蚯蚓纤溶酶部分质量标准的研究

采用亲和层析、凝胶层析对蚯蚓粗提液进行分离、纯化,得到蚯蚓纤溶酶纯化样品,并对其活性、含量、纯度等检测方法进行了试验研究,确定HPLC、SDS-PAGE电泳、280nm紫外吸收、琼脂糖-纤维蛋白平板法分别为蚯蚓纤溶酶的纯度、相对分子量、含量及活性的检测方法.同时又对纯化的蚯蚓纤溶酶进行了N-末端的测序,获得了重要的蚯蚓纤溶酶分子生物学的研究资料.     

蚯蚓纤溶酶部分质量标准的研究

采用亲和层析、凝胶层析对蚯蚓粗提液进行分离、纯化，得到蚯蚓纤溶酶纯化样品，并对其活性、含量、纯度等检测方法进行了试验研究，确定HPLC、SDS—PAGE电泳、280nm紫外吸收、琼脂糖-纤维蛋白平板法分别为蚯蚓纤溶酶的纯度、相对分子量、含量及活性的检测方法。同时又对纯化的蚯蚓纤溶酶进行了N-末端的测序，获得了重要的蚯蚓纤溶酶分子生物学的研究资料。     

富硒姬松茸提取物硒蛋白多糖对荷瘤小鼠的影响

目的:提取及分析富硒姬松茸硒蛋白多糖活性成分,初步探讨富硒姬松茸硒蛋白多糖的抗肿瘤作用。方法:分别应用Lowry-酚试剂法、用苯酚-硫酸法和2,3-二氨基萘荧光分光比色法测定蛋白质、多糖及硒含量。建立荷瘤小鼠模型,观察富硒姬松茸硒蛋白多糖的体内抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果:富硒姬松茸硒蛋白多糖能明显抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长,并显著提高荷瘤小鼠NK细胞活性、淋巴细胞转化率。其活性成分蛋白质、多糖及硒含量分别为16.32%、81.2%、7.01 mg/g。结论:富硒姬松茸提取物硒蛋白多糖具有良好的抗肿瘤生长作用。     

蚯蚓纤溶酶研究概述

对具有纤溶活性的物质研究已有多年的发展,但是血栓性疾病仍然是致人死亡或身体机能障碍的主要原因之一。从具有特殊生理功能的生物体中获取活性物质近来受到广泛关注,在蚯蚓消化腺的分泌物中纯化得到一组同工酶,表现出良好的溶栓效果,并被命名为蚯蚓纤溶酶（earthworm fibrinolytic enzyme,EFE）。本文在多层次上对蚯蚓纤溶酶作一综述,内容包括：蚯蚓纤溶酶的纯化、克隆表达,并详细介绍该酶结构与功能之间的关系以及临床应用等。     

蚯蚓纤溶酶抗血栓作用实验研究

我们应用血液流变学多项指标对蚯蚓纤溶酶的抗血栓作用进行了观察。现将结果报告如下。 实验研究 一、材料 蚯蚓纤溶酶为冻干粉剂,活性为65.175～116.482mm~2/mg,由甘肃省农垦科技实业开发公司纤溶酶研制协作组提供。     

蚯蚓生物工程技术研究进展

从蚯蚓中已经提取出的活性成分包括：纤溶酶、纤溶酶原激活剂、钙调素和钙调素结合蛋白、胆碱酯酶、过氧化氢酶、促髓系细胞增殖组分、抗微生物蛋白、收缩血管蛋白、溶血蛋白、免疫球蛋白梓粘连物和抗肿瘤瘤成分等。综述近几年来国内外对上述成分的研究进展。     

D-二聚体在高危孕妇监测中的意义

血浆D-二聚体（D—dimer,D—D）是纤维蛋白单体经活化因子X交联后在纤溶酶作用下产生的特异性降解产物,其含量增高可反映继发性纤溶活性增强,可作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物之一。D-二聚体检测对血栓性疾病的诊断及预后监测具有重要意义。孕妇体内绝大多数的凝血因子水平增高,血液处于高凝状态,同时激活纤溶系统引起血浆D—D浓度升高。本文采用金标法检测血浆D-二聚体水平,对于诊断与治疗妊娠期高血压疾病及产科出血性疾病有着重要的意义。     

蚯蚓纤溶酶去糖基化和免疫反应性分析

 目的对去糖基化的蚯蚓纤溶酶进行免疫反应性分析。方法①将变性的蚯蚓纤溶酶全组分与免疫佐剂混合,免疫家兔制得抗血清,酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和Western-blotting检测抗血清的效价。②三氟甲基磺酸去除蚯蚓纤溶酶全组分及6.5#,7#单组分的糖链,SDS-PAGE和ConA-HRP亲和印迹检测糖链的去除情况。③ELISA和Western-blotting检测糖链去除前后蚯蚓纤溶酶免疫反应性是否有变化。结果去除糖链后蚯蚓纤溶酶全组分及6.5#,7#单组分的免疫反应性基本没有变化。结论糖链的存在与否对蚯蚓纤溶酶组分免疫反应性的影响不大,提示蚯蚓纤溶酶分子上的寡糖链可能不构成其抗原决定簇。     

