荧光定量PCR检测人类乳头瘤病毒在尖锐湿疣中的应用

目的　对尖锐湿疣 (CA)患者进行乳头瘤病毒 (HPV )DNA定量测定。方法　用聚合酶链反应 (PCR )测定HPVDNA的载量及HPV分型。结果　 2 0 0例尖锐湿疣患者中 198例疣体组织HPV测定阳性 ,2例阴性。在 84例疣体组织HPV6、11阳性者中有 12例合并HPV16、18阳性。 5例疣体组织及宫颈分泌物同时阳性。定量测定结果显示 :HPV6、11患者最高 2 .0× 10 8copy/ml ,最低 3 .0× 10 4copy/ml,HPV16、18患者最高 1.75× 10 7copy/ml,最低 3 .0× 10 5copy/ml。 结论　尖锐湿疣患者应用荧光定量PCR检测HPV阳性率高 ,并可快速区分致癌型及致疣型HPV感染 ,对尖锐湿疣复发及癌变作出可能性预测     

粘膜疾病

951179 用核酸杂交法研究人类乳头瘤病毒与口腔癌的相关性/张桐…//中华口腔医学杂志。-1995,30(1).-37～39 以放射性核素~(32)P标记HPV 11、HPV16E_6和HPV18 DNA探针,用核酸斑点杂交法,检测了部分口腔恶性肿瘤组织中的HPV相关序列。①用HPV11探针检测12例,结果阳性5例(5/12),弱阳性1例,6例为阴性。②用HPV16E_6探针检测10例,结果阳性6例     

病毒性皮肤病

20 0 2 0 735　人乳头瘤病毒 11型 E6基因完整开放阅读框架的克隆和鉴定 /马军 (西安交大免疫病理研究室 )…∥西安医科大学学报 .- 2 0 0 1,2 2 (5 ) .- 472～ 4 74为构建人乳头瘤病毒 11型 (HPV11) DNA疫苗 ,从尖锐湿疣病变组织中克隆疫苗靶基因 E6。方法 :利用改良提取染色体外游离 DNA的方法制备模板DNA,采用聚合酶链反应 (PCR)技术进行基因克隆。结果 :从病变组织中扩增出了全长人乳头瘤病毒 11型E6基因完整开放阅读框架 ,并插入中介载体 T- eosy中构建重组质粒 ,转化 JM10 9扩增后经酶切、PCR及测序分析 ,证实克隆成功。提示该实验的成功为下一步制备 HPV11的治疗性疫苗奠定了基础。图 4参 7　(沈子伟 )2 0 0 2 0 736　人乳头瘤病毒 16、18型分子流行病学及新株筛查 /董学君 (浙江绍兴市医院中心实验室 )…∥中华传染病杂志 .- 2 0 0 1,19(5 ) .- 2 81～ 2 84用棉签擦拭尖锐湿疣患者病灶 ,女性同时取宫颈分泌物 ,然后采用 PCR方法扩增 HPV公共型 HPV16型和 HPV18型的...     

角化性皮肤病

20131533 FGFR3基因体细胞突变与脂溢性角化病和黑棘皮病的相关性研究/牛贵业(山东省皮研所),于功奇,于永翔…∥中国麻风皮肤病杂志.-2013,29(5).-299~302采用聚合酶链反应(PCR)和DNA直接测序(Sanger测序)技术对48例脂溢性角化病和30例黑棘皮病组织中的FGFR3基因第7,10,15号外显子进行基因突变检测,以18例正常皮肤组织作为对照。结果:正常皮肤组织的FGFR3基因均为野生型,脂溢性角化病组织中有8例存在FGFR3基因突变位点,其分别为6例     

