国产纳米级羟基磷灰石复合胶原膜降解产物的生物相容性研究

目的 验证国产纳米级羟基磷灰石复合胶原膜(nHAC)降解产物的生物相容性.方法 将国产nHAC降解产物与SD大鼠颅顶骨成骨细胞复合培养,从成骨细胞形态、增殖及碱性磷酸酶活性等方面评价国产nHAC膜降解产物对成骨细胞的生物相容性.结果 复合培养的成骨细胞能与正常培养的成骨细胞一样贴壁,增殖,并且能表现强烈的碱性磷酸酶活性.结论 国产nHAC膜降解产物既不影响成骨细胞的生长增殖也不影响成骨细胞的正常生理功能.有良好的生物相容性.     

表面修饰对纳米晶胶原基骨细胞相容性的影响

目的:探索纤维蛋白(fibrin,FB)修饰的纳米晶胶原基骨(nanoHydroxyapatite/collagen,nHAC)支架材料上成骨诱导的骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)黏附、增殖及分化的情况。方法:实验分为两组:实验组,纤维蛋白修饰的纳米晶胶原基骨(FB-nHAC);对照组,单纯的纳米晶胶原基骨(nHAC)。将SD大鼠骨髓间充质干细胞定向诱导为成骨细胞,种植于支架材料上,体外复合培养。通过检测支架材料的细胞黏附率、不同时间点(3,7,10,14 d)支架材料中细胞数、碱性磷酸酶表达量以及扫描电镜观察细胞在支架材料上的生长状况,比较分析不同支架材料与细胞生物相容性差异。结果:大鼠MSCs经诱导培养14 d后,I型胶原免疫荧光染色为阳性;实验组支架材料的细胞黏附率显著高于对照组(P<0.05);且相同时间点实验组支架材料中的细胞数及碱性磷酸酶表达量也明显高于对照组(P<0.05);电镜观察发现两组材料上均有细胞生长,但实验组的细胞生长状况明显好于对照组。结论:表面修饰纤维蛋白后的nHAC支架材料具有更好的细胞黏附、增殖及促成骨分化能力。     

大鼠牙乳头细胞与纳米羟基磷灰石的体外复合培养

目的:初步探讨多孔纳米羟基磷灰石(nano-hydroxyapatite,nano-HAP)对体外培养的大鼠牙乳头细胞(rat dental papilla cells,RDPC)增殖和分化功能的影响,以及nano-HAP作为牙组织工程支架材料的可行性.方法:实验组为RDPC与nano-HAP复合培养,对照组为RDPC常规培养.通过电镜观察RDPC在nano-HAP表面生长与附着状态,同时检测细胞增殖状况、细胞蛋白含量和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)等,评价RDPC生长情况和细胞活性.结果:实验组生长良好,6 d和8 d时实验组RDPC增殖明显高于对照组;6 d和9 d时实验组细胞总蛋白含量高于对照组;各时间点两组细胞ALP差异无统计学意义.结论:nano-HAP具有良好的生物相容性,能使RDPC细胞增殖,并可使其活性明显增强,可作为牙组织工程备选的支架材料;RDPC与牙组织工程支架材料复合培养可作为体外评价牙组织工程支架材料生物相容性的方法之一.     

BG/PHBV复合多孔支架材料与成骨细胞体外复合培养

目的用生物活性玻璃BG/聚羟基烷酸酯PHBV复合多孔支架材料与骨髓基质细胞来源的成骨细胞体外复合培养了解其生物相容性,为骨组织工程支架材料选择提供依据。方法:将体外培养的兔骨髓基质细胞诱导分化的成骨细胞,与BG/PHBV复合多孔支架材料体外复合培养,对复合体进行形态学、扫描电镜、细胞增长能力的测定,评价细胞与材料的相容性。结果:骨髓基质细胞有较强的向成骨细胞分化和繁殖能力成骨细胞与BG/PHBV复合多孔支架材料体外复合培养8d,分布于支架材料的成骨细胞迅速分化增殖,分泌细胞外基质并形成钙结节。结论:骨髓基质细胞是骨组织种子细胞的良好来源BG/PHBV复合多孔支架材料与成骨细胞具有良好的生物相容性,是构建组织工程骨的一种理想支架材料。     

