SPE-GC-ECD法测定中成药中20种有机氯类农药残留量

目的：建立中成药中20种有机氯农药残留量的测定方法。方法：采用正己烷作为提取溶剂，经弗罗里硅土小柱净化，选用电子捕获检测器（ECD）进行气相色谱测定。结果：20种有机氯农药在0．4～500μg·L^-1范围内呈良好的线性关系；检测限在0．04～2．62μg·L^-1之间，定量限存0．12～7．94μg·L^-1之间；低（5μg·L^-1）、中（50μg·L^-1）、高（100μg·L^-1）3个水平的添加回收试验的回收率（n=18）为72．2～125．3％，各回收率的RSD在3．2％～20．7％之间，符合残留量测定的有关要求。结论：方法简便、准确可靠，重复性较好，可作为中成药中有机氯农药残留的检验方法。     

静脉滴注注射用脑蛋白水解物致过敏性休克1例

患男,43岁,四肢进行性无力半年,智力减退1月余,医师以“四肢无力待查”收住院。患者于2009年6月23日入院,医生所开的静脉输液为：（1）50g·L^-1葡萄糖注射液500mL＋100g·L^-1氯化钾注射液i0mL;（2）9g·L^-1氯化钠注射液250mL＋注射用脑蛋白水解物180mg;（3）9g·L^-1氯化钠注射液500mL＋100g·L^-1氯化钾注射液15mL。无口服药。当日下午2：30开始静脉滴注9g·L^-1氯化钠注射液250mL＋注射用脑蛋白水解物（哈尔滨三联药业有限公司,090111B1）180mg,滴速50滴／min。2：40患者出现呼吸困难、恶心（未吐）、大汗淋漓、     

HPLC测定非冷冻人全血中吲达帕胺及相对生物利用度

目的：建立人全血中吲达帕胺的HPLC—UV测定法，研究2种吲达帕胺片的相对生物利用度。方法：全血样品液液萃取后，经Diamonsil C18柱（4．6mm×200mm，5μm）分离，240nm检测，流动相为乙腈-0．1％三乙胺溶液（磷酸调pH至4．0）（38：62，v／v），流速为1．0mL·min^-1。18名健康志愿者采用随机交叉方式分别单次口服吲达帕胺片T或R 5mg，在不同时间点取血，样品以新建立的HPLC—UV法测定，研究比较2制剂的药动学及相对生物利用度。结果：吲达帕胺与全血中内源性杂质分离度好，吲达帕胺浓度在3．1～500μg·L^-1范围内与峰面积比线性良好，最低定量浓度为3．1μg·L^-1。方法回收率为95．6％-102．6％，日内精密度（RSD）小于14．2％，日间精密度（RSD）小于9．9％。2种制剂的Cmax为（250．9±84．1）μg·L^-1和（245．4±78．8）μg·L^-1；Tmax为（2．4±0．5）h和（2．4±0．5）h；AUC0-72为（4417．4±976．3）μg·h·L^-1和（4372．7±942．0）μg·h·L^-1；T1/2为（21．9±8．6）h和（21．4±5．5）h。结论：该方法选择性好，灵敏度高，可用于吲达帕胺的体内过程研究。药动学参数经方差分析表明吲达帕胺片T和R中吲达帕胺的主要药动学参数之间均无明显差异，双单侧t检验结果表明2种制剂为生物等效制剂。     

何首乌水溶性成分2,3,5,4''-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对内皮细胞表达VEGF的影响

目的研究何首乌水溶性成分2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法在ECV304细胞培养基中加入LPC(2.5 mg·L-1)或LPC与ST I共孵24 h,收集各组条件培养基,用基础酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组条件培养基中VEGF蛋白含量;用原位杂交法、RT-PCR及Realtime RT-PCR法检测LPC对内皮细胞VEGFmRNA的表达及ST I的影响.结果ECV304细胞暴露于LPC后,VEGF蛋白分泌明显增加;加入STI后VEGF蛋白含量明显降低;LPC可以使ECV304中VEGF mRNA的表达明显升高,并使VEGF165 mRNA的表达升高;ST I可剂量依赖性地抑制VEGF165 mRNA的高表达.结论LPC能诱导ECV304细胞表达高水平的VEGF蛋白及VEGFmRNA,1×10-5mol·L-1ST I可抑制LPC的作用,降低VEGF的高表达.     

