Effects of Serum Containing Jiangu Granules on Expression of OPG and RANKL mRNA in Osteoblast-like Cells

目的 观察健骨颗粒含药血清对OPG、RANKL mRNA表达的影响.方法 制备健骨颗粒含药血清和生理盐水血清,分别干预体外培养的成骨样细胞ROS17/2.8,干预48 h后,用MTT法检测细胞增殖,荧光定量PCR检测OPG、RANKL mRNA表达.结果 中药血清组对OPG mRNA表达较生理盐水血清组上升,对RANKL mRNA表达较生理盐水血清组降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 健骨颗粒含药血清能促进成骨样细胞的OPG mRNA表达并抑制其RANKL mRNA表达.     

基于Wnt/β-catenin信号通路研究扶肝化纤汤抑制HSC-T6活化的作用

目的 探讨扶肝化纤汤抑制大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖的作用机制。方法 健康清洁级雄性SD大鼠40只,予扶肝化纤汤等效量灌胃,制备含药血清及正常血清。CCK8法检测不同含药血清浓度(5%、8%、10%、15%、20%)对HSC-T6增殖率的影响,选择最佳作用浓度。将HSC-T6分为空白组(15%胎牛血清)、模型组[转化生长因子-β1(TGF-β1)+15%正常血清)]和治疗组(TGF-β1+15%含药血清),Western blotting、qt-PCR检测Wnt1、β-catenin、Cyclin D1蛋白和mRNA表达,细胞免疫荧光染色法检测α-SMA表达。结果 镜下观察治疗组HSC-T6细胞数量减少,形态变圆,体积缩小,悬浮细胞增多。CCK8法检测结果显示,扶肝化纤汤含药血清抑制TGF-β1诱导活化的HSC-T6细胞增殖(P<0.01),其中15%、20%浓度效果最佳,但15%与20%两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting、qt-PCR检测结果显示,与模型组比较,治疗组Wnt1、β-catenin、Cyclin D1的mRNA和...     

Mechanism of Hewei Jiangni Capsule(和胃降逆胶囊)Regulating Proliferation and Apoptosis of Human Gastric Cancer AGS Cells Through PI3K/AKT Signaling Pathway

目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况.结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P＜0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义.在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低.各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P＜0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P＜0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P＜0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P＜0.05),且呈现出浓度相关性.结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡.     

RNAi沉默PLCε对Crocin抑制人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用调控的研究

目的:观察RNAi沉默膀胱癌BIU-87细胞磷脂酶C-ε(Phospholipase C epsilon,PLCε)表达后对藏花素(Crocin)抑制人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响.方法:将携有siRNA基因的真核表达质粒PGenesil-PLC?转染BIU-87细胞后,分为5组:未转染组、pGenesil-NP阴性质粒组、pGenesil-PLC ε质粒组、Crocin组、pGenesil-PLCε联合Crocin组.MTT法观察不同处理组对BIU-87细胞的生长抑制作用.RT-PCR法检测转染后对PLCε mRNA表达的影响及各处理组PCNA(Proliferating cellnuclear antigen)、CyclinD1 mRNA表达.Western-blot检测PCNA、CyclinD1蛋白表达.结果:RNAi可抑制BIU-87细胞78.06%的PLCεmRNA表达.pGenesil-PLCε联合Crocin组可增强Crocin对BIU-87细胞的生长抑制作用,48h抑制率达45.30%,且与pGenesil-PLCε质粒组和Crocin组相比较有显著性差异(P<0.01).RT-PCR和Western-blot结果显示与RNAi沉默PLCε组比较,RNAi PLC?联合Crocin组明显下调了PCNA、Cyclin D1基因和蛋白的表达(P<0.05);较单独Crocin组比较,RNAiPLC ε联合Crocin组显著降低了PCNA基因和蛋白的表达(P<0.05),降低了Cyclin D1蛋白的表达(P<0.05),Cyclin D1 mRNA表达变化两组间无显著性差异(P>0.05).结论:沉默PLC ?基因可增强Crocin对BIU-87细胞的抑制作用,其机制与进一步下调PCNA、CyclinD1的表达有关.     

