高效液相色谱-质谱联用法研究巫山淫羊藿黄酮类成分

目的:采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MSn)研究巫山淫羊藿中的黄酮类成分。方法:70%乙醇提取,大孔树脂柱纯化得到总黄酮;运用HPLC-MSn联用技术得到各化合物的总离子流图和多级质谱图。结果:从巫山淫羊藿药效部位中鉴定出12个化合物,其中有3对化合物互为同分异构体。结论:HPLC-MSn法可用于巫山淫羊藿中黄酮类成分的结构鉴定,为建立快速、准确的质量评价方法和分析炮制前后成分变化提供了参考。     

多基原淫羊藿不同部位质量评价研究

目的对不同基原淫羊藿药材不同部位所含的黄酮类成分进行比较,为淫羊藿质量评价及药用部位的合理选择提供依据。方法采集13批淫羊藿植株地上部分,分为叶片、叶柄、茎3个部位,对其HPLC指纹图谱和朝藿定A、B、C及淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ5种黄酮类成分进行分析,进而采用方差分析和中药色谱指纹图谱相似度评价软件并结合聚类分析(HCA)对淫羊藿叶片、叶柄和茎的含量差异进行综合评价。结果指纹图谱结果表明淫羊藿叶片中化学成分较茎及叶柄中丰富,叶柄与茎化学成分基本一致;含量测定结果表明淫羊藿叶片中5种成分含量均显著高于叶柄及茎,甚至达到数10倍。聚类分析结果也表明叶片与叶柄及茎可明显区分开来。结论通过分析淫羊藿不同部位化学成分差异,明确了淫羊藿叶片、叶柄及茎的质量差异,为淫羊藿质量控制及药用部位的确定提供了实验依据。     

淫羊藿属主要资源种类的HPLC指纹图谱特征和种类鉴定

目的：淫羊藿的物种鉴定一直是中药材研究和应用中比较困难的问题，本实验旨在尝试建立一种淫羊藿药材物种鉴定方法。方法：对淫羊藿Epimedium brevicornu、箭叶淫羊藿E. sagittatum、柔毛淫羊藿E. pubescens、朝鲜淫羊藿E. koreanum、巫山淫羊藿E. wushanense、粗毛淫羊藿E. acuminatum、天平山淫羊藿E. myrianthum和黔岭淫羊藿E. leptorrhizum等8个淫羊藿药材主要来源物种,以及淫羊藿属的其他24个物种中黄酮类成分的HPLC指纹图谱进行了研究，提取可用于种类鉴定的特征。结果与结论：朝鲜淫羊藿具有的HPLC指纹特征，可以区别于其他物种，心叶淫羊藿、粗毛淫羊藿、天平山淫羊藿的大部分样品也具有可资鉴别的指纹特征，而柔毛淫羊藿和黔岭淫羊藿种内图谱模式相对稳定，但是难以与其他物种区别，箭叶淫羊藿和巫山淫羊藿则种内图谱变化十分复杂。本研究也展示出淫羊藿药材质量极其不稳定。     

巫山淫羊藿净制研究

目的:研究巫山淫羊藿净制的科学性。方法:紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量,高效液相色谱法测定黄酮类单体成分——朝藿定C、淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的含量。结果:叶片、叶柄、叶中总黄酮含量分别为9.185%,2.143%,3.364%;朝藿定C含量分别为5.346%,0.653%,1.577%;淫羊藿苷含量分别为1.430%,0.047%,0.321%;淫羊藿次苷Ⅱ含量分别为0.328%,0.077%,0.078%。结论:叶片和叶柄中主要黄酮类成分含量差异明显;叶片中各成分的含量是叶柄的4.3～30.4倍,巫山淫羊藿摘取叶片入药时应摘除叶柄是科学的。     

指纹图谱评价和多元统计分析不同产地朝鲜淫羊藿药材质量

目的 采用高效液相色谱法建立朝鲜淫羊藿药材指纹图谱,并通过化学模式识别和多元统计分析,探析表征不同产地朝鲜淫羊藿质量差异的标志物。方法 采用高效液相色谱法建立9个产地朝鲜淫羊藿药材指纹图谱,通过对照品比对和高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱技术对共有峰进行指认,并利用相似度评价结合聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘法-判别分析等统计分析方法探析不同产地朝鲜淫羊藿药材的差异性成分。结果 9个产地朝鲜淫羊藿指纹图谱共标定11个共有峰,与对照指纹图谱的相似度均在0.977以上。聚类分析将9个产地朝鲜淫羊藿样品分为3类,主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析结果与聚类分析一致,并筛选得到6个产地差异标志物,分别为色谱峰1(金丝桃苷)、色谱峰9(朝鲜淫羊藿苷B)、色谱峰6(淫羊藿苷)、色谱峰4(朝藿定B)、色谱峰7[Anhydroicaritin-3-O-rhamnoside(1-2)-furanacid-7-O-glucoside]和色谱峰11。结论 朝鲜淫羊藿在不同产地之间存在一定的质量差异,建立的朝鲜淫羊藿指纹图谱可为药材质量评价提供依据。     