高效液相色谱法测定beagle犬血浆中神衰果素的浓度

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定beagle犬血浆中神衰果素的含量的方法。方法：色谱柱采用Diamon-sil ODS C18柱（4．6mm×150mm，5μm），以乙腈-甲醇-0．02mol·L^-1磷酸二氢钠缓冲液（1：9：90）（磷酸二氢钠缓冲液用磷酸调pH3．0）为流动相，原儿茶醛为内标；流速为1．0mL·min^-1；柱温为30℃；检测波长为270nm。结果：HPLC法测定beagle犬血浆中神衰果素的线性范围为21．3-4260μg·L^-1，r=0．9995.低（42．6μg·L^-1）、中（426μg·L^-1）、高（2130μg·L^-1）3个质量浓度的方法回收率分别为（96．7±13．5）％，（95．6±7．6）％，（99．9±1．4）％，日内、日间RSD均小于15％；分析方法的最低定量限为21．3μg·L^-1。结论：本方法适用于神衰果素血药浓度测定和药动学研究。     

西咪替丁与新鲜冰冻血浆联用致变态反应1例

患者,女,66岁。因糖尿病肾病及低蛋白血症就诊。入院体检：体温36．5℃,脉搏82次·min^-1,血压130／60mmHg（1mmHg=0．133kPa）,血糖11．8mmol·L^-1,尿素氮9．8mmol·L^-1,尿蛋白5．0g·L^-1,总蛋白47．2g·L^-1,清蛋白23．4g·L^-1。患者双下肢中度指凹性水肿。在进行常规治疗时发现,输入血清蛋白时,     

何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对内皮细胞表达VEGF的影响何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对内皮细胞表达VEGF的影响

目的研究何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法在ECV304细胞培养基中加入LPC(2.5 mg·L^-1)或LPC与ST I共孵24 h，收集各组条件培养基，用基础酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组条件培养基中VEGF蛋白含量；用原位杂交法、RT-PCR及Realtime RT-PCR法检测LPC对内皮细胞VEGF mRNA的表达及ST I的影响。结果ECV304细胞暴露于LPC后，VEGF蛋白分泌明显增加；加入ST I后VEGF蛋白含量明显降低; LPC可以使ECV304中VEGF mRNA的表达明显升高, 并使VEGF165 mRNA的表达升高；ST I可剂量依赖性地抑制VEGF165 mRNA的高表达。结论LPC能诱导ECV304细胞表达高水平的VEGF蛋白及VEGF mRNA，1×10^-5 mol·L^-1 ST I可抑制LPC的作用，降低VEGF的高表达。     

眼镜蛇毒神经生长因子诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡作用的研究

目的：研究广西眼镜蛇毒神经生长因子（Nerve growth factor，NGF）对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡。方法：应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法（ATP—TCA法）测定不同质量浓度（0．0125，0．025，0．05，0．1，0．2g·L^-1）NGF处理24，48，72，96h对人鼻咽癌CNP2生长的抑制率；Hoechst 33342荧光染色观察凋亡细胞的形态；琼脂糖凝胶电泳测定DNA断裂状况；流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率。结果：不同浓度的NGF能抑制CNE-2细胞增殖，并呈浓度时间效应关系，作用24，48，72，96h的半数抑制浓度（IC50）分别为0．213，0．095，0．048，0．033g·L^-1；经NGF（0．1g·L^-1）处理细胞48h后，荧光染色呈现典型的细胞凋亡形态学特征；DNA凝胶电泳可见凋亡细胞特有的DNA片段；0．（15，0．1，0．2g·L^-1 NGF作用48h后，CNB2细胞被阻滞于G0／G1期，细胞凋亡率分别为（28．2±2．0）％、（39．9±1．9）％、（50．3±1．3）％。结论：NGF通过诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡而产生抗鼻咽癌活性。     

盐酸伊托必利缓释片在犬体内的药动学

目的：对盐酸伊托必利缓释片和分散片在家犬体内进行药动学研究。方法：6只家犬按照单剂量双周期实验设计方案给药，建立一个测定狗血中的伊托必利的高效液相色谱法。结果：2种制剂在体内均符合单隔室一级吸收模型，缓释片和分散片Cmax分别为（548．6±54．2）μg·L^-1和（798．1±42.5）μg·L^-1。tmax分别为（6．7±1．2）h和（1．83±0．25）h，应用3P97药动学程序进行计算，t1/2（Ke）分别为（6．0±0．6）h和（5．72±0．26）h，AUC0→∞分别为（6．6±0．5）mg·L^-1·h和（7．0±0．6）mg·L^-1·h。结论：盐酸伊托必利缓释片具有显著缓释作用。     

