表阿霉素联合索拉非尼增强乳腺癌MCF-7细胞凋亡体外研究

目的探讨表阿霉素(Epirubicin)联合分子靶向药索拉非尼(Sorafenib)对乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用。方法采用人乳腺癌(MCF-7)细胞株。实验分为4组,即对照组、表阿霉素单药组、索拉非尼单药组、索拉非尼+表阿霉素联合组。对各组细胞给予相应药物处理,72h后经流式细胞仪检测各组药物对MCF-7细胞凋亡的作用。结果索拉非尼或表阿霉素单药作用后经流式细胞仪检测,细胞凋亡率均较对照组升高(P0.05),索拉非尼组诱导的细胞凋亡率为6.34%,表阿霉素组为13.35%。与单药组比,索拉非尼+表阿霉素联合组凋亡率升高更为明显,达23.47%(P0.05)。结论索拉非尼和表阿霉素的联合应用使抗肿瘤活性显著增强。     

盐酸表阿霉素纳米靶向制剂的缓释效应

背景：盐酸表阿霉素是一种广谱抗生素,目前临床使用的不足多为药物释放快、目标组织药物浓度低,静脉给药后广泛分布于体内各种组织器官,不良反应明显。 目的：针对盐酸表阿霉素临床应用的不足,制备盐酸表阿霉素纳米靶向注射制剂。 方法：以叶酸偶联牛血清白蛋白为载体,采用乳化-高压匀质法,制备盐酸表阿霉素纳米靶向注射制剂,以激光粒度分析仪测定纳米颗粒的粒径大小、粒径分布及Zeta电位,扫描电镜观察纳米颗粒的表面形态,高效液相色谱法分析白蛋白负载盐酸表阿霉素纳米制剂的包封率、载药量和释药性能。 结果与结论：制备的盐酸表阿霉素纳米粒外观呈均匀球型,粒径分布较窄,平均粒径为(157.73±     0.40) nm,平均 Zeta 电位为(-30.85±0.43) mV,载药量 22.78%,包封率可达96.24%。体外模拟释药结果表明药物释放曲线分为两个阶段,突释阶段微球释药量在24 h内达42.6%,缓释阶段纳米粒释药持续时间长,在112 h 时释药量达 84.1%,载药纳米粒的药物释放速率持续稳定。结果表明乳化结合高压匀质法制备的盐酸表阿霉素纳米靶向制剂粒径均匀,粒径范围分布窄,载药量和包封率高,具有一定的缓释作用。     

结肠癌荷瘤裸鼠三步法预定位放免显像及导向治疗研究

目的:探讨亲和素-生物素系统在人结肠癌裸鼠模型中进行预定位放免显像及导向治疗的实验研究。方法:应用三步法给药,在注药后4～48h对荷人结肠癌进行ECT显像和体内分布测定。预定位治疗组采用单次较大剂量投入治疗(放射性剂量为11.1MBq),治疗前后定期测量裸鼠的体重和肿瘤生长体积以及瘤块的组织病理学检查。结果:三步法组在注药后4h肿瘤即显像,其瘤/血比值为5.76±1.64明显高于对照组(直接标记法组和153Sm-DB2组分别为0.26±0.08和1.01±0.22)。三步法预定位治疗组与直接标记单抗组均能明显抑制荷瘤裸鼠体内人结肠癌的生长。结论:三步法预定位具有显著改善血T/NT比值,肿瘤显像时间提前的特点;预定位治疗具有明显的肿瘤抑制效应。     

