重组人生长激素对不同生长激素受体的人肝癌细胞的体外干预

[目的]研究重组人生长激素(rhGH)在体外对不同生长激素受体(GHR)表达的人肝癌细胞系的影响.[方法]采用免疫组织化学方法检测人肝癌细胞系GHR的表达.每种肝癌细胞分4组处理:未处理组、50ng/ml rhGH干预组、100ng/ml rhGH干预组和200ng/ml rhGH干预组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)荧光染色、ELISA法分析不同浓度rhGH对人肝癌细胞系的生长率和增殖等影响.[结果]在GHR高表达细胞rhGH干预组生长率明显增高(P<0.05),CFSE荧光强度明显减弱(P<0.05).下游蛋白IGF-1明显增加.而GHR未表达、低表达肝癌细胞则未见明显影响(P0.05).[结论]rhCH对GHR高表达肝癌细胞明显促进增殖,并且下游蛋白IGF-1表达明显增加,rhGH对GHR无表达、低表达肝癌细胞不受影响其细胞增殖和ICF-1的表达.     

反义端粒酶RNA对SMMC7721肝癌细胞系的作用

目的　观察反义端粒酶RNA对SMMC 772 1肝癌细胞系的作用 ,探讨抗端粒酶治疗在原发性肝癌治疗中的意义。方法　采用脂质体介导的方式将潮霉素抗性的反义端粒酶RNA真核表达载体PBBS2 12 /hTR转入SMMC772 1肝癌细胞中 ,经潮霉素筛选 ,克隆细胞株扩增鉴定后 ,采用TRAP PCR ELISA及FCM、电镜检测反义端粒酶RNA对SMMC 772 1细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。结果　TRAP PCR ELISA法检细胞端粒酶活性的检测结果为 :实验组吸光度值为 0 .482 ,对照组吸光度值为 2 .86 1;FCM检测细胞凋亡结果为 :实验组 13 .8% ,对照组未见有凋亡峰形成 ,电镜观察发现转染反义端粒酶RNA的SMMC772 1细胞具有典型的凋亡细胞形态 ,细胞发生较多的凋亡。结果表明反义端粒酶RNA显著抑制SMMC772 1肝癌细胞的端粒酶活性 ,并且对其有显著的促凋亡作用。结论　反义端粒酶RNA能有效地抑制肝癌细胞端粒酶活性 ,同时显著促进癌细胞凋亡。借助抑制细胞端粒酶活性的手段来达到阻止肿瘤生长的目的 ,为肝癌的治疗提供了新的途径。     

重组生长激素体外干预人肝癌细胞膜GHR密度变化

目的体外环境下,针对人肝癌细胞生长激素受体（GHR）的不同表达状态,研究重组人生长激素（rhGH）对其胞膜表面GHR密度变化的影响。方法采用免疫细胞化学方法分别半定量测定人肝癌细胞株HepG2、SMMC7721、和QGY7701的GHR表达情况,采取50ng／mLrhGH,100ng／mLrhGH,200ng／mLrhGH干预和未处理4种干预方式体外培养上述3种细胞,然后利用放射性受体分析方法定量检测胞膜表面GHR密度变化。结果免疫细胞化学检测细胞株HepG2呈GHR高表达状态,50ng／mLrhGH、100ng／mLrhGH、200ng／mLrhGH干预后胞膜表面GHR位点数分别为8．4350±0．2396、9．3957±0．5143、8．3297±0．3133（10^3／cell）,较空白对照组7．5137±0．5352（10^3／cell）明显增加（P〈0．05）;细胞株SMMC7721呈GHR弱表达状态,50ng／mLrhGH、100ng／mLrhGH、200ng／mLrhGH干预后胞膜表面GHR位点数分别为3．8343±0．2590、3．8213±0．2276、3．6947±0．2722（10^3／cell）,与空白对照组3．7190±0．2824（10^3／cell）差异无统计学意义（P〉0．05）;细胞株QGY7701未表达GHR,各种rhGH干预后均未出现GHR表达的现象。结论rhGH明显促GHR高表达细胞株HepG2胞膜表面GHR密度增加,对GHR低表达细胞株SMMC772胞膜表面GHR密度无影响。rhGH不会改变细胞株QGY7701的GHR不表达状态。     

