Th17细胞在小鼠巨细胞病毒感染急性期的作用研究

目的 整体水平观察Th17细胞在小鼠巨细胞病毒(MCMV)播散性感染急性期的作用.方法 建立MCMV播散性感染模型,病毒接种后第3、7、14和28天各处死3只小鼠;同时设模拟感染鼠作为对照.应用real-time PCR法检测MCMV感染鼠脏器MCMV DNA载量;HE染色观察MCMV感染后脾组织病理损伤变化;流式细胞术检测脾细胞中CD4+IL-17A+T细胞比率;ELISA法检测脾细胞培养上清中IL-17A蛋白浓度.结果 感染急性期唾液腺组织中MCMV DNA于感染后14 d最高;脾组织病理损伤也于感染后14 d最严重;与模拟感染对照鼠相比,MCMV感染鼠脾细胞中CD4+IL-17A+T细胞比率呈升高趋势(均P＜0.01),且于感染后14 d达峰值[(1.14±0.09)％ vs (0.19±0.04)％,t=17.551,P=0.000];病毒特异性IL-17A浓度也于感染后14 d达峰值[(81.98±12.37) pg/ml vs (44.96±8.44) pg/ml,t=4.281,P=0.006];脾细胞培养上清中病毒特异性IL-17A水平与唾液腺组织中MCMV DNA载量呈正相关(r=0.54,P＜0.05);脾组织病理损伤越重,脾细胞培养上清中IL-17A浓度越高.结论 Th17细胞主要通过IL-17A参与MCMV播散性感染急性期免疫应答,直接或间接的促进病毒复制或脾组织局部病理损伤,可能是MCMV持续性感染的重要原因之一.     

细粒棘球蚴早期感染促进小鼠体内IL-22的产生

目的探讨小鼠腹腔细粒棘球蚴感染早期主要产生IL-22的CD4~+T细胞Th1、Th17和Th22细胞以及IL-22R1的表达情况。方法建立小鼠腹腔细粒棘球蚴感染模型,分别在感染后第3、6、9、12天收集外周血、小鼠脾淋巴细胞以及肝脏和肠管组织。ELISA检测外周血IFN-γ和IL-17、IL-22的蛋白表达量;qRT-PCR检测脾淋巴细胞中Th1细胞相关因子(Ifng、Tbx21基因)、Th17细胞相关因子(IL-17、Rorc基因)、Th22细胞相关因子(IL-22、Ahr基因)以及肝脏和肠管组织中IL-22R1的mRNA表达水平;流式细胞术检测脾淋巴细胞中Th1细胞(CD4~+IFN-γ~+)、Th17细胞(CD4~+IFN-γ~-IL-22~+IL-17~+)及Th22细胞(CD4~+IFN-γ~-IL-22~+IL-17~-)的百分比情况。结果与对照组相比,ELISA、qRT-PCR和流式细胞术检测细粒棘球蚴感染后Th1细胞、Th17细胞、Th22细胞增高:qRT-PCR检测细粒棘球蚴感染后肝脏和肠管IL-22R1的表达增高。结论细粒棘球蚴感染小鼠早期,主要产生IL-22的CD4~+T细胞Th1、Th17、Th22细胞比例以及IL-22R1表达增加,可能参与了宿主的免疫防御反应。     

IL-12对BALB/c小鼠Th17细胞的分化的影响

目的: 观察细胞因子IL-12对Th17细胞分化的影响.方法: 小鼠脾淋巴细胞经抗CD3单克隆抗体(mAb)和不同浓度的重组小鼠IL-12刺激, 3 d后使用ELISA方法观察培养物上清液中IL-17的产生情况.并使用细胞内细胞因子染色的方法, 通过流式细胞术观察CD3 mAb和重组小鼠IL-12刺激对Th1和Th17细胞分化的影响.结果: Th17细胞不分泌IFN-γ、 IL-5、 IL-10等细胞因子, 不表达Foxp3, 是一个独立的细胞亚群.不同浓度的重组小鼠IL-12可以诱导抗CD3 mAb 的T细胞分泌IFN-γ, 并向Th1细胞方向分化.同时, IL-12可以抑制活化的T细胞分泌IL-17, 抑制T细胞向Th17细胞分化.结论: IL-12可以抑制Th17细胞的分化.     

CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠模型中CD4~+T细胞亚群格局及其作用

本研究主要关注BALB/c小鼠感染柯萨奇病毒B3型(CVB3)后CD4+T细胞亚群格局的变化及其对病毒性心肌炎发病的贡献度。CVB3腹腔感染小鼠后第7d,通过小鼠体重下降率、心肌损伤血清学指标肌酸激酶(CK)活性以及心肌组织病理学改变等多项指标证实小鼠心肌炎模型的成功建立。经Real-time PCR检测感染第7d脾脏CD4+T细胞亚群主要细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-17F及转录因子Foxp3表达情况;以流式细胞术检测了CD4+T细胞各亚群比例,并通过多元线性回归分析法评估了各T细胞亚群对病毒性心肌炎发病的影响。结果显示,与对照组相比,CVB3感染小鼠脾脏IL-17A、IL-17F、IFN-γ表达均显著上升(分别约为12、8.5、5倍),而IL-4和Foxp3表达无明显变化。CVB3感染小鼠脾脏中CD4+IL-17+Th17细胞的上调幅度最为明显,约2.75倍,其次为IFN-γ+Th1细胞,上调约2.27倍,而Th2和Treg细胞无明显变化。进一步统计学分析显示,Th17对病毒性心肌炎发病的贡献度最高(1.808),Th1次之,贡献度为1.581,而Th2和Treg对病毒性心肌炎发病无显著影响,提示CD4+T细胞亚群格局变化与病毒性心肌炎发病密切相关,其中以Th17对心肌炎发病的贡献度尤为显著。     

人外周血和扁桃体中Tfh细胞与其他Th细胞亚群之间的关系

目的比较观察人外周血和扁桃体Tfh细胞的表型以及与Th1、Th17、Th22细胞亚群之间的关系。方法分离正常人PBMC及扁桃体单个核细胞,利用anti-CD3+anti-CD28或PMA+ionomycin刺激后,采用ELISA和流式细胞术(FCM)检测其细胞因子的产生,分析Tfh与Th1、Th17、Th22细胞亚群之间的关系。结果与PBMC中CD4+T细胞不同,扁桃体CD4+T细胞高表达CXCR5和CD45RO,低表达CCR7和CD62L;与PBMC中CD4+T细胞相比,扁桃体CD4+T细胞IL-21和IL-17产生水平较高,IFN-γ产生水平较低,IL-22水平无显著差异;外周血和扁桃体CD4+T细胞中均存在一定比例的IL-21+IL-17+双阳性、IL-21+IL-22+双阳性、IL-21+IFN-γ+双阳性细胞,IL-21单阳性细胞在扁桃体CD4+T细胞中所占比例明显高于外周血;外周血和扁桃体CD4+CXCR5+细胞除表达IL-21外,还表达IL-17、IL-22和IFN-γ。结论扁桃体中存在较多数量的Tfh细胞,大多数Tfh细胞是不同于Th1、Th17和Th22的细胞亚群。     

MiR-143在Lewis肺癌小鼠外周血中的表达及其对Th1/Th2平衡的影响

目的 利用小鼠Lewis肺癌移植肿瘤模型探究肺癌疾病进展过程中外周血微小RNA的表达及其对Th1/Th2平衡的调控作用。方法 利用Real-time PCR实验检测血浆中miR-143、miR-217、miR-195和miR-615的表达水平;用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠外周血血清IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10表达水平,用流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+IFN-γ+Th1细胞及CD4+IL-4+Th2细胞比例,测量并统计荷瘤小鼠皮下接种部位肿瘤体积及肺部转移性结节;分离小鼠外周血CD4 T细胞,检测转录因子T-bet和GATA3的表达。结果 与Normal组相比,LCC组小鼠外周血血清miR-143表达水平显著上升,miR-217、miR-195和miR-615表达水平没有明显变化。与Normal组相比,LCC组小鼠外周血Th1相关细胞因子表达水平及脾脏Th1细胞比例下降,而Th2相关细胞因子表达水平上升,且Th1/Th2比率显著下降。而Anti-miR-143组Th1相关细胞因子及Th1细胞比例升高,且Th2相关细胞因子比例下降。与LCC组相比,Anti-miR...     

