L-缬氨酸高产菌选育及营养需求研究

以黄色短杆菌 (Brevibacteriumflavum)L 缬氨酸产生菌ZQ -2为出发菌株 ,经硫酸二乙酯(DES)和亚硝基胍 (NTG)诱变处理 ,氨基酸结构类似物定向筛选 ,获得一株L 缬氨酸高产菌XQ -6 (LeulAHVrα ABhr2 TAhr)。在以 1 4 %葡萄糖为碳源、5 %硫酸铵为氮源的培养基中直接发酵72h,产酸达 5 8～ 6 2g/L。同时添加Fe2 + 和Mn2 + 比单独添加Fe2 + 更有效。还进行了氨基酸、核酸、维生素和其它营养对L 缬氨酸发酵影响的试验。     

复合诱变选育乳链菌肽高产菌株

目的选育乳链菌肽高产菌株。方法以乳酸链球菌ATCC11454为出发菌株,采用紫外线、微波和亚硝酸钠对其进行复合诱变处理,并结合乳链菌肽抗性筛选选育出高产乳链菌肽的菌株。结果通过选育获得一株乳链菌肽的高产菌株Nis-123,乳链菌肽产量为5 250 U/mL,较出发菌株提高了4.3倍。传代实验证明该菌株遗传性稳定。结论紫外线、微波和亚硝酸钠复合诱变结合乳链菌肽抗性选育可以提高乳酸链球菌的产肽能力。     

利用原生质体诱变筛选L-亮氨酸高产菌株的研究

本实验以L-亮氨酸产生菌黄色短杆菌CF-435为出发菌株,制备原生质体,在原生质体形成率和再生率最佳的条件下,利用紫外线、利福平、氯化锂对原生质体进行复合处理,获得再生突变株,从中挑取单独菌落进行摇瓶发酵,筛选出高产菌株UV_3-29,在含有葡萄糖10%的培养基中发酵72h可积累L-亮氨酸26.73mg/ml,比原始菌种产酸量提高26%.     

L-赖氨酸高产菌株的选育及发酵培养基优化

目的以L 赖氨酸产生菌钝齿棒杆菌 (Corynebacteriumcrenatum)D60 -95为出发菌株 ,提高L 赖氨酸产量。方法采用紫外线诱变处理 ,对大量抗七叶苷 (esculin)突变株进行初筛、复筛 ;在此基础上 ,利用均匀设计方法对发酵培养基成分进行优化组合。结果得到抗性突变株E0 9-3 7,其发酵液中L 赖氨酸产量较出发菌株提高 2 0 6 % ;发酵培养基主要成分最佳配比为葡萄糖 14 0g·L-1,硫酸铵 5 5 g·L-1,碳酸钙 5 0 g·L-1和盐酸豆饼水解液 18g·L-1。结论以上方法是选育L 赖氨酸高产菌株的有效途径。     

利用亚硝酸诱变原生质体筛选L-亮氨酸高产菌株的研究

本实验以L-亮氨酸产生菌黄色短杆菌CFN-19为出发菌株。我们首先对CFN-19菌株制备原生质体,原生质体制备率为95.1%,再生率为25%,然后对原生质体进行亚硝酸、利福平、氯化锂复合诱变处理,从再生菌株中筛选出一株高产菌株H_(6-66),产酸量由原来的23.1mg/ml提高到32.6mg/ml,提高率达41%.同时又对H_(6-66)菌株进行遗传稳定性考察,考察结果H_(6-66)菌株是高产稳定菌株。     

L-赖氨酸高产菌株筛选

本实验以Ｌ－赖氨酸产生菌钝齿棒杆菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｃｒｅｎａｔｕｍ）ＯＭ－４（ＨＳ＋，ＡＥＳｒ，Ｍｅｔｒ）为出发菌株，经硫酸二乙酯和氯化锂复合诱变处理，用ＡＥＣ（Ｓ－［２－氨乙基）－Ｌ－半胱氨酸）和苏氨酸定向筛选获得了高抗ＡＥＣ的突变株ＡＴ－５（ＨＳ＋，ＡＥＣｒ，Ｍｅｔｒ）菌株，再以ＡＴ－５为出发菌株经亚硝基胍诱变处理，获得一株产Ｌ－赖氨酸的ＴＡ（２－噻唑－ＤＬ－丙氨酸）抗性突变株（ＡＴＴ一６８号），菌株产酸量由原来ＯＭ一４菌株的４６．３ｍｇ／ｍＬ提高到７４．８ｍｇ／ｍＬ提高１６１．５％，在筛选结构类似物抗性突变株时采用小钢杯法，可大大节省结构类似物药品．     

复合诱变选育青霉素高产菌株

青霉素(penicillin)属于抗革兰阳性细菌的β-内酰胺类抗生素,由于青霉素是其产生菌的自身代谢产物,随着发酵液中青霉素浓度的增大导致产生自身的反馈调节作用不断增强,影响青霉素的继续合成,所以,培育对自身终端代谢产物的抗性菌是解除代谢反馈阻遏的有效方法.     

