白藜芦醇诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡的线粒体机制(英文)

目的　探讨白藜芦醇诱导鼻咽癌细胞CNE 2Z凋亡的线粒体机制。方法　用 10 0 μmol·L- 1白藜芦醇分别处理细胞 0 (对照 ) ,2 ,4 ,8,12 ,2 4h和分别用 0 ,2 5 ,5 0 ,10 0 ,2 0 0 μmol·L- 1白藜芦醇处理CNE 2Z细胞 8h ,采用Western印迹分析Bcl 2 ,Bax和胞浆中细胞色素C(CytC)的蛋白水平变化 ,罗丹明 12 3荧光染色后经流式细胞术检测线粒体膜电位(△ψm)变化 ,比色法测定半胱天冬酶 9的活性改变。结果　① 10 0 μmol·L- 1白藜芦醇处理细胞不同时间 ,Bcl 2蛋白表达和△ψm 减少、胞浆中的CytC和半胱天冬酶 9活性增高均呈时间依赖性 (P <0 .0 1) ,但Bax蛋白表达无改变。除Bax以外的其他指标均自白藜芦醇处理 2h即有变化。Bcl 2的蛋白表达受抑和△ψm 的丧失在 4～ 8h间最明显 (与对照组比较P <0 .0 1) ,在 2 4h时已无意义。胞浆中CytC水平和半胱天冬酶 9活性在 8h达高峰 (分别为 0h的 3.0 ,5 .4倍 ) ,2 4h时仍明显高于对照组(P <0 .0 1)。②细胞经不同浓度的白藜芦醇处理 8h后 ,Bcl 2的蛋白表达受抑、△ψm 的丧失、CytC的释放和半胱天冬酶 9活性的升高均具有剂量依赖性 (P <0 .0 1) ,但Bax的蛋白表达未受影响。结论白藜芦醇可能经一个线粒体 /半胱天冬酶 9的特定途径诱导CNE 2Z细胞凋亡 ,但此凋亡?     

辛伐他汀通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡

目的观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡不同时间的膜电位(Δψm),caspase-3、9和细胞色素C的改变,以推测其凋亡通路。方法采用浓度为20μmol.L-1的辛伐他汀处理K562细胞24、48、72 h,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位,分光光度法检测caspase-3、9蛋白活性,免疫组织化学法检测细胞色素C蛋白。结果浓度为20μmol.L-1辛伐他汀作用K562细胞24、48、72 h后,凋亡率分别为(6.1±0.35)%、(14.15±0.42)%(、30.70±0.65)%,随着凋亡率增加线粒体膜电位降低分别为(39.6±4.80)%,(24.4±2.45)%,(6.0±1.62)%;caspase-3、9蛋白活性与对照组相比上调,细胞浆内细胞色素C升高。结论辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时线粒体膜电位下降,caspase-3、9活性增高和细胞色素C释放,推测辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡可能经过线粒体凋亡途径。     

姜黄素诱导食管癌Eca-109细胞凋亡机制的研究

目的观察姜黄素诱导食管癌Eca-109细胞凋亡,并初步探讨其作用机制。方法通过CCK-8法检测不同浓度、不同时间点作用于Eca-109细胞的增殖抑制率。应用Caspase 3活性检测试剂盒检测胱天蛋白酶3活性。流式细胞技术检测细胞早期凋亡。免疫细胞化学法检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达情况。结果随浓度增加时间延长各组生长抑制率有明显增高,且呈剂量浓度依赖性,组间差异有显著性(P<0.01)。胱天蛋白酶3活性检测发现:姜黄素20μmol·L-1,40μmol·L-1作用24 h后OD值与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测到姜黄素作用后,细胞凋亡率明显升高。免疫细胞化学染色显示,随着姜黄素浓度的增高和作用时间的增长,Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强。结论姜黄素可能是通过诱导胱天蛋白酶3表达活性增高,上调促凋亡基因Bax及下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,诱导Eca-109发生凋亡。     

镉诱发HEK293细胞凋亡的线粒体途径

目的研究镉引起的HEK293细胞凋亡与线粒体的关系。方法分别以2′,7′-二氯荧光素二酯和若丹明123为荧光探针,经流式细胞仪检测胞浆内活性氧含量和线粒体膜电位的变化;Western印迹法检测线粒体细胞色素c的释放。结果在镉诱导HEK293细胞的凋亡过程中,胞浆内的活性氧水平升高,但能被抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)抑制;同时,镉使线粒体膜电位下降和线粒体细胞色素c释放进入胞浆,二者都被NAC加剧。结论镉诱导HEK293细胞的凋亡可能通过线粒体途径。     