三七总皂苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖及cyclinD1、PCNA蛋白表达的影响

目的三七总皂苷(TPNS)对大鼠血管平滑肌细胞增殖及cyclin D1、PCNA蛋白表达的影响。方法选取统一环境饲养的大鼠20只,随机分为对照组和实验组,对照组灌胃生理盐水,实验组小鼠分别给大鼠灌胃50mg/m L、100mg/mL、200mg/mL TPNS,采集大鼠血浆后CCK-8法检侧不同浓度的含药血浆对VSMC细胞增值率的影响;利用免疫荧光流式细胞仪检测大鼠VSMC细胞Cyclin D1、CDK4、P21、PCNA蛋白的表达;结果随着TPNS药物浓度的增加及处理VSMC细胞时间的延长,VSMC细胞的相对增值率逐渐下降,当TPNS浓度为200mg/m L时细胞的增值率最低为(0.60±0.09),差异具有显著性(P0.05);免疫荧光流式细胞仪检测结果显示:与未经TPNS处理的细胞内蛋白相比,Cyclin D1、CDK4、PCNA蛋白表达量下降,且差异具有显著性(P0.05),而P21蛋白表达量升高,差异无显著性(P0.05)。结论 TPNS作用于大鼠VSMC细胞可能通过抑制细胞周期相关蛋白的表达进而抑制大鼠VSMC细胞的增殖。     

丹芍颗粒对体外培养大鼠系膜细胞MMP-2、MMP-9表达的影响

目的：研究丹芍颗粒含药血清对大鼠系膜细胞增殖抑制作用及MMP-2、MMP-9 mRNA表达的影响,从细胞因子、基因表达及其调控的角度探讨丹芍颗粒治疗紫癜性肾炎的作用机理。方法：采用CCK-8法观察含药血清对HBEH的增殖抑制率,RT-PCR法检测系膜细胞MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平。结果：不同浓度的丹芍颗粒血清对细胞增值影响不同;经LPS诱导HBEH细胞增殖后MMP-2、MMP-9 mRNA表达量明显升高（与正常组比较,P〈0.05）,而丹芍高剂量组、丹芍低剂量组、生理盐水对照组MMP-2、MMP-9 mRNA表达量与LPS组比较均降低（与LPS组比较P〈0.01）。结论：丹芍颗粒含药血清具有抑制大鼠系膜细胞增生的作用,能够下调经LPS诱导HBEH细胞增殖后MMP-2、MMP-9 mRNA的表达水平,可能是其发挥作用的主要机制之一。     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱及对P53和Cyclin D1基因表达的影响

目的:探讨Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化及对P53和Cyclin D1基因表达的影响。方法:PC12细胞同步于G0期,采用终浓度为0-45μmol/L或浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,用MTT比色法分析细胞存活率;流式细胞仪检测分析细胞周期的改变;RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测P53和Cyclin D1基因的变化。结果:随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);流式细胞仪分析表明去血清培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8,16,24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P<0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);P53 mR-NA表达和P53蛋白表达降低、Cyclin D1 mRNA表达和Cyclin D1蛋白表达增高。结论:Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与下调P53的表达,上调Cyclin D1的表达有关。     

p38MAPK通路在健骨颗粒促成骨细胞早期分化中的作用

目的观察p38MAPK信号转导通路在健骨颗粒促进体外培养成骨细胞早期分化过程中的作用。方法采用酶消化法分离、培养SD大鼠成骨细胞,分4组进行干预:对照组(加入生理盐水血清)、阻断剂组(加入p38MAPK的阻断剂SB202190)、中药组(加入健骨颗粒含药血清)和中药加阻断剂组(加入健骨颗粒含药血清和SB202190),运用化学比色法检测上清液中碱性磷酸酶(AKP)活性及羟脯氨酸(HYP)含量,实时荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测成骨细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达。结果在AKP活性、HYP含量及ColⅠmRNA表达3项指标上,中药组>中药加阻断剂组>对照组>阻断剂组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外培养大鼠成骨细胞的早期分化与p38MAPK信号转导通路有关;健骨颗粒含药血清能促进成骨细胞的早期分化,但这一作用仅部分通过p38MAPK信号通路实现。     

