TRPC离子通道参与硝普钠诱导海马神经元凋亡

目的 探讨TRPC离子通道在一氧化氮供体硝普钠(SNP)诱导原代培养海马神经元凋亡中的作用.方法 原代培养的海马神经元作为空白对照组,实验组分为3组,分别为原代培养神经元中加入SNP;SNP TRPC通道阻断剂组;SNP TRPC通道激活剂组.细胞处理24 h后MTT比色法检测各组细胞存活率,Hoechest33342荧光染色观察细胞凋亡.结果 SNP处理24h,神经元存活率为67.4％;与空白对照组有显著差异(P<0.05),SNP TRPC阻断剂组神经元存活率分别为102％、92.7％,与SNP组有显著差异(P<0.05);而SNP TRPC激活剂组神经元存活率为56.9％.与SNP组有统计学差异(P<0.05);单纯给予TRPC阻断剂或激动剂对神经元存活率无明显影响.荧光显微镜下观察.空白对照组神经元胞核均匀蓝染;SNP处理组胞核明显固缩、凝聚,可见凋亡小体;SNP TRPC激动剂组可见大量凋亡细胞;而SNP TRPC阻断剂组胞核均匀蓝染.结论 TRPC离子通道参与SNP诱导海马神经元凋亡.     

不同浓度硝普钠诱导兔软骨细胞凋亡模型的比较研究

目的 比较不同浓度硝普钠（SNP）诱导兔软骨细胞凋亡模型,为进一步探讨药物对软骨细胞凋亡的调控作用提供理论支持。方法 2014年9-12月选取4周龄健康雄性新西兰大耳白兔8只,体质量200～250 g,体外分离培养并鉴定兔软骨细胞,采用不同浓度SNP（0、0.062 5、0.125、0.25、0.5、1、2 mmol/L）诱导兔软骨细胞,分别于12、24、48 h采用四甲基偶氮唑盐比色试验法（MTT法）和末端脱氧核苷酸转移的dUTP缺口末端标记法（TUNEL法）评价并比较不同浓度SNP诱导软骨细胞凋亡模型,记录兔软骨细胞增殖情况（OD值）和兔软骨细胞凋亡率。结果 不同浓度SNP诱导的兔软骨细胞在不同时间点的OD值比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。SNP浓度为0.062 5、0.125 mmol/L培养12、24、48 h时兔软骨细胞OD值高于SNP浓度为0 mmol/L（P＜0.05）;SNP浓度为0.25、0.5、1、2 mmol/L培养12、24、48 h时兔软骨细胞OD值均低于SNP浓度为0 mmol/L;SNP浓度为0.25、0.5、1、2 mmol/L培养12、24、48 h时兔软骨细胞OD值在不同浓度间两两比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。不同浓度SNP诱导的兔软骨细胞在不同时间点的凋亡率比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。SNP浓度为0.25、0.5、1、2 mmol/L培养12、24、48 h时兔软骨细胞凋亡率均高于SNP浓度为0 mmol/L（P＜0.05）;且不同浓度间两两比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 SNP浓度为0.25～2 mmol/L且诱导12、24、48 h时可制备不同严重程度的软骨细胞凋亡模型,为进一步探讨药物对软骨细胞凋亡的调控作用提供了理论支持。     

丙戊酸钠对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用及其机制

目的:研究丙戊酸(VPA)对6-OHDA引起的SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法:采用光镜观察细胞形态,监测其存活状态,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡。采用Western blotting法检测细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果:形态学观察发现,6-OHDA处理SH-SY5Y细胞使大部分细胞胞体皱缩,突起缩短、消失或断裂,细胞存活率显著下降;而VPA(1mmol/L)预处理细胞24h,可提高细胞存活率。Hoechst33258荧光染色后出现染色质固缩等细胞凋亡的特征性改变,而用VPA预处理SH-SY5Y细胞可明显减少SH-SY5Y细胞凋亡。Western Blotting分析证实,6-OHDA抑制Bcl-2蛋白的表达,而VPA预处理Bcl-2蛋白含量明显上调。结论:VPA能抑制6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,Bcl-2可能是VPA神经保护作用的一个重要靶点。     

Bcl-xl基因克隆及其在SH-SY5Y细胞中的表达

目的研究Bcl-xl基因在SH-SY5Y细胞中的表达。方法构建真核表达载体pIRES2-EGFP/Bcl-xl,采用脂质体介导将重组质粒导入SH-SY5Y细胞,RT-PCR和Western-blot检测外源基因表达。结果本实验成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/Bcl-xl,并用脂质体介导的方法高效转染SH-SY5Y细胞,RT-PCR显示有Bcl-xlmRNA表达增加,Western-blot显示有32kD的蛋白质表达增加。结论重组质粒pIRES2-EGFP/Bcl-xl经转染能够在SH-SY5Y细胞中高效表达,为进一步研究Bcl-xl对SH-SY5Y细胞的生物学功能奠定了基础。     