急性期川崎病Th17细胞变化初探

目的 探讨Th17细胞在川崎病(Kawasaki disease,KD)免疫发病机制中的作用.方法 急性期KD患儿60例,正常同年龄对照组32例,KD患儿分别于静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前后直接取血备检.采用荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4+T细胞IL-17A/F、转录因子ROR-γt、Foxp3及PBMC IL-6、TGF-β、IL-23p19、IL-27p28、IL-27EBI3、IFN-γ等mRNA表达;酶联免疫吸附试验检测血浆中IL-6、TGF-β、IL-23、IL-27、IFN-γ的蛋白浓度;流式细胞术检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)的比例.结果 急性期KD患儿CD4+T细胞高表达IL-17A及IL-17F(P<0.01),IVIG治疗后明显降低(P<0.01);急性期KD患儿IL-17A/IL-17F与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、白细胞数目(WBC)呈正相关(IL-17A:0.70,0.85,0.80,P<0.01;IL-17F:0.63,0.65,0.69,P<0.01);急性期KD患儿Th17细胞转录因子ROR-γt及前炎症细胞因子IL-6转录水平明显高于对照组(P<0.01),IVIG治疗后显著降低(P<0.01);TGF-β、IL-23p19、IL-27p28、IL-27EBI3 mRNA水平及血浆蛋白浓度与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);血浆IFN-γ浓度显著升高,mRNA水平无变化;急性期KD患儿CD4+ CD25+ Tr细胞比例明显低于正常对照组(P<0.01),其转录因子Foxp3表达亦明显降低(P<0.01).结论 急性期KD患儿Th17细胞过度活化可能参与了KD免疫发病机制.     

慢性乙肝患者树突状细胞对Th1/Th2分化的影响

探讨慢性乙肝患者树突状细胞(dendritic cells,DC)对CD4+Th细胞亚群分化的影响。分离慢性乙肝患者外周血单个核细胞(PBMC),以rhIL-4(50 ng/ml)、rhGM-CSF(10 ng/ml)和rhTNF-α(100 u/ml)诱导培养DC。以流式细胞仪检测DC表面CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子表达情况。MTT法检测DC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力。免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞亚群,PMA+Ionomycin刺激后胞内荧光染色,流式细胞仪检测辅助性T细胞(helper T cell,Th)内特征性细胞因子IFN-γ/IL-4以判断Th1/Th2分化。ELISA法检测DC或Th细胞培养上清中IL-6、IL-12、IFN-γ和IL-4的含量。结果:慢性乙肝患者的DC表达CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子水平明显低于正常人(P<0.01);培养至第7天,慢性乙肝患者DC分泌的IL-12水平低于正常人(P<0.01),而分泌的IL-6水平增高(P<0.05)。与正常人相比,慢性乙肝患者外周血中Th1细胞占CD4+T细胞的百分比较低(P<0.01),其Th细胞培养上清中IFN-γ的量也较低(P<0.01)。患者DC与同种异体的健康人Th细胞共培养,刺激Th1型细胞因子IFN-γ产生的能力低于正常人(P<0.01)。慢性乙肝患者体内DC功能的异常可能导致了外周血Th1细胞分化不足。     

