参附益心颗粒通过线粒体KATP通道改善缺氧H2C9心肌细胞能量代谢的作用＊

目的 探索参附益心颗粒改善缺氧心肌细胞能量代谢的机制。方法 采用CCK-8法筛选出参附益心颗粒含药血清实验研究的药物浓度。H2C9心肌细胞随机分为正常组，缺氧组，缺氧 + 二氮嗪组，缺氧 + 参附益心颗粒组，缺氧 + 参附益心颗粒 + 5-羟基癸酸组.除正常组外，根据实验分组，缺氧处理前预先对细胞进行二氮嗪、5-羟基癸酸和参附益心颗粒含药血清处理，后将细胞置于缺氧的37℃的细胞培养箱中连续培养6 h。采用荧光素酶发光法检测细胞ATP的浓度，CCK-8检测细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞的凋亡水平，Western blot测定线粒体K_ATP（mitoK_ATP）的蛋白Kir6.2和SUR2A的表达。结果 根据CCK-8实验结果选择250 μM的参附益心颗粒含药血清作为实验药物浓度。与正常组相比，缺氧H2C9心肌细胞ATP水平显著降低，细胞的增殖能力降低，凋亡率增加，mitoK_ATP通道蛋白的Kir6.2和SUR2A的表达水平均显著降低（均P < 0.01）。与缺氧组相比，二氮嗪和参附益心颗粒组的ATP浓度，细胞增殖能力和Kir6.2，SUR2A蛋白表达水平均显著升高，细胞的凋亡率显著下降（均P < 0.01）。而参附益心颗粒经mitoK_ATP阻断剂5-羟基癸酸作用后，细胞的ATP浓度，增殖能力和Kir6.2，SUR2A的表达均显著下降（均P < 0.01），凋亡率明显升高（P < 0.01）。结论 参附益心颗粒可能通过mitoK_ATP通道改善缺氧心肌细胞的能量代谢。     

参附注射液对脓毒症大鼠心肌氧化应激和线粒体呼吸功能的影响

目的:观察参附注射液对脓毒症大鼠心肌氧化应激和线粒体呼吸功能的影响。方法:采用肓肠结扎穿孔法制备腹腔感染脓毒症动物模型。80只SD大鼠随机分为假手术组(Sham),脓毒症组(CLP),参附注射液低、高剂量治疗组(LSF,HSF)共4组。记录手术后6、18h各组的平均动脉压(MAP)、心率(HR)、心脏收缩功能指标(LVDP和+dP/dt)、心脏舒张功能指标(LVEDP和-dP/dt)、心肌细胞凋亡发生率(AI)、心脏组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、呼吸控制比(RCR)。结果:与Sham组比较,CLP组术后6h的HR显著升高(P0.05),但术后18h的HR显著降低(P0.01);术后6h和18h的MAP、LVDP、+dP/dt、LVEDP、-dP/dt、SOD、RCR均显著下降(均P0.01),AI、MDA均显著升高(P0.05或0.01)。而与CLP组比较,LSF组术后6h的MAP和HR、HSF组术后6h的HR均无显著差异(均P0.05),但HSF组术后6h的MAP及LSF组和HSF组术后18h的HR、MAP均显著升高(P0.05或0.01);LSF组和HSF组术后6h、18h的LVDP、+dP/dt、LVEDP、-dP/dt、SOD、RCR均显著升高(P0.05或0.01);LSF组和HSF组术后6h、18h的AI、MDA均显著降低(P0.05或0.01)。结论:参附注射液可不同程度地增高CLP大鼠的平均动脉压、改善其心功能、减少心肌细胞凋亡的发生和心肌组织MDA含量,增加SOD活性,保护线粒体功能;且高浓度参附注射液则以上结果更明显。参附注射液有助于脓毒症大鼠心肌氧化应激和线粒体呼吸功能异常的恢复,这些作用的强度与参附注射液的剂量成正比。     

