miR-144和miR-502-3p在原发性肝细胞癌术后复发患者中的表达及临床意义

目的探讨miR-144和miR-502-3p在原发性肝细胞癌术后复发患者中的表达及临床意义。方法从我院肝癌数据标本库中挑选82例原发性肝癌深低温冻存组织标本。其中50例早期复发组(术后1年内肝内出现复发病灶);32例非早期复发组(术后超过2年未出现肝内复发病灶)。运用实时荧光定量PCR验证miR-144、miR-502-3p在两组肝癌组织中的表达水平。结果相对于非早期复发组,miR-144在肝癌早期复发组中表达上调[(43.893±107.890)vs(6.321±6.845),P=0.018];其在肝癌组织中的表达仅与肝癌术后早期复发有关(P<0.05)。而miR-502-3p在肝癌早期复发组中表达下调[(6.702±9.775)vs(26.467±39.613),P=0.009];其在肝癌组织中的表达与肿瘤直径、肝癌术后早期复发、脉管癌栓、肝硬化、Edmonson病理分级有关(P<0.05)。结论 miR-144、miR-502-3p与肝癌的早期复发转移密切相关,并且可能是肝癌早期复发的分子标记物以及未来肝癌靶向治疗的有效靶点。     

儿童急性白血病耐药相关microRNA的筛选

【目的】 寻找?鉴定与儿童急性白血病耐药相关的microRNA,为治疗耐药白血病探索新的途径?【方法】 在不同的阿霉素(DOX)浓度下培养原代细胞K562/WT,建立三种不同浓度的耐药白血病细胞株K562/DOX?提取K562/WT及其耐药细胞株的RNA进行基因芯片检测?qRT-PCR等方法,初步筛选可能与白血病细胞耐药相关的microRNA?收集治疗前?治疗后骨髓完全缓解及早期复发的儿童急性白血病的骨髓样本,提取RNA检测筛查的白血病细胞耐药相关的microRNA的表达,进一步验证体外实验的结果?【结果】 ①在K562/DOX耐药细胞株,miR-20a?miR-188-3p?miR-214等microRNA表达上调,而miR-331-5p?miR-338-5p?miR-27a?miR-15a和miR-455-3等的表达明显下调?qRT-PCR进一步证实了上述结果,并且发现miR-331–5p 和 miR-27a的表达与P-gp的表达呈反向关系?②在复发的骨髓样本组(13例),miR-331–5p 和miR-27a表达明显低于治疗前骨髓组(24例)和治疗后完全缓解组(11例),证明复发的儿童急性白血病耐药细胞存在miR-331-5p 和miR-27a低表达? 【结论】 耐药白血病细胞存在microRNA差异性表达,其中miR-331–5p 和miR-27a在耐药白血病细胞及复发的急性白血病细胞中低表达?推测miR-331-5p 和miR-27a可能在儿童急性白血病耐药中起到重要作用?     

mir-155-5p调控胃癌细胞肿瘤生物学特征的靶点研究

目的:将mir-155-5p在胃癌细胞过表达后,选用表达谱芯片筛选其靶基因,结合生物信息学预测选择部分两者的交集靶基因,研究其功能和作用机制。方法:采用Affymetrix真核生物基因表达谱筛选mir-155-5p调控的基因实验,然后通过Western blot技术检测筛选靶基因的蛋白表达。本研究采用了人类全基因组基因表达谱芯片筛选了mir-155-5p mimics,mir-155-5p mimics-nc和mir-155-5p mock转染胃癌MKN-45和BGC-823细胞的后差异表达基因。结果:mimics在转染胃癌细胞BGC-823中后,与mimics-nc组和mock组细胞相比,mimics组细胞的SMAD1、STAT1、CAB39、CXCR4和CA9的mRNA的表达量显著下调;mimics在转染胃癌细胞BGC-823和MKN-45后,与mimics-nc(MNC)组和mock(MOCK)组相比,mimics(MIMICS)组细胞的SMAD1、STAT1和CAB39的蛋白的表达下调。结论:SMAD1、STAT1、CAB39作为mir-155-5p的预测靶蛋白,mir-155-5p过表达可使其在胃癌细胞MKN-45和BGC-823中的表达水平下调。     

