44株阴沟肠杆菌耐药基因分析

目的了解解放军第98医院临床分离的阴沟肠杆菌耐药基因存在状况。方法采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析44株阴沟肠杆菌中15种耐药相关基因。结果44株中,12种基因blaTEM、blaOXA-1群、blaMIR、blaDHA、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、intⅠ1、qacE△1-sul1、dfrA1、dfrA17、qnr的阳性株数分别为24株(54.50%)、3株(6.82%)、35株(79.50%)、5株(11.40%)、11株(25.00%)、31株(70.50%)、15株(34.10%)、38株(86.40%)、36株(81.80%)、1株(2.27%)、20株(45.05%)、3株(6.82%),bla0XA-1群基因PCR产物经序列分析确认为blaOXA-1型广谱β-内酰胺酶基因,其他3种基因blaSHV、blaCTX-M-1群、blaOXA-10群均阴性。结论临床分离的阴沟肠杆菌至少存在12种耐药相关基因;在阴沟肠杆菌中检出blaOXA-1、dfrA1、dfrA17和qnr基因均为国内首次报道。     

阴沟肠杆菌喹诺酮耐药基因的检测

目的调查阴沟肠杆菌中喹诺酮耐药基因（qnr）的携带状况,为临床治疗提供依据。方法使用VITEK-AMS鉴定病原菌;qnr与超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）耐药基因型检测采用聚合酶链反应（PCR）扩增技术;耐药基因水平传播采用质粒接合试验;根据CLSI指南进行药敏试验。结果55株阴沟肠杆菌中,23.6%qnr基因检测阳性,其中46.2%的qnr基因阳性菌株对环丙沙星敏感,qnr基因阴性菌株的敏感率为83.3%;38.2%的产ESBLs菌株qnr基因检测阳性,2株qnr基因阳性菌株接合试验成功。结论产ESBLs阴沟肠杆菌中常同时携带qnr基因,qnr基因可以进行菌株间的水平传递。     

阴沟肠杆菌质粒型AmpC酶基因的研究

目的调查阴沟肠杆菌质粒型AmpC酶基因的流行状况及基因型。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法,对44株临床分离的阴沟肠杆菌进行抗菌药物敏感试验,PCR方法检测DHA和ACT型AmpC酶基因。结果44株阴沟肠杆菌呈多重耐药;36株质粒AmpC酶基因阳性(81.8%),DHA和ACT-1基因阳性率分别为11.4%、79.5%,而且3株阴沟肠杆菌同时携带DHA和ACT-1基因。结论临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重、质粒AmpC酶基因携带率高;阴沟肠杆菌中检出ACT-1基因为国内首次报道。     

122株阴沟肠杆菌的耐药特性分析

阴沟肠杆菌 (enterobactercloacae)是一种重要的条件致病菌 ,80年代以来逐渐成为院内感染的重要病原菌之一 ,近年来其感染率呈逐年上升趋势 ,造成被感染人群极高的病死率[1 ,2 ] 。及时了解该菌的感染部位及耐药特性 ,可为临床治疗和控制其感染提供重要依据。1　材料和方法1.1　菌株来源　 (1)临床菌株 :2 0 0 1年 8月～ 2 0 0 2年 4月从血液 (12株 ,9 8% )、脓液 (6株 ,4 9% )、尿液 (12株 ,9 8% )、痰 (5 8株 ,4 7 5 % )、咽拭子 (5株 ,4 1% )、腹水 (4株 ,3 3% )、胆汁 (2株 ,1 6 % )、引流液 (13株 ,10 7% )、分泌物 (10株 ,8 3% )等…     

携qnrA耐药基因阴沟肠杆菌的分子流行病学研究

目的了解深圳地区临床分离的qnrA基因阳性阴沟肠杆菌的分子流行病学特征。方法采用PCR和产物直接测序法,检测58株临床分离阴沟肠杆菌的qnrA基因,脉冲场电泳进行菌株的DNA分型。结果11株阴沟肠杆菌中检出qnrA基因,其中甲医院6株、乙医院5株;前者可分为A和B 2个克隆系,A系包括3个相同和1个密切相关克隆,B系包括2个相同的克隆;后者5株菌间无相同或密切相关克隆。结论携qnrA基因阴沟肠杆菌的流行不仅存在散发模式,而且存在克隆株医院感染暴发的模式,应加强其医院感染的监控和分子流行病学研究。     

