弓形虫病的病理学研究

弓形虫病的病理形态学，不仅由于弓形虫直接破坏大量的宿主细胞所致，还由于弓形虫作为一种抗原，使机体产生免疫应答而引起的过敏反应^[1]。至于病变程度的轻重，可能与弓形虫的数量、虫株的毒力大小以及宿主免疫状况等有关。但弓形虫的致病机理与致病规律仍是研究的方向，现就有关这方面的研究概况作一综述，供同道参考。     

弓形虫病研究概况

弓形虫病是一种严重危害人畜健康和畜牧业发展的人畜共患寄生虫病。目前对该病的流行病学、实验室检测技术及疫苗研究开发等方面的研究已经取得较大进展,特别是分子诊断技术的开发应用,使弓形虫病难以准确诊断和及时治疗的现状得到明显改善。现对弓形虫病的研究概况作一系统综述。     

抗弓形虫感染ROP2核酸疫苗的研究

目的研究弓形虫核酸疫苗，以用于弓形虫病的防治。方法根据ROP2基因序列，设计合成能表达ROP2完整蛋白基因的扩增引物，扩增ROP2靶基因并克隆于PUCm—T载体，然后再亚克隆于真核表达载体pe—DNA3质粒中，制备弓形虫pe—DNA3—ROP2核酸疫苗；应用裸pc—DNA3—ROP2免疫小鼠，通过免疫学指标的检测，评价小鼠的免疫应答反应，最后应用弓形虫RH株攻击实验，评价出该疫苗的有效保护率、安全性和在人类及畜类的应用价值。结果以ROP2基因为模板，PCR扩增出1.7kb DNA条带，与预想结果一致；将扩增DNA回收并成功的克隆了ROP2（PUCm—T—ROP2），然后亚克隆并构建了pe—DNA—ROP2重组体，通过酶切、PCR扩增和基因测序证明亚克隆的重组子正确，ROP2扩增基因包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列；在应用疫苗免疫接种小鼠结果显示。疫苗接种能使小鼠产生强烈的细胞、体液免疫反应；攻击实验结果显示，实验组小鼠的存活时间明显延长。并且开始死亡时间明显延迟（P〈0.001），实验组9只小鼠中有1只长期存活；在实验的整个过程中，没有发现小鼠对免疫接种的毒性和异常反应。结论该疫苗免疫原作用强，具有很好的开发应用价值，目前可在动物群体中试验应用。     

弓形虫SAG1 ROP1基因及其复合抗原基因的核酸免疫研究

1　前　言刚地弓形虫是一种机会性致病原虫 ,寄生于宿主的细胞内 ,在机体免疫力下降的情况下 ,弓形虫大量增殖 ,可导致组织器官的损伤 ,引起弓形虫病。该病呈世界性分布 ,是严重危害人畜健康的寄生虫病之一。孕妇感染弓形虫后可导致早产、流产、胎儿发育畸形。此外 ,弓形虫病也是免疫功能严重低下患者 (如ＡＩＤＳ病人等 )的主要死亡原因。弓形虫病疫苗的研制一直是国内外专家关注的热点。已有研究表明 :采用死的弓形虫疫苗可以诱导体液免疫及Ｔｈ细胞的免疫应答 ,免疫原性低 ;减毒的弓形虫活疫苗存在虫株毒力恢复的潜在危险 ;基因工程疫苗…     

人体弓形虫病

弓形虫病是全球广泛分布、对人类造成严重危害的人兽共患病。近年来,由于与庞物接触增多,我国弓形虫病发病率有增高趋势。鉴于本病临床表现缺乏特异性,一旦确诊,治疗效果显著。本文从发病机制、病理改变、临床表现、实验室诊断、治疗等几个方面对本病进行了简要的评述,以期引起广大临床医务人员的重视。     

上海市人体弓形虫病研究概况

弓形虫病是一种人兽共患的寄生虫病。我国 2 0世纪 5 0年代在福建从猫、兔、猪、鼠等动物分离出其病原 ,6 0年代在江西发现了首例人体病例。 70年代后期 ,在上海市发现了猪弓形虫病的大流行[1 ] ,这不仅引起了兽医界的广泛关注 ,而且也引起了人医部门的高度重视 ,并纷纷参与人体弓形虫病的研究 ,进而把弓形虫病的研究和防治课题作为重点 ,掀起了上海市人体弓形虫病研究的热潮。近 2 0年来 ,上海市的人体弓形虫病研究取得了很大的进展 ,本文试就其病原学、流行病学及病例和治疗等方面的进展概述如下。1　病原学1.1　弓形虫病的发现与虫株分离…     

弓形虫复合基因疫苗研究进展

弓形虫疫苗包括全虫疫苗、虫体特异组分疫苗、DNA 疫苗、基因工程疫苗,现阶段研究较多的是后两种,由原来的单一疫苗向复合疫苗发展,复合疫苗有多种联合方式：表面抗原联合、表面抗原与分泌抗原联合、其他类型抗原联合,疫苗免疫效力低下的缺点可采用有效免疫方式或使用佐剂提高效果。     