GP1对人肝癌细胞SMMC—7721细胞周期和端粒酶活性的研究

[目的]研究GP1对人肝癌细胞细胞周期和端粒酶活性的影响。探讨其抗癌机制。[方法]以SMMC-7721细胞为研究对象,采用MTT法,流式细胞术和端粒重复序列扩增法。[结果]GP1可抑制SMMC-7221细胞增殖;阻滞细胞从G2/M期进入G1期;降低细胞端粒酶活性。[结论]GP1阻滞细胞周期于G2/M期和降低端粒酶活性是其重要的抗癌机制。     

重组人生长激素对人肝癌细胞Bel-7402裸小鼠移植瘤生长的影响

背景与目的:在原发性肝癌患者围手术期应用重组人生长激素(recombinanthumangrowthhormone,rhGH),于改善患者状况同时是否会促进原有肿瘤生长、转移与复发,鲜见相关的研究报道。大多数原发性肝癌能表达生长激素受体(growthhormonereceptor,GHR),本研究拟探讨rhGH对表达GHR的人肝癌细胞Bel-7402裸小鼠移植瘤生长的影响。方法:放射配体分析法证实肝癌细胞Bel-7402表达GHR后行裸鼠肝内移植,将32只肝内移植人肝癌细胞Bel-7402的裸小鼠随机分为4组:1组为对照组,实验组则根据rhGH剂量不同分为3组[即0.5u·(kg·d)-1、1.0u·(kg·d)-1、2.0u·(kg·d)-1]。在肝脏肿瘤移植术后2周开始动物皮下注射rhGH2周,实验结束处死动物,检查肿瘤情况;用抗增殖细胞核抗原(proliferationcellnuclearantigen,PCNA)单克隆抗体免疫组化染色检测瘤组织PCNA表达情况。结果:移植瘤组织的重量与体积在rhGH1.0u·(kg·d)-1、2.0u·(kg·d)-1组与对照组之间比较有显著性差异(P<0.05),但0.5u·(kg·d)-1组与对照组无显著性差异(P>0.05)。各实验组肿瘤PCNA标记指数(labelingindex,LI)均高于对照组(P<0.05),各实验组之间相互比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。rhGH用药剂量与LI显著相关(r=0.779,P<0.001)。结论:rhGH能促进裸小鼠肝脏人肝癌细胞Bel-7402移植瘤的生长,其作用有随用药量增加而增强的趋势,两者之间存在一定相关性。     

原发性肝癌组织中生长激素受体的表达及其意义

背景与目的:重组人生长激素(recombinehumangrowthhormone,rhGH)在调节代谢、降低外科病人死亡率方面,疗效明显,然而rhGH能否用于治疗原发性肝癌患者,目前存在较大争议。由于生长激素必须通过与其受体(growthhormonereceptor,GHR)结合方能发挥作用,因此本研究旨在通过了解原发性肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)组织生长激素受体的表达情况,探讨rhGH在肝癌患者中是否适用。方法:应用放射性配体法对40例HCC组织进行GHR的检测,以6例正常肝组织作为对照,肝组织GHR的受体最大结合量(RT)和平衡解离常数(Kd)采用Scatchard法计算;并分析肝癌GHR的RT值与肝癌临床病理特点之间的关系。结果:在正常肝组织与35例HCC组织中检测到单一的生长激素(GH)特异性结合位点(即GHR),对照组肝组织GHR的RT值为(39.5467±3.4770)fmol/mgprotein,Kd为(0.6167±0.1007)nmol/L,肝癌组织GHR的RT为(18.5416±4.1686)fmol/mgprotein,肝癌组织GHR的Kd值为(0.6319±0.1978)nmol/L,与正常肝组织相比,肝癌GHR的RT显著性降低(P<0.05),而Kd无显著性改变(P>0.05);肝癌组织GHR的RT值与肿瘤大小、患者临床分期呈显著性负相关,而与肿瘤分化程度、患者年龄、是否合并肝硬变无显著性相关。在5例肝癌组织未检测到GHR。结论:本组结果显示,大多数原发     