阴沟肠杆菌对3类抗菌药物耐药基因研究

目的调查阴沟肠杆菌β-内酰胺类、氨基糖苷类和复方新诺明3类抗菌药物耐药基因的流行状况。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法,对20株临床分离的阴沟肠杆菌进行抗菌药物敏感试验,PCR方法检测β-内酰胺类、氨基糖苷类和复方新诺明耐药基因。结果20株阴沟肠杆菌呈多重耐药;β-内酰胺酶基因ACT-1、DHA和TEM的阳性株数分别为14株(70.0%)、9株(45.0%)和11株(55.0%),而其余基因均阴性;氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ阳性株数分别为10株(50.0%)、3株(15.0%)、2株(10.0%)、1株(5.0%)、1株(5.0%),而aac(3)-Ⅰ基因均阴性;复方新诺明耐药基因sulⅠ、dfrA1、dfrA17阳性株数为10株(50.0%)、1株(5.0%)、0。结论我院临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重;β-内酰胺类、氨基糖苷类和复方新诺明3类抗菌药物耐药基因携带率高。     

阴沟肠杆菌分离株五类抗菌药物耐药基因元件分析

目的调查一组20株阴沟肠杆菌中五类抗菌药物耐药基因元件的携带状况,及菌株间的亲缘关系。方法收集2014年1-12月医院患者痰标本中分离的20株阴沟肠杆菌,12种抗菌药物敏感性试验为K-B法。采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析20种β-内酰胺类耐药基因、17种氨基糖苷类耐药基因、5种喹诺酮类耐药基因、2种氯霉素耐药基因、4种磺胺类耐药基因、7种可移动遗传元件遗传标记。阳性耐药基因测序后直接作BLAST比对。耐药基因检测结果作样本聚类分析(UPGMA法)。结果 20株阴沟肠杆菌对β-内酰胺类药物除亚胺培南、美罗培南外均为耐药,对氨基糖苷类与磺胺类药物亦均为耐药。20株菌共检出4种β-内酰胺酶类耐药基因、6种氨基糖苷类耐药基因、3种喹诺酮类耐药基因、1种氯霉素耐药基因、4种磺胺类耐药基因、4种可移动遗传元件遗传标记,且阳性率较高。样本聚类分析显示:除13号菌株外的其余19株显聚集性。其中4～7号菌株,6～11号菌株,14～16号菌株均为克隆传播。本组菌检出的3个克隆可能为医院感染。结论本组20株阴沟肠杆菌携带的β-内酰胺类耐药基因、氨基糖苷类耐药基因、喹诺酮类耐药基因、氯霉素耐药基因、磺胺类耐药基因和可移动遗传元件遗传标记是对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、氯霉素、磺胺类产生耐药的重要原因。     

耐药阴沟肠杆菌一线抗菌药物耐药基因及菌株亲缘性研究

目的调查耐药阴沟肠杆菌中抗菌药物耐药基因元件的携带状况,以及菌株间的亲缘关系。方法收集2016年1月-12月湖州市第一人民医院患者分离的20株耐药阴沟肠杆菌,用Kirby-Bauer法检测对11种抗生素的敏感性;用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析β-内酰胺类耐药基因、氨基糖苷类耐药基因、喹诺酮类耐药基因。耐药基因经测序后作BLAST比对。对耐药结果作样本聚类分析(UPGMA法)。结果 20株阴沟肠杆菌对β-内酰胺类药物除亚胺培南、美罗培南外均为耐药,7株对氨基糖苷类与喹诺酮类药物耐药。20株菌共检出2种β-内酰胺酶类耐药基因、4种氨基糖苷类耐药基因、3种喹诺酮类耐药基因。样本聚类分析显示,20株菌可分为A与B二群。A群共有16株,呈明显的聚集性,其中12株疑似克隆传播。B群又可分为B-a和B-b二个亚群,但无疑似克隆传播。结论本组20株阴沟肠杆菌携带耐药基因是对β-酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类产生耐药的重要原因,且基因型与耐药表型对应。本组菌检出的12株菌疑似克隆传播。     