阿魏酸钠对一氧化碳供体硝普钠诱导的海马神经元凋亡的保护作用

目的 探讨阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)对NO供体硝普钠(SNP)引起的大鼠海马神经元凋亡的影响.方法 采用MTT比色分析测细胞存活率,Hoechst 33258荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳分析等方法 检测凋亡.结果 不同剂量SF(10～160 μmol/mL)预处理海马神经元6h可剂量依赖地对抗SNP引起的神经元凋亡,提高神经元的存活率;减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象;DNA凝胶电泳图谱未见典型的"梯子状"改变.结论 SF对NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡具有明显的保护作用.     

牛膝多糖对硝普钠诱导的兔关节软骨细胞凋亡的影响及机制研究

目的研究牛膝多糖（ABPS）对硝普钠诱导的兔软骨细胞凋亡的影响及可能机制。方法取新西兰白兔膝关节软骨建立兔软骨细胞体系,分别用白芦藜醇、尼克酰胺及不同浓度ABPS（200、300、400滋g/ml）处理经硝普钠诱导凋亡后的P3代软骨细胞。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用RT-PCR法检测烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）、信息沉默因子1（Sirt1）、p53和BaxmRNA表达水平。结果与硝普钠组比较,白芦藜醇组、ABPS各组软骨细胞凋亡率均明显下降（均P＜0.05）,而尼克酰胺组软骨细胞凋亡率明显上升（P＞0.05）。与ABPS200滋g/ml组比较,ABPS300滋g/ml组及ABPS400滋g/ml组软骨细胞凋亡率明显下降（均P＜0.05）。ABPS可上调抗凋亡基因NAMPT、Sirt1mRNA表达,同时使凋亡基因p53、BaxmRNA表达下调,并且浓度300滋g/ml时效果最明显。结论ABPS可能通过激活NAMPT、Sirt1来抑制p38信号通路下游的关键基因p53,对软骨细胞凋亡起保护作用。     

慢性缺氧对乙酰胆碱和硝普钠舒张肺动脉的抑制作用

本实验观察模拟海拔5000m连续缺氧20d和模拟海拔8000m连续缺氧4d对大鼠肺动脉内皮依赖性和非内皮依赖性舒张反应的影响。结果表明慢性缺氧显著抑制肺内和肺外动脉对乙酰胆碱和硝普纳舒张反应的敏感性和反应性。其机理很可能是由于缺氧抑制鸟苷酸环化酶,从而减低肺动脉对乙酰胆碱和硝普钠舒张反应的敏感性和反应性。     

酸性肽对硝普钠诱导体外培养SD大鼠海马神经细胞凋亡的保护作用

目的:观察不同剂量酸性肽(AP)对NO供体硝普钠(SNP)诱导的大鼠海马神经细胞凋亡的影响.方法:分离培养新生SD大鼠海马神经细胞,用终浓度为50 μmol/L的SNP诱导海马神经细胞凋亡.实验共设空白对照组、SNP处理组和AP实验组,AP实验组分别加入浓度为0.037 5、0.075 0、0.150 0 g/L的AP与SNP共培养24 h后,通过细胞形态学观察、MTT测定、吖啶橙荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳等方法检测细胞凋亡情况及细胞存活率.结果:SNP处理组海马神经细胞存活率降低至58.9%±4.5%,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).3个AP实验组海马神经细胞存活率均高于SNP处理组(P<0.05或0.01).SNP组凋亡细胞的形态学改变及细胞核固缩、核碎裂现象明显,DNA琼脂糖凝胶电泳图谱具有DNA ladder;各AP实验组凋亡细胞形态学改变不明显,DNA琼脂糖凝胶电泳图谱没有DNA ladder出现.结论:AP对SNP诱导的海马神经细胞凋亡具有保护作用.     