miR-144-3p在大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的表达及其靶向调控作用

目的探讨在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中,miR-144-3p表达的生理功能和作用机制,并预测其靶基因,为成骨细胞 分化的深入研究提供实验依据。方法采用大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,并在体外诱导间充质干细的成骨分化,通过 qRT-PCR 检测成骨分化标志基因（Runx2, OCN）以及miR-144-3p 的表达;通过向BMSCs 株转染miR-144-3p mimic 以及 miR-144-3p inhibitor,检测miR-144-3p 表达对BMSCs分化的影响,并通过Western blot 以及qRT-PCR检测miR-144-3p 靶蛋 白在RNA水平以及蛋白水平的表达变化。结果在体外诱导BMSCs成骨分化过程中,成骨分化标志基因（Runx2, OCN）的 表达量逐渐升髙,而miR-144-3p 的表达量则逐渐降低,到诱导成骨第21 天表达水平最低;检测各组ALP活性发现,相比于 对照组miR-144-3p mimics 转染组ALP活性显著降低（P<0.05）,miR-144-3p inhibitor 转染组ALP活性显著升高（P<0.05）;运 用多种靶基因预测数据库TargetScan、microRNA.org和miRanda对miR-144-3p进行靶基因的预测分析发现,smad4最可能是 miR-144-3p的靶基因;qRT-PCR结果表明,smad4在各组中的表达水平差异无统计学意义（P>0.05）;Western blot结果显示,smad4 在miR-144-3p mimics转染组表达显著下降,在miR-144-3p inhibitor转染组则显著升高,相比于对照组差异均有统计学意义（P< 0.05）。结论miR-144-3p参与调控大鼠BMSCs成骨分化,其抑制成骨分化的功能是通过降低smad4转录后的表达水平来实现。     

肝细胞癌组织中调控CDK2基因的靶miRNA的表达

目的通过筛选肝细胞癌及癌旁组织中microRNA差异表达谱探讨肝细胞癌组织中调控CDK2基因的靶miRNA。方法通过芯片分析临床收集的3例肝细胞癌与癌旁组织样本的miRNA差异表达谱,与miRNA生物信息数据库反向预测的miRNA进行比对,通过实时荧光定量PCR初步确定调控肝癌细胞CDK2基因表达的靶miRNA。利用FUNRICH软件对差异表达的miRNA进行GO富集分析和转录因子分析。结果通过比对芯片结果和反向预测结果筛选出9个miRNA与芯片结果一致,经qRT-PCR验证确定miR-18a-5p、miR-222-3p、miR-200a-3p、miR-375与临床样本的miRNA差异表达谱上/下调一致,其中miR-18a-5p、miR-222-3p表达上调,miR-200a-3p、miR-375表达下调。GO富集分析显示转录因子活性、细胞黏附分子活性、细胞核与胞质、转移酶活性富集程度高;筛选到5个与miRNA结合能力强的转录因子EGR1、SP1、POU2F1、SP4、FOXA1。结论初步确定miR-200a-3p、miR-375为肝细胞癌组织中调控CDK2基因的靶miRNA,与CDK...     

鼻咽癌差异表达miRNAs筛选研究

 【目的】应用miRNAs芯片筛选原代培养的鼻咽癌细胞差异表达miRNAs，并寻找差异表达miRNAs调控的靶基因，为进一步研究其在鼻咽癌发病机制中的作用打下基础。【方法】运用miRNAs芯片技术筛选原代培养的鼻咽癌细胞差异表达miRNAs，同时运用miRNAs特异的引物组对差异表达的miRNAs进行荧光定量RTPCR验证。运用靶基因预测软件并结合全基因组表达谱芯片结果预测差异表达miRNAs可能调控的靶基因，并利用westernblot技术检测预测的靶基因在原代培养的鼻咽癌细胞中的表达。【结果】miRNAs芯片结果显示，鼻咽癌中miR-203、miR-503、miR-424、miR-141和miR-148a表达下调，而miR-25、miR-195和miR-15a表达上调，其差异表达均在2倍以上；荧光定量RTPCR结果与miRNAs芯片的结果较符合；其中miR-203的预测靶基因为CCNG1和SPARC，Western blot结果显示，其在原代培养的鼻咽癌细胞亦高表达。【结论】miR-203、miR-503、miR-424、miR-141、miR-148a、miR-25、miR-195、miR-15a在原代培养的鼻咽癌细胞与正常鼻咽上皮细胞中存在差异表达；CCNG1和SPARC可能是miR-203调控的靶基因，可能参与了鼻咽癌的发生发展。     