多重耐药阴沟肠杆菌β-内酰胺酶编码基因的研究

目的了解北京朝阳医院临床分离的多重耐药阴沟肠杆菌的β-内酰胺酶编码基因. 方法对12株临床分离的多重耐药的阴沟肠杆菌进行琼脂稀释法药敏试验、改良三维试验法和聚合酶链反应克隆测序. 结果 12株阴沟肠杆菌对多种抗生素耐药,改良三维试验法证实同时产生AmpC酶和ESBLs;其中,9株ESBLs编码基因PCR结果阳性,分别为SHV-2、SHV-12、CTX-M-3和CTX-M-14型ESBLs;对另外3株进行粗酶等电点测定发现,存在7.89和8.0等电点条带,并被克拉维酸抑制;12株细菌ampD和ampC基因PCR扩增均呈阳性,将6株耐药菌进行ampD基因的克隆测序发现均存在羧基端可疑的突变位点. 结论 12株多重耐药的阴沟肠杆菌同时产生≥1种的ESBLs及高产AmpC酶.     

阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的 了解阴沟肠杆菌(ECL)耐药性及AMEs基因携带状况,为临床治疗及控制医院感染提供依据.方法 临床标本分离132株ECL经VITEK-32细菌鉴定仪鉴定,采用K-B纸片法进行药敏试验,再用三维试验检测ESBLs和AmpC酶,PCR检测AMEs基因并序列分析.结果 132株ECL对IMP和MER无耐药,AMK,LVX、FEP、CFS和CIP耐药率增高,分别为21.2%、35.6%、37.9%、46.2%和48.5%,其他耐药率为50.0%～87.7%,呈多药耐药性;45株产ESBLs占34.1%,27株产AmpC酶占20.5%,11株同时产ESBLs和AmpC酶占8.3%,49株均未检出产ESBLs、AmpC酶占37.1%,有7株CTX、CAZ表型耐药,ESBLs检测为阴性,采用PCR检测携带有TEM、SHV耐药基因;AMEs基因检出率62.1%其中以aac(6')-Ⅰ b为主,检出率为51.5%,aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ、aph(3')-Ⅵ分别为15.9%、12.9%、18.9%、37.1%、6.8%、9.8%,携带＞2种AMEs基因89.0%,有5株表型耐药,未检出AMEs基因.结论 临床分离ECL严重耐药并呈多药耐药性;产ESBLs、AmpC酶及AMEs基因携带率高,是导致细菌耐药的主要原因.     

阴沟肠杆菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解某医院阴沟肠杆菌产AmpC酶情况及其对10种常用抗菌药物的耐药性,以指导临床合理选择抗菌药物。方法收集该院2007年8月-2008年7月临床分离的非重复阴沟肠杆菌98株,采用头孢西丁纸片扩散法进行AmpC酶初筛,酶提取物三维试验确证阴沟肠杆菌高产AmpC酶,聚合酶链反应检测AmpC酶基因。以K B纸片扩散法进行药敏试验。结果98株阴沟肠杆菌中有36株携带AmpC酶,检出率36.73％。在36株产AmpC酶阴沟肠杆菌中,检测到仅携带DHA基因株6株(16.67%);仅携带ACC基因株20株(55.56%);同时携带ACC和MIR基因株8株(22.22%);同时携带ACC、MIR和FOX基因株2株(5.56%)。产AmpC酶菌株对头孢西丁全部耐药,对第三代头孢菌素、联合抑酶剂、氨曲南、阿米卡星及环丙沙星均有不同程度耐药（44.44%~91.67%）;对头孢吡肟及亚胺培南较敏感,耐药率分别为27.78%、0.00%。结论阴沟肠杆菌AmpC酶携带率高,是导致其对第三代头孢菌素耐药的重要原因;治疗阴沟肠杆菌感染应以药敏检测结果为依据。     

阴沟肠杆菌痰液分离株耐药基因谱及菌株亲缘性分析

目的 了解阴沟肠杆菌(ECL)痰液分离株耐药基因谱与亲缘性.方法采用PCR检测16株ECL 15种耐药基因,并作聚类分析.结果 16株中TEM、OXA-I群、DHA、ACT-1、aac(6′)-I、ant(3″)-I、qnr、dfrA17、sull和intI1基因阳性率分别为78.6%、6.3%、18.8%、75.0%、78.6%、56.3%、6.3%、37.5%、87.5%和87.5%,聚类分析示存在克隆传播现象.结论 TEM、DHA、ACT-1、aac(6′)-I、ant(3″)-I、dfrA17、sull和intI1基因检出率高,ECL可导致克隆传播医院感染.     