参附注射液对大鼠缺血/再灌注损伤期间心肌细胞基因表达的影响

 目的对参附注射液抗心肌缺血/再灌注损伤可能的分子机制进行初步探讨。方法SD大鼠19只,分为2组,对照组和参附注射液组,分别为生理盐水组,心肌缺血30 min/再灌注10 min+参附注射液组。建立心肌缺血/再灌注损伤模型,分别收集各组大鼠心肌组织,提取心肌细胞总RNA,利用Affymetrix Rat 230A芯片进行基因差异表达分析,用Microarray Suite 5.0软件读取并进行数据处理。结果心肌缺血/再灌注10 min后,给药组与对照组比较明显上调基因222条,明显下调基因246条。与心肌缺血/再灌注损伤密切相关的主要基因有,超氧化物岐化酶、谷胱苷肽S转移酶、巨噬细胞移动抑制因子、热休克蛋白、钙通道电压依赖相关基因及金属硫因等基因。这些基因主要与抗氧自由基损伤、抑制细胞凋亡、心肌保护、抑制炎症及抑制心肌缺血/再灌注损伤时的钙超载等机制相关。结论参附注射液对心肌起到保护作用的分子机制主要是通过调节抗氧自由基损伤相关基因、炎症相关基因及钙转运酶等相关基因,进而参予调控心肌缺血/再灌注损伤疾病过程中细胞信号转导。通过抗过氧化脂质损伤作用,减轻缺血时被激活的白细胞聚集等炎症反应,抑制缺血/再灌注期间钙超载所致的细胞凋亡发生,从而提高心肌细胞的防御能力,起到保护心肌的作用。     

参附益心方对缺氧条件下原代心肌细胞葡萄糖利用的作用研究

目的观察参附益心方在缺氧条件下对原代心肌细胞葡萄糖利用的作用。方法取新生1～3天的SD乳鼠,进行原代心肌细胞分离、培养、鉴定,利用缺氧条件建立原代心肌细胞模型,筛选参附益心方0.25、0.5mg/ml、辅酶Q10 1×10~(-4)mol/L进行干预,实验共设5组:正常组,模型组,参附益心方低剂量组(0.25mg/ml)、高剂量组(0.5mg/ml)和辅酶Q10组(1×10~(-4)mol/L),试剂盒检测各组ATP含量及乳酸脱氢酶(LDH)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测AMP激活的蛋白激酶(AMPK)、丙酮酸脱氢酶(PDH)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)基因表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GLUT-4蛋白的表达。结果与正常组相比,模型组原代心肌细胞ATP含量及GLUT-4基因与蛋白表达含量明显降低, AMPK、PDH基因表达及LDH含量明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,参附益心方高剂量组可提高缺氧条件下原代心肌细胞ATP含量与GLUT-4基因和蛋白表达,降低AMPK和PDH的基因表达及LDH含量(P0.05,P0.01);参附益心方低剂量组可降低心肌细胞LDH含量,提高GLUT-4基因和蛋白表达(P0.05,P0.01)。参附益心方对心肌细胞ATP和LDH含量、AMPK和PDH基因表达,GLUT-4基因和蛋白表达作用呈剂量依赖性。结论参附益心方可通过提高缺氧条件下原代心肌细胞GLUT-4基因和蛋白表达,并降低LDH含量、回调心肌AMPK和PDH的基因表达,从而提高缺氧条件下原代心肌细胞葡萄糖的利用,改善心肌ATP储备。     

参附注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 观察单味中药红参、附子及参附注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法 40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、参附组、红参组及附子组。结扎冠状动脉左前降支使心肌缺血,60min后恢复血流并持续240min,复制缺血再灌注损伤模型。治疗组分别于缺血再灌注前10min经右颈内静脉注射参附注射液10mg／kg,红参注射液9mg／kg,附子注射液1mg／kg。模型组及假手术组给予等体积生理盐水。观察心肌梗死面积的大小,光镜和透射电镜下的心肌病理变化,测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)及心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)值。评价红参、附子单独使用或参附合用对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。结果参附组、红参组及附子组与模型组比较,心肌梗死面积明显缩小,血清LDH、CK值降低,心肌组织MDA值减小,SOD值升高。光镜及透射电镜下心肌细胞变性坏死程度及心肌细胞超微结构形态改变显著减轻。治疗组组间比较,参附组优于红参组和附子组。红参组和附子组之间比较,差异无显著性。结论 红参、附子或参附合用对大鼠心肌缺血再灌注损伤均有保护作用。参附合用疗效优于红参和附子单独应用。     