基于淫羊藿苷测定及HPLC指纹图谱分析的淫羊藿药材质量差异评价

目的建立客观评价淫羊藿药材质量差异的方法。方法采用高效液相色谱法,Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(23∶77),体积流量1 mL/min,检测波长270 nm,进样量10μL,建立不同产地、不同品种淫羊藿药材不同生长部位(茎与叶)的HPLC指纹图谱,并测定其不同生长部位中淫羊藿苷的量。结果 淫羊藿药材不同生长部位(茎与叶)的HPLC指纹图谱和淫羊藿苷的量存在差异,从其叶和茎的特征指纹图谱中分别提取出19和10个共有峰,且叶中淫羊藿苷的量是茎中的4~8倍;叶与叶、茎与茎之间的化学特征存在差异,叶与茎化学特征差异最显著。结论建立的淫羊藿苷测定方法和指纹图谱的精密度、稳定性、重现性好,可表征淫羊藿药材质量的差异性,为淫羊藿药材的质量研究和建立淫羊藿药材的商品规格提供参考依据。     

巫山淫羊藿在不同生长季节中两种黄酮类成分的反相高效液相色谱分析

目的对《中国药典》淫羊藿药材的收载品种巫山淫羊藿中2种黄酮类成分柔藿苷(rouhuoside)和淫羊藿苷(icari-in)进行测定,比较这两种成分在不同月份的含量变化。方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,以beckm ancou lter-1,检测波长为270 nm。结果柔藿苷在TM-C18柱(带预柱)为色谱柱,流动相为乙腈-水(25∶75),流速1.0 m l.m in     

不同产地巫山淫羊藿指纹图谱的主成分、因子和聚类分析

目的：采用HPLC建立巫山淫羊藿的指纹图谱,结合主成分、因子和聚类分析对不同产地巫山淫羊藿综合品质进行研究,为其质量评价提供理论基础。方法：采用Agilent InfinityLab Poroshe1l 120 SB-C₁₈色谱柱（3.0 mm×100 mm,2.7 μm）,流动相乙腈（A）-水（B）梯度洗脱（0~5 min,25%~26% A;5~6 min,26%~34% A;6~11 min,34%~38.5% A;11~17 min,38.5%~100% A;17~20 min,100% A）,流速0.8 mL·min^-1,检测波长270 nm,柱温30℃。结果：聚类分析较好地对不同产地的巫山淫羊藿进行分类,贵州产巫山淫羊藿和重庆巫山淫羊藿在聚类分析中明显分为二类,相距较远,说明由于环境气候的影响,不同产地的淫羊藿在品质上存在差异。主成分、因子分析结果,重庆巫山淫羊藿质量总体优于贵州产巫山淫羊藿,其中CQWS-02（重庆市巫山县官阳镇鸦鹊村）,CQWS-10（重庆市巫山县官阳镇河湾）两个产地的样品在优质品种筛选时可重点考虑。另外,1号（朝藿定A）,2号（朝藿定B）,4号（淫羊藿苷）,5号（未知成分）共有峰可作为巫山淫羊藿质量评价指标成分。结论：通过主成分、因子和聚类分析,可实现快速分析,发挥各自优势,互相验证和补充,多方面综合评判不同产地巫山淫羊藿药材的质量。     