温阳利水方含药血清对脾肾阳虚IMN患者血清致小鼠足细胞凋亡的作用

目的 探讨温阳利水方含药血清对特发性膜性肾病(IMN)脾肾阳虚证足细胞凋亡的作用.方法 CCK-8检测不同浓度脾肾阳虚型IMN患者血清对体外培养小鼠永生化足细胞增殖能力的影响,构建脾肾阳虚型IMN血清损伤足细胞体外模型.SPF级大鼠予不同浓度温阳利水方水提物灌胃,腹主动脉取血,分离血清并灭菌后备用.设正常对照组、模型组、低、中、高浓度含药血清组,温阳利水方含药血清与脾肾阳虚型IMN血清损伤足细胞共孵育48 h,qRT-PCR检测凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2 mRNA相对表达量.结果 10%脾肾阳虚型IMN患者血清造成足细胞损伤模型,加入不同浓度温阳利水方含药血清共孵育48 h后,Caspase-3 mRNA相对表达量,与正常对照组比较,模型组增多,但差异无统计学意义;含药血清组Caspase-3 mRNA相对表达量无明显增减.Bcl-2 mRNA相对表达量,与模型组比较,低、中、高浓度含药血清组Bcl-2 mRNA相对表达量均增加,组间比较,模型组与中、高浓度含药血清组差异均有统计学意义(P<0.01);含药血清组间比较,中、高浓度组Bcl-2 mRNA相对表达量均较低浓度组增加,且差异均有统计学意义(P<0.01);中、高浓度组间,Bcl-2 mRNA相对表达量差异有统计学意义(P<0.01).结论 对脾肾阳虚型IMN患者血清损伤足细胞,温阳利水方含药血清共孵育48 h,可能通过上调Bcl-2的水平,发挥抗凋亡效应.     

MiR-199a-3p对大鼠肝细胞增殖的抑制作用

目的探讨miR-199a-3p对体外培养SD大鼠BRL-3A增殖的影响.方法人工合成miR-199a-3p模拟物、miR-199a-3p阻遏物及其各自阴性对照载体,分别转染BRL-3A肝细胞,转染后12 h、24 h、48 h和72h,应用定量PCR分析细胞中Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平,免疫组化方法观测Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率,流式细胞仪检测细胞各周期比例和CCK 8法检测细胞增殖.实验分4组:mimics组,mi-nc组,inhibitors组和in-nc组.结果转染后24 h、48 h、72 h,inhibitors组肝细胞Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平较in-nc组显著增多(P<0.05),而mimics组肝细胞Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平较mi-nc组显著降低(P<0.05).inhibitors组肝细胞Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率均高于mi-nc组(P<0.05),而mimics组肝细胞Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率均低于mi-nc组(P<0.05).inhib... 更多     