重症监护室阴沟肠杆菌感染的耐药监测

目的对近年耐第三代头孢的阴沟肠杆菌进行β-内酰胺酶监测，以指导临床用药。方法收集来自重症监护室的各种标本中对第三代头孢耐药的阴沟肠杆菌165株，用三维试验检测ESBLs与AmpC酶。结果165株阴沟肠杆菌中，产ESBLs 120株，占72．7％，产AmpC酶40株，占24．24％。结论我院重症监护室对第三代头孢耐药的阴沟肠杆菌主要产ESBLs，体外试验表明对亚胺培南敏感率为97．66％，对其他抗生素敏感性差。     

重症监护室阴沟肠杆菌感染的耐药监测

目的对近年耐第三代头孢的阴沟肠杆菌进行β-内酰胺酶监测,以指导临床用药。方法收集来自重症监护室的各种标本中对第三代头孢耐药的阴沟肠杆菌165株,用三维试验检测ESBLs与AmpC酶。结果165株阴沟肠杆菌中,产ESBLs120株,占72.7%,产AmpC酶40株,占24.24%。结论我院重症监护室对第三代头孢耐药的阴沟肠杆菌主要产ESBLs,体外试验表明对亚胺培南敏感率为97.66%,对其他抗生素敏感性差。     

耐碳青霉烯酶肠杆菌科耐药基因及同源性分析

目的了解临床分离的60株耐碳青霉烯酶肠杆菌(CRE)对常用抗菌药物的耐药性及耐药机制,以期帮助临床医师制定合理抗菌药物给药方案,最大限度阻止耐药菌的产生与传播。方法收集2011年1月-2013年6月衢州市人民医院住院患者临床分离的CRE 60株;检测CRE对抗菌药物的敏感性;通过改良Hodge试验和EDTA协同试验对碳青霉烯酶进行表型分析,应用PCR法进一步确定碳青霉烯酶的基因型;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对21株肺炎克雷伯菌进行分子分型。结果 60株CRE对多数β-内酰胺类和喹诺酮类抗菌药物耐药,部分菌株对氨基糖苷类抗菌药物敏感,磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的敏感率最高为56.7%;37株细菌携带KPC-2基因,11株细菌携带IMP-4基因,3株细菌携带NDM-1基因,未检出VIM、OXA-48型碳青霉烯酶基因;肺炎克雷伯菌PFGE分型结果提示,A型菌株引起医院克隆菌株的流行播散。结论 KPC-2及IMP-4基因是医院CRE最主要的获得性碳青霉烯酶基因,肺炎克雷伯菌存在院内流行株,应重视CRE的感染,并做好对其的耐药监测。     

阴沟肠杆菌耐药性分析及NDM-1基因检测

目的 探讨阴沟肠杆菌的耐药性以及对亚胺培南耐药菌株进行新德里金属β-内酰胺酶1型(NDM-1)基因检测分析,为临床治疗阴沟肠杆菌感染合理用药提供试验依据。方法 试验菌株分离自2011年7月-2012年6月的临床标本,采用西门子Microscan Walkway 40plus全自动微生物分析系统对菌株进行鉴定及药敏检测,应用WHONET5.4对数据进行分析统计;聚合酶链反应(PCR)特异性扩增NDM-1基因,并对扩增产物进行测序和BLAST分析。结果 共分离得到35株阴沟肠杆菌,对亚胺培南敏感性最高,敏感率为91.4%,但也出现3株耐药菌株,其次为阿米卡星;对第一代头孢菌素头孢唑林及广谱青霉素的耐药率>90.0%,对其他抗菌药耐药率>40.0%;3株亚胺培南耐药菌株NDM-1检测均为阳性,且同源性为100.0%。结论 多药耐药阴沟肠杆菌及产NDM-1阴沟肠杆菌的出现,造成耐药形势日益严峻,需要加强监测力度。     