粉防己碱预处理对心肌缺血/再灌注损伤大鼠肿瘤坏死因子-α表达及核因子活化的影响

目的探讨粉防己碱预处理对心肌缺血/再灌注过程中大鼠肿瘤坏死因子-α表达及与核因子活化的影响以及相关关系。方法60只SD大鼠随机分为3组:缺血/再灌注损伤组、假手术组、粉防己碱治疗组,缺血/再灌注损伤组结扎大鼠左前降支造成心肌缺血30min后再灌注24h后处死大鼠;假手术组只穿针不结扎,余步骤同缺血/再灌注损伤组;粉防己碱治疗组在缺血前30min腹腔注射粉防己碱,余步骤同缺血/再灌注损伤组。24h后取心肌标本,用酶联免疫吸附法检测心肌组织中肿瘤坏死因子-α表达水平,凝胶电泳迁移率变化分析检测核因子的活性。结果粉防己碱组与缺血再灌注组相比肿瘤坏死因子-α表达水平明显减低(208.40±25.12 VS 306.65±17.78,P<0.01)而与假手术组相比表达明显增强(208.40±25.12 VS 61.45±9.20,P<0.01)。粉防己碱组核因子的活性明显低于缺血再灌注组(29.58±1.56 VS 40.33±4.39,P<0.01)而与假手术组无显著性差异(29.58±1.56 VS 30.09±3.46,P>0.05)。结论粉防己碱预处理可以使心肌缺血/再灌注损伤过程中肿瘤坏死因子-α生成明显减少,核因子的活化受到有效抑制,从而起到减轻心肌缺血/再灌注损伤的作用。     

雷帕霉素增强子宫内膜癌细胞对阿霉素的敏感性

目的: 探讨mTOR抑制剂雷帕霉素联合阿霉素对子宫内膜癌细胞株的影响及其机制。方法: 选用2株不同 PTEN 状态的子宫内膜癌细胞株:HEC-1A( PTEN 野生型)和Ishikawa( PTEN 突变型),分别给予低浓度雷帕霉素预处理24 h,再使用阿霉素,MTT法检测联合用药前后阿霉素24 h IC₅₀及细胞生存率的变化,计算两药的联合指数;流式细胞术检测细胞凋亡率, Western blotting观察PI3K/Akt通路的蛋白磷酸化和凋亡蛋白caspase-3的变化。结果: (1)雷帕霉素或阿霉素单药使用时均明显抑制2株子宫内膜癌细胞的生长。抑制率与时间、剂量呈正相关。使用10 nmol/L雷帕霉素预处理24 h后,阿霉素作用Ishikawa细胞的IC₅₀由(21.3±3.8)μmol/L降到(11.9±1.2) μmol/L(P<0.05);而HEC-1A细胞的IC₅₀由(14.3±2.8)μmol/L降到(8.2±0.9)μmol/L(P<0.05);2株细胞中阿霉素与雷帕霉素的联合指数均大于1.15,提示在2种细胞株中两药均有协同作用;(2)联合用药后,凋亡率较单药使用组明显升高(P<0.05);同时,p-Akt蛋白表达下降,而活化的caspase-3表达上调。结论: 雷帕霉素能增加子宫内膜癌细胞对阿霉素的敏感性,从而降低肿瘤细胞对药物的耐药性,具有良好的抗肿瘤前景。     

转铁蛋白修饰共载阿霉素与蒽贝素脂质体的构建及其体外评价

目的 研究转铁蛋白修饰共载阿霉素(DOX)和蒽贝素的脂质体(TELP-DOX/EB)与乳腺癌细胞的亲和力和增殖抑制作用.方法 后插入法制备转铁蛋白修饰共载阿霉素和蒽贝素脂质体(TELP-DOX/EB).细胞摄取法检测细胞对普通脂质体(LP)和转铁蛋白修饰脂质体(TFLP)的摄取.将MCF-7细胞分为TELP-DOX/EB组、TELP-DOX组、TELP-EB组、LP-DOX/EB组和PBS组,MTT检测细胞的增殖.构建乳腺癌MCF-7细胞肿瘤球模型,激光共聚焦显微镜检测脂质体的肿瘤球穿透能力和肿瘤球的生长.结果 MCF-7细胞对TFLP的摄取效率是LP的3.2倍(P＜0.01);给药48 h后,TELP-DOX/EB对MCF-3细胞的抑制率分别是TELP-DOX、TELP-EB和LP-DOX/EB、的1.95倍、2.43倍和2.75倍(P＜0.01).TELP-DOX/EB具有良好的肿瘤球穿透作用和肿瘤球生长抑制作用(P＜0.01).结论 铁蛋白修饰共载阿霉素和蒽贝素脂质体是一种潜在高效的乳腺癌靶向给药系统.     