免疫缺陷性皮肤病

20 0 11583　用逆转录 -聚合酶链反应 ( RT- PCR)检测HIV- 1感染 /戴玉琳 (上海检验检疫局 )…∥临床皮肤科杂志 .- 2 0 0 0 ,2 9( 6) .- 330～ 332对 9份阳性标本进行 RT- PCR检测 ,8份标本扩增出两条核酸片段 ,1份标本仅扩增出一条核酸片段 ,阴性对照无片段。该方法的优点 :1敏感性强 ,为88.89% ( 8/ 9) ;2特异性高 ,扩增 HIV- 1的 gag、pol和env3个区的保守基因片段 ,且每个片段都做巢式扩增 ,并规定要扩增出两个片段才能确认 ,仅一个片段阳性定为可疑 ,特异性达 10 0 % ;3不仅能检测中国的HIV- 1流行株 ,也能检出非洲和欧洲的 H…     

大疱及疱疹性皮肤病

20 0 32 76 0　 H L A- 类基因与大疱性类天疱疮的相关性研究 /金岩 (复旦大学华山医院皮肤科 )…∥中华皮肤科杂志 .- 2 0 0 3,36 ( 7) .- 36 8～ 371用聚合酶链反应 -序列特异性引物寡核苷酸探针 ( PCR - SSOP )方法对上海地区汉族 56例类天疱疮患者及 150例健康人进行 H LA- DRB1、DQA1、DQ B1等位基因分型。结果显示 ,HL A-DRB1* 10 0 1与 DQ B 1* 0 50 1紧密连锁 ,其基因频率 BP组明显高于对照组 ,与 BP粘膜损害、靶抗原 BP180呈正相关 ;DRB 1* 12基因频率 BP组明显低于对照组 ,与 BP患者年龄和对皮质类固醇的治疗…     

实时荧光定量聚合酶链反应检测解脲脲原体、沙眼衣原体感染

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术,准确定量检测待检标本中解脲脲原体(Uu)、沙眼衣原体(Ct)的感染状况.方法采用实时FQ-PCR技术,检测标本650份;用常规PCR技术和实时FQ-PCR技术,对比检测了60例.结果FQ-PCR检测的650份标本,Uu-DNA、Ct-DNA检出率分别为24.08%(150/650)、16.00%(104/650),总检出率为36.00%(234/650).常规PCR结果重复检测时,14例Uu阳性者中2例变为阴性,而46例阴性者中3例变为阳性;10例Ct阳性者中1例变为阴性,而50例阴性者中2例变为阳性;FQ-PCR结果重复检测时完全吻合.结论实时FQ-PCR是检测Uu、Ct一个较好的方法.     

皮肤鳞状细胞癌中人乳头瘤病毒的检测

目的:检测皮肤鳞状细胞癌(SCC)皮损中的人乳头瘤病毒(HPV)并探讨其在SCC发病中的作用.方法:用原位杂交(ISH)、聚合酶链反应技术(PCR)检测SCC患者43例,健康者28例标本组织切片中的HPV6、11、16、18、31、33.结果:43例SCC中有2例肢端部位皮损呈HPV DNA阳性,检出类型为HPV16和HPV33.其中1例标本中HPV16和HPV33同时阳性.对照组全部为阴性.结论:HPV16等6种黏膜型HPV可能与肢端以外SCC的发生无相关性,而与肢端部位SCC可能有关联性.     

热休克蛋白在尖锐湿疣组织中的检测及其与HPV感染相关性

目的　探讨热休克蛋白 70(HSP70)在尖锐湿疣(CA)组织中的检测及其与人乳头瘤病毒 (HPV)感染的关系。方法　采用免疫组化法检测了 24例CA、46例宫颈癌和 28例正常宫颈组织HSP70,用PCR技术对各组织标本的HPV-DNA进行检测和 6, 1 1, 1 6, 1 8分型。结果　HSP7 0在CA和宫颈癌组的阳性率显著高于正常宫颈对照组 (P<0. 01)。CA组HPV6, 11型DNA阳性者HSP70的检出率显著高于阴性者(P<0. 05),宫颈癌组HPV16, 18型DNA阳性者与阴性者HSP70的检出率差异无显著性(P>0. 05)。结论　HSP70的表达与尖锐湿疣的发病有关,HSP70在尖锐湿疣组织中的表达与HPV的感染明显相关。     