L-鸟氨酸脱羧酶抑制剂筛选模型的建立

目的：基于酶促反应法,利用HPLC测定腐胺含量,评价待筛选药物对PC-3M细胞中L-鸟氨酸脱羧酶（ L-ODC）活性的影响,建立鸟氨酸脱羧酶抑制剂的筛选模型。方法将与药物反应后的细胞处理样本,以TSKge lODS-80TM凝胶色谱柱（150 mm ×4．6 mm,5μm）为分析柱,在甲醇-水（8∶2）保持3 min,从4 min到14 min,甲醇比率由80％梯度增至100％梯度洗脱,流速为0．8 ml/min,激发波长为340 nm,发射波长为515 nm,柱温为50℃,进样量10μl。按内标法定量。结果 ODC特异性抑制剂二氟甲基鸟氨酸（DFMO）对ODC活性的抑制率为（59．3±5．4）％,雷帕霉素对ODC活性的抑制率为（29．8±6．4）％,姜黄素对ODC活性的抑制率为（26．1±6．6）％。结论本模型通过测定药物对ODC细胞内鸟氨酸脱羧酶的作用,利用HPLC分离法测定在药物抑制影响下的鸟氨酸脱羧酶的活性,这一模型有望成为筛选ODC抑制剂的快速方便准确的检测方法。     

复合诱变选育乳链菌肤高产菌株

目的 选育乳桩菌肽高产菌株.方法 以乳酸链球菌ATCC11454为出发菌株,采用紫外线、微波和亚硝酸钠对其进行复合诱变处理,并结合乳链菌肽抗性筛选选育出高产乳健菌肽的菌株.结果 通过选育获得一株乳健菌肽的高产菌株Nis-123,乳链菌肽产量为5 250 U/mL,校出发菌株提高了4.3倍.传代实验证明该菌株遗传性稳定....     

硫酸二乙酯诱变原生质体选育赖氨酸高产菌株的研究

本实验以Ｌ－赖氨酸产生菌钝齿棒杆菌（ｃｏｒｙｎｅ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｒｅｎａｔｕｍ）Ｅ２２６（ＨＳ＾＋、ＡＢＣ＾ｒ１Ｍｅｔ＾ｒ、ＴＡ、ＥＳ＾ｒ）为出发菌株，经甘氨酸、青霉素，溶菌酶作用形成原生质体，并对原生体进行硫酸二乙酯（ＤＥＳ）的诱变处理，然后对大量的再生突变株进行初筛、复筛、获得了高产稳定菌株Ｄ６０￣１０９，其发酵液中Ｌ－赖氨酸含量较出发菌株提高了１９．４％。并且又对发酵培养基通过菌株的     

尼莫克汀高产菌株诱变选育研究

目的 为了提高尼莫克汀产量以满足生产需求。方法 本试验以蓝灰链霉菌N20-69为出发菌株,探索了紫外(UV)诱变、常压室温等离子体(ARTP)诱变、亚硝基胍诱变、UV氯化锂复合诱变与ARTP缬氨酸氧肟酸复合诱变育种。结果 筛选到了11株高产突变株,均将出发菌株提高了20%以上,其中突变株NAX-96遗传性稳定,最适种龄为19 h。在500 L发酵罐发酵实验中,突变株NAX-96在生产能力上优势明显,尼莫克汀的产量达到3593μg/mL,比出发菌株N20-69(2477μg/mL)提高了45%。结论 研究结果对实际生产有重要指导作用。     

多因素复合诱变选育克拉维酸高产菌株

采用多因素连续复合诱变的方法,对克拉维酸产生菌带小棒链霉菌(Streptomyces clavuligerus)进行系列诱变,以抗生素抗性作为理性筛选标记,从含青霉素35 μg/ml的琼脂平板上筛选到青霉素抗性突变株YT-201-57#,在摇瓶实验中,对青霉素的抗性由8μg/ml提高到45 μg/ml,克拉维酸产景较出发菌株提高10.3%,且高产遗传特性经5次传代仍稳定.     