粉防己碱抑制耐氟康唑热带念珠菌外排泵机制的研究

目的探讨粉防己碱抑制耐氟康唑热带念珠菌外排泵的机制。方法通过MTT法确定24h粉防己碱对耐氟康唑热带念珠菌的无细胞毒性剂量,并以此剂量处理5株耐氟康唑热带念珠菌。粉防己碱组（20mg／L）及对照组（PBS）加入不同浓度的氟康唑（10～50mg/L）处理48h以测定MIC值。半定量PCR分析粉防己碱（20mg/L）作用24h前后,耐氟康唑热带念珠菌外排泵基因CDR1和MDR1转录水平的变化;流式细胞术检测粉防己碱（20mg／L）作用24h后对耐氟康唑热带念珠菌罗丹明123的蓄积能力的影响。结果粉防己碱对耐氟康唑热带念珠菌的最大无细胞毒性剂量为20mg／L。以此浓度处理5株耐氟康唑热带念珠菌,与对照组相比,MIC的范围由64（64～128）mg/L减少到32（24-64）mg/L（P〈0．05）。粉防己碱可以将耐氟康唑热带念珠菌CDR1和MDR1基因mRNA水平的表达由0．905±0．026及b．649±0．028分别下调至0．715±0．131和0．342±0．068（均P〈0．05）。粉防己碱作用后的耐氟康唑热带念珠菌对罗丹明123的蓄积量提升至（37．7±3．5）％,高于对照组的（16．3±2．2）％（P〈0．05）。结论粉防己碱可以减少耐氟康唑热带念珠菌外排蛋白的表达,增加细胞内药物的蓄积,从而抑制氟康唑的耐药作用。     

粉防己碱预处理对心肌缺血/再灌注损伤大鼠肿瘤坏死因子-α表达及核因子-κB活化的影响

目的 探讨粉防己碱预处理对心肌缺血/再灌注过程中大鼠肿瘤坏死因子-α表达及与核因子-кB活化的影响以及相关关系.方法 60只SD大鼠随机分为3组缺血/再灌注损伤组、假手术组、粉防己碱治疗组,缺血/再灌注损伤组结扎大鼠左前降支造成心肌缺血30 min后再灌注24 h后处死大鼠;假手术组只穿针不结扎,余步骤同缺血/再灌注损伤组;粉防己碱治疗组在缺血前30 min腹腔注射粉防己碱,余步骤同缺血/再灌注损伤组.24 h后取心肌标本,用酶联免疫吸附法检测心肌组织中肿瘤坏死因子-α表达水平,凝胶电泳迁移率变化分析检测核因子-κB的活性.结果 粉防己碱组与缺血再灌注组相比肿瘤坏死因子-α表达水平明显减低(208.40±25.12 VS 306.65±17.78,P＜0.01)而与假手术组相比表达明显增强(208.40±25.12 VS 61.45±9.20,P＜0.01).粉防己碱组核因子-κB的活性明显低于缺血再灌注组(29.58±1.56 VS 40.33±4.39,P＜0.01)而与假手术组无显著性差异(29.58±1.56 VS 30.09±3.46,P＞0.05).结论 粉防己碱预处理可以使心肌缺血/再灌注损伤过程中肿瘤坏死因子-α生成明显减少,核因子-кB的活化受到有效抑制,从而起到减轻心肌缺血/再灌注损伤的作用.     

阿霉素诱导人乳腺癌细胞系耐药后的细胞行为变化

目的研究和完善乳腺癌细胞多药耐药机制及多药耐药后肿瘤细胞的性质、行为改变。方法分别对野生组(MCF-7)、阿霉素诱导的耐药组(MCF-7/ADM)、撤药60d组(MCF-7/撤药60d)进行细胞学分析,观察细胞增殖速度及群体增殖时间,SP免疫组化法检测细胞表型变化。结果MCF-7/ADM与MCF-7细胞增殖速度无明显差异,撤药组随着撤药时间的延长,细胞的增殖速度加快,群体倍增时间缩短;MCF-7/ADM、MCF-7/撤药60d细胞的分化程度低于MCF-7组;MCF-7/ADM的耐药相关标记蛋白Pgp、LRP、GST-π、HER-2表达较MCF-7明显增加,而雌激素受体(ER)、TOPO-Ⅱ转为阴性表达,孕激素受体(PR)随撤药时间的延长表达逐步减低。结论应用阿霉素诱导的MCF-7具有明显的耐药细胞性状,耐药细胞具有去分化的能力;耐药细胞的遗传和生化特性发生了变化,可用于肿瘤多药耐药机制的研究。     