金喜素诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase活化

目的　探讨金喜素诱导急性白血病细胞凋亡的生化机制。方法　采用MTT法测定金喜素对HL 6 0细胞的杀伤作用 ;通过形态学、DNA凝胶电泳及AnnexinVFITC染色 ,研究金喜素对靶细胞的促凋亡活性 ;采用caspase 8、3特异性抑制剂IETD fmk、DEVD CHO ,分析金喜素介导的靶细胞凋亡与caspase活化的关系。结果　经 0 1μmol·L-1金喜素处理至 8、12及 16h时 ,HL 6 0细胞的存活率依次降至6 2 %± 12 %、、43%± 15 %及 32 %± 10 % ,低于对照 (P <0 0 5 ) ,同时 ,靶细胞逐渐出现磷脂酰丝氨酸外化 ,并产生梯状DNA及凋亡小体 ;经caspase抑制剂与金喜素联合处理12、16h时 ,HL 6 0细胞的存活率高于单用金喜素组 ,分别为77%± 14%、6 5 %± 16 % (IETD fmk组 )与 74%± 12 %、6 0 %± 11% (DEVD CHO组 ) ,同时 ,靶细胞的梯状DNA与凋亡小体的诱生也明显受抑。结论　金喜素对HL 6 0细胞具有较强的促凋亡作用 ,该过程可能依赖caspase 8、caspase 3的活化     

线粒体介导的细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡是由相关基因调控的程序化细胞死亡过程,线粒体在细胞凋亡中起重要的调控作用。该文对Cyt-c、活性氧、Bcl-2及AIF介导的细胞凋亡机制进行综述。     

五没食子酰基葡萄糖对卵巢癌HO-8910细胞凋亡调控基因表达与胱天蛋白酶凋亡途径的影响

目的探讨五没食子酰基葡萄糖(PGG)诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡的作用及诱导胱天蛋白酶凋亡途径的机制。方法 PGG 10,20,40和80μmol·L-1处理HO-8910细胞48,72和96 h后,MTT法检测细胞存活率;Hoechst 33258染色观察HO-8910细胞核形态改变,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;Western印迹法检测细胞内胱天蛋白酶酶原及活性形式;RT-PCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2、Bcl-XL、凋亡抑制因子1(CIAP-1)、CIAP-2、存活蛋白、神经元凋亡抑制蛋白(NIAP)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和细胞周期蛋白D1 mRNA表达。结果 PGG 10～80μmol·L-1分别作用48,72和96 h,随浓度的增加,细胞存活率明显降低,r分别为0.93,0.95和0.86(P<0.05)。PGG 40μmol·L-1使HO-8910细胞的细胞核染色质固缩,出现凋亡形态学改变,早期凋亡率从正常对照组的(0.6±0.1)%分别增加到(3.4±1.1)%,(9.8±3.7)%和(19±4.5)%,对晚期凋亡率影响不明显。PGG 20～80μmol·L-1使HO-8910细胞内胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶7和胱天蛋白酶9及其底物多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切水平增加,PGG20～80μmol·L-1均抑制死亡受体FAS的蛋白表达水平并使胱天蛋白酶8总剪切水平降低。PGG 20～80μmol·L-1抑制HO-8910细胞中细胞周期蛋白D1,Bcl-2,Bcl-XL和NIAP mRNA的表达,上调CIAP-1 mRNA的表达,对基因Bax,CIAP-2和XIAP mRNA表达影响不明显;PGG 20μmol·L-1抑制存活蛋白基因mRNA的表达,但是增加处理浓度却上调存活蛋白基因mRNA的表达。结论 PGG可能通过抑制凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL的表达从而诱导HO-8910细胞内胱天蛋白酶9依赖的内源性凋亡途径,并诱导细胞凋亡。     

天然活性分子isatin经p53介导的线粒体途径诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡

目的探讨吲哚醌(isatin)对乳腺癌细胞MCF-7的抗肿瘤作用及其具体的调控机制。方法不同浓度isatin(0、50、100、200μmol·L~(-1))作用于乳腺癌细胞48 h后,利用细胞荧光染色、RT-PCR、Western blot及流式细胞术等方法检测isatin的促凋亡作用。结果不同浓度isatin处理MCF-7细胞48 h,荧光显微镜观察到细胞出现核染色质聚集、细胞体积缩小及DNA断裂等典型的凋亡形态学改变。RT-PCR和Western blot结果证实,随着isatin浓度的不断增加,p53、Bax mRNA和蛋白表达量也逐渐增加,而Bcl-2 mRNA及蛋白表达下降;流式细胞仪结果提示不同药物浓度作用的细胞膜电位出现不同程度的下降,caspase-9被激活。Western blot结果显示isatin处理组细胞胞质细胞色素C含量明显增加,相反线粒体中细胞色素C含量相应降低。结论 isatin具有明显诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的作用,其可能的作用机制是经p53的线粒体凋亡通路被激活。     