参附益心颗粒对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌线粒体呼吸功能的影响

目的观察参附益心颗粒对心力衰竭大鼠线粒体呼吸功能的影响。方法采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法复制心肌梗死后心力衰竭大鼠模型。将造模成功的40只大鼠随机分为模型组、参附益心颗粒(简称参附)常用剂量组[1.76 g/(kg·d)]、大剂量组[8.8 g/(kg·d)]和氯沙坦组[10 mg/(kg·d)],每组10只,同时设假手术组10只。分别给予相应的药物或相同体积的蒸馏水灌胃4周。利用颈动脉导管法测量相关血流动力学指标:心率(HR)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)及左室压最大上升和下降速率(±dp/dtmax);采用Seahorse法检测线粒体呼吸功能相关参数:基础呼吸、最大呼吸、态3呼吸(T3)、态4呼吸(T4)和控制率(RCR);Western Blot法检测心肌线粒体呼吸链复合酶Ⅰ~Ⅴ的蛋白表达量。结果与假手术组比较,模型组HR、LVEDP明显升高(P<0.01),LVSP、±dt/dpmax降低(P<0.05,P<0.01);T3、最大呼吸及RCR1、RCR2值均降低(P<0.01),T4明显升高(P<0.01);呼吸链复合酶Ⅲ和Ⅳ表达降低(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,各药物干预组LVEDP降低(P<0.01),±dt/dpmax升高(P<0.05,P<0.01),参附常用量和大剂量组LVSP增高(P<0.05,P<0.01),参附常用量组和氯沙坦组中HR降低(P<0.05);各药物干预组T3、最大呼吸和RCR值均上升(P<0.01),参附常用量组和氯沙坦组T4下降(P<0.05,P<0.01);各药物干预组呼吸链复合酶Ⅲ均升高(P<0.01,P<0.05),参附大剂量组和氯沙坦组中呼吸链复合酶Ⅳ升高(P<0.05)。结论参附益心颗粒能够改善心衰大鼠线粒体呼吸功能、增加心肌收缩力,其机制可能与抑制线粒体呼吸链复合酶Ⅲ和Ⅳ含量的降低有关。     

提高新生大鼠原代心肌细胞纯度方法的探讨

目的:探讨提高新生大鼠原代心肌细胞纯度的方法。方法:应用0.08%心肌细胞消化液重复消化出生第1-3天乳鼠的心肌组织多次;收集的细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基中和。用差速贴壁分离法分离后,加入红细胞裂解液,以除去红细胞,加入溴脱氧尿嘧啶(Brdu)纯化心肌细胞后置CO2培养箱孵育2天,无血清同步化1天。结果:分离1只乳鼠获得的心肌细胞产量约为1.2×106个,有活力心肌细胞占90%以上,心肌细胞纯度>90%,3-4天后心肌细胞融合成片,并出现自发性节律性搏动。结论:该方法在保证心肌细胞产量和心肌细胞活性的同时,能大幅度提高心肌细胞纯度。     

参附注射液对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的：观察参附注射液对大鼠心室肌细胞L型钙通道的作用。方法：采用急性酶解法获得单个心肌细胞,全细胞膜片钳技术记录钙电流。结果：参附注射液浓度依赖性阻断L型钙通道电流,其IC50为原液2.5%稀释。参附注射液（0.3%,3%）能够上移I-U曲线,但不改变峰电位和反转电位;3%参附注射液对L型钙通道激活曲线失活曲线无明显影响,但可使通道电流从失活中恢复的时间明显延长,时间常数由给药前的82ms增至给药后的139ms。结论：参附注射液对心肌细胞L型钙通道电流有抑制作用。     

青阳参对点燃癫痫大鼠脑内c-fos、c-jun基因表达的影响

目的：探讨青阳参抗痫作用的分子生物学机制。方法：大鼠杏仁核快速点燃癫痫模型，应用免疫组化技术观察青阳参对点燃癫痫大鼠脑内c—fos、c-jun基因表达的影响。结果：杏仁核点燃癫痫大鼠脑内c-fos、c-jun基因表达明显增强，青阳参能明显阻断其表达，阳性细胞数量明显减少。结论：青阳参的抗痫作用机制可能与降低脑内c-fos、c-jun基因表达有关。     