21种不同产地中药淡豆豉中5种活性成分的对比

目的:对不同产地市售淡豆豉中总异黄酮、大豆皂苷、多糖、总蛋白、纤溶酶的含量进行测定,并进行聚类分析,为淡豆豉的工艺研究和质量评价应用提供科学依据。方法:采用紫外分光光度法,以染料木素为对照品,测定总异黄酮的含量,测定波长为260 nm,染料木素在0.996 4~14.946 mg·L-1呈良好线性关系;采用香草醛-高氯酸比色法,以齐墩果酸为对照品,测定大豆皂苷的含量,测定波长520 nm,齐墩果酸在2.2~11 mg·L-1呈良好线性关系;采用苯酚-硫酸比色法,以葡糖糖为对照品,测定多糖的含量,测定波长490 nm,葡糖糖在0.002 5~0.02 g·L-1呈良好线性关系;采用考马斯亮蓝法测定总蛋白的含量,测定波长595 nm;采用纤维蛋白平板法测定豆豉纤溶酶活力,以尿激酶为对照品,尿激酶在100~10 000 U·mL-1呈良好线性关系。使用SPSS 16.0以淡豆豉中5种有效成分的含量为参数组合对市售淡豆豉进行聚类分析。结果:各地市售淡豆豉主要活性成分含量有明显差异,这21种淡豆豉中总异黄酮的质量分数最低为0.518 mg·g-1,最高为4.511 mg·g-1;大豆皂苷的质量分数最低为0.873 mg·g-1,最高为8.623 mg·g-1;多糖的质量分数最低为0.28%,最高为1.81%;总蛋白的质量分数最低为4.675%,最高为36.133%;7号样品中淡豆豉无纤溶酶活性,其他有活性的产品,纤溶酶活性最低为15.49 U·g-1,活性最高为1 752.08 U·g-1。聚类分析的树状图结果与地理位置有明显的对应关系。结论:21批不同产地淡豆豉中活性成分存在明显差异。     

蚯蚓纤溶酶分离及部分生化性质的研究

采用亲合层析法对蚯蚓纤溶酶进行初步纯化,并对其生化特性进行鉴定.结果表明经纯化的蚯蚓纤溶酶其分子量在20KD-30KD之间,对人血纤维蛋白平板具有良好的溶解作用,并考察了其热稳定性.纤溶酶能激活血栓中的纤溶酶原,从而使血栓溶解,直接作用于血栓表面,使形成血栓的纤维蛋白溶解成小分子,达到抗血栓之目的.     

地龙的鲜品和干品可溶性蛋白及纤溶酶活性的对比研究

目的:对比研究地龙的鲜品和干品的可溶性蛋白及纤溶酶活性.方法:采用Bradfold方法测定蛋白含量,SDS-PAGE进行蛋白谱带的分析,并采用琼脂糖-纤维蛋白平板法进行纤溶酶活性的测定.结果:以干燥品计,鲜品的蛋白提取率为( 13.89±0.86)％,蛋白含量为(63.14±0.38)％,体外纤溶酶活性为(8 743 ±17) IU·g-1;干品蛋白提取率为(9.82±0.75)％,蛋白含量为(45.16 ±0.12)％,体外纤溶酶活性为(206±14) IU·g-1;SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,鲜品共显示12条蛋白谱带,干品的谱带较少,且不清晰.结论:鲜地龙的可溶性蛋白提取率、含量及体外纤溶酶活性均明显高于干品,且蛋白组分有较大的差异.     

蛴螬提取物体外抗肠道EV-71病毒的研究

目的:对蛴螬用不同极性的溶剂提取并研究其提取物对肠道EV-71病毒的抑毒效果,对其有效部位进一步分离。方法:分别用蒸馏水、75%乙醇、乙酸乙酯提取蛴螬,对其水提醇沉和醇提水沉的上清液和沉淀分别进行对肠道EV-71病毒的抑毒实验,根据实验结果对水提醇沉的沉淀部位通过大孔树脂吸附的方法进一步分离。结果:蛴螬水提醇沉的沉淀物对肠道EV-71病毒有明显的抑制作用,其TI=94.15;对其用大孔树脂吸附的方法分离后水1部位抗病毒效果最为明显,TI=118.93。结论:蛴螬的水提醇沉的沉淀部位具有良好的抗肠道EV-71病毒效果。     

黄芪活性成分最佳提取工艺探讨

目的：探讨黄芪活性成分最佳提取工艺。方法：用两种方法提取制备黄芪皂苷和黄芪多糖,比色法分别测定其含量。结果：80％乙醇制备的黄芪提取物（皂苷）粉末含皂苷较多,采用90％乙醇提取后的药材再提多糖,含量较80％乙醇提取后的高;冻干多糖粉末质地、色泽、水溶性较好。结论：黄芪药材用90％提取皂苷后,再用冻干法制备多糖可以充分利用药材。     