PcDNA3.0/p27~(kip1)真核表达质粒对小鼠哮喘模型Th1/Th2的影响

目的:探讨细胞周期负性调控蛋白PcDNA3.0/p27kip1重组真核表达质粒转染小鼠哮喘模型对Th1/Th2比例失衡的调节作用。方法:小鼠各10只分为A组(正常对照组)、B组(哮喘模型组)、C组(质粒治疗组)三组。用卵蛋白致敏法构建小鼠哮喘模型,以本实验室构建的PcDNA3.0/p27kip1重组真核表达质粒经静脉转染小鼠哮喘模型,36小时后Western blot检测肺组织中p27蛋白表达量;流式细胞仪分析小鼠脾CD4+、CD8+T细胞比例;ELISA检测小鼠血清IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ水平。结果:B组与A组比较,哮喘发病后肺p27蛋白表达量明显降低;脾CD4+T细胞显著增高而CD8+T细胞显著降低;血清IL-4、IL-5、IL-13水平明显升高而IFN-γ明显降低。C组与B组比较,肺p27蛋白表达量明显增加,脾CD4+T细胞比例显著降低而CD8+T细胞显著升高;血清IL-4、IL-5、IL-13水平明显降低而IFN-γ明显升高。结论:PcDNA3.0/p27kip1静脉给药可在哮喘模型肺组织中表达,并通过基因干预调控细胞周期的方式调节Th1/Th2比例失衡,为哮喘防治提出了新思路。     

Th17细胞分化的调节

Th17细胞是一群分泌IL-17的CD4+T细胞,它在分化发育及功能上不同于Th1细胞和Th2细胞。目前认为Th17细胞与自身免疫性疾病的发生发展密切相关,Th17细胞在病灶部位高表达,并与疾病的严重程度相一致。研究发现:CD4+CD25+Treg和Th17细胞的分化均需要TGF-β,并通过IL-6决定两者的分化比例,CD4+CD25+Treg和Th17细胞的动态平衡在机体免疫防御、免疫自稳中起着重要作用;RORγt是Th17细胞分化的关键转录因子,RORγt的表达依赖于IL-6和TGF-β;IL-23及其受体能上调Th17细胞的表达,而IL-12、IFN-γ、IL-4、T-bet抑制其表达。对Th17细胞的深入研究将有助于我们对自身免疫性疾病发病机制的深入了解。     

Toll样受体与Th1和Th2型免疫应答

Toll样受体是广泛表达在哺乳动物细胞表面的跨膜信号传导受体,其通过识别多种类型的病原体相关分子模式及一些内源性配体,激活天然免疫系统,同时通过诱导树突状细胞分化成熟,调控获得性免疫反应的建立。大多数TLRs的配体可诱导机体产生Th1型免疫应答,然而在某些条件下也可导致Th2型免疫应答的发生。弄清TLRs参与调节Th0分化的机制,可为今后在感染免疫、自身免疫、超敏反应等方面进行深入研究及相关疾病的治疗提供新的切入点。     

Th1/Th2失衡对于类风湿性关节炎炎症损伤的临床意义

目的 探讨类风湿性关节炎患者外周血以及关节液中的Th1/Th2失衡对于类风湿性关节炎炎症损伤的意义.方法 采用酶联免疫法(ELISA)检测42例类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血以及关节液中的IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α以及IFN-γ的表达情况.同时选取我院就诊的35例健康体检人员作为对照组.结果 相比于对照组以及RA患者的外周血,RA患者的关节积液中的IL-2、IL-6以及IL-10、IL-4水平均明显升高;相比于对照组的外周血,RA患者的外周血以及关节积液中的IFN-γ以及TNF-α水平均明显升高;相比于对照组,RA患者关节积液中的IFN-γ/IL-4比例明显升高.抗环瓜氨酸抗体(cyclic citrullinated peptide,CCP)阳性的RA患者关节积液中IL-2、IL-6、IFN-γ以及TNF-α的表达水平均明显高于CCP阴性的RA患者,以上数据组间比较差异均有统计学意义,P＜0.05.结论 Th1/Th2失衡是引起RA炎症性损伤的重要免疫学机制,其诱导的免疫性炎症反应是主要表现,CCP抗体阳性患者的炎性损伤更加严重.     