乙型肝炎核酸疫苗研究进展

全世界大约有3．5亿的慢性HBV携带，慢性乙型肝炎的防治研究一直是肝病研究的重大课题。干扰素能使部分患有持续性反应，拉米呋啶能迅速抑制病毒复制，但是停药易反跳，用药后导致变异株的产生，两种药物治疗均使病毒进入低复制状态。因此，为了治愈乙型肝炎，需要探索其他的治疗途径。近年来，由于基因重组技术的发展与应用，使得利用核酸疫苗来治疗慢性HBV感染成为研究的热点。本对目前乙肝核酸疫苗研究情况作一综述。     

弓形虫病基因诊断的动物实验研究

目的：建立敏感、特异、稳定的PCR法，用于弓形虫病诊断。方法：选择与合成引物并确立最佳扩增条件，用PCR法检测实验感染鼠血液中弓形虫DNA，并与ELISA法检测循环抗原(CAg)作比较。结果：该PCR检测弓形虫DNA法特异性强，对其他7种寄生虫DNA均不扩增；敏感性高，可检测到0．2pg DNA；检测急性感染弓形虫小鼠血液最早于感染后第2天出现用性，与ELISA法查CAg比较。PCK检测弓形虫DNA法阳性出现时间早、检出率高。结论：该PCR法可应用于弓形虫感染的早期诊断。     

核酸疫苗制备卵黄免疫球蛋白研究进展

卵黄免疫球蛋白（IgY）由于其独特的分子结构和稳定性能，使得IgY的制备成为抗体领域的研究热点。核酸疫苗作为一种新型疫苗，在生产成本、免疫剂量和免疫保护力等方面比大多数传统疫苗更具有优势。核酸疫苗制备IgY结合了两者的优点，比常规免疫方法更具有优势，产生的IgY适用范围也更广。本文综述了一种经济、快速的IgY制备方法：核酸疫苗制备IgY。     

结核杆菌多价核酸疫苗在小鼠体内的免疫保护效应研究

目的:探讨结核杆菌Ag85A/ESAT-6/CFP-10多价核酸疫苗的动物免疫保护效应。方法:将24只BALB/c小鼠随机分成4组,多价核酸疫苗免疫组每只小鼠股四头肌肌肉注射重组质粒VR1020-85A、VR1020-E6和VR1020-P10各25μg(溶于100μL灭菌生理盐水中)进行免疫接种,3周后加强免疫1次。其余3组均为对照组,分别是生理盐水注射组、空白质粒VR1020免疫组和卡介苗(mycobacterium bovis bacillus calmette-guérin,BCG)免疫组。每只小鼠于初次免疫6周后经腹腔注射结核杆菌H37Rv(菌落数为1×105)进行攻击,攻击实验28 d后取小鼠肺组织作结核杆菌培养和病理形态学检测。结果:多价核酸疫苗免疫组小鼠肺组织结核杆菌培养带菌量明显低于生理盐水注射组和空白质粒免疫组(P<0.05),但明显高于BCG免疫组(P<0.05)。多价核酸疫苗免疫组小鼠肺组织病变明显轻于生理盐水注射组和空白质粒免疫组,但明显重于BCG免疫组。结论:结核杆菌Ag85A/ESAT-6/CFP-10多价核酸疫苗免疫小鼠后能产生一定程度的抗结核免疫保护效应,但其免疫保护效应不及BCG。     

我国日本血吸虫核酸疫苗的研究进展

血吸虫病 (schistosomiasis)是呈世界性分布的严重危害人类及家畜的寄生虫病,发病率仅次于疟疾(malaria).全世界至少有2亿血吸虫病感染者.该疾病流行区仍有6亿人受其威胁[1],我国是受日本血吸虫病危害最为严重的国家之一,流行株为日本血吸虫中国大陆株(Chinese Mainland Strain),全国血吸虫病流行县(市、区)454个;累计达到血吸虫病传播消灭标准的县(市、区) 265个,2009年度, 我国实有患者36.6万人[2].[作者简介]蒋斌(1970-),男,硕士研究生,副教授.主要研究方向:分子免疫学.     

幽门螺杆菌UreB核酸疫苗的构建

目的:构建含幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)基因的核酸疫苗.方法:抽提Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA,应用PCR技术从基因组DNA扩增UreB基因,克隆入PUCmT载体,检测UreB基因序列.经过一系列酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES,转入感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,通过PCR和酶切反应进行鉴定.通过脂质体法将构建好的重组载体pIRES-UreB转染COS-7细胞,Western印迹分析检测pIRES-UreB表达UreB蛋白的免疫原性.结果:扩增出长约1 700 bp的UreB基因,与基因库Hp UreB序列一致,PCR和酶切鉴定结果证实成功构建了含UreB基因的Hp核酸疫苗pIRES-UreB,并且Western 印迹分析检测到特异性的蛋白条带.结论:构建了具有免疫反应性UreB基因的Hp核酸疫苗,为进一步探索其免疫作用奠定了基础.     

