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1.
人巨细胞病毒PP150的原核表达及其ELISA诊断方法的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
徐博  王清 《山东医药》2006,46(29):23-25
采用基因工程方法组建含有人巨细胞病毒(HCMV)PP150蛋白强抗原决定簇基因的重组抗原克隆,进行诱导表达及纯化,在此基础上,以纯化重组PP150蛋白作为包被抗原,对各种条件进行优化,确定判定标准,建立检测HCMV IgM抗体的间接ELISA方法。用此方法检测266份血清样品,并与ELISA试剂盒检测结果相比较。结果重组表达质粒pMAL-P2-PP150可在E.coliDH5a中有效表达,表达产物经SDS-PAGE电泳后,凝胶成像系统分析显示相对分子质量约为64000,约占菌体蛋白的10%。Western blot检测,阳性识别率为80%(12/15)。用此蛋白包被ELISA板,检测正常孕妇血清,与ELISA试剂盒的诊断符合率为98.1%,敏感性达88.2%,特异性100%。应用本方法检测569份正常人血清样品HCMV-IgM,阳性率为4.1%。提示该重组蛋白具有良好的抗原性,可望替代HCMV感染检测中的全病毒ELISA试剂盒。  相似文献   

2.
人巨细胞病毒感染与脑血栓形成关系的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
采用高敏感性ELSA法和PCR技术分别检测58例脑血栓病人的血清特异性HCMV-IgA、IgM及悄HCMV-DNA。结果显示,脑血栓病人活动性HCMV感染率(IgM/IgA)和尿HCMV DNA阳性率分别为24.14%和8.62%,而对照组为2.78%和0,两组有显著性差异(P〈0.01)提示HCMV活动性感染与脑血栓形成有关。  相似文献   

3.
目的 比较国内常用商品化ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体的诊断效果。方法 选用3种猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒(Keqian,Lvshiyuan,Tianchen),以微量中和试验为金标准,对90份猪血清进行检测分析。结果 中和试验的阳性检出率为34.4%(31/90),Keqian,Lvshiyuan和Tianchen阳性检出率分别为50.0%(45/90), 47.8%(43/90)和 38.9%(35/90)。灵敏度最高的是Keqian,为90.32%,但其特异度只有71.19%;Tianchen的灵敏度和特异度分别为83.87%和79.66%;Lvshiyuan的灵敏度和特异度分别仅为41.94%和16.95%。与中和试验比较,Tianchen试剂盒的κ系数最高为0.63,其次是Keqian为0.57,Lvshiyuan仅为0.04。显示3种试剂盒具稳定性。结论 目前国内商品化猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒诊断结果差异较大,与中和试验相比存在较高的假阴性,质量有待提高。  相似文献   

4.
巨细胞病毒感染参与动脉粥样硬化发生的机制   总被引:10,自引:0,他引:10  
探讨巨细胞病毒感染与动脉粥样硬化的相关性及其可能机制。酶联免疫吸附试验检测一个大样本病人血清中的抗人巨细胞病毒的IgG抗体以及C 反应蛋白 ,同时用聚合酶链式反应检测动脉粥样硬化病变中人巨细胞病毒特异性的即时早期基因 ,探讨巨细胞病毒感染和动脉粥样硬化的关系 ;采用反转录聚合酶链式反应检测人巨细胞病毒感染对内皮细胞趋化因子表达的影响。结果发现动脉粥样硬化组血清中的人巨细胞病毒的阳性率显著高于非动脉粥样硬化组 (分别为 82 .2 %和 6 1.0 % ,P =0 .0 2 ) ;动脉粥样硬化患者血清中的C 反应蛋白水平显著高于无动脉粥样硬化的对照组病人 (5 .912± 3.795mg L比 2 .871± 1.76 1mg L ,P =0 .0 0 0 ) ;而且动脉粥样硬化斑块中人巨细胞病毒基因出现率显著高于正常血管组织 (13 15比 2 7,P =0 .0 1)。人巨细胞病毒感染还可上调内皮细胞ECV 30 4表达单核细胞趋化蛋白 1和不规则趋化因子。表明人巨细胞病毒感染参与动脉粥样硬化的形成和发生 ,可能与人巨细胞病毒上调内皮细胞趋化因子表达有关。  相似文献   