Type I interferons and the Th1/Th2 paradigm

During the past year significant advances have been made in our understanding of the factors contributing to the differentiation of CD4⁺ T helper cell subsets. These have been driven, in part, by the realization that cytokines from the innate immune response, such as interleukin-12 (IL-12) and interferons (IFNs), play a critical role in T cell subset differentiation. This review covers some of the most recent data concerning the divergent role that IFNs have in the differentiation of human versus mouse T helper cell subsets. In this review we discuss the molecular basis for the specie-specific effect of type I IFN on the selective induction of Th1 type immune responses. Furthermore, since IFN-β is used in the treatment of multiple sclerosis (MS) we discuss the potential effects of such treatment and the value of the Th1/Th2 paradigm in MS.     

树突细胞与哮喘Th1/Th2失衡

特应性哮喘患者以Th2免疫反应为主,导致气道炎症,Th1／Th2失衡是特庆性哮喘重要的免疫病理机制,树突细胞（DCs）中肺部主要抗原递呈细胞,不但可以介志对吸入抗原初始的免疫反应,活化辅助性T细胞,而且在可以决定T细胞的分化方向,维持哮喘Th2免疫反应和Th1／Th2失衡机制中发挥重要作用而日益受到重视。本文就近年来对特应性哮喘免疫病理机制中DCs对Th1／Th2失衡影响认识作一综述。     

Anti-idiotype immunomodulation of experimental anti-phospholipid syndrome via effect on Th1/Th2 expression.

Mice with experimental anti-phospholipid syndrome (APS), induced by active immunization with a human anti-cardiolipin MoAb (H-3), were treated with mouse anti-idiotypic MoAb (anti-H3, named S2.9) and with an irrelevant anti-idiotype. The immunized mice produced high titres of mouse anti-cardiolipin antibodies along with clinical manifestations of experimental APS: prolonged activated partial thromboplastin time (aPTT), thrombocytopenia and high rate of fetal loss. Treatment with the specific anti-Id (S2.9) as a whole molecule or F(ab)2 fraction, resulted in a decrease in serum levels of the anti-cardiolipin antibodies, rise in platelet count, shortened aPTT and reduced rate of fetal loss. The anti-Id effect was associated with a rise in the number of IL-2 and interferon-gamma (IFN-gamma)-secreting cells (Th1) and reduction in IL-4- and IL-6-secreting cells (Th2). The beneficial effect of the anti-Id treatment in mice with experimental APS induced by active immunization with an idiotype further supports the idiotypic aetiology of experimental APS and points to the role of Th1 cytokines in suppression of its manifestations.     

在单个细胞水平上分析抗原特异性Th1/Th2细胞因子产生的关联性

目的　在单个细胞水平上 ,观察抗原特异性Th1和Th2细胞因子产生的关联性 ,为进一步阐明CD4 T细胞的分化 ,细胞因子产生的相互关系及其特征提供理论依据。方法　从OVA TCR转基因小鼠的脾和淋巴结中分离CD4 T细胞 ,在体外在抗原提呈细胞存在下 ,用卵白蛋白 (OVA)抗原多肽刺激 3d后 ,再以同样的培养条件刺激 5～ 6h ,固定细胞 ,然后进行细胞表面和细胞内细胞因子染色 ,最后利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析Th1和Th2细胞因子产生的关联性。结果　抗原特异性CD4 T细胞经抗原再一次刺激后 ,分泌Th1(IFN γ和IL 2 )和Th2 (IL 4、IL 5和IL 10 )细胞因子。IL 12促进IFN γ的表达 ,控制Th2细胞的分化。此外 ,大多数抗原特异性CD4 T细胞只产生 1种细胞因子 ,1个细胞同时产生 2种细胞因子极少见。结论　在单个细胞水平上的研究结果表明 ,经抗原短暂刺激后 (3d) ,不同的CD4 T细胞亚群只产生 1种Th1和 或Th2细胞因子 ,同时产生两种以上者占有很低的比率     