HPLC指纹图谱化学模式识别法评价淫羊藿药材质量一致性

目的:建立淫羊藿药材HPLC指纹图谱,采用相似度计算和化学模式识别的方法,评价淫羊藿药材质量的一致性。方法:采用高效液相色谱法。以Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),乙腈-0.4%甲酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0mL/min,柱温为30℃,进样量为20μL,检测波长为270nm,对淫羊藿指纹图谱进行相似度计算和化学模式识别分析。结果:淫羊藿药材指纹图谱测定方法精密度、稳定性、重复性良好,以13批淫羊藿药材建立指纹图谱共有模式,淫羊藿药材相似度均达到0.91,模式识别分析结果与其一致;标定其中18个共有特征峰,经对照,指认出淫藿定A、淫藿定B、淫藿定C、淫羊藿苷4种主要成分。结论:该方法稳定、易操作,可为科学评价和控制淫羊藿药材的质量提供参考。指纹图谱结合化学模式识别分析技术可以有效应用于淫羊藿药材质量的一致性评价,并为淫羊藿药材商品规格划分提供参考依据。     

叶类药材淫羊藿精准煮散饮片的质量研究

目的：采用化学指纹图谱法结合DNA分子鉴定技术,考察淫羊藿精准煮散饮片与市售原饮片质量差异。方法：制备不同规格淫羊藿煮散饮片,对比市售饮片及煮散饮片的干膏收率;应用ITS2及psbA-trnH条形码序列对淫羊藿饮片进行分子鉴定;采用HPLC-DAD法进行3批次饮片混合粉碎前后质量均一性、指纹图谱及相似度评价。结果：淫羊藿煮散饮片出膏率略高于市售饮片;3批市售饮片指标成分淫羊藿苷提取率有明显的差异性,RSD为15.56%,煮散饮片差异较小RSD为6.82%。指纹图谱相似度评价结果显示,淫羊藿精准煮散饮片的指纹图谱相似度提高,标定共有峰10个,峰面积均有提高。ITS2及psbA-trnH序列对淫羊藿煮散饮片可实现准确鉴定。结论：淫羊藿精准煮散饮片与市售饮片基本属性相一致,但煮散饮片的浸膏提取率、指标成分的批间均一性有不同程度提升。研究结果显示发展精准煮散饮片有良好的应用前景。     

大孔树脂-梯度高速逆流色谱分离巫山淫羊藿中双藿苷A和朝藿定C

目的 研究大孔树脂结合梯度高速逆流色谱法从巫山淫羊藿粗提物中制备双藿苷A和朝藿定C的分离纯化方法.方法 采用大孔树脂法预处理得到巫山淫羊藿粗提物,以二氯乙烷-甲醇-水(4∶4.5∶2,V/V)体系的上相做固定相,下相做流动相,用梯度高速逆流色谱法分离纯化其主要成分双藿苷A和朝藿定C,检测波长为270 nm.结果 从1.5g巫山淫羊藿提取物中分离得到双藿苷A (458 mg)和朝藿定C(321mg),经HPLC法分析,其纯度分别为95.2％和93.8％.结论 该法简单有效,可提高淫羊藿黄酮的分离效率.     

巫山淫羊藿叶中挥发油成分的气相色谱-质谱分析

目的研究巫山淫羊藿叶中挥发油的化学成分。方法水蒸气蒸馏法提取巫山淫羊藿中的挥发油,采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析,鉴定挥发油的化学成分。结果共鉴定出34个化合物,占挥发油总成分的90.36%。结论巫山淫羊藿叶中挥发油的化学成分主要为羧酸类(33.36%)、酮类(21.79%)、烷类(19.03%)、醇类(12.92%)、炔类(1.2%)等。     

巫山淫羊藿不同炮制品中脂肪酸成分的气相色谱-质谱联用分析

目的比较巫山淫羊藿不同炮制品及辅料羊脂油中的脂肪酸成分组成和相对含量变化。方法采用索氏提取法提取脂肪酸成分,用KOH-MeOH溶液甲酯化后,用气相色谱-质谱联用技术分析脂肪酸成分的组成,面积归一化法计算成分相对含量。结果巫山淫羊藿生品、清炒品、油拌品、油炙品和羊脂油中分别检测出16、14、17、19、18种化合物,油炙品与生品比较,含量升高的组分有6个,占油炙品脂肪酸成分总量的53.10%;降低的有4个组分,占总量的34.36%。结论巫山淫羊藿不同炮制品中脂肪酸成分的组成和相对含量有较大差异,成分变化与加入羊脂油和加热均有关。     