静滴硝普钠的护理体会

<正> 硝普钠(NP)是一种速效、强效的降压药物。它能扩张小动脉,降低外周阻力,也扩张小静脉,使回心血量减少,减轻心脏前后负荷。我院用硝普钠静脉点滴治疗心力衰竭和高血压病收到了满意的效果,现将护理体会介绍如下。 1.临床资料 25例患者中,男18例,女7例。年龄在50—80岁之间。其中,心衰占19例,高血压病占6例。 2.硝普钠的理化性质 硝普钠是一种有机盐,易溶于水,由于不能经胃肠     

PFOS致SH-SY5Y细胞凋亡及可能机制

目的探讨全氟辛烷磺酸盐(PFOS)对成人神经母瘤细胞(SH-SY5Y)的凋亡效应及可能的机制。方法实验中PFOS剂量设置为200、150、100、50、10、1μmol/L和DMSO(对照组)。体外培养SH-SY5Y细胞,以不同浓度PFOS(1、10、50、100、150、200μmol/L)处理细胞。染毒24 h和48 h后用CCK8法检测SH-SY5Y细胞活性,应用Annexin-V FITC/PI双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡,紫外和荧光分光光度法检测SH-SY5Y细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH)、总活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的影响。结果 PFOS暴露降低了SH-SY5Y细胞活性,并呈明显的剂量效应关系;PFOS导致SH-SY5Y细胞凋亡;紫外和荧光分光光度法结果显示PFOS引起SH-SY5Y细胞中SOD和GSH水平下降,与对照组相比,最高剂量组PFOS引起GSH含量从8.00±0.12 nmol/mg蛋白降至5.89±0.90 nmol/mg蛋白;同时引起总活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平上升,与对照组相比,最高剂量组PFOS引起MDA含量从1.92±0.17 nmol/mg蛋白显著上升至6.95±0.26 nmol/mg蛋白。结论PFOS可能通过对SH-SY5Y细胞产生氧化应激损伤从而对SH-SY5Y细胞产生毒性效应。     

汉防己甲素对人神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖和凋亡的影响

目的 探讨汉防己甲素对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株的增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法 通过CCK-8实验检测汉防己甲素对于细胞生长的抑制率,流式细胞术检测Tet作用于细胞后,对细胞活性氧、线粒体膜电位、凋亡和周期的影响。结果 汉防己甲素能显著抑制SH-SY5Y细胞生长,基本呈时间－剂量依赖性。流式细胞术检测显示不同浓度汉防己甲素处理后,活性氧明显升高,线粒体膜电位明显下降,细胞凋亡比例明显升高,G₀/G₁期细胞占比明显增高。结论 汉防己甲素能够抑制SH-SY5Y细胞增殖并且诱导其发生凋亡。     

P4对双氧水诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的：研究P4对双氧水诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立双氧水诱导SH-SY5Y细胞凋亡的模型,给予P4进行干预。应用Hoechst染色,测定细胞凋亡率。结果10uM的双氧水24 h可以使SH-SY5Y细胞凋亡率达到(56.33±13.17)%。然而,给予P4后,SH-SY5Y细胞的凋亡率明显减低,P4加双氧水组与双氧水组对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论P4对SH-SY5Y细胞的凋亡有保护作用。     

MPP+对SHSY5Y细胞凋亡的诱导作用

目的 探讨1－methyl-4-phenylpyridium iodide(MPP^ )对SHSY5Y细胞的毒性作用。方法 采用体外培养的SHSY5Y细胞,通过TUNEL染色、细胞超微结构观察和DNA倍体分析检测MPP^＋对SHSY5Y细胞凋亡的诱导作用。结果 MPP^ 可明显地抑制SHSY5Y细胞的生长,并诱导SHSY5Y细胞发生凋亡,主要表现为TUNEL染色阳性的细胞增多,细胞核异染色质增多,线粒体肿胀、嵴断裂、消失,在DNA周期中的G0－G1期前出现明显的亚二倍体峰。结论 MPP^ 通过诱导SHSY5Y细胞凋亡的方式发挥毒性作用。     

枳壳活性成分对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y生长的影响

目的：探讨枳壳醇提有效部位及其所含部分单体成分对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y生长的影响。方法：将细胞分为不同给药组,给以枳壳醇提有效部位及其所含的川陈皮素、红橘素、伞形酮和葡萄内酯不同浓度的试药,以四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞的活力,分析药物对SH-SY5Y细胞生长的作用。结果：红橘素和伞形酮在实验浓度下对SH-SY5Y细胞生长无显著性影响;枳壳醇提有效部位、川陈皮素和葡萄内酯在实验浓度下对SH-SY5Y细胞生长有显著性影响,且呈浓度效应关系。结论：枳壳醇提有效部位、葡萄内酯和川陈皮素对神经细胞生长有保护作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对稳定表达淀粉样前体蛋白的SH-SY5Y细胞抗炎抗凋亡作用研究

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)对稳定表达淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)的SH-SY5Y细胞抗炎抗凋亡的保护作用.方法 将SH-SY5Y细胞分为对照组、模型组(稳定表达APP的细胞)和EGCG组(APP+10、20、30 μmol/L的EGCG).免疫荧光细胞化学法观察APP在各组细胞中表达;MTT法检测细胞存活能力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3表达;ELISA法测定IL-6和TNF-α浓度.结果 模型组中,APP高表达;与模型组比较,给予20 μmol/L EGCG的EGCG组明显提高SH-SY5Y细胞的存活率,减少细胞凋亡数目,下调Bax/Bcl-2比例及Caspase-3 mRNA表达,减少IL-6和TNF-α浓度.结论 EGCG对稳定表达APP的SH-SY5Y细胞有一定保护作用,可能是通过抗炎以及减少细胞凋亡发挥治疗作用.     

