氟化物对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的：研究不同浓度氟化物对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法：大鼠颅骨分离的成骨细胞经不同浓度（10μmol/L-4mmol/L）的氟化钠作用后，采用AlamarBlue^TM摄入法检测细胞增殖；ELISA方法测定碱性磷酸酶活性。结果：低浓度氟化钠（100μmol/L-1mmol/L）在体外可刺激细胞增殖，高浓度氟化钠（2mmol/L以上）可抑制细胞增殖；10μmol/L-50μmol/L的NaF增强细胞ALP活力，100μmol/L以上的NaF降低了细胞ALP活力。结论：氟化物对成骨细胞的增殖与分化具有双向作用，即低浓度促进，高浓度抑制。     

大鼠肾细胞分离制备及培养方法的比较

目的比较胶原酶消化法、胰蛋白酶消化法和胶原酶、胰蛋白酶两步消化法(简称两步消化法)对大鼠肾细胞分离效果及细胞产量的影响,以及不同培养基(MEM、RPMI1640)、鼠龄(乳鼠、成年鼠)对细胞产量、质量、增殖率和乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响。方法分别对两组Wistar大鼠(乳鼠和成年鼠)用三种不同的消化方法制备大鼠肾组织细胞悬液,分别在MEM培养液和RPMI1640培养液中原代培养,培养48小时之后第一次传代,观察细胞质量,计算细胞产量,MTT法检测传代细胞24~48小时之间的增殖率,生化分析仪检测传代细胞第1~7天培养液中LDH漏出量。结果胶原酶消化法和两步消化法的肾细胞产量显著高于胰蛋白酶消化法(P<0.01),两步消化法的细胞质量优于胶原酶消化法,MEM培养液和RPMI1640培养液对细胞产量、增殖率和LDH漏出量的影响均无显著性差异,乳鼠的肾细胞产量显著高于成年鼠(P<0.01)。结论两步消化法对于肾细胞的分离制备尤为适合,MEM培养液和RPMI1640培养液均适于肾细胞的培养,乳鼠比成年鼠更适合肾细胞的制备。     

新生小鼠成骨细胞原代培养方法的实验研究

目的 验证及比较成骨细胞原代培养常用方法,探讨两种原代培养方法的可行性和应用价值.方法 取出生后24 h昆明小鼠乳鼠顶骨,以含血清胶原酶消化法和分段胶原酶消化法分离成骨细胞,进行细胞形态观察,以噻唑蓝(MTT)比色实验法绘制生长曲线,以台盼兰排斥法计数活细胞率.结果 与含血清胶原酶消化法相比,分段胶原酶消化法提取的成骨细胞产量多;细胞存活率高(P<0.01);对细胞损伤小,细胞纯度高.消化时问易于控制.结论 分段胶原酶消化法是一种方便、高效、细胞生物学特性稳定的原代成骨细胞分离培养方法.

Abstract：

Objective To confirm an alternative method for primary culture of osteoblasts through comparison of two primary culture methods. Methods Calvarias were dissected from newborn Kunming mice, osteoblasts were isolated with serum-containing collagenase digestion method and sequential digestion method respectively. The osteoblasts were observed under invert microscope, the growth curve was made with the application of MTT method, the rate of living osteoblasts was counted with trypan blue method respectively. Results Compared with the serum-containing collagenase digestion method, the sequential digestion method presented higher production of osteoblasts, higher cell survival rate (P<0.01), little damage on osteoblasts and easier control of the digestion time. Conclusion The sequential digestion of calvaria method is simple, efficient and stable for primary osteoblasts culture.     