巫山淫羊藿悬浮培养细胞的生长特性研究

目的考察巫山淫羊藿悬浮培养细胞的生长特性,为巫山淫羊藿资源利用提供参考。方法选用悬浮培养所获得的均匀悬浮培养细胞为研究对象,在光照条件下进行悬浮培养,每隔3 d取样,测定相关的生理生化指标。结果巫山淫羊藿悬浮细胞的生长曲线呈"S"型,培养基中蔗糖、磷酸盐、硝酸盐、铵盐量均呈急剧下降趋势,最后变化趋于平缓,细胞合成黄酮最佳光照时间为每天12 h,黄酮合成量为27.854 82 mg/L。结论巫山淫羊藿细胞生长特性的研究为其大规模悬浮培养生产天然活性成分奠定了基础。     

高效液相色谱法测定贵州产淫羊藿药材不同药用部位中淫羊藿苷的含量

目的：通过测定贵州产淫羊藿药材不同药用部位中淫羊藿苷的含量,为合理开发利用贵州淫羊藿资源提供理论依据。方法：对不同种类、产地、药用部位的淫羊藿药材样品,采用HPLC法分别测定其淫羊藿苷含量。结果：16种贵州产淫羊藿药材因种类、产地、药用部位不同,其淫羊藿苷含量有较大差异。结论：贵州产部分淫羊藿的质量符合或超过中国药典（2005版）标准,为了淫羊藿资源的可持续利用,药材生产应以采收地上部分质量为好。     

实时细胞分析结合指纹图谱技术比较不同部位雷公藤生物活性

目的基于实时细胞分析技术结合HPLC法,比较不同部位、不同产地雷公藤的生物活性。方法建立x CELLigence实时细胞分析系统实时动态检测细胞活性的方法:接种密度为2×105/m L,给药时间为24 h左右,检测雷公藤对RBL-2H3细胞的活性;通过HPLC法建立不同部位雷公藤的指纹图谱并分析其共有峰。结果浙江产雷公藤同一部位活性相似;根皮和叶具有类似生物学活性,根和茎具有类似的活性,根皮、嫩芽对RBL-2H3细胞的生物活性明显高于根、茎部位,尤以根皮部活性最强;指纹图谱显示不同部位成分相似但量差异较大;氯仿提取液对RBL-2H3细胞的抑制率明显高于水提液。结论在细胞生物学层面上雷公藤根皮及地上部分有研究与药用价值,可对其深入开发和利用。     

不同规格怀牛膝不同极性部位HPLC指纹图谱

目的研究并比较不同规格怀牛膝不同极性部位的HPLC指纹图谱,探索其内部质量差异,为该药材的规格标准完善及临床用药提供参考。方法将怀牛膝用体积分数75%乙醇水浴回流提取,得体积分数75%乙醇回流提取物,用40 mL水溶解后,依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,得到各萃取相及萃取后的水相,浓缩至浸膏,采集各部位HPLC指纹图谱;运用相似度、综合聚类法进行数据分析,同时对其不同部位的指纹图谱进行比对分析。结果石油醚、氯仿部位均标定了11个共有峰,乙酸乙酯部位标定了10个共有峰,正丁醇部位标定了19个共有峰,水部位标定8个共有峰;氯仿部位指纹图谱相似度差异较大,其他部位指纹图谱相似度差异较小,均在0.9以上;石油醚部位指纹图谱差异主要体现在峰高,乙酸乙酯部位、氯仿部位、水部位的化学成分种类及峰高均存在差异;综合聚类分析能将不同规格怀牛膝区分开。结论不同规格怀牛膝内部质量存在差异;实验中所建立的HPLC指纹图谱可以全面反映不同规格怀牛膝的化学成分分布,为不同规格怀牛膝的整体质量评价提供参考。     

缩泉丸不同提取部位缩尿作用的谱效关系

目的:益智仁盐炙后组成缩泉丸,建立缩泉丸不同提取部位的指纹图谱,阐明各共有峰所代表的化学成分对缩尿药效的贡献大小,揭示其药效物质基础。方法:通过观察不同提取部位对单纯水负荷模型小鼠尿量系数的影响研究缩泉丸的缩尿药效,流动相乙腈-水梯度洗脱,检测波长230 nm,建立缩泉丸不同提取部位的HPLC指纹图谱,采用灰色关联分析法建立缩泉丸的谱效关系。结果:不同成分(共有峰编号)对缩泉丸缩尿作用贡献大小排序为8号9号7号11号17号5号19号29号18号10号6号12号23号。结论:建立的HPLC指纹图谱方法简便、重复性良好,可作为缩泉丸中益智仁盐炙后物质基础改变及药效改变的依据。初步证明缩泉丸的缩尿药效物质是一些极性较小的成分,且主要集中在石油醚部位,缩尿作用是这些成分协同作用的结果。