核酸疫苗Sj31BIN联合IL-12免疫抗日本血吸虫攻击感染的实验研究

目的 :在证明日本血吸虫重组蛋白酶B核酸疫苗Sj31BIN具有抗生殖免疫作用的基础上 ,联合使用IL 12 ,观察IL 12是否具有佐剂效果。方法 :分别用Sj31BIN +IL 12和IL 12免疫Balb/C小鼠。攻击感染后 6周计数成虫负荷和组织内虫卵数及肝脏表面虫卵结节数。结果 :Sj31BIN +IL 12免疫小鼠可降低成虫发育率。肝组织减卵率为5 9 74% ;肠组织减卵率为 5 9 6 0 % ;肝脏表面虫卵结节减少率为 71 30 % ;单独使用IL 12有一定的免疫保护作用。结论 :Sj31BIN +IL 12能诱导小鼠产生较强的抗生殖免疫作用。     

核酸疫苗Sj31BIN联合IL-12免疫抗日本血吸虫攻击感染的实验研究

目的：在证明日本血吸虫重组蛋白酶B核酸疫苗Sj31BIN具有抗生殖免疫作用的基础上,联合使用IL-12,观察IL-12是否具有佐剂效果。方法：分别用Sj31BIN IL-12和IL-12免疫Balb／C小鼠。攻击感染后6周计数成虫负荷和组织内虫卵数及肝脏表面虫卵结节数。结果：Sj31BIN IL-12免疫小鼠可降低成虫发育率。肝组织减卵率为59．74％;肠组织减卵率为59．60％;肝脏表面虫卵结节减少率为71．30％;单独使用IL-12有一定的免疫保护作用。结果：Sj31BIN IL-12能诱导小鼠产生较强的抗生殖免疫作用。     

我国综述文献研究现状

综述文献在科学研究领域中越来越受到重视，本文就我国情报界同仁对综述文献的外部特征、内部特征及其应用和作用规律的研究进行了回顾。     

构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因表达载体的家族特异性抗淋巴瘤疫苗

目的　构建免疫球蛋白重链可变区 (IgHV)基因片段与细胞因子粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)或白细胞介素 2 (IL 2 )的融合基因表达载体作为家族特异性抗淋巴瘤核酸疫苗 ,接种动物了解该疫苗抗淋巴瘤免疫功能。方法　从脐带血免疫球蛋白基因文库获得 6个片段长度差异较大的IgHV3基因片段 ,测序后利用生物信息资源分析预测其重链可变区的T细胞表位 ,分析IgHV1 6个片段。选择包含了绝大多数T细胞表位的IgHV1、IgHV3基因 ,将框架区 (FR)为主的IgHV(FR)基因片段及IgHV(FR)与GM CSF或IL 2基因连接后形成的融合基因克隆到真核表达载体中。表达载体通过脂质体转染COS细胞 ,ELISA法确定GM CSF或IL 2的表达情况。将一些表达载体作为核酸疫苗免疫小鼠 ,通过间接免疫荧光法和细胞因子分泌法检测小鼠抗同一家族淋巴瘤和正常淋巴细胞的免疫反应。结果　计算机评分系统预测显示在每个IgHV序列中约存在 30个左右分别受HLA位点限制的T细胞表位 ,90 %以上的T细胞表位位于框架区 ,积分排位于前 1 0 %的T细胞表位都位于框架区。构建了去除CDR3区后以框架区 (FR)为主的IgHV1 (FR)和IgHV3(FR)真核表达载体。将GM CSF或IL 2基因连接到 2个IgHV基因的 3′端。IgHV (FR ) GM CSF/pcDNA3.0中GM CSF的表达量高于对照组 2 0     

自拟抗弓形虫汤对小鼠急性弓形虫感染的治疗机制研究

目的 观察自拟抗弓形虫汤对急性弓形虫感染小鼠的治疗作用及其作用机理。方法 将昆明雌性小鼠随机分三组（A中药抗弓形虫汤组、B复方SMZ组、C模型组），将弓形虫RH株速殖子感染小鼠，2h后灌胃给药，A组给予中药配伍0．5ml（18mg／m1），B组给予0．5ml复方SMZ悬浊液（12mg／m1），治疗组疗程14d，观察至30d，记录小鼠存亡情况；肝组织病理切片采用HE染色；在感染后第3d、6d和第20d用羟胺法分别检测各组小鼠的血清、心、肝和肺组织超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果 A（16．55d）、B（23．20d）组小鼠存活时间均较C（7．85d）组差异有极显著性（P〈0．01），其中，A组与B组比较，差异有显著性（P〈0．05）；病理检查A组及B组有不同程度肝细胞肿大、炎症细胞浸润等病变，但与C组相比损伤程度明显减轻，差异有极显著性意义（P〈0．01），A组与B组比较，差异有显著性（P〈0．05）；A、B组小鼠各部位SOD活性较C组差异有极显著性（P〈0．01），但A组与B组比较，差异无显著性（P〉0．05）。结论 自拟抗弓形虫汤有显著的抗弓形虫作用，它从推迟小鼠死亡时间，保护肝细胞，增强抗氧化损伤等方面发挥重要作用。