多肽水凝胶复合支架对大鼠脂肪干细胞体外增殖和分化的影响

目的:研究多肽水凝胶复合骼金(nano-hydroxyapatite/collagen, nHAC)对大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)体外增殖和早期骨向分化的作用?方法:用1%的多肽水凝胶与nHAC制备复合支架,未复合水凝胶的nHAC为对照组,使用扫描电子显微镜(field emission scanning electron microscope,FESEM)和共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)进行表征,将ADSCs接种到两种支架材料上,以CCK-8检测1?3?5?7 d的增殖情况,以碱性磷酸酶(ALP)活性为早期骨向分化指标,检测其3?5?7 d 的活性?结果:多肽水凝胶在nHAC表面形成涂层,ADSCs在有涂层的nHAC上黏附?铺展得更好,两种支架上的ADSCs在1?3?5?7 d都持续增殖,其中两组间在1?3 d无差异,5?7 d有差异,实验组增殖更快(P < 0.05);ALP值在3?5?7 d都持续增高,实验组更高,两组间有差异(P < 0.05),但在3?5?7 d时两两比较差异不显著(P > 0.05)?结论:多肽水凝胶复合支架材料能显著促进ADSCs的黏附增殖,对细胞早期骨向分化有一定的促进作用,但不如对细胞增殖的促进作用显著?     

新型骨基质材料细胞相容性的形态学研究

目的检测新型有机-无机复合类骨基质材料(newbone-matrixmaterial,NBM)的细胞相容性,为骨组织工程探寻一种新型复合类细胞外基质材料提供实验依据。方法应用组织培养技术,对兔骨髓基质干细胞(bonemarrowstromacell,BMSC)和NBM体外联合培养进行相差显微镜观察和扫描电镜观察。结果BMSC可以在NBM材料上发生良好的粘附、增殖,并能长入材料的孔隙内,分泌大量的细胞外基质成分。结论NBM在体外与BMSC复合培养时表现出良好的细胞相容性,对细胞的粘附、增殖和功能表达未见明显影响。     

胎兔成骨细胞与复合肝细胞生长因子/异种脱蛋白松质骨的体外培养

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对体外培养的胎兔成骨细胞在异种脱蛋白松质骨(DPB)支架上黏附行为及增殖和分化功能的影响.方法:成骨细胞从胎兔中分离,实验组为HGF/DPB与成骨细胞复合培养,对照组为DPB与成骨细胞常规培养.通过电镜观察成骨细胞在HGF/DPB表面生长与附着状态,同时检测细胞增殖状况和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性等,评价成骨细胞生长情况和细胞活性.结果:成骨细胞在复合肝细胞生长因子脱蛋白骨外表面及孔隙内表面均可贴附生长,增殖、分化良好.HGF/DPB对成骨细胞的ALP活性有明显的促进作用,并能促进成骨细胞的增殖.结论:HGF/DPB具有良好的生物相容性和骨诱导作用,可作为骨组织工程备选的复合支架材料.     

骨髓间充质干细胞复合音猬因子/纳米晶胶原基骨修复骨缺损

目的:探讨骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells)复合音猬因子(sonic hedgehog,Shh)修饰的纳米晶胶原基骨(nano Hydroxyapatite/collagen, nHAC)修复大鼠股骨缺损的效果.方法:SD大鼠 MSCs经成骨诱导后,种植于支架材料形成细胞支架复合物.SD大鼠30只制成股骨干5 mm节段性缺损,分为空白对照组:骨缺损处不植植入物,MSCs/nHAC组:植入MSCs/nHAC复合物,MSCs/Shh-nHAC组:植入MSCs/Shh-nHAC复合物.通过大体观察、X线放射学、组织学对比各组骨缺损修复情况.结果:SD大鼠MSCs在体外与nHAC,Shh-nHAC复合培养第7天,电镜扫描证实Shh-nHAC更有利于MSCs黏附、增殖.术后第6、12周放射学检查评价新骨生成各组间差异有统计学意义(P<0.05).术后组织学检查各组新骨生成速度、生成量差异有统计学意义(P<0.05).结论:MSCs/Shh-nHAC复合物能够修复SD大鼠股骨缺损, 修复效果明显优于MSCs/nHAC复合物.     