山茱萸多糖的提取及含量测定

目的从山茱萸中提取多糖,并建立山茱萸多糖含量的测定方法。方法采用均匀设计优化山茱萸多糖的提取条件,用热水浸提、乙醇沉淀、DE-52柱层析的方法提取纯化山茱萸多糖,用苯酚-硫酸比色法测定多糖含量。结果山茱萸中多糖的含量为16.04%,平均回收率为99.01%,RSD=1.13%(n=3)。结论首次运用均匀设计优化山茱萸多糖的提取条件,提取得率高,苯酚-硫酸比色法测定山茱萸多糖含量稳定性、回收率较好。     

正交设计法优选复方昆丹胶囊的提取工艺

目的:建立高效液相色谱同时测定复方昆丹胶囊中多种成分含量的方法,采用正交设计法优选复方昆丹胶囊中有效成分的提取工艺.方法:以5,7-二甲氧基香豆素,白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ为指标,采用正交试验,考察提取次数,提取时间,乙醇体积分数及用量等因素的影响,优化提取条件.结果:最佳提取工艺条件为8倍量75％乙醇提取3次,每次0.5h.结论:优选的提取工艺多种有效成分的提取率均较高,适用于生产.     

钩藤总生物碱提取工艺研究

目的:优选钩藤总生物碱的提取工艺。方法:以钩藤总碱含量和提取液干膏率为综合评价指标,对乙醇用量、浓度、提取时间及次数四因素进行正交考察。结果:钩藤总碱的最佳提取工艺为10倍量75%乙醇提取3次,提取时间2h。结论:提取工艺可稳定可行。     

暖心胶囊提取工艺研究

目的优选暖心胶囊的提取工艺。方法采用单因素试验与正交试验。正交试验以提取液中人参皂苷Rg1与柚皮苷为指标,乙醇浓度、乙醇用量、提取次数和提取时间为考察因素,优选最佳提取工艺。结果最佳提取工艺为：用6倍药材量的75％乙醇超声提取2次,每次25min。结论该提取工艺条件稳定、可行。     

基于凝血活性和星点设计-效应面法的黄槐复方提取工艺研究

运用纤维蛋白原平板法,以凝血酶为参照,建立体外凝血活性测定的方法,以体外凝血活性为指标,筛选黄槐复方提取路线,并在单因素试验基础上,以黄芩苷、芦丁提取转移率和浸膏得率的综合评分值为因变量,乙醇浓度、溶剂用量、提取时间为影响因素,利用星点设计3因素5水平试验,进行二次多项式拟合,通过效应面法优选黄槐复方提取工艺,并测定其凝血活性。结果表明凝血酶浓度在0.4~16 U·m L~(-1)与沉淀圈面积呈良好线性关系,r=0.997 5;平均加样回收率为103.8%,RSD4.7%;黄槐合提浸膏的沉淀圈面积38.81 mm~2,比分提浸膏沉淀圈面积大;黄槐浸膏的日用量的活性84.28 U。黄槐复方的最佳提取工艺为加6倍量40%乙醇,提取3次,每次2 h,综合评分值预测值为94.26,验证值为88.34,与预测值偏差为6.28%,最佳提取工艺制得的中间体凝血活性较好。所建立的方法可以简便、快速、准确地测定黄槐复方的凝血活性,可用于后续工艺的筛选以及质量控制。     

何首乌药效成分3种提取方法比较

目的:研究中药材何首乌的不同提取方法,比较所提取的成分,探索优化何首乌的提取工艺。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)分析测定何首乌渗漉提取、75℃回流提取、89℃回流提取的提取液的二苯乙烯苷、蒽醌类化合物含量,并进行3种不同提取方法的提取液化学成分指纹图谱相似度及所得干物质考察。结果:3种提取方法提取的二苯乙烯苷、蒽醌类化合物的含量基本接近。结合蒽醌的含量89℃回流提取略高于渗漉提取;75℃回流提取略低于渗漉提取。何首乌3种不同提取方法制备的供试品溶液的特征指纹图谱与共有模式的相似度均大于0.95,符合国家对药材指纹图谱研究的技术要求(大于0.9)。结论:3种不同提取方法制备的指纹图谱相似程度高,其提取液化学成分差异不大。     

新疆马齿苋中总黄酮的微波提取及含量测定

目的：从马齿苋中提取总黄酮，并测定其含量。方法：微波技术提取马齿苋总黄酮后用比色法测定总黄酮含量，结果：测得马齿苋中总黄酮含 量5．790％，平均回收率为97．6％，相对标准偏差（RSD）为1．43％（n=6)，结论：首次运用微波技术干燥马齿苋并从中提取总黄酮，反应速度加快，提高了提取效率。