高效液相色谱法测定盐酸苯乙双胍的有关物质

目的：建立高效液相色谱法测定盐酸苯乙双胍的有关物质。方法：采用Phenomenex—ODS—C18色谱柱（250mm×4．60mm，5μm）；以甲醇-5mmol·L^-1磷酸二氢钾溶液（含有10mmol·L^-1十二烷基磺酸钠，用磷酸调节pH至3．5±0．05）（72：28）为流动相；流速1．0mL·min^-1；检测波长216nm；柱温：室温。结果：盐酸苯乙双胍的线性范围为3～300μg·mL^-1，r=0．9999，检测限为0．5ng，精密度为0．4％；双氰胺的线性范围为0．05～0．3μg·mL^-1，r=0．9999，检测限为0．15ng，精密度为0．6％。结论：本方法简便可靠，灵敏度高，重现性好，可用于盐酸苯乙双胍的质量控制。     

中华眼镜蛇毒神经生长因子对PCI2细胞K阿片受体蛋白质表达的影响

目的探讨中华眼镜蛇毒（NajaNajaAtra）神经生长因子（nNGF）对PCI2细胞K阿片受体蛋白质表达的影响。方法PCI2细胞分为正常对照组和给药组,采用Westernblot方法检测各组PCI2细胞K阿片受体蛋白质的表达。结果①nNGF的25、50、100μg·L-1 3个剂量中,50和100μg·L-1 nNGF下调PCI2细胞K阿片受体蛋白质的表达,50μg·L-1 剂量组下调最明显（P〈0．01）,100μg·L-1 剂量组下调（P〈0．05）。②50μg·L-1 nNGF分别处理PCI2细胞1、3、5、7、10d后,其一（阿片受体蛋白质表达呈降低趋势,其中d5、7下调（P〈0．05）,d10下调明显（P〈0．01）。③10μg·L-1 吗啡可上调PCI2细胞K阿片受体蛋白表达,而10μg·L-1 纳络酮对其无影响,二者分别都能逆转nNGF的下调效应,但是二者共存时不能逆转nNGF的下调效应。结论nNGF诱导PCI2细胞分化中,可引起PCI2细胞K阿片受体蛋白质表达的下调效应,该效应能被吗啡或纳络酮逆转,但二者共存不能被逆转效应。     

锥面玻碳电极的制作及其在双黄连粉针剂测定中的应用

目的：研制抗氢气吸附的锥面玻碳电极，建立溶出伏安法测定双黄连粉针中铅的方法。方法：电极制作过程中将玻碳棒镶嵌在电极套的锥面。采用微量样品酸法恒温消化双黄连粉针，选用DTD-5恒温消解仪，100℃预消解30min，200℃消化30min除去残酸。底液为20mg·L^-1H^2＋-0．12mol·L^-1HCl。结果：锥面玻碳旋转电极传质速度快，抗氢波干扰能力强，测量2．0μg·L^-1Pb^2＋相对标准偏差为2．44（n=9）％。测量时电极不易中毒。铅的浓度与溶出峰高在0．05～1．0μg·L^-1范围内呈线性关系；样品量20mg用于测量，测得的回收率为102．92％，样品测量的相对标准偏差RSD为4．54（n=9）％，检出限0．05μg·L^-1。结论：锥面玻碳电极抗氢气吸附能力强，建立了测定双黄连粉针中微量铅的方法。     

黄蓝颗粒体外的抗巨细胞病毒、风疹病毒作用

目的：探讨黄蓝颗粒体外抗巨细胞病毒（HCMV）、风疹病毒（RuV）活性及其作用机制。方法：根据病毒复制周期，设计3种药物抗病毒作用方式来观察黄蓝颗粒对HCMV、RuV的作用。通过观察细胞病变效应（CPE）、噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞存活率，以确定该药物体外抗HCMV、RuV的活性。结果：黄蓝颗粒既不能阻断病毒吸附，亦不能直接杀灭病毒，而是通过抑制病毒生物合成发挥抗病毒活性。黄蓝颗粒对HEL细胞的半数毒性浓度（TC50）为1．71g·L^-1，对HCMV半数抑制质量浓度（IC50）为0．09g·L^-1，治疗指数（TI）为19．0；黄蓝颗粒对Vero细胞的TC50为1．96g·L^-1，对RuV的IC50为0．10g·L^-1，TI为19．6。结论：黄蓝颗粒通过抑制病毒生物合成机制发挥抗HCMV、RuV的作用。     