5.
HIV抗体ELISA阳性标本蛋白印迹确证试验的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
用获FDA准许的美国CambridgeBiotech公司HIV-1蛋白印迹剂盒(WB)对HIV-1/2抗体诊断试剂盒(ELISA)初筛阳性的62份血清标本做确证试验。一次性确证HIV抗体阳性者8名;阴性者12名;不确定者42名,对8名HIV抗体不确定者做追访采样监测,其中1人12天后WB血清HIV抗体由不确定性转为阳性,另7人在6~15个月经2~3次采样检测,WB区带反应无变化或略有变化,本研究证  相似文献   

6.
目的 探讨国产与进口人肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)IgG抗体ELISA检测试剂盒的性能差异. 方法 采用国产和进口ELISA试剂盒分别检测50例HFRS疫苗接种者血清样本中抗人HFRS IgG抗体含量,分析比较2种ELISA试剂盒的一致性、灵敏性、精密度以及方法学等的差异. 结果 2种ELISA试剂盒的精密度良好,批内变异系数均<5%;2种试剂阳性一致率为100%,阴性一致率为20%,相似率为60%;灵敏性检测结果显示,2种ELISA试剂盒的灵敏性差异较大(P<0.05),国产ELISA试剂盒的灵敏度约是进口ELISA试剂盒的5倍. 结论 国产人HFRS IgG抗体ELISA检测试剂盒灵敏性好,进口ELISA试剂盒特异性好,国产和进口ELISA试剂盒的精密度均良好,在实际应用中应根据具体情况合理选用.  相似文献   

7.
目的探讨儿童病毒性脑炎脑脊液病毒病原学特点及临床特征。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)疗法埘121例临床诊断为病毒性脑炎患儿的脑脊液进行肠道病毒(EV)、单纯疱疹病毒(HSV)I型和Ⅱ型、EB病毒(EBV)、腺病毒(ADV)及流感病毒(FLuV)特异性IgM抗体检测。结果脑脊液病毒特异性IgM抗体检测阳性75例,阳性率61.98%。肠道病毒阳性35例,居第1位,其次是单纯疱疹病毒I型和Ⅱ型,共17例。肠道病毒感染多见于婴幼儿(6个月~3岁),单纯疱疹病毒感染多见于学龄儿童;肠道病毒感染多见于夏秋季,单纯疱疹病毒感染多见于冬备季,EB病毒、腺痫毒及流感病毒各季节散发。结论肠道病毒是本地区儿童病毒性牺炎感染的主要病原;晒脊液病毒特异性IgM抗体检测町作为早期病原诊断的指标之一。  相似文献   

8.
目的用马立克氏病毒(Marak's Disease Virus-MDV)阳性鸡血清提纯IgG和MDV制备抗原,免疫BALB/c鼠,建立间接ELISA法检测MDV抗独特型抗体的方法.方法采集琼扩检出MDV羽囊阳性鸡血清,提纯制备IgG抗原和用MDV制备的抗原,免疫接种6~8周龄BALB/c小鼠,不同时期采集血样,用间接酶联免疫吸附试验和竞争抑制试验方法进行动态血清学观测.结果各个时段都出现MDV抗独特型抗体效价,效价可达10 000×以上.结论建立了MDV抗独特型抗体的间接ELISA方法.  相似文献   