表皮松解性角化过度型鱼鳞病二例及其基因突变的研究

目的 研究二例表皮松解性角化过度型鱼鳞病患者基因突变情况。方法 取患者皮损进行组织病理及电镜检查;提取患者外周血DNA,采用聚合酶链反应及DNA直接测序方法,检测患者皮损角蛋白10(K10)及角蛋白1(K1)基因突变;等位基因特异性引物PCR及限制性内切酶片段长度多态性方法筛查正常人群中该等位基因频率。结果 2例患者均存在K1或K10基因的杂合点突变,即K10基因第2140位G→A,K1基因第4226位G→A,分别导致K10第156位的精氨酸变为组氨酸(R156H)及K1第477位氨基酸从谷氨酸变为赖氨酸(E477K),而正常对照无此替代。结论 K10R156H及K1E477K为导致这2例患者临床表型的特异突变。     

聚合酶链反应检测尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒DNA

我们应用聚合酶链反应(PCR)检测了39例尖锐湿疣患者疣组织及其中5例患者血液中人乳头瘤病毒(HPV)的DNA,结果显示疣组织中HPV 6型的阳性率为76.92％(30例),HPV 11型的阳性率为12.82％(5例),HPV 6、11型同时阳性率为10.26％,HPV 16、18、31、33、52b、58型检测结果为阳性,5例患者血液中未检测到HPVDNA。检测结果表明:尖锐湿疣患者疣组织中HPV的总阳性率为100％,其HPV亚型主要为HPV 6型和11型,同一患者可同时存在二种HPV亚型的感染,PCR是检测尖锐湿疣HPV DNA快速、准确、有效的方法。     

遗传性皮肤病

20 0 3 1 2 97　痒疹样营养不良型大疱性表皮松解症一家系的基因突变 /姜薇 (北京大学第一医院皮肤科 )…∥中华皮肤科杂志 . 2 0 0 2 ,3 5 ( 6) . 442～444鉴定一痒疹样营养不良型大疱性表皮松解症家系的基因突变 ,为进一步开展基因诊断和基因治疗奠定基础。应用聚合酶链反应 (PCR )、DNA直接测序明确突变位点 ,根据突变位点设计等位基因特异性引物 ,用PCR来检测突变位点以及采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和克隆测序进一步确定该家系的致病原因。结果 :该家系中患者COL7A1基因的 87号外显子存在剪接位点突变 ,导致 87号对显子…     

人类乳头瘤病毒感染的女性及其男性性伴在人类乳头瘤病毒损害和病毒类型上的低一致性

作者对用脱落细胞巴氏涂片异常的270例妇女及其男性性伴用阴道镜、阴茎镜及原位杂交(ISH)技术进行检查,男性性伴ISH阴性者用聚合酶链反应(PCR)进行复检。结果显示女性人类乳头瘤病毒(HPV)DNA最高检出率是在宫颈上皮内肿瘤(CIN-Ⅲ)损害中,25例中24例ISH阳性,阳性率为96％,其中HPV16是最常见的类型,检出率为73.1％。在所有270例男性中,193例(71.5％)经组织学证实有HPV感染,尖锐湿疣(CA)23例中ISH阳性20例(87％),阴茎上皮内肿瘤(PIN)20例中ISH     

性病

942174 聚合酶链反应检测生殖器疣与癌中人乳头瘤病毒/刘元林…//中华皮肤科杂志。-1994,27(3)。-148～149 采用一种新建立的总引物介导的聚合酶链反应(PCR)检测多种人乳头瘤病毒(HPV)基因型别,结果证明生殖器疣与癌(阴茎鳞癌及宫颈鳞癌)中HPVDNA的阳性率较既往免疫组化及核酸分子杂交检测结果有显著提高;所用的实验标本可以是新鲜组织或存挡2～15年的石蜡包埋组织,且仅需3～4小时,表明PCR不     

寻常性银屑病患者肿瘤坏死因子α基因启动子多态性的检测

有研究表明,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与银屑病关系密切^[1],TNF-α基因极可能是银屑病的一个重要候选基因。在TNF-α基因启动子区域内存在着多态性位点,尤以-238、-308位点的G→A碱基变化较为多见,通常将该位点为G时定义为TNF1,为A时定义为TNF2^[2]。我们采用聚合酶链反应(PCR),结合直接测序法,检测寻常性银屑病患者TNF-α基因启动子区域的多态性位点,探讨其在银屑病发病中的作用。     