23-羟基白桦酸诱导LoVo细胞凋亡与线粒体膜电位的变化

目的探讨23-羟基白桦酸对人结肠癌细胞株LoVo细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测23-羟基白桦酸对LoVo细胞的增殖抑制作用。Hoechst染色、流式细胞仪检测细胞凋亡及线粒体膜电位的变化。结果23-羟基白桦酸能抑制LoVo细胞的增殖,其作用呈明显的时间和剂量依赖性。Hoechst33258染色显示细胞凋亡特征。23-羟基白桦酸25、50、100及200μmol·L-1作用LoVo细胞48h后,其凋亡率分别为11.32%±0.92%、19.23%±0.78%、24.51%±5.88%及42.22%±2.32%,显示一定的剂量依赖性关系。与空白组相比,23-羟基白桦酸可明显降低LoVo细胞线粒体膜电位(P<0.01)。结论23-羟基白桦酸可抑制LoVo细胞的增殖,其机制与降低线粒体膜电位继而诱导LoVo细胞凋亡有关。     

薯蓣苷元诱导人黑素瘤细胞A375-S2凋亡依赖半胱天冬酶和MAPK途径

目的　研究薯蓣苷元诱导人黑素瘤细胞A375 S2凋亡的机制。方法　MTT法测定细胞生长抑制率及半胱天冬酶和有丝分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)抑制剂对薯蓣苷元诱导细胞凋亡的影响。电镜观察细胞形态变化。流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布。用半胱天冬酶活力检测试剂盒测定半胱天冬酶活力。结果　薯蓣苷元抑制A375 S2细胞的生长呈时间 剂量依赖性。经薯蓣苷元处理后的A375 S2细胞表现出典型的凋亡特征 :细胞表面微绒毛消失、胞质空泡化、染色质浓集、边聚。流式细胞仪检测表明薯蓣苷元导致DNA片段化和细胞周期阻滞在G0 /G1期。半胱天冬酶家族抑制剂 (z VAD fmk )和p38MAPK抑制剂 (SB2 0 35 80 )可部分抑制薯蓣苷元诱导的A375 S2细胞凋亡。结论薯蓣苷元可诱导A375 S2细胞凋亡。其诱导凋亡作用与半胱天冬酶及MAPK的活化相关。     

大萼香茶菜甲素通过线粒体途径诱导HL-60白血病细胞凋亡

目的：观察大萼香茶菜甲素（macrocalyxinA,MA）体外诱导HL-60细胞凋亡,并探讨其作用机制。方法：不同浓度的MA与HL-60细胞进行培养,采用MTT比色法观察其对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin—V／PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析其促细胞凋亡效应;流式细胞术和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax、P53、Fas、线粒体膜蛋白（Ap02．7）、线粒体跨膜电位（AWm）与Bcl-2、Bax、P53、caspase-3 mRNA变化水平,研究其促凋亡机制。结果：MA呈现作用时间和剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖和活力;HL-60细胞经MA作用后,Wright—Giemsa染色和Hoechst荧光染色后细胞出现典型的凋亡小体,细胞阻滞于G0／G1期,DNA片段化,亚二倍体明显增高,Annexin—V／PI标记升高;MA诱导HL-60细胞凋亡过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白（Apo2．7）、caspase-3表达显著增加,Bax／Bcl-2比值升高,龇下降。结论：MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导细胞凋亡,其机制通过上调Bax基因和Bax／Bcl-2比值,使线粒体膜电位下降、膜通透性增高,最终使caspase-3激活而促进凋亡。     

鲎素激活FAS途径促使HL-60细胞凋亡的实验研究

目的 鲎素是来源鲎血细胞的一种抗菌肽,它能抑制HL-60细胞生长,诱导细胞凋亡.但是鲎素诱导细胞凋亡的确切机制尚未清晰.本研究探讨鲎素是否可以促进Fas/FasL的表达,诱导HL-60细胞凋亡,揭示鲎素诱导HL-60细胞凋亡的可能机制.方法 Hoechst 33258和PI双荧光染色观察细胞调亡,流式细胞仪检测细胞调亡.Western blotting检测easpase-3,caspase-8活性变化,Fas,FasL,FADD表达变化.结果 鲎素处理HL-60细胞后,细胞调亡,caspase-3,caspase-8被激活,Fas,FasL,FADD表述时间依赖性上调.结论 鲎素诱导HL-60细胞凋亡可能与死亡受体介导的途径相关.     