HPLC法同时测定三七中7种皂苷含量

目的：建立HPLC法同时测定三七中7种皂苷含量的方法。方法：Hypersil BDS C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-水（B）二元梯度洗脱；流速：1．0ml·min^-1；检测波长203nm；柱温：室温。结果：三七皂苷R1，人参皂苷Rb1，Rb2，Rc，Rd，Rg1，Re的线性范围分别为5．6～140μg·ml^-1（r=0．9992）5．8～144μg·ml^-1（r=0．9991）、5．9-148μg·ml^-1（r=0．9997）、6．1～152μg·ml^-1（r=0．9992）、5．8～144μg·ml^-1（r=0．9992）、5．8～146μg·ml^-1（r=0．9990）、5．8～144μg·ml^-1（，=0．9994）；回收率98．5％～100．1％。结论：HPLC法可同时并且简单快速分离三七中7种皂苷。     

TFARl9蛋白协同米非司酮对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响

目的初步探讨TFARl9协同米非司酮（MIF）对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响。方法构建TFARl9真核表达载体，用脂质体介导的方法转染PC-3M细胞。MTT法检测5、10、20、50和100μmol·L^-1 MIF作用于前列腺癌PC-3M细胞24～96h的吸光度（A）值。在转染TFARl9的细胞中加入20mol·L^-1 MIF培养24、48h，MTT比色法检测细胞增殖，原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡率，透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果构建了PCI-neo-TFARl9真核表达载体并在转染的PC-3M细胞中得到了瞬时表达。MTT实验表明，与对照组相比，5、10μmol·L^-1 MIF组的A值差异无统计学意义（P〉0．05），20、50和100μmol·L^-1MIF组的A值差异有统计学意义（P〈0．01），MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈时间、剂量依赖性；转染PCI-neo-TFARl9并加入20mol·L^-1 MIF后，与对照组及单独应用MIF组相比，细胞生长明显受到抑制（P〈0．01），细胞凋亡率明显增加（P〈0．01），透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征（细胞体积缩小，核皱缩、碎裂，染色质呈块状边集等）。结论TFARl9蛋白能够协同米非司酮促进前列腺癌PC-3M细胞凋亡，有望成为前列腺癌的辅助治疗药物。     

液相色谱-串联质谱法研究人体内马来酸氨氯地平滴丸的生物等效性

目的：研究健康人口服马来酸氨氯地平滴丸后的药动学和生物等效性。方法：20个健康受试者采用随机分组自身交叉对照试验设计，口服马来酸氨氯地平滴丸10mg后应用LC／MS／MS测定血浆中氨氯地平浓度，以DAS2．0软件计算其药动学参数和评价生物等效性。结果：在选定的色谱／质谱条件下氨氯地平与内标及血浆杂质分离良好，在0．2～16．0μg·L^-1范围内线性良好。相对回收率大于95．420，日内和日间RSD小于12．6%,氨氯地平受试制剂（T）和参比制剂（R）的主要药动学参数：tmax分别为（5．7±0．8）h和（6．0±1．0）h，Cmax分别为（5．3±1．4）μg·L^-1和（5．3±1．4）μg·L^-1；t1/2分别为（43．7±4．4）h和（44．6±4．3）h；AUC0→∞分别为（188．2±49．6）μg·h·L^-1和（185．0±44．8）μg·h·L^-1；用面积法（AUC0→∞）估算的马来酸氨氯地平滴丸相对生物利用度为（102．0±13．6）%。结论：用LC／MS／MS测定血浆中氨氯地平浓度，杂质无干扰，定量限低，重复性好，准确度高。受试的马来酸氨氯地平滴丸与参比的马来酸氨氯地平片（麦利平）生物等效。     

HPLC—MS测定十味龙胆花颗粒中的龙胆苦苷和小檗碱

目的：建立一种快速灵敏的同时测定十味龙胆花颗粒中的有效成分龙胆苦苷和小檗碱的HPLC—MS方法。方法：样品用50％甲醇溶液超声提取，采用Zorbax SBC18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，以含0．2mmol·L^-1醋酸钠的1％醋酸水溶液（A）-甲醇（B）为流动相进行梯度洗脱（0～10min，33％B；19min，60％B；19．01min，80％B），流速0．8mL·min^-1；在ESI正离子模式下，采用选择性离子监测方法（0—14min，m／z 379；14～22min，m／z 336）。结果：龙胆苦苷、小檗碱的线性范围分别为0．030～30．0μg·mL^1（r=0．9992）和0．004～10．0μg·mL^-1（r=0．9990），检出限分别为0．010μg·mL^-1和0．0013μg·mL^-1样品加样回收率为99．2％～103．3％，日内、日间精密度试验的RSD均低于5％。结论：方法快捷、准确，重复性好，可用于药品十味龙胆花颗粒的分析。     