参附注射液对实验性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡干预作用的研究

目的:研究参附注射液对心力衰竭大鼠心肌凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法:45只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,采用左冠状动脉结扎法建立心力衰竭模型。对照组和模型组给予0.9%氯化钠溶液、参附组给予腹腔注射参附注射液(6.2mL.kg-1.d-1,4周)。采用TUNEL和免疫组化检测心肌凋亡和相关蛋白。结果:共有38只大鼠存活。对照组(n=14)未见心肌凋亡,模型组(n=13)凋亡数量增加,而参附组(n=11)凋亡数量明显减少,与模型组比较差异具有显著性(P0.01)。与对照组相比,模型组Bax、Bcl-2、Fas和FasL蛋白表达增加(P0.05);与模型组相比,治疗组Bax、Fas和FasL蛋白表达显著下降(P0.01)。结论:参附注射液能够抑制实验性心力衰竭大鼠心肌凋亡,其作用机制与下调促凋亡基因Bax、Fas和FasL表达的作用相关。     

参附益心颗粒对心衰大鼠心肌c-fos,c-myc表达的影响

目的:探讨参附益心颗粒对心衰大鼠心肌c-fos,c-myc表达的影响。方法:随机将150只雄性SD大鼠分为造模组130只,假手术组20只。造模组结扎左冠状动脉前降支,假手术组手术方法同上,仅在冠状动脉前降支下穿线不结扎。造模8周后,经超声测定大鼠左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)<50%者随机分为5组(模型组、卡托普利组、氯沙坦组、参附益心颗粒(5.48,21.90 g.kg-1.d-1)2个剂量组,每组10只,另选假手术组大鼠10只。假手术组及模型组以纯净水ig,药物干预组将药物溶于纯净水中ig给药,每天1次,疗程4周。4周后超声测定LVEF,称重后,处死测左室重量指数(left ventricular mass index,LVMI),免疫组化法检测大鼠心肌中c-fos,c-myc表达。结果:21.90 g.kg-1.d-1参附益心颗粒可显著提高心衰大鼠LVEF,降低LVMI,抑制心衰大鼠心肌中c-fos,c-myc表达。结论:参附益心颗粒能够通过抑制心衰大鼠心肌中c-fos,c-myc表达,抑制心肌重塑。     

益心方治疗冠心病不稳定型心绞痛临床研究

目的观察益心方配合常规西药治疗不稳定型心绞痛的临床疗效。方法将180例患者随机分为两组各90例，治疗组90例在西药常规治疗的基础上加用益心方，对照组90例给予西药常规治疗。结果治疗组心绞痛症状改善和心电图疗效与对照组比较无差异，但能明显减少心绞痛发作次数和硝酸甘油的用量，且对血液流变学指标也有较好地改善作用。结论中西医结合治疗对不稳定型心绞痛有更加理想的疗效。     

排毒益心汤治疗急性病毒性心肌炎的研究

目的观察排毒益心汤治疗急性病毒性心肌炎的临床疗效。方法将60例急性轻、中度病毒性心肌炎患者随机分为2组,治疗组30例给予排毒益心汤,对照组30例给予能量合剂,2组疗程均为4周。结果排毒益心汤在改善患者临床症状、纠正异常心电图、降低血清心肌酶、改善左心室功能状态等方面优于对照组。结论排毒益心汤是治疗轻、中度急性病毒性心肌炎的有效方药。     

抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌纤维化相关蛋白表达的影响

目的:观察抗纤益心方对扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)大鼠心肌纤维化的作用及可能的作用机制.方法:参照相关文献将雄性Wistar大鼠随机分为造模组和正常组,造模组大鼠用呋喃唑酮复制DCM大鼠模型,10周后根据心脏超声情况将造模成功大鼠随机分为模型组、抗纤益心方低、中、高剂量组与卡托普...     