叶绿酸铜钠对SMMC7721肝癌细胞抑制作用的体外实验研究

[目的]研究叶绿酸铜钠（CHL）体外抑制SMMC7721肝癌细胞的作用及机制。[方法]（1）MTT法测半数抑制浓度（IC50）并绘制生长曲线;（2）流式细胞仪观察CHL对SMMC7721细胞凋亡的诱导作用;（3）免疫组化方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期素D1（Cyclin D1）、环氧化酶-2（COX-2）的表达。[结果]（1）CHL对SMMC7721细胞具有增殖抑制作用,且具有浓度和时间依赖效应;（2）CHL能诱导SMMC7721细胞G1期阻滞,通过抑制细胞生长周期、降低细胞增生速率抑制肿瘤细胞增殖;（3）CHL对SMMC7721细胞凋亡无明显诱导作用;（4）CHL能下调SMMC7721细胞PCNA和COX-2蛋白表达,并呈一定的浓度依赖性。对Cyclin D1的表达无明显影响。[结论]CHL能抑制SMMC7721细胞的生长,这种抑制作用同PCNA、COX-2表达下调及细胞G1期阻滞有关,但与细胞凋亡和Cyclin D1的表达无关。     

^3H—TdR放射自显影在人肝癌SMMC7721细胞药物敏感性试验中的应用

用＾３Ｈ－ｄＲ掺入放射自显影法测定人肝癌ＳＭＭＣ７７２１细胞对抗癌药ＤＤＰ、ＡＤＭ、５－ＦＵ的浓度依赖性，三者均有良好的线性关系。ｒ〉ｒ．０５，ＩＣ５０分别为２．５４、１．２３、６９．７（μｇ／ｍｌ），而集落培养法，除ＤＤＰｒ〉ｒ．０５外，ＡＤＭ、５－ＦＵ均相差不显著。从实验结果看，＾３Ｈ－ＴｄＲ放射自显影法的敏感性和重复性均优于集落培养法。     

藻红蛋白介导的光敏反应可诱导人肝癌7721细胞凋亡

目的 :探讨藻红蛋白介导的光动力效应对肝癌细胞的杀伤机制是否与诱导瘤细胞凋亡有关。方法 :对培养的人肝癌细胞进行光动力治疗处理 ,通过观察DNALadders的形成和形态学改变 ,判断凋亡的发生与否。结果 :可观察到在经过光动力治疗处理一定时间后 ,772 1细胞出现典型的凋亡形态学改变 ,同时伴有特征性的DNALadders出现。结论 :藻红蛋白介导的光敏反应杀伤肿瘤细胞与诱导人肝癌细胞凋亡相关 ,是一种很有前景的光动力药物。     

菱角提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

[目的]探讨菱角提取物对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。[方法]采用MTT法检测菱角提取物对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;丫啶橙染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。[结果]菱角提取物能抑制SMMC-7721细胞的增殖,且呈明显的剂量依赖性。荧光显微镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变。[结论]菱角提取物可抑制SMMC-7721细胞的增殖并诱导其凋亡。     

nm23-H1对肝癌细胞株SMMC7721转移特性的抑制

[目的]研究转移抑制基因nm23-H1与肝癌细胞转移行为的关系.[方法]体外构建真核细胞表达重组体DNA pcDNA 3.1(-)-nm23-H1;采用Lipofectamine介导将目的基因nm23-H1体外转染肝癌细胞株SMMC7721,通过软琼脂克隆实验、内皮细胞异质粘附实验和Boyden小室侵袭实验对转染细胞的生物学活性进行检测.[结果]粘附实验中,实验组肿瘤细胞株与内皮细胞粘附计数为(50～60)/mm2,少于对照组的(200～300)/mm2,实验组细胞株粘附性降低,t检验P＜0.05;软琼脂克隆实验对照组形成多个细胞克隆(47%～62%),而实验组无克隆形成,克隆能力明显降低;Boyden小室侵袭实验中,每视野穿透Matrigel膜的细胞数分别为1.34～3.26和27.46～32.94,实验组细胞株侵袭能力明显低于对照组细胞株,t检验P＜0.01.[结论]nm23-H1能够降低肿瘤细胞株SMMC7721在体外的转移潜能.     