9.
塑料条ELISA检测日本血吸虫病抗体方法的建立及应用   总被引:1,自引:1,他引:0  
塑料条ELISA(PS-ELISA)方法,以PVC塑料条代替微孔板,作为ELISA的固相载体,以达到简化操作、节约成本的目的.建立的PS-ELISA方法,在抗原、血清、酶结合物工作浓度选择时,与常规ELISA方法相比,两法OD值差异不大;检测73份血吸虫病人血清、95份健康人血清、18份肺吸虫病人血清和18份丝虫病人血清,PS-ELISA和ELISA检测阳性率分别为95.9%、1%、0%、0%和94.5%、1%、0%、0%,两法无显著差异;检测73份血吸虫病人血清,PS-ELISA和ELISA的平均P/N值分别为14.63和5.47,t检验有显著差异(t=12.28,P<0.01);检测95份健康人血清,PS-ELISA和ELISA的平均P/N值分别为1.01和1.16,(t=1.92,P>0.05).结果提示,PS-ELISA可应用于检测血吸虫病,且该法似能提高低感染度的检出率和降低假阳性率.  相似文献   

10.
用获FDA准许的美国CambridgeBiotech公司HIV-1蛋白印迹试剂盒(WB)对HIV-1/2抗体诊断试剂盒(ELISA)初筛阳性的62份血清标本做确证试验。一次性确证HIV抗体阳性者8名;阴性者12名;不确定者42名。对8名HIV抗体不确定者做追访采样监测,其中1人12天后WB血清HIV抗体由不确定性转为阳性,另7人在6~15个月经2~3次采样检测,WB区带反应无变化或略有变化。本研究证实WB不确定者,若有HIVenv(gp160、gp120、gp41)区带反应,HIV血清抗体可能转阳;若仅HIVpol(p31、p51、p66)和/或gag(P17、P24、P55)区带反应,很大可能是非特异性反应。虽ELISA阳性,而WB不确定者血清主要呈p24抗体反应(42.9%,18/42)与p24、p17抗体反应(28.6%,12/42)。  相似文献   

11.
7种单纯疱疹病毒Ⅱ型IgG抗体检测试剂盒的比较   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的比较7种单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)特异性IgG抗体检测试剂盒的优劣。方法对来自体检和性病门诊的生殖器疱疹可疑者的189份血清,同时用3种进口试剂盒(A、B、C)和4种国产试剂盒(D、E、F、G)进行检测。结果以"扩大金标准"为判断标准,7种检测试剂盒的敏感性:A、B、C分别为94.6%、100%、100%,D、E、F、G分别为98.5%、93.9%、96.9%、30.8%;特异性:A~G分别为98.2%、96.4%、96.4%、9.1%、43.6%、18.2%、100%;受试者工作特性曲线(ROC)下面积:A~G分别为0.964(0.933~0.995)、0.982(0.953~1.011)、0.982(0.953~1.011)、0.529(0.434~0.623)、0.664(0.567~0.761)、0.517(0.416~0.618)、0.654(0.576~0.732)。结论三种进口试剂盒检测结果可信度高,可用于临床实验室的辅助诊断、流行病学调查等。  相似文献   

12.
Human cytomegalovirus (HCMV), a member of the betaherpesvirinae, can cause life-threatening diseases. HCMV is globally widespread, with a seroprevalence in adults varying from 50 to 100%. HCMV infection is rarely of significant consequence in immunocompetent individuals. However, although immune control is efficient, it cannot achieve the clearance of the virus. HCMV persists lifelong in the infected host and reactivates in certain circumstances. In neonates and in immunocompromised adults, HCMV is a serious pathogen that can cause fatal organ damage. Different antiviral compounds alone or in combination have been used for the treatment of HCMV diseases. In clinical use, mutations in the viral DNA polymerase or the terminase confer resistance to ganciclovir, foscarnet, cidofovir, and letermovir. There is an urgent need to find new well-tolerated compounds supporting different modes of action. The list of novel small molecules that might have anti-HCMV activity has grown in recent years. In this short review, a selection of compounds in clinical trials and novel inhibitors targeting host-cell factors or viral proteins is presented, and their modes of action, described.  相似文献   