蛇葡萄素改变Bcl-2/Bax表达和激活caspase-3诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡

目的探讨蛇葡萄素在体外诱导人肝癌细胞株Bel-7402的凋亡作用及其可能机制。方法以不同浓度的蛇葡萄素作用于体外培养的人肝癌细胞株Bel-7402,应用MTT法检测培养24、48和72h的细胞生长情况;荧光染色观察细胞核的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳分析细胞DNA变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞caspase-3、Bcl-2和Bax的表达情况。结果蛇葡萄素对Bel-7402细胞的生长有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性。24、48、72h的IC50值分别是89.6±16.1、36.2±6.5和15.3±3.0mg·L-1。经荧光染色后可观察到典型的凋亡小体。细胞DNA电泳后呈现出凋亡细胞典型的DNAl adder。流式细胞术检测细胞凋亡率呈时间和浓度依赖性。caspase-3和Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,Bax蛋白表达量逐渐增加,呈明显的浓度依赖性。结论蛇葡萄素能诱导体外培养的人肝癌Bel-7402细胞凋亡,其作用具有时间和浓度依赖性。下调Bcl-2、上调Bax表达,活化caspase-3是蛇葡萄素诱导Bel-7402细胞凋亡的可能机制之一。     

Citrinin induces apoptosis in HL-60 cells via activation of the mitochondrial pathway

The mycotoxin citrinin (CTN), a frequent natural contaminants of certain food and feeds, is known to be cytotoxic and genotoxic to various mammalian cells. To investigate the death mode of cells exposed to CTN, human promyelocytic leukemia (HL-60) cells were chosen to identify the apoptotic process induced by CTN. Morphological evidence of apoptosis, including nuclei fragmentation and DNA laddering formation, was clearly observed 24h after exposure to CTN. Flow cytometry analysis revealed that apoptotic cells in the hypodiploid region dramatically increased in cultures treated with CTN at concentrations above 50muM. Results of Western blotting showed that CTN induced the formation of processed caspase-3, -6, -7, -9, but not caspase-8, in a dose-dependent manner; CTN also induced a time-dependent increase in caspase-3 catalytic activity. The apoptosis triggered by CTN in HL-60 was accompanied by the cytochrome c release from mitochondria to cytoplasm. The presence of antioxidants in cultures did not effectively suppress CTN-induced cytotoxicity and caspase-3 activity. These findings suggest that CTN induces apoptosis in HL-60 cells by stimulating cytochrome c release followed by activation of multiple caspases, but oxidative stress may not play a role in the apoptotic process.     

迷迭香酸抗过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡作用的研究

目的探讨迷迭香酸对过氧化氢(H2O2)诱导血管平滑肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞形态学变化;MTT法检测细胞活性;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Fas和FasL蛋白的表达。结果经500μmol·L-1H2O2处理24h后,细胞凋亡率为34.9%±2.55%,出现核固缩、核碎裂等典型的凋亡形态学改变,所以随后实验选择500μmol·L-1H2O2为诱导血管平滑肌细胞凋亡的最佳浓度。①500μmol·L-1的H2O2处理血管平滑肌细胞24h能引起细胞活性明显降低;细胞凋亡率明显增加,达35.7%±1.33%;细胞中Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax蛋白比值减少,Fas和FasL蛋白表达升高。②用迷迭香酸(10、20、40μmol·L-1)预处理细胞30min,可以增加细胞活性;降低细胞凋亡率,呈浓度依赖性;细胞中Bcl-2/Bax蛋白比值升高,Fas和FasL蛋白表达降低。结论迷迭香酸能拮抗H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡;其作用机制可能与升高细胞中Bcl-2/Bax蛋白比值,减少Fas、FasL蛋白表达有关。     

Patensin-induced apoptosis is accompanied by decreased bcl-2 expression and telomerase activity in HL-60 cells