健骨颗粒对钛颗粒诱导的骨溶解模型大鼠OPG/RANKL/RANK mRNA的调控作用

目的研究健骨颗粒对钛颗粒诱导的骨溶解模型大鼠OPG/RANKL/RANK系统相关因子的影响,探讨其防治人工关节假体无菌性松动发病机制。方法 40只SD大鼠随机取10只将其颅骨骨片作为供体,其余30只制备植骨气囊模型后随机分为对照组、模型组和健骨颗粒组各10只,其中模型组和健骨颗粒组建立肽颗粒诱导的骨溶解病理模型。造模后健骨颗粒组予健骨颗粒混悬液灌胃,对照组和模型组予等量生理盐水灌胃,连续灌胃2周。灌胃结束后取出完整气囊,HE染色观察植骨气囊壁形态变化,ELISA法检测IL-1β、TNF-α含量,Real-time PCR法检测OPG、RANKL mRNA表达。结果 HE染色中对照组气囊壁炎症反应较轻、无明显骨溶解,模型组气囊壁厚度增加、炎细胞浸润以及骨溶解,健骨颗粒组炎细胞浸润、骨溶解程度较模型组低。与对照组比较,模型组IL-1β、TNF-α含量及RANKL mRNA表达明显升高(P<0.05),OPG mRNA表达及OPG/RANKL明显降低(P<0.05);与模型组比较,健骨颗粒组IL-1β、TNF-α含量及RANKL mRNA表达明显降低(P<0.05),OPG mRNA表达及OPG/RANKL明显升高(P<0.05)。结论健骨颗粒可能通过降低炎性反应、上调OPG/RANKL mRNA比值来抑制钛颗粒诱导骨溶解,这可能是其防治人工关节无菌性松动的作用机制之一。     

氧化苦参碱通过P38 MAPK通路抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖

目的 观察氧化苦参碱(OXY)对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响,并探讨其机制及作用.方法 人宫颈癌HeLa细胞经过系列浓度的OXY(1.0、2.0和4.0 mg/ml)处理不同时间后,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖的变化.免疫印迹(Western blot)方法测定OXY对HeLa细胞PCNA、Cyclin D1和P38 MAPK、P-P38MAPK计学意义表达的影响.并采用Annexin V-PI双染测定细胞凋亡.结果 氧化苦参碱成浓度时间依赖性抑制HeLa细胞增殖;高浓度氧化苦参碱(4.0 mg/ml)不仅抑制HeLa细胞增殖,而且促进细胞凋亡.与对照组比,OXY处理细胞的PCNA和Cyclin D1蛋白表达明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),而P-P38 MAPK蛋白表达水平明显升高;P38 MAPK特异性抑制剂可缓解OXY对HeLa细胞增殖的抑制率,增加PCNA和Cyclin D1蛋白表达.结论 OXY能够通过提高P38 MAPK磷酸化而下调PCNA和Cyclin D1表达,抑制HeLa细胞增殖.     

骨炎定含药血清对人骨关节炎软骨细胞保护作用的机理探讨

[目的]观察骨炎定含药血清对人骨关节炎软骨细胞Ⅱ型胶原(collage Ⅱ)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。[方法]SD大鼠10只,给予骨炎定2.4 g·kg-1·d-1灌胃,空白对照组给予等容积生理盐水灌胃,连续1个月,采血得含药血清和空白血清;从髋关节炎行关节置换术中获取离体股骨头关节软骨,进行软骨细胞分离培养;治疗组加入骨炎定含药血清,空白对照组加入空白血清,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测含药血清对软骨细胞增殖的影响,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测含药血清对软骨细胞iNOS和collage Ⅱ信使核糖核酸(mRNA)表达的影响。[结果]骨炎定含药血清可促进软骨细胞增殖,降低iNOS mRNA的表达,增强collage ⅡmRNA的表达,与空白对照组比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。[结论]补肾益气活血方剂骨炎定治疗骨性关节炎的疗效可能与其促进软骨细胞增殖,抑制iNOS表达,增强Ⅱ型胶原表达,保护软骨细胞的作用有关。     