尖锐湿疣患者外周血Thl/Th2及Tc1/Tc2亚群的检测及意义

目的 探讨辅助性T淋巴细胞(Th细胞)和细胞毒性T淋巴细胞(Tc细胞)的极化情况在尖锐湿疣(CA)发病机理中的作用及其与疾病复发的关系.方法 采用三色荧光抗体染色流式细胞术检测细胞内细胞因子的方法 ,检测30例CA患者和20名健康对照者外周血CD3+CD8-/IFN-γ+(Th1)、CD3+CD8-/IL4+(Th2)、CD3+CD8+/IFN-γ+(Tc1)和CD3+CD8+,IL-4+(Tc2)细胞比例.结果 与健康对照组比较,CA患者外周血中Thl细胞含量显著减少(P<0.01),Tc1细胞含量、Th1/Th2比值、Tc1/Tc2比值均减少(P<0.05);其中15例复发CA患者的Th1/Th2比值较正常对照显著减少(P<0.01),而Te1/Te2比值与健康对照组比较差异无统计学意义.结论 CA患者外周血Th1和Tc1细胞数减少,而Th2和Tc2细胞相对占优势,复发的CA患者这种失衡更趋严重.CA患者机体免疫状态可能存在Th1→Th2、Tc1→Tc2方向的漂移,这种漂移可能是人乳头瘤病毒(HPV)不易被有效清除或CA反复发生的一种免疫机制.     

纠正Th1/Th2迁移在小儿过敏性紫癜早期肾损伤急救中的临床意义

目的研究并探讨纠正Th1/Th2迁移在小儿过敏性紫癜早期肾损伤急救中的临床意义。 方法选取2012年1月至2015年1月于商丘市第一人民医院被确诊为小儿过敏性紫癜且发生早期肾损伤的50例患儿作为研究对象,命名为紫癜性肾炎组,另选取同期就诊的50例未发生肾损伤的小儿过敏性紫癜患儿和同期进行体检的50例健康体检儿,分别命名为单纯紫癜组、对照组,仅紫癜性肾炎组患儿给予纠正Th1/Th2迁移治疗。各组治疗前后采用流式细胞仪检测Th1、Th2细胞的比例、ELISA法测定白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)含量、免疫比浊法检测尿微量蛋白含量。 结果治疗前,紫癜性肾炎组与单纯紫癜组IL-4、IFN-γ、Th1、Th2差异均无统计学意义(P>0.05),但两组的IFN-γ、Th1、Th1/Th2均较对照组明显更低,IL-4、Th2均较对照组明显更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与治疗前相比,紫癜性肾炎组患儿治疗后的IFN-γ、Th1、Th1/Th2均明显提升高,IL-4、Th2均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),紫癜性肾炎组尿微量蛋白含量得到显著改善(P<0.05)。 结论给予小儿过敏性紫癜早期肾损伤患儿纠正Th1、Th2迁移治疗,可有效纠正Th1/Th2失衡,Th1/Th2可作为判断小儿过敏性紫癜病情进展及其早期肾损伤预后的重要指标。     

苦参素对HBsAg转基因小鼠血清Th1和Th2细胞因子水平的影响

目的　探讨苦参素对HBsAg转基因小鼠外周血Th1 Th2细胞因子水平的影响。方法　HBsAg转基因小鼠分成苦参素组和对照组 ,分别每天腹腔注射苦参素注射液 2 0 0mg kg 0 2ml和生理盐水 0 2ml,共 30d。处理前后 ,检测外周血清细胞因子水平。结果　对照组处理前后γ 干扰素(IFN γ)与白细胞介素 4 (IL 4 )水平差异无显著意义 ;苦参素组处理前后IFN γ分别为 (3 10 8± 3 172 )pg ml和 (11 0 5 9± 6 971)pg ml,IL 4分别为 (2 9 0 4 5± 13 2 35 )pg ml和 (13 0 2 4± 9 0 0 2 )pg ml(均P <0 0 0 1)。处理后对照组与苦参素组IL 2分别为 (1 0 70± 0 4 4 7)pg ml和 (5 5 37± 2 887)pg ml(P <0 0 0 0 1) ;IL 10分别为 (97 2 2 6± 73 30 6 )pg ml和 (33 6 0 7± 2 3 15 4 )pg ml(P <0 0 1)。结论　在苦参素作用后 ,HBsAg转基因小鼠体内的Th1型细胞因子明显升高 ,Th2型细胞因子明显降低。这将有助于研究苦参素临床治疗乙型肝炎的机制。