鼻咽癌差异表达miRNAs筛选研究

【目的】应用miRNAs芯片筛选原代培养的鼻咽癌细胞差异表达miRNAs，并寻找差异表达miRNAs调控的靶基因，为进一步研究其在鼻咽癌发病机制中的作用打下基础。【方法】运用miRNAs芯片技术筛选原代培养的鼻咽癌细胞差异表达miRNAs，同时运用miRNAs特异的引物组对差异表达的miRNAs进行荧光定量RTPCR验证。运用靶基因预测软件并结合全基因组表达谱芯片结果预测差异表达miRNAs可能调控的靶基因，并利用westernblot技术检测预测的靶基因在原代培养的鼻咽癌细胞中的表达。【结果】miRNAs芯片结果显示，鼻咽癌中miR-203、miR-503、miR-424、miR-141和miR-148a表达下调，而miR-25、miR-195和miR-15a表达上调，其差异表达均在2倍以上；荧光定量RTPCR结果与miRNAs芯片的结果较符合；其中miR-203的预测靶基因为CCNG1和SPARC，Western blot结果显示，其在原代培养的鼻咽癌细胞亦高表达。【结论】miR-203、miR-503、miR-424、miR-141、miR-148a、miR-25、miR-195、miR-15a在原代培养的鼻咽癌细胞与正常鼻咽上皮细胞中存在差异表达；CCNG1和SPARC可能是miR-203调控的靶基因，可能参与了鼻咽癌的发生发展。     

风心病合并房颤患者心肌microRNA表达谱分析与靶基因预测

目的 研究风心病合并房颤患者心肌microRNAs的表达差异,预测其靶基因并分析其可能的生物学功能.方法 经知情同意,整群采集2013年1—12月收治的14例住院风心病房颤患者和8例风心病无房颤患者右心耳组织;提取总RNA进行miRNAs芯片杂交检测,应用RMA和FC法筛选差异表达的miRNAs,并用RT-PCR进行验证;运用生物信息学软件预测靶基因并分析其生物学功能.结果 与风心病无房颤组相比,风心病合并房颤组有22个miRNAs表达有差异,其中6个miRNAs表达上调,16个miRNAs表达下调;验证结果表明与风心病无房颤组比较,miR-661、miR-520d-5p和miR-145-5p表达显著下调(P<0.01);经GO和KEGG数据分析,差异miRNA靶基因的一部分亦与心肌纤维化相关.结论 该研究获得与房颤相关的差异miRNAs,可能是房颤新的生物标志物和潜在治疗靶点.     

CCl4诱导大鼠纤维化肝组织 microRNA 差异表达及其初步分析

目的：探索 microRNA 在四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠纤维化肝组织中的差异表达及其意义。方法采用 microR-NA 高通量测序分析技术检测对照组(n=10)与模型组(n=10)肝脏组织 microRNA 表达,对差异 microRNA 进行靶基因预测,对靶基因进行基因本(GO)分析、pathway 分析。结果对照组与模型组间筛选出37个差异 microRNA,上调29个,下调8个;从microRNA-基因网络图中发现关键上调为 miR-184、miR-10b-5p、miR-199a-3p 等;关键下调为 miR-200b-3p、miR-199a-5p、miR-125b-5p 等。结论模型组 microRNA 表达谱变化明显,肝纤维化的形成与 microRNA 调控细胞增殖、凋亡、细胞周期等有关。     

miRNA表达谱改变与儿童急性淋巴细胞白血病复发的相关性

摘 要: 【目的】 筛选与儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)预后相关的microRNA(miRNA),旨在寻找与ALL预后相关的分子标记物,为临床ALL患儿分层治疗提供实验室依据? 【方法】 采用基因芯片技术检测10例初发-缓解配对的ALL患儿骨髓细胞的miRNA表达谱(基因芯片组),定量RT-PCR(qRT-PCR)方法验证异常miRNA在ALL患儿骨髓细胞内的表达(qRT-PCR组),结合患儿临床资料分析异常表达的miRNA与ALL预后的关系?【结果】 基因芯片结果显示:初发患儿miR-708?miR-181b?miR-199a-3p?miR-320a和miR-145表达上调最为明显,而miR-223?miR-1244?miR-494?miR-124?miR-23a?miR-27a?miR-181a*和miR-23b表达下调最明显;qRT-PCR结果显示:miR-708?miR-223和miR-27a在ALL患儿骨髓细胞内表达与基因芯片结果一致.;无复发生存分析提示ALL初发时高表达miR-708?miR-223?miR-27a者,3年无复发生存率较高,反之预后较差?【结论】 miRNA是预测ALL预后的有效分子标记物,初发患儿miR-708?miR-27a和miR-223高表达提示预后良好,在指导临床ALL患儿分层治疗方面具有重要意义?     