双功能氧化酶2在尖锐湿疣患者皮损中的表达及与HPV型别关系的研究

目的:检测尖锐湿疣(CA)患者皮损中是否表达双功能氧化酶2(Duox2),并分析其与HPV6/11,16/18型别之间的关系,以初步探讨其与CA发病之间的可能联系。方法:用PCR-荧光探针法检测40例CA患者皮损及对照组(20例,正常皮肤组织)中Duox2的mRNA表达水平并比较,聚合酶链反应(PCR)检测及鉴定CA组织中人乳头瘤病毒(HPV)感染类型:HPV6/11、HPV16/18。结果:CA组患者皮损中Duox2 mRNA表达水平明显高于对照组(t=-0.24,P=0.007)。40例患者中仅HPV6/11阳性23例,仅HPV 16/18阳性8例,HPV6/11DNA阳性组Duox2 mRNA表达水平明显低于HPV16/18DNA阳性组(t=4.92,P=0.001)。结论:CA患者中,HPV病毒感染特别是HPV16、18病毒会引起Duox2的水平增高。     

早期蕈样肉芽肿采用激光捕获显微切割及基因扫描分子诊断基因重排的研究

目的:研究激光捕获显微切割及基因扫描定性检测T细胞受体(TCR)_γ基因重排在早期蕈样肉芽肿(MF)细胞中表达的可行性.方法:激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)分离早期MF中的肿瘤细胞,荧光标记引物双重聚合酶链反应(PCR)和基因扫描(GeneScan)分析TCR _γ基因重排.结果:9例早期MF的TCR_γ/基因重排检出率为66.7%(6/9).2例肿瘤期MF的检出率为100%.结论:激光捕获显微切割技术可用于诊断早期MF的TCR_γ基凶重排检测.     

多发性脂囊瘤角蛋白17基因的突变研究

目的:研究多发性脂囊瘤(SM)角蛋白17基因的突变,为进一步开展基因诊断和基因治疗奠定基础。方法:抽取多发性脂囊瘤患者、患者父母以及100例正常人静脉血提取基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)的方法对角蛋白17外显子1及其侧翼和外显子6进行扩增,并对其PCR产物直接进行双向测序以检测突变。结果:在家系中两例患者第42位密码子由CTG突变为CCG,结果导致角蛋白17 V1区杂合错义突变(L42P),即亮氨酸由脯氨酸替代,而此家系中的正常人和与该家系无关的100例正常人的DNA测序结果未发现此突变。结论:此家系中患者表型可能由角蛋白17基因头区的L42P突变所致。     

核酸原位杂交和聚合酶链反应法检测78例尖锐湿疣HPV DNA分析

尖锐湿疣(CA)是由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的性传播疾病。为从分子水平上诊断和鉴别诊断尖锐湿疣，我们应用HPV6／11 DNA探针核酸原位杂交和聚合酶链反应(PCR)法对尖锐湿疣组织中HPV进行了检测，报道如下。     

咽拭子擦拭检测皮肤疣人乳头瘤病毒分型的敏感性研究

目的研究咽拭子擦拭皮肤疣表面检测人乳头瘤病毒(HPV)分型的敏感性,改进皮肤疣HPV分型检测的取材方法。方法招募50例皮肤疣患者,用被细胞保存液浸湿的咽拭子采样头用力擦拭靶疣表面10次,再用外科手术刀片刮除同一疣体的部分疣体组织,两组方法取材的样本均低温保存;采用聚合酶链反应(PCR)、基因测序和TA克隆技术检测两组样本的HPV型别,通过与刀片刮除法的HPV型检测结果比较,计算咽拭子擦拭法的敏感性。结果刀片刮除、咽拭子擦拭组的HPV型检出率分别为100%(50/50)和92%(46/50),咽拭子擦拭法的敏感性为92%。结论咽拭子擦拭法可作为检测皮肤疣HPV型的常规取材方法。