人骨肉瘤耐阿霉素细胞模型的建立及其生物学特性

背景：多药耐药是骨肉瘤化疗失败的重要原因,目前其耐药机制不明。 目的：诱导建立耐阿霉素的人骨肉瘤细胞株并观察多药耐药蛋白1、多药耐药相关蛋白1和肺耐药蛋白的表达。 方法：采用逐步递增阿霉素浓度间歇作用的方法诱导143B/WT细胞株建立143B/阿霉素耐药细胞株。 结果与结论：经阿霉素诱导45 d建立了143B/阿霉素细胞株,其对阿霉素高度耐药,对顺铂、甲氨蝶呤、异环磷酰胺、长春新碱和紫杉醇亦产生不同程度交叉耐药;流式细胞仪检测显示与143B野生型细胞相比,143B/阿霉素细胞周期中G1和S期所占比例增加,而G2/M期所占比例明显减少;罗丹明外排实验显示,143B/阿霉素细胞药物外排能力显著高于143B/WT细胞(P < 0.01);流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察发现,143B/阿霉素细胞阿霉素相关性细胞凋亡率显著低于143B/WT(P < 0.01);Western blot检测显示143B/阿霉素细胞多药耐药蛋白1表达水平较143B/WT显著升高(P < 0.01),二者多药耐药相关蛋白1和肺耐药蛋白表达差异无显著性意义(P > 0.05)。提示143B/阿霉素细胞多药耐药的产生与多药耐药蛋白1表达升高相关。     

Autophagy and nuclear changes in FM3A breast tumor cells after epirubicin, medroxyprogesterone and tamoxifen treatment in vitro.

OBJECTIVE: Autophagy is a form of physiological programmed cell death which is observable after hormonal withdrawal. In this study, the FM3A murine breast tumor cell line was treated with epirubicin alone and with medroxyprogesterone acetate (MPA) or tamoxifen, to determine if structural and kinetic signs of autophagy may also occur in an enhanced manner during epirubicin sensitization via hormonal agents. METHODS: One-week soft agar colony growth, 96-hour values of plating and pulse thymidine labeling and electron microscopical examinations were performed following treatment with MPA and tamoxifen alone or with epirubicin. RESULTS: Tamoxifen induced signs of autophagy, which was enhanced when it was combined with MPA. Epirubicin also induced autophagy of secretory granules, which coalesced to form an intracytoplasmic lumen. Combining MPA with epirubicin enhanced the formation of apoptotic blebs and chromatin fragmentation. When epirubicin was combined with tamoxifen, peculiar nuclear structures were formed. CONCLUSIONS: Hormonal agents may modulate anthracycline activity towards specific patterns in eliciting cell death, via autophagy and/or as yet unknown nucleolus-specific interactions.     

无创监测表阿霉素心脏毒性-组织多普勒超声心动图

目的： 利用组织多普勒和常规超声心动图评估淋巴瘤患者表阿霉素心脏毒性。 方法： 20例接受表阿霉素化疗的淋巴瘤患者，表阿霉素总累计量(450±75)mg/m2，每个疗程治疗前进行组织多普勒和常规超声心动图检查。健康对照组20例。常规超声心动图指标包括左室舒张末内径（LVEDD），左室收缩末内径（LVESD），左室射血分数（LVEF），二尖瓣口血流速度（早期速度E,晚期速度A及两者比值E/A）；组织多普勒指标有二尖瓣环左室侧壁处组织多普勒峰值速度（收缩峰速S，舒张早期峰速E，舒张晚期峰速A及E/A）。 结果： 与治疗前相比，常规超声心动图收缩期指标LVEDD、LVESD、LVEF在累计量达到450 mg/m2才出现显著差别［LVEDD (55.4±10.2)mm vs (42.2±8.1)mm；LVESD (34.2±7.9)mm vs (24.5±5.3)mm；LVEF (58.1±6.5)% vs (68.2±7.4)%,P<0.05］，常规超声心动图舒张期指标E/A在累计量达到375 mg/m2才出现显著差别［(0.88±0.16) vs (1.22±0.21)，P<0.05］；而组织多普勒收缩期指标S在累计量达到300 mg/m2就出现显著差别［(8.1±2.5)cm/s vs (10.2±3.6)cm/s，P<0.05］，组织多普勒舒张期指标E/A在累计量达到225 mg/m2即出现统计学意义的差别［(0.90±0.18) vs (1.13±0.23)，P<0.05］。与健康对照组相比，20例淋巴瘤患者第一次治疗前各指标无明显差别（P>0.05）。 结论： 在监测表阿霉素心脏毒性上，组织多普勒超声心动图较常规超声心动图能较早期和较敏感发现变化，且舒张功能变化早于收缩功能变化。     