多重耐药阴沟肠杆菌临床分离株ESBLs基因型别和分子流行病学分析

目的了解引起医院感染的阴沟肠杆菌临床菌株ESBLs的分布及流行情况,为控制ESBLs流行提供依据。方法连续收集了27株不重复的对头孢他啶或头孢噻肟耐药的阴沟肠杆菌临床菌株,采用系列ESBLs特异性引物进行PCR,并对PCR产物测序;同时采用ERIC2引物进行rep-PCR。结果对头孢他啶或头孢噻肟耐药的阴沟肠杆菌临床菌株中最为流行的ESBLs是CTX-M-3样(13株阳性,占48%);在我国首次发现肠杆菌科细菌中有VEB-1样β-内酰胺酶流行;产ESBLs阴沟肠杆菌大多具有克隆相关性,它们在流行过程中又分别获得了不同的ESBLs耐药基因。结论上海华山医院引起医院感染的阴沟肠杆菌ESBLs产生率高,是阴沟肠杆菌对β-内酰胺类药物耐药的重要原因。     

多重耐药阴沟肠杆菌流行状况及耐药机制的研究

目的了解多重耐药阴沟肠杆菌的流行状况及耐药机制。方法58株临床分离的对第三代头孢菌素耐药的阴沟肠杆菌进行琼脂稀释法药敏试验、表型筛选法和聚合酶链反应克隆测序。结果58株阴沟肠杆菌表型筛选结果显示，高产AmpC酶株、单产ESBLs株和同时产AmpC酶和ESBLs株的检出率分别为65．52％、13．79％和20．69％；58株阴沟肠杆菌对多种抗菌药物耐药，高产AmpC酶菌株、单产ESBLs菌株和同时产AmpC酶和ESBLs菌株对头孢哌酮／舒巴坦的敏感率分别为55．3％、87．5％和16．7％；对哌拉西林／他唑巴坦的敏感率分别为28．9％、50％和8．3％；对头孢吡肟的敏感率分别为97．4％、37．5％和16．7％；对亚胺培南的敏感率均为100％；58株临床分离株ESBLs编码基因的测序结果显示，分别为SHV-2、SHV-2a、SHV-12、CTX-M-14和CTX-M-3型ESBLs；58株临床分离株的ampD基因PCR扩增显示49株阳性，占84．48％，对其中8株进行克隆测序，均存在可疑的羧基端突变位点。结论产生AmpC酶和ESBLs是阴沟肠杆菌对头孢菌素耐药的主要机制。     

高产AmpC酶阴沟肠杆菌的耐药性及同源性分析

目的掌握阴沟肠杆菌的耐药谱及分子流行病学特征.方法高产AmpC酶采用表型筛选法,耐药谱选用改良K-B法,基因分型采用随机扩增多态DNA(RAPD)法.结果50株阴沟肠杆菌中表现高产AmpC酶株有16株(32%)、单产ESBLs菌株有8株(16%)、同时产AmpC酶和ESBLs的菌株有8株(16%),未发现亚胺培南耐药株,产酶和不产酶菌株间的耐药率差异存在显著性,RAPD基因分型得的遗传聚类图,可分为4类.结论阴沟肠杆菌有很高的耐药性,阴沟肠杆菌感染的治疗应首选亚胺培南,RAPD技术对阴沟肠杆菌感染同源性分析是一个有效的方法.     

阴沟肠杆菌对碳青霉烯类药物的耐药机制

 目的 研究耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌分子流行病学特征和碳青霉烯耐药机制,为临床经验性用药及医院感染防控提供依据。方法 对某院2019年4—9月分离的耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌进行菌种鉴定及药敏分析,mCIM联合eCIM试验筛选碳青霉烯酶,聚合酶链反应（PCR）方法检测碳青霉烯酶耐药基因,多位点序列分型（MLST）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子流行病学特征分析。结果 8株耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌中5株来自于重症监护病房（ICU）,对临床常用头孢类及加酶抑制剂药物均表现出高水平耐药的特性。所有菌株均携带金属β-内酰胺酶,7株为bla_NDM-1,1株为bla_IPM-4。MLST分子分型及PFGE同源性分析有6个ST序列类型,6个克隆群。ST596（3株）均为A群、ST121（1株）为C群、ST993（1株）为F群、ST91（1株）为E群、ST794（1株）为B群、ST88（1株）为D群。结论 该院耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌主要来源于ICU,产金属酶bla_NDM-1β-内酰胺酶是其主要耐药机制。ST596 A群阴沟肠杆菌短时间内在ICU存在局部流行,应加强医院感染防控措施,遏制暴发流行。