一种反应人胎成骨细胞增殖快捷的检测方法

在人胎成骨细胞培养中，需要检测细胞的增殖率和存活状况，常规使用的方法有细胞计数、蛋白含量测定和3H-TdR掺入。1983年Mosmann[1][2]创立了MTT比色分析法，用于定量研究淋巴细胞的存活、生长和增殖。由于这种方法操作简便快速、灵敏、且无放射性污染之弊，已广泛使用在     

两种分离大鼠触须部毛乳头改良方法比较

目的探索简便快捷分离大鼠触须部毛乳头的方法,为进一步研究毛囊再生提供细胞模型。方法分别用改良两步酶法和改良显微解剖法分离培养7日龄SD大鼠触须部毛乳头,并比较获得的毛乳头个数、形态、贴壁率、细胞迁出时间等。结果改良两步酶法总操作时间(6.91±0.37)h,较改良显微解剖法(5.66±0.40)h长(P0.05),获得的总毛乳头数量前者(493.33±25.03)个,较后者(41.66±7.52)个多(P0.05),其中触须型毛乳头数量前者(95.00±10.48)个,较后者(42.0±6.89)个多(P0.05);改良两步酶法的人工操作时间(1.91±0.37)h,较改良显微解剖法(4.75±0.52)h短(P0.05);而在贴壁时间、细胞迁出时间上两种方法无统计学差异(P0.05);改良两步酶法获得的毛乳头间杂质细胞较多,而改良显微解剖法获得的毛乳头形态较好,纯度较高。结论改良显微解剖法适用于快捷提取较纯的触须型毛乳头,而改良两步酶法适用于简便大批量的提取触须部毛乳头。     

健骨二仙提取物对大鼠体外培养成骨细胞作用的研究

目的探讨健骨二仙提取物对大鼠体外培养成骨细胞的作用效果及对成骨细胞增殖的作用机理。方法采用新生大鼠颅骨进行成骨细胞分离,并在含10%的胎牛血清DMEM中进行体外培养,分别加入高、低剂量的健骨二仙提取物并与高、低剂量Premarin组、阴性组、Tamoxifen对照组、Tamoxifen阻断对照组进行对照,用MTT法进行成骨细胞增殖和活性检测。结果在培养24h后,健骨二仙提取物对培养成骨细胞增殖有明显的促进作用,培养到48h促进作用更为明显,表现出一定的时间相关性,且其作用不能被Tamoxifen阻断或完全阻断。结论健骨二仙提取物可促进成骨细胞增殖,且其对骨代谢的影响不通过或者主要不是通过雌激素样作用生效。     

成年大鼠腰椎成骨细胞和破骨细胞的体外培养

[目的]探讨正常大鼠腰椎骨组织成骨细胞和破骨细胞的体外培养方法。[方法]分离成年大鼠腰椎(L1～5),分别采用酶消化法分离获取成骨细胞,骨髓诱导法分离获取破骨细胞,并对在体外培养的成骨细胞和破骨细胞进行鉴定与功能评价。[结果]所培养的成骨细胞表达标志性分化基因,具有较好的钙化能力;破骨细胞表现为多核巨细胞外观,抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性,具有良好的骨吸收功能。[结论]成功分离、培养获得了成年大鼠腰椎成骨细胞和破骨细胞,为进一步研究骨质疏松腰椎并发症的预防与治疗方法打下基础。     

氟化物对大鼠颅骨成骨细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响

目的 :研究氟化物对大鼠颅骨成骨细胞生长、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 :应用酶消化法分离培养大鼠颅骨的成骨细胞 ;AlamarBlue摄入法检测细胞活性 ;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果 :氟化钠 (NaF)浓度为 0～ 2mmol L、2 4h对细胞活性无影响 ;浓度为 2mmol L时 ,S期细胞数增多 ,G0 G1 期和G2 M期细胞无明显改变。NaF浓度为 4mmol L时 ,细胞活性受抑制 ,S期细胞数明显增多 ,G2 M期细胞明显减少。NaF浓度为 2mmol L和 4mmol L时 ,凋亡百分率明显增加。结论 :过量氟化物可影响大鼠颅骨成骨细胞活性及细胞周期的分布 ,使细胞停滞于S期 ,并可诱导细胞凋亡     

自然流产胚胎绒毛细胞培养方法比较

目的:探讨自然流产胚胎绒毛细胞培养的简单有效方法。方法:取57例早期自然流产胚胎绒毛组织分别采用改良组织块培养法和酶消化法进行培养。结果:改良组织块培养法培养成功51例(89.5%),酶消化法培养成功42例(73.7%),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:改良组织块培养法用于自然流产胚胎染色体诊断简单可行,成功率高。     