参芪益心方对心力衰竭大鼠心肌细胞线粒体解耦联蛋白2的干预作用

目的:观察参芪益心方对心力衰竭大鼠心肌细胞线粒体解耦联蛋白2(UCP2)的干预作用。方法:建立阿霉素诱导心力衰竭大鼠模型,观察参芪益心方对大鼠心功能、心肌线粒体内三磷酸腺苷(ATP)、磷酸肌酸(PCr)、UCP2表达的影响。结果:与依那普利组比较,参芪高剂量组LVEDD、LVESD、EF、FS、CO、ATP差异无统计学意义(P0.05),与芪苈强心组比较,参芪高剂量组LVEDD、LVESD、EF、FS、CO差异无统计学意义(P0.05)。参芪高剂量组与参芪低剂量组比较,LVEDD、ATP差异有统计学意义(P0.05)。与依那普利组比较,参芪高剂量组下调UCP2表达差异有统计学意义(P0.05),与芪苈强心组比较参芪高剂量组下调UCP2表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:参芪益心方可以提高心力衰竭大鼠心肌细胞ATP和PCr含量,下调UCP2的表达。     

参附芎泽方药对阿霉素所致心力衰竭大鼠心功能的影响

目的研究参附芎泽方药对阿霉素所致心力衰竭大鼠心功能的影响,并探讨其作用机制。方法 SD大鼠随机分为2组:阿霉素组40只,腹腔注射阿霉素,2.5 mg/kg,3次/周,连续2周;生理盐水组,10只,腹腔注射同剂量的生理盐水,连续2周,随后正常饮食4周。2周后阿霉素组死亡7只,余下33只随机分为4组:阿霉素对照组9只,正常饮食;低剂量中药组(每毫升煎液含生药0.5 g)、中剂量中药组(每毫升煎液含生药1 g)、高剂量中药组(每毫升煎液含生药2 g),每组8只,持续灌胃4周,剂量均为12 ml/(kg.d),4周后测量每组大鼠体质量、心脏质量,计算心脏质量/体质量;右侧颈总动脉插管至左心室,采用多导生理信号采集处理系统监测大鼠血流动力学指标;病理切片,HE染色,光镜观察左心室心肌组织变化。结果阿霉素组相对于生理盐水组大鼠体质量、心脏质量及心脏质量/体质量均降低,且体质量的降低更为显著(P<0.05);血流动力学指标:平均动脉压、心率、左心室收缩压、左心室内压最大上升及下降速率均下降,左心室舒张末期内压升高(P<0.05);镜下观察左心室心肌组织损伤明显,经各方药组灌胃干预4周后,以上各项指标均有所改善,且以大剂量方药组的作用显著。结论参附芎泽方药对阿霉素所致心衰具有较好的防治作用,能够明显改善心衰大鼠的心脏功能。     

青蒿琥醋诱导人原代白血病细胞凋亡及其相关基因表达谱的初步研究

目的 探索青蒿琥酯治疗人类急性白血病的作用及其分子机理.方法 收集人类急性白血病患者骨髓细胞,进行原代培养;MTT法检测青篙琉醋对急性白血病原代细胞增殖的影响;基因芯片观察青蒿琥酯作用前后相关基因表达变化.结果 浓度为50,25,12.5 ug/ml,的青蒿琥酯分别作用于急性白血病原代细胞,48h后抑制率依次为56.25%、41.49%、30.08%;72h后抑制率依次为59.8%、45.07%、33.57%,呈剂量、时间依赖关系;青蒿琥酯醋对AL原代细胞的半数抑制率浓度(IC50为18.3 ug/mL;经青蒿琥酯作用后,AML-M3和ALL-L2原代细胞基因表达谱分别呈现变化趋势,并与药物剂量呈梯度比例关系.结论 青蒿琥酯抗AL原代细胞的作用包括多方面,诱导细胞凋亡是其主要作用,可能的机制包括通过Bcl-2途径、线粒体途径、Tnf/TnfR1及Fas/FasL信号转导途径、Jak/Stat通路等诱导AL细胞凋亡;同时青蒿琥酯还有抑制AL原代细胞的增殖及诱导AL原代细胞向成熟分化的作用.     

益心抑毒汤治疗急性病毒性心肌炎的临床观察

目的：研究自拟方益心抑毒汤治疗急性病毒性心肌炎的临床疗效。方法：将７６例急性轻、中度病毒性心肌炎患者随机分为两组，试验组４０例给予益心抑毒汤，对照组３６例给予芪冬颐心口服液，两组疗程均为４周。结果：益心抑毒汤在改善患者临床症状，纠正异常心电图，降低血清心肌酶，改善左心室功能状态，调整患者Ｔ细胞免疫功能（提高ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８）等方面优于对照组。结论：益心抑毒汤是治疗轻、中度急性病毒性心