Rab1A siRNA对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖和凋亡的影响并探讨其分子机制。方法应用siRNA干扰Rab1A基因表达,将He La细胞分为空白对照组、阴性对照组和Rab1A siRNA组,空白对照组不做处理,阴性对照组转染阴性对照siRNA。Rab1A siRNA组转染Rab1A特异性siRNA。MTT比色法分析Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;Western blot观察Rab1A siRNA对Cyclin D1、GRP78、Bcl-2和Bax表达的影响。结果与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的Rab1A mRNA和蛋白的表达均显著下调;Rab1A siRNA抑制宫颈癌He La细胞增殖;与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的S期细胞数量显著减少(P<0.05),G1/G0期细胞数量显著增加(P<0.05),Rab1A siRNA组He La细胞的早期凋亡和晚期凋亡显著增加(P<0.01);Rab1A siRNA组与阴性对照组相比,Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P<0.01),GRP78和Bax在蛋白水平的表达显著上调(P<0.01)。结论 Rab1A通过调控Cyclin D1的表达促进宫颈癌He La细胞增殖,通过调控GRP78、Bcl-2和Bax表达抑制细胞凋亡。     

人参皂苷Rg1对兔膝早期骨性关节炎软骨细胞增殖影响的体内实验研究

目的观察人参皂苷Rg1对兔膝关节早期骨性关节炎软骨细胞增殖的影响。方法将50只健康新西兰雄性大白兔随机均分为正常组、模型组和人参皂苷Rg1低、中、高剂量组。采用伸直位管型石膏固定法制备兔膝骨性关节炎早期模型,造模后立即干预,人参皂苷Rg1低(5mg/kg)、中(10mg/kg)、高(20mg/kg)剂量组5 m L/kg体积灌胃给药,正常组和模型组予以等剂量生理盐水灌胃,每周3次,干预6周后取材。采用PCR技术检测P21、Cyclin D1 mRNA表达,Western-blot技术检测相应蛋白的表达,PCNA法检测软骨细胞增殖活性。结果人参皂苷Rg1低、中、高剂量组P21 mRNA及相应蛋白的表达均低于模型组(P0.05或P0.01),而Cyclin D1 mRNA及相应蛋白的表达高于模型组(P0.05或P0.01),PCNA检测显示人参皂苷Rg1中、高剂量组软骨细胞增殖率明显高于模型组(P0.05)。各项指标中以中剂量组效果最佳,即存在一定的量效关系。结论人参皂苷Rg1可有效提高软骨细胞G1期调节蛋白Cyclin Dl的表达,抑制P21表达,从而促进软骨细胞增殖,对软骨组织有着积极的修复作用。     

周期蛋白A、D1和增殖细胞核抗原在肺癌中的表达及临床意义

目的观察细胞周期蛋白A、D1（Cyclin A、D1）和增殖细胞核抗原（PCNA）在肺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化和RT-PCR方法观察94例肺癌组织和10例假瘤炎性肺组织（对照组）中Cyclin A、D1和PCNA的表达。结果在94例肺癌中，Cyclin A蛋白表达阳性率为84.0%；Cyclin D1蛋白表达阳性率为63．8％;PCNA蛋白表达阳性率为68．1％；肺癌的分期与Cyclin A和PCNA蛋白的表达相关（P〈0．05）。在小细胞癌、鳞癌中Cyclin A、D1的mRNA表达较对照组均存非常显著的提高（P〈0.01）;在腺癌中Cyclin A、D1的mRNA表达较对照组也有明照增强（P〈0．05）。结论肺癌中Cyclin A和PCNA蛋白表达有显著升高，Cyclin A和PCNA蛋白的过表达与肺癌的分期相关。     