miRNA-769-5p在乙型肝炎相关肝细胞癌中的表达

目的:研究乙型肝炎相关性肝细胞癌中异常表达的微小RNA(miRNAs)及其与肝细胞癌患者根治术预后的关系。方法:通过Taqman低密度芯片(TLDA)分析了显微切割福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样本中的肝细胞癌组织及癌旁组织中miRNA的表达,并在48例样本中验证了其中1个差异表达的miRNA(miR-769-5p)及与肝细胞癌患者根治性切除术预后的关系。结果:miR-769-5p在癌组织较癌旁组织中高表达,在48例显微切割的有、无早期复发肝细胞癌样本中验证了该结果并分析了miR-769-5p与肝细胞癌患者根治术预后的关系,结果发现miR-769-5p在早期复发者的癌组织中表达高于无早期复发者。但是,肿瘤中miR-769-5p的表达水平与复发时间及总生存时间无关。进一步分析发现miR-769-5p的表达可能与肿瘤的数目相关,而与肿瘤大小、包膜及肿瘤的分期无关。结论:miR-769-5p在乙型肝炎相关肝细胞癌组织中较癌旁组织高表达,且其表达水平可能与肿瘤的数目相关。     

人肝癌中p57kip2 mRNA及其蛋白表达研究

【目的】研究p57kip2基因在人体肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)不同阶段的mRNA和蛋白表达情况,以探讨HCC发生的分子生物学机制。【方法】运用原位分子杂交和免疫组化技术分别检测30例正常肝组织、30例癌周肝硬化和30例肝癌组织中p57kip2mRNA及P57kip2蛋白的表达情况。【结果】p57kip2mRNA表达:正常肝组织组未见表达,癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率分别为33.33%和16.67%。肝癌组分化好和分化差阳性表达率之间差异有统计学意义,相关分析呈正相关。P57kip2蛋白表达:正常肝组织组未见表达;癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率分别为56.67%和63.33%。肝癌组分化好者与分化差者阳性表达率之间差异有统计学意义,相关分析呈正相关。【结论】p57kip2基因mRNA和蛋白表达缺失或下降与HCC分化程度低呈正相关,提示p57kip2基因的失活可能是进展期HCC的晚期分子事件,并可能是一个新的预后指标。     

肝癌细胞株HepG2与正常肝细胞株7702差异微小RNA筛选

目的：初步探讨肝癌细胞株 HepG2与正常肝细胞株7702微小 RNA（miRNA）分子表达谱的差异。方法选取肝癌细胞株 HepG2与正常肝细胞株7702样本分别作为实验组和对照组,采用高通量的 miRNA微阵列芯片技术筛选两者间差异表达的 miRNA,并运用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）验证芯片结果的可靠性（样品间变化标准以上调或者下调2倍作为判定的阈值范围）。结果在肝癌细胞株 HepG2中,上调2倍的差异表达 miRNA分子有32个,其中上调超过8倍差异表达 miRNA有12个;下调2倍的差异表达miRNA有26个,其中下调超过8倍的miRNA分子有4个（P＜0．05）,miRNA上调与下调表达率差异有统计学意义。结论肝癌细胞株 HepG2与正常肝细胞株7702的差异表达 miRNA分子可能与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的发生、转移以及侵袭能力相关,为进一步研究与肿瘤相关的 miRNA在肝细胞癌发病机制中的作用奠定基础。     

MMP-1在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的明确MMP-1在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测MMP-1在正常肝组织和肝癌组织中的表达,采用卡方检验评估MMP-1表达与临床病理参数的相关性,对预后因素进行多元回归分析。结果 MMP-1在正常肝组织呈低表达,在肝癌组织中高表达,与肝细胞癌复发、TNM分期以及门静脉浸润显著相关(P<0.01)。在多元回归分析中,MMP-1表达是影响患者总生存率与无病生存率的独立预后因素(P<0.01)。结论 MMP-1可作为预测肝细胞癌患者复发和转移的新指标,也是预后不良的重要指标。     