新型生物陶瓷对体外培养成骨细胞影响的试验研究

目的 :研究新型复合生物陶瓷 (ZrO2 -CBC)对体外培养的胎鼠成骨细胞增殖分化的影响 ,探讨ZrO2 -CBC的细胞相容性 .方法 :将ZrO2 -CBC与胎鼠成骨细胞体外共同培养 15d ,通过细胞计数、ALP活性检测和流式细胞仪法评价ZrO2 -CBC对成骨细胞增殖分化的影响 .结果 :与空白对照组相比 ,实验早期ZrO2 -CBC对成骨细胞增殖分化无抑制作用 (P >0 0 5 ) ,后期轻度抑制成骨细胞的增殖 ,并抑制成骨细胞ALP的分泌 (P <0 0 5 ) .结论 :ZrO2 -CBC是一种有前途的牙科种植体材料     

骨髓基质细胞和胶原膜BME-10X生物相容性的实验研究

目的 观察胶原膜BME-10X与Beagle犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)的生物相容性,为将其运用于组织工程技术修复牙周缺损提供理论依据.方法 体外培养Beagle犬BMSCs,并与胶原膜BME-10X复合培养.HE染色检测细胞与材料的黏附,MTT法检测细胞的增殖,并行碱性磷酸酶(ALP)活性检测.结果 BMSCs复合胶原膜后生长良好,MTT及ALP结果均显示,在各时间点,对照组和实验组间增殖及ALP活性均无显著性差异(P>0.05).结论 胶原膜BME-10X有良好的生物相容性,有望成为BMSCs的载体材料应用于牙周组织工程研究.     

曲古抑菌素A对大鼠脂肪干细胞在二维及三维培养下早期骨向分化的影响

目的:研究曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在二维培养板(TCP)和三维复合纳米羟基磷灰石/胶原(nano-hydroxyapatite/collagen,nHAC)支架上早期骨向分化的影响?方法:处理组分别在含75 nmol/L TSA的二维培养板和三维 nHAC上培养ADSCs(TCPT组和nHACT组),未添加TSA的两组(TCP组和nHAC组)为对照组?使用扫描电子显微镜(field emission scanning electron microscope,FESEM)对接种ADSCs 1?3 d后nHAC和nHACT组细胞的生长情况进行表征,以碱性磷酸酶(ALP)活性为早期骨向分化指标,分别检测3?5?7 d时的ALP活性,用Western blot检测成骨指标Runx2?骨桥蛋白(OPN)?骨形态发生蛋白2(BMP2)的表达?结果:ADSCs在三维培养中均表现出良好的粘附?铺展,其中经TSA诱导的细胞对支架的黏附?铺展更好;ALP值在3?5?7 d持续增高,其中以nHACT组最高,组间差异显著(P < 0.05);Western blot结果显示Runx2?OPN?BMP2在 nHACT组表达最高,与ALP结果一致?结论:TSA对ADSCs早期骨向分化有促进作用,复合三维支架共培养后促进作用显著?     

转BMP-7基因BMSCs复合nHAC体外培养的实验研究

目的建立能够稳定表达骨形态发生蛋白-7（BMP-7）的骨髓基质干细胞（BMSCs）,并与纳米羟基磷灰石胶原（nHAC）材料复合培养体外构建组织工程骨。方法用慢病毒把人BMP-7基因和增强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因导入大鼠BMSCs,用G418筛选获得阳性细胞后接种于nHAC支架体外复合培养。荧光显微镜下观察eGFP表达,判断感染效率;以四唑盐（MTT）实验检测细胞活力;RT-PCR、ELISA检测目的基因表达;碱性磷酸酶（ALP）活性检测成骨能力;扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长状况。结果慢病毒24h对BMSCs的转染率约为90%;MTT实验显示细胞活性较未转染组无明显差异（P〉0.05）;RT-PCR检测到BMP-7表达,在1300bp处出现特异性条带;ELISA检测24hBMP-7蛋白含量为（150.2±18.3）pg/ml;ALP活性以第16天左右最强;扫描电镜见细胞种植nHAC支架后粘附、生长良好。结论 BMP-7可在BMSCs内稳定表达,并诱导其向成骨分化;与nHAC复合培养可构建组织工程骨。     