The present study aimed to investigate the effect of telomerase activity in patensin-induced apoptosis and the regulation of B cell leukemia/lymphoma 2 (bcl-2) gene expression in human leukemia HL-60 cells. Apoptosis of HL-60 cells was induced by patensin (100 μmol L_-1) for 3, 6, 12 and 24 h. Apoptosis and bcl-2 were determined by flow cytometry analysis. A polymerase-chain-reaction-based telomeric repeat amplification protocol assay was used to detect the telomerase activity. Patensin induced growth arrest and apoptotic cell death in HL-60 cells. The telomerase activity was inhibited in a time-dependent manner during the patensin-induced apoptosis of HL-60 cells, and the expression of bcl-2 was progressively down-regulated by patensin. Inhibition of the telomerase activity of HL-60 cells was closely related to the patensin-induced apoptosis. The present results indicate that inhibition in telomerase and reduced bcl-2 gene expression may play a role in the patensin-induced apoptosis of HL-60 cells.     

Dimethylarsinic acid causes apoptosis in HL-60 cells via interaction with glutathione

 Inducibility of apoptosis in cultured human HL-60 cells by arsenic compounds, such as arsenite, arsenate, methylarsonic acid (MAA), and dimethylarisinic acid (DMAA), was investigated, together with the role of glutathione (GSH) in the induction. Among the arsenic compounds DMAA was the most potent in terms of the ability to cause the morphological changes (formation of nuclear fragmentation and apoptotic bodies) characteristic of apoptosis. Furthermore, fragmentation of internucleosomal DNA was also induced by DMAA. Depletion of cell GSH by L-buthionine-SR-sulfoximine, a selective inhibitor of γ-glutamylcysteine synthetase, enhanced the cytotoxicity of arsenite, arsenate, and MAA, while such depletion suppressed the cytotoxicity of DMAA. The depletion of GSH also suppressed the morphological changes and the fragmentation of internucleosomal DNA caused by DMAA, both of which are characteristic features of apoptosis. The results suggest that the death of cells caused by DMAA is due to apoptosis and that GSH is involved in the induction of apoptosis by this arsenic compound. Received: 17 January 1996/Accepted: 12 March 1996     

Induction of apoptosis by yomogin in human promyelocytic leukemic HL-60 cells

Yomogin is an active compound isolated from Artemisia princep, a traditional Oriental medicinal herb, which has been shown to inhibit tumor cell proliferation. In this study, we investigated the effects of yomogin on the cytotoxicity, induction of apoptosis, and putative pathways of its actions in human promyelocytic leukemia cells. Yomogin-treated HL-60 cells displayed several features of apoptosis, including DNA fragmentation, formation of DNA ladders in agarose gel electrophoresis, and externalization of annexin-V targeted phosphatidylserine residues. We observed that yomogin caused activation of caspase-8, caspase-9, and caspase-3. A general caspase inhibitor (z-VAD-fmk), caspase-8 inhibitor (z-IETD-fmk) and caspase-3 inhibitor (z-DEVD-fmk), almost completely suppressed the yomogin-induced DNA fragmentation. We further demonstrated that yomogin induced Bid cleavage, mitochondrial translocation of Bax from the cytosol, and cytochrome c release from mitochondria in a caspase-8-dependent manner. Taken together, our data indicate that yomogin is a potent inducer of apoptosis and facilitates its activity via caspase-8 activation, Bid cleavage, Bax translocation to mitochondria, and subsequent release of cytochrome c into the cytoplasm, providing a potential mechanism for the anticancer activity of yomogin.     

Nanoparticle realgar powders induce apoptosis in u937 cells through caspase mapk and mitochondrial pathways

Nanoparticle realgar powders (NRP) inhibited U937 cell growth in a time and dose-dependent manner. U937 cells treated with NRP showed typical characteristics of apoptosis including the morphological changes and DNA fragmentation. Caspase family inhibitor (z-VAD-fmk), caspase-8, -9 inhibitor (z-IETD-fmk, Ac-LEHD-CHO, respectively) and caspase-3 inhibitor (z-DEVD-fmk) partially prevented NRP -induced apoptosis. Moreover, the classical substrates of caspase-3, poly-ADP ribose polymerase (PARP) was degraded after U937 cells treatment with NRP. In addition, NRP increased the ratio of Bax/Bcl-2 protein expression. Although p38 inhibitor (SB203580) and ERK inhibitor (PD98059) failed to block cell death, JNK inhibitor (SP600125) had marked inhibitory effects on NRP -induced apoptosis. Furthermore, the phosphorylation of JNK was up-regulated, suggesting that JNK was responsible for NRP -induced apoptosis in U937 cells. These results suggested that the caspase, mitochondria and MAPK signal pathways were involved in NRP-induced U937 apoptosis.