混合酶消化法大鼠颅盖骨细胞的原代培养和鉴定

目的通过不断的摸索,寻找一种获得细胞数量较多且纯的原代成骨细胞的体外培养方法,为下一步实验研究奠定基础。方法取出生24h内的sD大鼠脱臼处死,取出颅盖骨,剪成1mm×1mm×1mm大小的组织片;采用胰酶和I型胶原酶混合酶消化法分离获得原代成骨细胞;采用“差速贴壁法”进行纯化。通过对细胞形态学的镜下观察,碱性磷酸酶染色及I型胶原免疫组化法等对细胞进行鉴定。结果镜下观察所获得的细胞具有成骨细胞的典型特征,细胞多为单核,呈三角形、多边形、长梭形等形态,并伸有粗大伪足;碱性磷酸酶染色及I型胶原免疫组化染色呈阳性。结论采用混合酶消化法可获得数量较多且活性较好的细胞,再采用“差速贴壁法”可以去除成纤维细胞等杂质细胞,获得纯度较高的成骨细胞。     

人骨髓成骨细胞体外培养

目的 研究人骨髓基质干细胞体外培养及其成骨特性，为骨组织工程学研究提供成骨种子细胞。方法 以人髂骨区骨髓为材料进行体外人骨髓基质干细胞培养，传代后改用含地塞米松、β-甘油磷酸纳和维生素C的条件培养基进行培养，用倒置显微镜观察、碱性磷酸酶染色、四环素荧光标记等方法对所培养的细胞进行生物学特性研究。结果 接种细胞4d即可传代，在条件培养液中2周形成多层结构，并出现黑色结节，ALP染色阳性，结节四环素荧光标记、钙染色阳性，Ⅰ型胶原免疫组化染色呈黄褐色。结论 采用本法在体外培养的人成骨细胞生长良好，并具有成骨细胞形态特征和生物学特性，可做为临床所需的成骨种子细胞来源，为骨组织工程学研究奠定了实验基础。     

铅对乳鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的研究铅对乳鼠颅骨成骨细胞增殖分化的增响,以期阐明铅对儿童骨骼发育的毒作用机制。方法分离并培养原代成骨细胞,加入不同浓度Pb(Ac)2,培养72 h,用MTT法检测成骨细胞增殖作用;用对-硝基苯磷酸盐(pNPP)法检测碱性磷酸酶(ALP)活力。结果在Pb(Ac)2≥50μmol/L时,成骨细胞增殖功能明显下降;在Pb(Ac)2≥0.5μmol/L时,成骨细胞分化水平降低。结论铅对成骨细胞有毒性作用,影响其增殖和分化,且对ALP损害更显著,可能是铅影响骨骼发育的机制之一。     

昆虫抗菌肽两种提取方法的比较

目的 检测用两种不同方法提取的昆虫抗菌肽对作用细胞的影响。方法 对家蝇幼虫采用针刺感染大肠埃希菌诱导产生抗菌肽，经研磨、层析提取其抗菌肽，并通过流式细胞仪测定用生理盐水或磷酸缓冲液这两种方法提取的抗菌肽对癌细胞和正常细胞的影响。结果 两种方法处理的家蝇幼虫抗菌肽对人髓样白血病细胞（K562）均有杀伤作用；而对正常人淋巴细胞，生理盐水处理的抗菌肽比缓冲液伤害作用小。结论 缓冲液可能对细胞造成高渗作用促进细胞死亡；而生理盐水无此作用，对细胞不造成伤害。     

两种不同方法测定残气容积结果的对比分析

对用两种不同方法测定残气容积的结果进行对比分析,结果显示, FEV1% Pred正常时,两种方法测定的残气容积结果相差不显著（ p〉0.05）, 80% 》FEV1% Pred≥ 60%时,结果相差显著（ p〈0.05）, FEV1% Pred《60%时,结果相差非常显著（ p〈0.01）.     