卡拉胶/纳米羟基磷灰石/胶原可注射骨修复材料的制备与表征

目的制备一种新的可注射骨修复材料卡拉胶/纳米羟基磷灰石/胶原(nHAC/Carr),并进行表征。方法将纳米羟基磷灰石/胶原(nHAC)微粒分散在卡拉胶中。结果nHAC/Carr与nHAC的X射线衍射谱无明显差别,可注射材料保持了nHAC的特性。nHAC/Carr的红外光谱显示卡拉胶的化学结构未发生变化。流变性能测试显示nHAC/Carr具有与卡拉胶相似的水凝胶特性。扫描电镜照片和孔隙率分析表明nHAC/Carr材料具有多孔结构,孔隙率在90%左右。结论可注射材料nHAC/Carr有望被用作骨修复材料。     

纳米胶原基骨在根尖周病骨缺损修复中的应用观察

【目的】研究纳米胶原基骨（nHAC）修复根尖周病骨缺损的治疗效果。【方法】选择慢性根尖周病变非手术治疗失败根尖囊肿,根周骨破坏超过1 cm×1 cm的70例患者随机分为2组,nHAC组35例,根尖搔刮术后骨腔中植入nHAC。对照组35例,术后骨腔中不置入材料。【结果】术后3个月时,X线片显示nHAC组骨密度明显增高,与对照组比较疗效差异有显著（P〈0.01）。6个月时骨性愈合高于对照组,差异有显著性（P〈0.01）。12个月时骨性愈合优于对照组（P〈0.05）。【结论】nHAC生物相容性好,可促进早期骨缺损的修复,是一种较为理想的骨替代材料。     

联合应用釉基质蛋白,骨形成蛋白-2对人牙囊细胞生物学行为的影响

目的观察联合应用釉基质蛋白（EMPs）、骨形成蛋白-2（BMP-2）对人牙囊细胞增殖及分化的影响。方法以不同浓度的EMPs、BMP-2作用于牙囊细胞，通过四唑盐比色法和酶动力学法检测对细胞增殖及ALP活性的变化，再筛选出浓度为100mg／l的EMPs、100μg／L的BMP-2，检测单独或联合运用二者对牙囊细胞生物学特性的影响。结果EMPs、BMP-2均能促进牙囊细胞增殖和ALP的分泌，联合应用与单独应用两种因子相比，对增殖的影响无差异，对ALP的合成促进更显著。结论EMPs、BMP-2联合可影响牙囊细胞的生物学特性。EMPs、BMP-2两种因子可能在牙囊细胞的诱导分化中起重要作用。     

软骨细胞与瑞福纳米人工骨复合物的体外构建

目的:评估瑞福纳米人工骨(胶原基纳米骨,nano-hydroxyapatie/collagen, nHAC) 作为软骨组织工程细胞支架材料的可行性.方法:选择骨性关节炎(OA)患者行髋关节置换手术后外观大致正常的关节软骨, 消化、分离、体外培养扩增后种植到nHAC中,复合物体外培养后进行Ⅱ型胶原免疫组织化学检测和扫描电镜观察.结果:软骨细胞可以长入nHAC支架材料中.同期软骨细胞保持了正常的外形且可分泌Ⅱ型胶原.结论:nHAC可以作为软骨细胞的载体.     

干扰素α对人肺腺癌细胞系A549增殖抑制和诱导分化作用

目的 :探讨干扰素α(IFN α)对人肺腺癌细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法 :用不同质量浓度IFN α(2 5 μg/L ,75 μg/L ,10 0 μg/L)处理人肺腺癌A54 9细胞 ,记录细胞数目 ,进行甲基绿 派洛宁染色 ,测定软琼脂集落形成率。结果 :IFN α能明显抑制A54 9细胞的增殖 ,药物组与对照组之间差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,药物组与对照组比较增殖型细胞减少 ,分化型细胞数增加 ,双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制 ,对照组集落普遍比药物组集落大 ,且单个集落中细胞数目多 (P <0 0 5 )。结论 :IFN α对A54 9细胞具有增殖抑制和诱导分化作用