MicroRNA-223表达与肝癌根治性切除术预后的相关性

 摘要：目的  识别可以作为肝癌根治性切除术患者预后标志物的microRNA（miRNA）分子。方法  利用miRNA微阵列方法对2例原发性肝癌及对应的肺转移性肝癌进行miRNA表达分析。将原发性和转移性肝癌中表达量有2倍差异的miRNAs作为候选miRNAs分子。在miRNA验证过程中，运用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分析37例肝癌及相应癌旁非肿瘤组织中候选miRNAs分子的表达，并将其与患者的临床病理特征及生存情况进行相关性分析。结果  最终选取8种miRNAs（miR-27b、122、142-5p、196a、223、590-5p、630及944）作为候选miRNA。只有miR-223表达水平与肿瘤分期、有丝分裂指数相关。将肝癌患者分为miR-223高表达组（25例）和miR-223低表达组（12例）后发现，miR-223高表达与较高T分期、淋巴结转移、较高丝分裂指数及较高Ki-67阳性指数相关。此外，miR-223高表达还与总体生存率和无病存活率下降相关（P <0.05），中位随访时间37.9个月[疾病复发危险比为16.267（95%CI：1.732，153.789）P =0.015]。结论  肝癌组织中miR-223异常表达与肝癌患者治疗结束后发生复发转移，以及无病生存时间和总生存率有关，通过检测肿瘤组织中miR-223 qRT-PCR反应有可能预测患者预后。

     

mir-130a-3p及smad 4在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 考察mir-130a-3p及靶基因smad 4在肝细胞癌(HCC)组织中表达及相关性,并分析两者表达与肝癌临床病理特征和预后的关系.方法 从石蜡组织包埋的51例肝癌组织及相应癌旁组织中提取总RNA,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测mir-130a-3p的表达,并采用免疫组织化学EliVision(IHC)法测定肝癌组织及癌旁组织中smad 4表达,分析两者相关性、与临床病理参数及总生存时间(OS)之间的关系.结果 mir-130a-3p在肝癌组织中的表达水平(1.38±0.15)显著低于癌旁组织(2.48±0.16)(P<0.001).在肝癌组织中,smad 4阳性表达率为72.5%(37/51),明显高于癌旁组织51.0%(26/51)(P<0.05).mir-130a-3p和smad 4在肝癌组织中的表达呈负相关性(rs=-0.431,P<0.05).mir-130a-3p和smad 4的表达水平与肝癌患者TNM分期有关(P<0.05),与年龄、性别、有无淋巴结转移、有无脉管癌栓及病理分级无关.肝癌组织中mir-130a-3p高表达患者中位OS(25.6个月)较低表达组(23.1个月)延长,但差异无统计意义;smad 4阴性表达组中位OS(26.7个月)较阳性表达组(20.0个月)显著延长(P<0.05).结论 mir-130a-3p在肝癌组织中表达下调,可能通过调控smad 4的表达参与了肝癌的发生发展,mir-130a-3p有望成为肝癌潜在的治疗靶点及预后判断因子.     

p57^kip2在人肝细胞癌中杂和性缺失研究

【目的】研究p57kip2基因在人肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）不同阶段的杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH）,以探讨HCC发生的分子生物学机制。【方法】运用PCR聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法对30例肝癌组织p57kip2基因位点上2个微卫星位点（TH01和D11S2359）进行LOH的检测。【结果】30例肝癌组织中有9例至少在1个微卫星位点（30.0%）表现出LOH,且分化好肝癌组织LOH率明显低于和分化差肝癌组织。【结论】p57kip2基因位点频繁的LOH在HCC发生中起重要作用。     

Notch1受体和配体分子Jagged1蛋白在肝癌组织中的表达及意义

目的 探讨Notch1及Jagged1蛋白在肝脏肿瘤中的表达特点及其与肝癌的临床病理学特点的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测65例肝癌组织及其相应癌旁正常组织中Notch1和Jagged1蛋白的表达.结果 在肝癌和癌旁正常组织中,Notch1的阳性表达率分别为16.9％和90.8％;Jagged1的阳性表达率分别为10.9％和86.2％,两组间差异均有显著性(P=0.000).Notch1受体和Jagged1配体分子的表达与患者年龄、性别,肿瘤大小无关;Notch1受体表达与肝癌组织学分型、Edmondson分级及有无淋巴结转移无关(P＞0.05);而Jagged1配体表达则与肝癌组织学分型、Edmondson分级及有无淋巴结转移有关(P＜0.05);在肝癌组织中Notch1与Jagged1的表达呈正相关(r1=0.301,P =0.005).结论 Notch1蛋白和Jagged1蛋白可以作为诊断肝癌的特异性指标,也有望成为肝癌基因治疗的新靶点.