13.
目的 建立检测血清和唾液中旋毛虫抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法.方法 应用方阵滴定法,筛选适宜的旋毛虫抗原(肌肉幼虫可溶性抗原、肌肉幼虫排泄分泌抗原、成虫可溶性抗原、成虫排泄分泌抗原)浓度、血清和唾液稀释度、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔、山羊抗人IgG抗体稀释度.共有20份旋毛虫感染兔、10份旋毛虫病患者血清和唾液用于这4种抗原的敏感性试验,20份健康兔与38份其他寄生虫感染兔和患者的血清和唾液用于这4种抗原的特异性试验.结果 这4种抗原适宜包被浓度依次为8.0 μg/ml、6.0 μg/ml、10.0 μg/ml、9.0 μg/ml.适宜的血清稀释度依次为1:100、1:200、1:50、1:200,唾液均用原液.适宜的山羊抗兔、山羊抗人IgG稀释度分别为1:2 500和l:2 000.这4种抗原检测旋毛虫感染兔血清和唾液的敏感性分别为100%和80%~100%,检测旋毛虫病患者血清和唾液的敏感性分别为100%和60%~80%;检测血清和唾液的特异性依次为81.03%、89.65%、77.59%、82.76%和93.10%、96.55%、89.65%、91.35%.结论 建立了检测兔和人血清及唾液中旋毛虫lgG抗体的ELISA方法.当采集血清标本有困难时,可将唾液替代血清用于检测旋毛虫病.  相似文献   

14.
用ELISA方法检测原头节及EgM免疫犬IgG变化情况   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 用不同的抗原检测免疫犬后的血清,判定所引起的IgG变化和有无与其他虫种的交叉反应.方法 在用原头节可溶性粗抗原和Eg M家族重组表达蛋白对犬的免疫保护实验中,以原头节可溶性粗抗原、细粒棘球绦虫成虫可溶性粗抗原和多头绦虫可溶性粗抗原包被检测时,通过间接ELISA的方法检测其中的特异性抗体IgG的变化规律及与多头绦虫抗原有无交叉反应.结果 原头节可溶性粗抗原检测出相对应免疫组实验犬IgG 应答变化情况,同时用细粒棘球绦虫成虫包被抗原亦检测出IgG存在一定差异,但不十分明显,与多头绦虫无交叉反应.检测EgM重组蛋白免疫组IgG时它们存在一定差异,但不十分明显.结论 原头节可溶性粗抗原免疫组通过ELISA 的方法较为准确地检测出其IgG的应答情况;EgM重组蛋白免疫组的抗体检测仍需进一步完善.  相似文献   

15.
直接ELISA和PCR相结合快速检测样品中的沙门氏菌   总被引:16,自引:1,他引:16  
目的 通过样品试验,得到优化的沙门氏菌检测方法。方法 在单抗直接ELISA和PCR法检测沙门氏菌的基础上,将PCR法和单抗直接ELISA两种快速检测方法进行比较研究。结果 直接ELISA方法结合PCR方法对城区141份水样、2002年春季饮食行业工作人员健康检查的1426份人粪便样品,并与常规国标方法对比,直接ELISA法的敏感性和特异性达100%和97.2%,PCR法的敏感性和特异性均为100%。通过对鲜牛奶样、龙虾、虾仁、熟食制品、水样、人粪样测试,最终确定较优化的沙门氏菌检测程序。结论 PCR法的敏感性优于直接ELISA法。对大量样品采用直接ELISA筛检,除去大量阴性样品,阳性样品用PCR法作进一步鉴定;需要确定血清型时则用国标方法。  相似文献   