姜黄素调节纤维黏连蛋白整合素途径增强Raji细胞化疗敏感性的研究

目的：研究纤维黏连蛋白（FN）整合素途径在调节淋巴瘤细胞对化疗药物敏感性中的作用及姜黄素体外增敏淋巴瘤细胞的作用及其机制.方法：采用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测阴性对照组、姜黄素（Cur）组、阿霉素（ADR）组、Cur＋ADR组、FN＋ADR组、β1整合素抗体（anti-integrin）＋ADR组、FN＋anti-integrin＋ADR组、Cur＋FN＋ADR组各组细胞的增殖抑制率.金氏公式进行联合用药分析.结果：Cur与ADR合用对Raji细胞呈单纯相加至增强效应.Raji细胞与FN作用后,再给予半数致死剂量的ADR（689.67μmol·L^-1）,细胞增殖抑制率为32.5%,与未加FN的Raji细胞（抑制率53.1%）相比,两组之间差异极具显著性（P＜0.01）.将抗β1整合素抗体阻断Raji细胞上与FN结合的β1整合素,ADR对细胞的抑制率恢复至54.6%.Raji细胞株与FN和6.25 μmol·L^-1Cur同时培养,ADR对其的抑制率为59.2%,显著高于FN＋ADR组（P＜0.01）.结论：FN/β1整合素参与调节Raji细胞对ADR的敏感性,Cur可能通过下调整合素的表达抑制FN/β1整合素途径的激活来增加Raji细胞株对化疗药物的敏感性.     

藻酸双酯钠对血管内皮细胞的生长及其与中性粒细胞黏附功能的影响

目的 探讨藻酸双酯钠（polysaccharide sulfate，PSS）对体外培养血管内皮细胞生长以及对血管内皮细胞与中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMN）黏附功能的影响。方法 体外培养人类脐静脉血管内皮细胞（细胞株ECV-304），分别经50，100，150，200，250μg·mL^-1不同终浓度处理或不经处理后，采用MTT法观察各组ECV-304生长情况。建立血管内皮细胞缺氧／复氧（Hypoxia／Reoxygenation，H／R）模型，检测经或不经H／R及PSS处理条件下培养的ECV-304与脑梗死病人外周血PMN的黏附率。结果 PSS浓度≤200μg·mL^-1各组ECV-304活力高于未经PSS处理的对照组，差异有统计学意义（P〈0．01），其中PSS浓度为100μg·mL^-1组最明显。PMN与非H／R处理的体外培养的ECV-304的黏附率在脑梗死组较健康组明显增高；ECV-304经H／R处理后与脑梗死病人PMN黏附率增高。体外培养的ECV-304无论是否经H／R处理，培养液中加入PSS（PSS终浓度100μg·mL^-1）组与不加PSS组比较，ECV-304与脑梗死病人PMN的黏附率明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 适当浓度的PSS能促进体外培养正常血管内皮细胞的生长，降低H／R血管内皮细胞与中性粒细胞的黏附能力。     

组织型纤溶酶原激活物重组腺病毒载体的构建及其转染ECV304细胞后对血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的 评估外源性组织型纤溶酶原激活物(t-PA)对ECV304细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用细菌内同源重组技术快速构建Adt-PA腺病毒重组质粒,转染不同病毒滴度Adt-PA至ECV304细胞,转染比率(MOI)分别为1∶10、1∶50、1∶100,选取合适MOI值;病毒转染后检测ECV304细胞内t-PA蛋白的表达.然后将培养的ECV304细胞分为二组,在培养液中加入Adt-PA混合培养24 h和48 h分别作为实验组1和实验组2,加入空病毒Ad混合培养48 h作为对照组,比较各组细胞中VEGF mRNA的转录和蛋白表达水平.结果 成功构建了重组腺病毒Adt-PA.当MOI为1∶50时,细胞转染效率为(69.6±21.2)%,且对ECV304细胞增殖具有一定的促进作用;Adt-PA转染ECV304细胞后在72 h内随着时间的延长其蛋白表达量逐渐升高(P<0.01);细胞内VEGFmRNA的转录水平和蛋白表达量在实验组1和2中较对照组均有明显升高(P<0.01).结论 构建的t-PA腺病毒表达载体可有效感染ECV304细胞并可显著增加其VEGF的表达水平.