L—精氨酸产生菌的选育及其发酵条件

以谷氨酸棒杆菌（Glutamicum corynebacterium )JHAS(His∧-,SG∧r）为出发菌株,经硫酸二乙酯（DES）和亚硝基胍（NTG）逐级诱变处理,获得一株精氨酸高产菌JDN28-50（His∧-SG∧rD-Arg∧rL-HA∧r）,在以120g/L葡萄糖为碳源、50g/L硫酸铵为氮源的培养基中培养4d,产酸可达30g/L。     

复合诱变选育抗菌肽Sublancin局产菌株

Bacillus subtilis BF168可以产生一种新型的抗菌肽Sublancin,Sublancin具有明显的抗革兰氏阳性菌活性,但产量较低.为了获得Sublancin高产菌株,对其产生菌B.subtilis BF168进行诱变选育研究.以B.subtilis BF168为出发菌株,采用加热、紫外(Ultrav...     

原生质体ARTP诱变选育阿维拉霉素高产菌株

目的 筛选获得阿维拉霉素A含量高的菌株,进一步提高绿色产色链霉菌(Streptomyces viridochromogene)发酵阿维拉霉素的水平。方法 对绿色产色链霉菌AVL4(S. viridochromogene AVL4)菌株原生质体制备及再生条件进行了优化,并在此基础上,采用ARTP诱变系统对其原生质体进行了诱变研究。结果 S. viridochromogene AVL4原生质体制备和再生的最佳条件为：以活化斜面转接至种子摇瓶培养24h的菌丝体为出发菌丝体,以SMM溶液作为渗透压稳定剂,采用12mg/mL的溶壁酶,30℃酶解反应60min。以原生质体为诱变对象,ARTP处理40s后的菌株经菌落形态初筛和摇瓶发酵复筛,获得一株编号S251的菌株,其摇瓶发酵阿维拉霉素的生物效价较出发菌株提高19.3%,其中,阿维拉霉素A占组分含量81%,较原始出发菌株AVL4含量提高6.4%,而且斜面连续转接五代遗传相对稳定。另外,成功实现变株S251的50L罐发酵验证,其产素水平最高达到4500U/mL,较对照菌株AVL4提高27.4%。结论 ARTP处理AVL4菌株原生质体,能够有效提高绿色产色链霉菌产阿维拉霉素的能力,获得的变株S251具有非常好的生产阿维拉霉素的工业化应用潜力。     

庆大霉素优良高产菌株的诱变选育研究

为得到优良的庆大霉素(GM)高产菌,以Micronozpora Echinozpora 07-1为出发菌,经硫酸二乙酯(DES)和微波诱变处理,以自身代谢终产物为筛子,采取抗性平板以及摇瓶动态选育两种方式,结合薄板层析(TLC)检测进行优良突变菌株的筛选.筛选得到的产C1组分比例较高的优良突变菌株突变菌株D15,其发酵液中C1含量达到GM中的45.94%,生物效价为1 400 U/ml,较出发菌株提高了66.8%,并且具有良好的遗传稳定性.     

复合诱变法选育普那霉素高产菌株

以始旋链霉菌(Streptomyces pristinaespiralis)ZP2为出发菌株,经紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)复合诱变,并结合普那霉素抗性突变株的理化筛选,选育到一株高产突变菌株UN2056,其普那霉素产量达到1490 mg/L,比出发菌株提高了45.7%.传代试验表明该高产突变菌株的高产性能遗传特性稳定.高产突变株UN2056在5 L发酵罐中进行发酵试验,其平均发酵产量达到1645 mg/L,比出发菌株提高了60.8%.     

利用原生质体诱变筛选L-异亮氨酸高产菌株

在捧杆菌原生质体制备中,以单一甘氨酸代替青霉素与溶菌酶进行细胞脱壁处理,以含0.3M蔗糖的普通肉汤培养基作为再生培养基。L-异亮氨酸产生菌A6在肉汤中培养至对数期,加入0.3M蔗糖和3%甘氨酸,继续培养8h,原生质体的形成率达98%。原生质体经洗涤后的再生率为81.6%,不经离心洗涤直接涂皿的再生率为81.2%。A6菌株的原生质体经紫外线诱变处理后,再生菌株的L-异亮氨酸产量高达14.3mg/ml,比原菌株产量提高30%左右。     

复合诱变选育多黏菌素E高产菌株

以多黏芽胞杆菌（Bacillus polymyxa）090918为出发菌株,经60-Co-r射线照射（剂量为22Gy）、甲磺酸乙酯（EMS）诱变处理、多粘菌素E耐受等处理,得到一株多粘菌素E突变株120116,其摇瓶发酵效价较出发菌株提高26％。