16.
Human cytomegalovirus (HCMV) is a major cause of morbidity and mortality in transplant patients and the leading viral cause of birth defects after congenital infection. The glycoprotein complexes gH/gL/gO and gH/gL/UL128/UL130/UL131A (Pentamer) are key targets of the human humoral response against HCMV and are required for HCMV entry into fibroblasts and endothelial/epithelial cells, respectively. We expressed and characterized soluble forms of gH/gL, gH/gL/gO, and Pentamer. Mass spectrometry and mutagenesis analysis revealed that gL-Cys144 forms disulfide bonds with gO-Cys351 in gH/gL/gO and with UL128-Cys162 in the Pentamer. Notably, Pentamer harboring the UL128-Cys162Ser/gL-Cys144Ser mutations had impaired syncytia formation and reduced interference of HCMV entry into epithelial cells. Electron microscopy analysis showed that HCMV gH/gL resembles HSV gH/gL and that gO and UL128/UL130/UL131A bind to the same site at the gH/gL N terminus. These data are consistent with gH/gL/gO and Pentamer forming mutually exclusive cell entry complexes and reveal the overall location of gH/gL-, gH/gL/gO-, and Pentamer-specific neutralizing antibody binding sites. Our results provide, to our knowledge, the first structural view of gH/gL/gO and Pentamer supporting the development of vaccines and antibody therapeutics against HCMV.Human cytomegalovirus (HCMV) is a member of the β-herpesvirus subfamily with >60% seropositivity in adults worldwide (1). HCMV infection is typically asymptomatic, but can cause severe disease or death in immunocompromised solid organ and hematopoietic stem cell transplant recipients. In addition, HCMV can infect the placenta and cross this barrier to infect developing fetuses, causing severe birth defects (2). Given the severity and importance of this disease, obtaining an effective vaccine is considered a public health priority (3).The ability of HCMV to cause disease in a wide range of organs and tissue types is reflected at the cellular level by the virus infecting epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, dendritic cells, hepatocytes, neurons, macrophages, and leukocytes (4). Similar to other herpesviruses, the envelope glycoproteins gB and gH/gL form the conserved fusion machinery required for viral entry (5, 6). Recent structural and mutagenesis analysis suggested that gB is responsible for mediating virus and host membrane fusion during viral entry (7, 8). The role of gH/gL in fusion is less clear because crystal structures of herpes simplex virus 2 (HSV-2), pseudo-rabies virus (PrV), and Epstein–Barr virus (EBV) gH/gL did not reveal any similarity to known viral fusion proteins (911). It has been proposed that gH/gL is involved in the entry process through activation of gB (12). In addition to gB and gH/gL, most herpesviruses encode additional glycoproteins that are able to interact with gH/gL and are capable of either mediating binding to specific cellular receptors or regulating the activity of the gH/gL–gB complex (5, 6).HCMV entry into both epithelial and endothelial cells requires a pentameric glycoprotein complex (Pentamer) formed between gH/gL and the UL128, UL130, and UL131A proteins (13, 14). Mutations in the UL131AUL128 gene locus are sufficient to eliminate epithelial/endothelial tropism and occur spontaneously within only a few passages of wild-type (WT) HCMV in fibroblasts (15, 16). In addition, Pentamer cell surface overexpression interferes with HCMV entry into epithelial cells, but not into fibroblasts, suggesting the presence of a cell-type-specific Pentamer receptor (17).HCMV entry into fibroblasts is mediated by the gH/gL/gO complex at the cell surface at neutral pH (1821). gO is a highly glycosylated protein and has been shown to covalently interact with gH/gL (22, 23). It has been proposed that gO might function as a molecular chaperone to promote gH/gL incorporation, but not gH/gL/gO, into the virion (21). However, it has been recently demonstrated that gH/gL/gO and Pentamer are much more abundant on the HCMV envelope than gH/gL alone (24).Highly potent HCMV-neutralizing monoclonal antibodies were isolated from the memory B-cell repertoire of HCMV-immune donors and shown to bind the Pentamer. These antibodies were capable of neutralizing HCMV infection of epithelial/endothelial cells, but not fibroblasts (25, 26). In addition, several studies have demonstrated that the Pentamer is the main target of the neutralizing humoral response to HCMV infection in epithelial/endothelial cells (2729). Consistent with these observations, immunization with the Pentamer has been shown to elicit a strong neutralizing antibody response in mouse, rabbit, and rhesus macaque models (3032). Together these data indicate that the Pentamer represents a key antigenic target for vaccine development against HCMV infection.Here we report the purification and biochemical characterization of HCMV gH/gL, gH/gL/gO, and Pentamer. In addition, we describe the architecture of these complexes by electron microscopy (EM) and characterize their interaction with MSL-109, a previously described HCMV-neutralizing antibody isolated from the spleen of a HCMV-seropositive individual (33, 34). Our data provide new insights into the structure and function of the HCMV gH/gL/gO and Pentamer complexes.  相似文献   