生物样品中铯-137活度浓度的两种分析方法比较

目的探讨生物样品中铯-137活度浓度的γ能谱法与放射化学法分析结果的一致性。方法对多种生物样品分别用这两种方法进行比对测量,并对结果进行统计检验和线性拟合。结果两种方法的实验结果没有显著性差别,并且线性相关。结论两种方法可视工作需要相互替代。     

两种不同标记法的面罩固定在重复摆位中的精度比较

本文通过用CT定位系统测量头颈部体位两种不同标记法的面罩固定在重复摆位中的误差,以确定提高头颈部重复摆位精度的方法。     

两种根管冲洗方法联合不同根管冲洗剂疗效评价

目的评价两种根管冲洗方法联合不同根管冲洗剂杀灭感染根管内细菌的效果及临床疗效。方法将80例根尖周病患者共80颗患牙随机分为4组,每组各20颗患牙,使用Protaper系统进行根管预备,分别进行根管冲洗:A组1%NaClO+17%EDTA超声冲洗,B组1%NaClO+17%EDTA常规冲洗,C组3%H2O2+0.9%NS超声冲洗,D组3%H2O2+0.9%NS常规冲洗。根管预备前后分别取样进行细菌培养,对菌落计数进行统计。6月后对患者进行临床疗效评价。结果各组根管预备前后厌氧菌菌落计数经配对t检验,其差异具有统计学意义(P<0.01);而菌落计数差值经方差分析,超声组(A、C组)与常规组(B、D组)之间,A、B组与C组之间差异有统计学意义(P<0.05),但A与B组之间差异没有统计学意义(P>0.05)。方差分析愈合数,超声组(A、C组)较常规组(B、D组)之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论超声冲洗技术与1%NaClO+17%EDTA联合使用更能有效杀灭感染根管内的细菌,提高临床治疗效果。     

防龋剂氟化物对牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

用四氮唑溴盐（ＭＴＴ）染色法和以对硝基苯磷酸脂（ＰＮＰＰ）为底物检测不同浓度ＮａＦ对大鼠牙髓细胞的影响。实验结果显示１０ｐｐｍＦ－开始对牙髓细胞增殖产生抑制（Ｐ＜０．０１）；５０ｐｐｍ影响最大，细胞形态发生改变，圆缩死亡细胞明显增多。Ｆ－抑制细胞碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活性，浓度增高，抑制增强。提示一定浓度Ｆ－对牙髓细胞某些功能活动具有抑制作用，且随浓度增高而增强     

尿镉两种不同方法测定结果比对

目的：通过对同一项目、不同检测方法的测定结果进行分析比对,探讨不同尿镉分析方法存在的误差是否在允许范围内,实现检测结果互认的可比性。方法：用石墨炉原子吸收光谱法为标准方法,微分电位溶出法为参比法,选取3份样品在原子吸收分光光度计和溶出仪上进行检测,同时带有质控样。分析比对实验所得的数据,计算方法间的相关性和相对偏差。结果：两种方法的分析误差均〈3．69％,加标回收率均在95．3％-104．5％,在误差允许范围之内。在各自的试验条件下质控样也均在允许的范围之内,经过计算当t值在：-0．627—2．89时,P值在0．715-0．914。结论：通过比对实验数据分析,结果一致性良好,可以满足实验的要求,溶出仪法更适合大批量的高浓度的检测。     

生长期大鼠长骨成骨细胞体外培养及生长过程研究

「目的」建立生长期大鼠长骨成骨细胞体外培养实验模型。「方法」以１０周龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠股骨、胫骨为材料,采用酶分次消化法分离成骨细胞,经ＤＭＥ：Ｆ－１２加１０％胎牛血清的培养基原代和传代培养,追踪观察成骨细胞的体外培养中的形态变化,并通过碱性磷酸酶（ＡＬＰ）、Ｖａｎ－Ｇｉｅｓｏｎ氏胶原纤维及ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ组化染色技术,对细胞进行鉴定。「结果」①增减细胞具有成骨细胞的形态特征,体外增殖代谢旺盛,