活率在90%以上,含成熟细胞较多的CD45＋细胞群落凋亡发生率可达50%左右。造血干祖细胞群落中,早期细胞较晚期细胞更能耐受冷冻损伤。提示在基础冷冻保护剂二甲亚砜的基础上,加入羟乙基淀粉和海藻糖并未显示出对冷冻保存效果的增强作用。     

不同冷冻保护剂对低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存造血干细胞效果的影响

背景:非程序降温-80 ℃低温冰箱保存方便快捷,程序降温-196 ℃液氮保存可靠长久,将两者合二为一简化流程已成功用于临床.目的:观察不同冷冻保护剂对-80 ℃低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存造血干细胞效果的影响.方法:分设10%二甲亚砜组、5%二甲亚砜联合3%羟乙基淀粉组、5%二甲亚砜联合0.25 mol/L海藻糖组、5%二甲亚砜联合3%羟乙基淀粉及0.25 mol/L海藻糖组.采用 -80 ℃低温冰箱转液氮阶梯降温法对单采外周造血干细胞进行冷冻保存,通过透射电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞仪观察Annexin-V、PI、Caspase-3水平.结果与结论:4组冷冻保存细胞的存活率、凋亡率和死亡率差异均无显著性意义(P > 0.05).透射电镜下各组细胞超微结构变化差异不明显.单个核细胞群落冷冻保存后存活率在90%以上,含成熟细胞较多的CD45+细胞群落凋亡发生率可达50%左右.造血干祖细胞群落中,早期细胞较晚期细胞更能耐受冷冻损伤.提示在基础冷冻保护剂二甲亚砜的基础上,加入羟乙基淀粉和海藻糖并未显示出对冷冻保存效果的增强作用.     

低温保存血小板的制备与质控效果的观察

本研究探讨建立系统的二甲亚砜 (DMSO)低温保存血小板的制备及质控的技术和方法 ,以保证低温保存血小板的质量。采取的方法 :①DMSO在使用前进行超滤替代消毒 ;②采血后 6小时内对血液进行离心 ,将血袋管道系于套桶上方 ;③以 4 80×g的相对离心力 ,离心加速 9档 ,减速 4档 ;④分离血小板时流速不能太快 ,80 - 10 0ml富含血小板血浆应在 1分钟左右分完 ;在加入DMSO时速度以 1毫升 /分钟为宜 ;加好DMSO后放入 - 80℃冰箱保存 ;临床输注前将血小板置于 38- 4 0℃的循环水浴中 ;⑤融化后进行血小板计数、白细胞和红细胞计数 ,检测HBsAg、抗 HCV、抗 HIV、梅毒特异性抗体 ,测定丙氨酸氨基转移酶 (ALT)并进行细菌培养。结果表明 :共制备14 80 0单位低温保存血小板 ,其中机采血小板 80单位。对其中 30 0单位进行质控。手工分离血小板计数≥ 2 .4×10 10 /单位 ,平均得率在 70 %以上。机采血小板计数≥ 2 .5× 10 11/单位。手工分离血小板红细胞污染数≤ 1× 10 9个/单位 ,白细胞污染数≤ 5× 10 7个 /单位。融化后进行细菌培养 ,无细菌生长 ;ALT均在正常范围内。患者输注后具有明显的止血作用。结论 :本方法制备的手工分离和机采低温保存血小板质量可靠 ,临床应用效果良好。     

Effects of high platelet concentration in collecting and freezing dry platelets concentrates

OBJECTIVE: To evaluate, in vitro, the effects of collecting and cryopreserving fresh dry platelet concentrates (PCs). MATERIAL AND METHODS: Standard and dry PCs were collected in the same apheresis procedure. PCs were evaluated by mean platelet volume (MPV), pH, glucose and LDH levels. Activation was examined by flow cytometry using anti-CD41, anti-CD42 and anti-CD62p monoclonal antibodies and annexin binding assay. Platelet function was assessed by aggregation using ADP, collagen and arachidonic acid as agonists. Dry PCs were compared to standard PCs and to cryopreserved dry PCs. We also compared the use of ThromboSol to 5% DMSO as cryoprotectives. RESULTS: Dry PCs presented a significantly reduced pH and glucose (p<0.001), increased LDH levels and CD62p expression (p<0.001) and diminished aggregation response to ADP (p<0.001). Platelet cryopreservation was associated with platelet lysis, activation and loss of function. Dry PCs cryopreserved with TS were associated with statistically higher LDH levels (p<0.001) and a higher percentage of annexin binding (p=0.005), in addition to a lower number of CD42 positive platelets (p=0.01). CONCLUSION: Dry PCs should be rapidly frozen after collection to avoid a fall in pH and platelet activation. 5% DMSO performed better than TS to cryopreserve dry PCs.     