重组人p53腺病毒联合奥沙利铂对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制作用

目的观察外源p53基因在胃癌细胞SGC-7901内的表达及其对胃癌SGC-7901细胞生长的影响、对胃癌细胞化疗敏感度的作用及机制。方法用重组人p53腺病毒注射液（rAd-p53）及奥沙利铂（OXA）单独及联合作用于胃癌细胞株SGC-7901不同时间后,CCT-8法检测其对体外培养SGC-7901细胞的抑制率,免疫组织化学SP法检测p53蛋白的表达情况,流式细胞仪（FCM）分析其细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达情况。 结果rAd-p53及OXA单独作用SGC-7901细胞时,随药物浓度及作用时间的增加,细胞的生长抑制率逐渐增高;两者联合作用48h,其在较低浓度时即可显著抑制细胞生长（P<005）;OXA（6.25 μg/ml）与rAd-p53(5×107、5×108、5×109vp/ml)联合作用48h后,胃癌细胞caspase-3蛋白的含量较对照组升高,但p53蛋白无明显升高。结论OXA和 rAd-p53单药可抑制胃癌细胞的生长, 两者联合对胃癌细胞的抑制作用明显增强; rAd-p53有增强OXA化疗敏感度的作用,其机制与通过线粒体途径激活下游的 caspase-3诱导细胞凋亡有关。     

RNA干扰抑制BMP-2基因表达对人肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响

目的：设计并化学合成针对骨形态发生蛋白2（BMP-2）的siRNA分子片段,转染人肝癌SMMC7721细胞,观察其对SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响。方法：阳离子脂质体法瞬间转染SMMC7721细胞,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western印迹法检测转染BMP-2-siRNA后细胞BMP-2 mRNA水平和蛋白水平的变化,MTT法和流式细胞术检测转染BMP-2-siRNA后SMMC7721细胞增殖、细胞周期和凋亡的变化。结果：3对特异性BMP-2-siRNA均有效地抑制了BMP-2基因的表达,以siRNA-B抑制效果最好。转染BMP-2-siRNA后SMMC7721细胞的增殖能力明显受到抑制( P <0.05)且明显促进了SMMC7721细胞的凋亡。结论：靶向BMP-2基因的siRNA分子片段可以有效地抑制人肝癌SMMC7721细胞的增殖并促进其凋亡     

水飞蓟宾对人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖的影响

目的:探讨水飞蓟宾对SMMC-7721细胞的抗增殖作用。方法:MTT法观察对细胞的抑制作用;免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)及Ki-67的表达;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡;光镜及透射电镜观察细胞形态学的变化。结果:水飞蓟宾可抑制SMMC-7721的增殖,并降低PCNA、Ki-67的表达及引起细胞G2/M期阻滞,同时诱导凋亡。光镜发现细胞体积缩小,核固缩深染;电镜可见凋亡及凋亡小体。结论:在体外,水飞蓟宾可抑制SMMC-7721细胞的增殖。     

Effects of HMGB1 Expression Suppressed by siRNA on Cell Cycle and Proliferation of Human Cervical Cancer Cell Line HeLa

OBJECTIVE In this study, RNA interference was used to evaluate the effects of HMGB1 expression on cell cycle and proliferation of the human cervical cancer cell line HeLa. METHODS We had previously constructed and screened effective eukaryotic expression vectors carrying PGCsi3.0-1/HMGB1 siRNA and PGCsi3.0-3/HMGB1 siRNA, then the vectors were transfected into HeLa cells. The expression of HMGB1 before and after transfection in HeLa cells were detected by RT-PCR and Western blot. The cell viability and proliferating activity was tested by Trypan blue dye test and MTT, and the cell cycle was determined by flow cytometry. RESULTS The introduction of PGCsi3.0-1/HMGB1 siRNA and PGCsi3.0-3/HMGB1 siRNA inhibited the expression of HMGB1 mRNA and protein efficiently and specifically, there was a significant difference between the siRNA groups and the control groups (P < 0.05). The proliferation speed of PGCsi3.0-1 group and PGC si3.0-3 group were obviously slower than those of PGCsi3.0-Neg group and non-transfected group. Flow cytometry showed that the content of DNA in G2 phase in PGCsi3.0-1 group and PGCsi3.0-3 group were obviously more than those in PGCsi3.0-Neg group and non-transfected group, but the content in S phase was less (P < 0.01). The progression of cell cycle was arrested from G2 to S phase. CONCLUSION PGCsi3.0-1/HMGB1 siRNA and PGCsi3.0-3/HMGB1 siRNA could specially suppress the expression of HMGB1 gene, inhibit the proliferation speed of HeLa cells effectively, and arrest the progression of cell cycle from G2 to S phase. RNAi provides a new approach to the bio-therapy of cervical cancer.