17.
目的 目的 比较3种不同的检验方法对弓形虫IgG抗体的检测效能, 并进行分析。方法 方法 采用临床上常用的金标法、 间接血凝试验 (IHA)、 酶联免疫吸附实验(ELISA), 对304份血清标本进行弓形虫IgG抗体平行检测, 比较各检测方法的敏 感性、 特异性和Youden指数。结果 结果 金标法、 IHA、 ELISA这3种方法对弓形虫IgG抗体检测的敏感性分别为85.5%、 89.8% 和91.9%, 三者之间差异没有统计学意义 (χ2 = 4.12, P > 0.05); 特异性分别是92.4%、 96.6%和97.5%, 差异亦无统计学意义 (χ2 =4.06, P > 0.05)。ELISA法的检测效率和Youden指数分别为94.1%和0.89, 高于IHA法和金标法。结论 结论 ELISA法检 测弓形虫IgG抗体的敏感性和特异性较高, 可自动化, 适合于大规模的弓形虫IgG抗体筛查。  相似文献   

18.
目的对ELISA(酶联免疫吸附试验)法检测血清包虫IgG抗体试剂盒进行评价,为其应用提供参考。方法收集2012-01-12就诊的1242位可疑包虫病患者的血清标本,采用ELISA检测血清棘球蚴IgG抗体。结果1242例中就诊患者中对包虫感染有明确诊断(确诊或排除包虫病)的有1130例,其中棘球蚴IgG抗体阳性159例(14.07%),棘球蚴IgG抗体阴性971例(85.93%);以临床诊断为标准得到灵敏度87.06%,特异性91.87%,Youden指数为0.78。结论ELISA法检测棘球蚴IgG抗体的灵敏度和特异性较高,可用于包虫病患者的流行病学调查;并结合B超等影像学检查用于临床包虫病的辅助诊断。  相似文献   

19.
ELISA法快速检测慢性肝病患者血清中TIMP-1   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 应用酶联免疫吸附方法(ELISA)快速检测慢性肝病患者血清中基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1),了解TIMP-1血清学检测与肝纤维化病程进展程度。方法 以抗人TIMP-1单克隆抗体为包被抗体,15%小牛血清为封闭液,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人IgG作为酶结合物建立检测人血清TIMP-1 ELISA法,用于临床检测399例肝病患者血清和健康人血清105例。结果 临床检测表明肝硬化患者TIMP-1检出阳性率为76.9%,明显高于慢性肝炎(40.7%)和急性肝炎(19.4%)(P〈0.005),并随着纤维化程度加重而升高(P〈0.01)。结论 血清中TIMP-1的变化可作为肝纤维化较为有用的诊断指标。ELISA法具有较高的敏感性、特异性和快速性,试剂用量少,且不需复杂的仪器设备,加之实验程序简单,甚适于医院及基层医疗单位应用。  相似文献   

20.
间接ELISA法检测血清隐孢子虫抗体IgG及IgM的实验研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 间接ELISA法检测小鼠隐孢子虫抗体诊断隐孢子虫病的敏感性和实用性。方法 经过方阵滴定检测确定最佳的酶标抗体的工作浓度和最佳的抗原包被量 ,进一步测定血清隐孢子虫抗体的光密度 ,并设立阴性对照组比较。结果  10、5 0、10 0、5 0 0个卵囊剂量组和阴性对照组比较均具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;将剂量对数与OD490 值作相关分析 ,IgG的相关系数r=0 .990 ,P <0 .0 5 ;IgM的相关系数r=0 .95 4 ,P <0 .0 5 ;各组剂量对数与OD490 作回归分析 ,呈线性关系 ,P <0 .0 5。结论 间接ELISA法检测血清隐孢子虫抗体具有较高的敏感性和特异性 ,适合常规的流行病学调查  相似文献   

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