Review of In Vivo Studies of Dimethyl Sulfoxide Cryopreserved Platelets

A literature review was conducted to assess the efficacy and safety of dimethyl sulfoxide (DMSO) cryopreserved platelets for potential military use. In vivo DMSO cryopreserved platelet studies published between 1972 and June of 2013 were reviewed. Assessed were the methods of cryopreservation, posttransfusion platelet responses, prevention or control of bleeding, and adverse events. Using the Department of Defense's preferred 6% DMSO cryopreservation method with centrifugation to remove the DMSO plasma before freezing at ? 65°C and no postthaw wash, mean radiolabeled platelet recoveries in 32 normal subjects were 33% ± 10% (52% ± 12% of the same subject's fresh platelet recoveries), and survivals were 7.5 ± 1.2 days (89% ± 15% of fresh platelet survivals). Using a variety of methods to freeze autologous platelets from 178 normal subjects, mean radiolabeled platelet recoveries were consistently 39% ± 9%, and survivals, 7.4 ± 1.4 days. More than 3000 cryopreserved platelet transfusions were given to 1334 patients. There were 19 hematology/oncology patient studies, and, in 9, mean 1-hour corrected count increments were 11 100 ± 3600 (range, 5700-15 800) after cryopreserved autologous platelet transfusions. In 5 studies, bleeding times improved after transfusion; in 3, there was either no improvement or a variable response. In 4 studies, there was immediate cessation of bleeding after transfusion; in 3 studies, patients being supported only with cryopreserved platelets had no bleeding. In 1 cardiopulmonary bypass study, cryopreserved platelets resulted in significantly less bleeding vs standard platelets. In 3 trauma studies, cryopreserved platelets were hemostatically effective. No significant adverse events were reported in any study. In summary, cryopreserved platelets have platelet recoveries that are about half of fresh platelets, but survivals are only minimally reduced. The platelets appear hemostatically effective and have no significant adverse events.     

两种血小板制剂应用于儿科血液病的临床观察

目的观察并比较机器单采法及手工法分离制备血小板制剂用于儿科血液病输注的效果。方法输注机器单采血小板患儿463例次为机采制剂组,输注手工分离血小板制剂患儿155例次为手工制剂组,分别在输注后24、48及72h作外周血血小板计数,观察临床止血效果、有无输血反应发生,计算血小板计数增加校正指数(CCI)、血小板回升率(PPR)、输注无效率、输血反应发生率等指标。结果输注后24、48、72h,机采制剂组:CCI分别为18.9、15.4、14.1,PPR分别为33.4%、27.8%、25.0%;手工制剂组:CCI分别为11.3、9.4、2.9,PPR分别为20.3%、10.3%、3.8%;机采法制剂组均明显高于手工制剂组(P<0.01)。机采制剂组输注无效率10.58%、输血反应发生率3.02%,手工制剂组相应为32.90%及11.61%,机采组虽都明显低于手工组,但两组均达到较好的临床止血目的,组间无差异。结论输注机器单采血小板制剂能更有效地提高血液病患儿的血小板值,减少其血小板输注无效及输血反应的发生。     

海藻糖对低温保存胸骨中bcl-2和bax基因表达的影响（英文）

背景：研究已经证实海藻糖对低温保存中的胸骨具有保护作用,但作用途径尚不清楚。目的：观察海藻糖对低温保存胸骨bcl-2和bax基因表达的影响。方法：新鲜配置4组保存液：低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐＋二甲基亚砜组、低钾右旋糖酐＋海藻糖组、低钾右旋糖酐＋二甲基亚砜组＋海藻糖组。切取SD大鼠胸骨后立即分别放入含上述4种溶液的冻存管中低温保存。抽取新鲜大鼠胸骨组织和低温保存120d的4组标本,采用RT-PCR方法检测不同保存液保存的胸骨及新鲜胸骨bcl-2和bax基因mRNA表达量。结果与结论：低钾右旋糖酐＋海藻糖组bcl-2表达量高于低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐＋二甲基亚砜组（P〈0.01）,但bax表达量低于低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐＋二甲基亚砜组（P〈0.01）;低钾右旋糖酐＋二甲基亚砜组＋海藻糖组bcl-2表达量最高,bax表达量最低,基本接近新鲜骨组织（P〉0.05）。结果提示海藻糖可能通过增强bcl-2基因、抑制bax基因的表达保护低温保存中的胸骨细胞活性,其与二甲基亚砜合用保护作用更好。