Morphological changes in human gall bladder carcinoma cell line-NOZ due to epirubicin and doxorubicin

Epirubicin is widely used in various cancer therapies because its side effects and less than those of doxorubicin. We compared the direct effects of doxorubicin and epirubicin to cellsin vitro. In this study, we used the human gall bladder carcinoma cell line-NOZ. We evaluated the cytocidal effects using a DNA fluorimetric assay with fluorochrome Hoechst 33342. The addition of epirubicin in a culture medium showed stronger cytocidal effects than the addition of doxorubicin. Morphologically, after treatments with the two drugs, cells were enlarged, large vacuoles appeared in the cytoplasm, and concentrated microvillus-like structures due to doxorubicin were observed by transmission electron microscopy. This study was presented at the 25th Annual Meeting of the Clinical Electron Microscopy Society of Japan, Matsumoto, September 28–30, 1993.     

表柔比星壳聚糖隐形纳米粒的制备及其抗肿瘤活性的检测

目的 制备包裹抗癌药物表柔比星（EPI）的"隐形"壳聚糖纳米粒,并检测其抗肿瘤活性。方法 应用阴离子凝聚法制备负载EPI的PEG化壳聚糖纳米粒（PEG/CS-EPI NPs）和普通壳聚糖纳米粒(CS-EPI NPs),通过透射电镜和动态光散射方法表征粒子的形貌和尺寸分布,用MTT法测定鼻咽癌细胞的增殖抑制率;并通过尾静脉注射给药法对荷小鼠肉瘤细胞S-180小鼠进行体内抑瘤试验。结果 PEG/CS-EPI NPs呈圆形或椭圆形,平均粒径322nm,载药量为13%,包封率74%,抑制细胞增殖具有浓度和时间依赖性,与普通壳聚糖纳米粒相比,隐形纳米粒的体内抗肿瘤作用更明显。结论 隐形壳聚糖纳米粒较普通壳聚糖纳米粒更适合用于制备化疗药物载体。     

白藜芦醇与表阿霉素联合用药对多种人类肿瘤细胞的体外抑制作用

目的 探讨白藜芦醇与表阿霉素联合用药对7种人类肿瘤细胞的抑制作用。方法 体外培养多种人类肿瘤细胞,经白藜芦醇与表阿霉素联合处理24h后,用MTS法测定细胞活性,光镜下观察细胞形态,用二氢丙啶荧光染料(PI)观察细胞的坏死程度,用流式细胞术检测细胞周期分布。结果 白藜芦醇与表阿霉素的联合用药对人乳腺癌MCF7和人胃癌MGC803细胞呈现出协同抑制效应,明显高于单独用药抑制率的加和（p<0.01）,对其它所研究的肿瘤细胞则有加和抑制效应。联合用药处理后细胞坏死情况明显,且细胞周期被抑制在G0/G1期和S期。结论 白藜芦醇与表阿霉素的联合用药对MCF7和MGC803细胞具有引起细胞坏死和细胞周期抑制的协同效应,而对其它所研究肿瘤细胞仅存在加和抑制效应。     