骨康对体外培养人成骨细胞OPG及RANKL基因表达的影响

【目的】观察中药骨康含药血清对肾阳虚型骨质疏松症患者成骨细胞细胞因子骨保护素(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。【方法】取6月龄体质量2.5～3.0 kg的新西兰大耳白兔4只,雌雄各半,随机分为2组(中药骨康组、空白对照组),每组2只;分别灌服骨康煎剂4.2 g.kg-1.d-1,以及等容积生理盐水,连续灌胃共7 d,最后1次灌胃2 h后所有动物进行心脏采血,收集血清备用。分离并传代培养肾阳虚骨质疏松症患者成骨细胞,取第2代,制成2×105/mL的细胞悬液。实验组分别加入低、中、高不同浓度(体积分数5%、10%、20%)的骨康含药血清进行干预,空白对照组仅加培养液,继续培养。48 h后采用Trizol一步法提取总RNA,然后采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法检测OPG、RANKL mRNA的表达。【结果】骨康低、中、高浓度组OPG mRNA表达量显著上升,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);骨康中浓度组与骨康低浓度组、骨康高浓度组与骨康中浓度组组间分别比较差异均有统计学意义(P<0.05);骨康含药血清以体积分数5%、10%、20%浓度递增时,RANKL mRNA的表达量显著下降,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),骨康中浓度组与骨康低浓度组、骨康高浓度组与骨康低浓度组组间RANKL mRNA表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】骨康可以上调肾阳虚骨质疏松症患者体外培养成骨细胞OPG mRNA的表达,下调RANKL mRNA的表达。     

黄斑颗粒含药血清预处理对人RPE细胞缺氧损伤的保护作用

目的:观察中药黄斑颗粒含药血清预处理后对人视网膜色素上皮(hRPE)细胞缺氧损伤的保护作用。方法:制备不同剂量中药黄斑颗粒含药血清,用含药血清预处理hRPE细胞,分不同时间段建立化学缺氧损伤模型,培养24h后,用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果:黄斑颗粒含药血清组细胞活力较空白血清组与模型组细胞活力显著提高,其中高剂量含药血清组细胞活力高于低剂量含药血清组,但仍低于正常对照组,有显著性差异;各含药血清组细胞活力抑制率均明显降低,其中高剂量组低于低剂量组。此外,含药血清能促进缺氧条件下RPE细胞由G0/G1期进入S期,促进RPE细胞的增殖。结论:中药黄斑颗粒含药血清预处理对人视网膜色素上皮细胞缺氧损伤具有一定的保护作用。     

骨连接素对角质形成细胞的增殖抑制作用

目的:观察骨连接素对体外培养人角质形成细胞(HaCaT)的细胞增殖、细胞周期及相关基因表达的影响,初步探讨骨连接素对人角质形成细胞的作用机制.方法:用不同浓度骨连接素处理HaCaT细胞,MTT法检测HaCaT细胞增殖;流式细胞术测定细胞周期;实时定量RT-PCR方法检测CCND1和PCNA mRNA表达水平的变化.结果:与未加入骨连接素的HaCaT细胞相比,5 μg/ml以上浓度骨连接素作用的细胞增殖率明显下降(P<0.05), 10 μg/ml骨连接素作用的细胞G0/G1期细胞明显增多.10 μg/ml以上浓度的骨连接素作用后,HaCaT细胞CCND1和PCNA的mRNA水平显著减弱(P<0.05,P<0.01).结论:骨连接素可能是通过抑制CCND1和PCNA的表达,从而发挥抑制细胞增殖的作用.     

补肾方含药血清对人肝癌SK-HEP-1细胞增殖与凋亡的影响

目的:评价补肾方含药血清对人肝癌细胞株SK-HEP-1细胞增殖和细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:用SD大鼠制备空白组、补肾组、索拉非尼组含药血清;培养并建立VEGF诱导的SK-HEP-1细胞模型,分别予药物血清干预。以MTT比色法检测各组对SK-HEP-1细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡,荧光Real-time PCR法检测细胞凋亡基因bax mRNA、bcl-2 mRNA的表达。结果:与空白血清组和VEGF组比较,补肾组含药血清可明显抑制SK-HEP-1细胞增殖(P0.01),提高SK-HEP-1细胞G1期的细胞比率(P0.05)以及细胞的早期凋亡率(P0.05)和总凋亡率(P0.05),上调bax mRNA基因表达(P0.05)和下调bcl-2 mRNA基因表达(P0.01),且补肾组和索拉非尼组组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:补肾方对人肝癌细胞株SK-HEP-1具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用;其作用机制可能与阻滞细胞由G1期进入S期和G2期,以及上调bax和下调bcl-2基因表达,促进SK-HEP-1细胞的凋亡有关。