表阿霉素和抗CD47抗体联合治疗乳腺癌的体外实验研究

目的：探索表阿霉素（Epirubicin,EPI）和抗CD47抗体对乳腺癌的联合治疗策略。方法：表阿霉素处理乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231后,流式和免疫荧光检测细胞膜表面钙网织蛋白（ Calreticulin,CRT）和CD47分子的表达情况;乳腺癌细胞经表阿霉素处理后,在含抗CD47或抗CRT抗体的培养基中与从人外周血分离出的树突状细胞（ Dendritic cells , DC）共培养,观察肿瘤细胞被DC吞噬的情况。结果：未经化疗药处理的MCF-7和MDA-MB-231细胞膜上不表达CRT,高表达CD47;表阿霉素能诱导CRT从胞内转位到细胞膜上,并降低细胞膜上的CD47的表达;联合应用表阿霉素和抗CD47抗体可明显增强DC对乳腺癌细胞的吞噬。结论：表阿霉素能诱导CRT膜转位,增强DC细胞识别;联合表阿霉素与抗CD47抗体可进一步增强DC对肿瘤细胞的清除。 CRT的膜转位和CD47分子可能共同介导DC对乳腺癌细胞的吞噬。本研究可为乳腺癌化疗和CD47抗体的联合治疗提供新的实验依据。     

Molecular weight distribution changes during degradation and release of PLGA nanoparticles containing epirubicin HCl

The molecular dynamics of the degradation process of poly(lactic-co-glycolic acid) nanospheres were investigated during the degradation process usually observed when these polymers are used as controlled release carriers. The molecular weight distribution of PLGA samples was determined over a period of 32 days by accurately analyzing the molecular weight distribution of the polymer as a function of time as degradation progressed. The molecular weight distribution shifted gradually to lower average molecular weights over 32 days, with significantly smaller molecular weight components appearing at 8-12 days. In addition, the degradation of nanospheres containing epirubicin HCI was analyzed and increasing the amount of epirubicin from 1.7 to 3.4 to 6.7 wt% was found to hasten the degradation of the nanoparticles and subsequently affect the release behavior from these particles. This is believed to be the first time that such molecular dynamics have been presented for the degradation of PLGA nanoparticle formulations containing a drug for controlled delivery.     

促性腺激素释放激素类似物对乳腺癌细胞株化疗敏感性的影响

目的： 探讨促性腺激素释放激素类似物（GnRHa）对乳腺癌细胞株（MCF-7和MDA-MB-231）化疗敏感性的影响。方法：不同浓度的GnRHa（曲普瑞林,triptorelin）（10^－9 mol/L、10^－8 mol/L、10^－7 mol/L、10^－6 mol/L、10－5 mol/L）分别作用于MCF-7和MDA-MB-231细胞24 h、96 h和168 h后，用CCK-8方法检测细胞活性。用或不用GnRHa（10^－5 mol/L）处理96 h后，分别加入5-氟尿嘧啶（5-FU）或表阿霉素(EPI)作用24 h，用CCK-8法检测细胞抑制率。用RT-PCR检测GnRHa（10^－5 mol/L）作用168 h后GnRH受体、PCNA和MDR1 mRNA表达水平。结果：不同浓度GnRHa作用不同的时间后对乳腺癌细胞活性无影响。GnRHa（10^－5 mol/L）作用96 h后，5－FU和EPI对两种细胞的IC50不改变；GnRHa（10^－5 mol/L）不影响5－FU（MCF-7细胞0.5 g/L，MDA－MB－231细胞0.5 g/L）和EPI（MCF-7细胞1.2 mg/L,MDA－MB－231细胞0.8 mg/L）对两种细胞的抑制作用（P>0.05）。GnRHa（10^－5 mol/L）作用168 h后，MCF-7细胞的PCNA mRNA表达无改变。而在MDA-MB-231细胞，PCNA表达升高，差别有统计学意义（P<0.05）。在MCF-7对照组中，MDR1 mRNA有弱表达。GnRHa作用后，抑制了MDR1 mRNA表达。MDA-MB-231细胞GnRHa作用前后， MDR1 mRNA均无表达。结论：GnRHa不影响乳腺癌细胞株对5-FU和EPI的敏感性。GnRHa可能通过下调MDR1 mRNA表达水平，减弱MCF-7细胞的耐药性。