神经外科术中硝普钠控制性降压期间血流动力学的变化

为观察神经外科术中硝普钠控制性降压 (CH)对血流动力学的影响 ,对 1 5例ASAⅠ～Ⅱ级无心肺疾患的择期颅脑手术病人 (男 5例 ,女 1 0例 ,年龄 1 9～ 5 5岁 ) ,术中吸入 1 .0MAC异氟醚维持麻醉。剪开硬膜后 ,需行控制性降压时 ,用微量泵输注硝普钠 ,初始量 1 .5～ 2 μg/ (kg·min) ,将平均动脉压 (MAP)降至并维持在 7.3～ 8.0kPa(5 5～ 60mmHg)。连续监测无创平均动脉压 (MAP)、心率 (HR)、心电图 (ECG)、脉搏血氧饱和度 (SpO2 )。用HEMOSONICTM1 0 0经食管连续监测血流峰速度 (PV)、血流加速度 (ACC)、左室射血时间 (LVET)、每搏量 (SV)、心输出量 (CO) ,计算全身血管阻力 (TSVR)。用气体浓度监测仪 (DatexUltima,芬兰 )连续监测呼气末二氧化碳 (PetCO2 )、SpO2 、呼气末异氟醚浓度。分别于降压前、降压达目标时、维持降压 5、1 5和 3 0min、停降压 5、1 0min ,采集血流动力学参数进行统计学处理。在控制性降压期间ACC、PV、CO、SV和HR较降压前增加 2 0 .8%～ 41 .1 %、1 8.1 %～ 2 6.3 %、2 1 .6%～ 2 7.9%、2 .7%～ 7.6%和 2 0 .5 %～ 2 5 .0 % ;TSVR下降 3 5 .1 %～ 3 9.1 %。结果提示 :神经外科术中行硝普钠控制性降压具有起效快 ,作用强 ,心输出量增加 ,复压迅速等优点     

S14G-humanin对氧糖剥夺/复氧神经细胞损伤的保护作用

目的：评估S14G-humanin(HNG)在SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞体外氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型中潜在的神经保护作用的相关分子机制。方法：将SH-SY5Y细胞分为对照组、OGD/R模型组、HNG干预组、HNG联合FLLL32抑制剂组。三气培养箱建立SH-SY5Y细胞OGD/R损伤模型;抑制剂组给予不同剂量HNG、FLLL32(JAK2/STAT3通路抑制剂)。CCK8细胞检测试剂盒检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot分析JAK2、p-STAT3(Y705)、p-STAT3(S727)的表达。结果：OGD/R导致SH-SY5Y细胞存活率显著降低(P<0.01),凋亡率显著增加(P<0.01)。给予0.1、1、5、10μg·L^-1 HNG干预的SH-SY5Y细胞与未行HNG干预的OGD/R细胞相比,存活率更高(P<0.01),凋亡明显减少(P<0.01),1μg·L^-1HNG干预组效果最好。与对照组...     

Ⅱ型单胺囊泡转移体在SH-SY5Y细胞中的稳定表达

目的构建稳定表达Ⅱ型单胺囊泡转移体（VMAT2）的SH-SY5Y细胞系。方法构建VMAT2真核表达载体，利用脂质体转染神经母细胞瘤SH-SY5Y，选择筛选后挑取单克隆扩大培养，通过Western-blot及免疫荧光的方法鉴定蛋白质在细胞中的表达，并通过免疫双荧光技术对VMAT2在细胞系中的分布进行定位。结果Western-blot及免疫荧光结果显示该蛋白在挑选的细胞系中有高效表达。免疫双荧光结果显示表达的蛋白定位在大密度核心囊泡（LDCV）。结论该细胞系的成功构建为研究VMAT2在帕金森氏病（PD）发病机制中的作用奠定良好的基础。     

布比卡因对高糖培养S H-SY5Y 细胞毒性研究

目的：布比卡因作用高糖培养的SH‐SY5Y细胞,观测细胞内活性氧（ROS）及凋亡影响。方法1 mmol／L布比卡因作用不同浓度葡萄糖培养基培养的SH‐SY5Y 细胞6 h ,检测细胞内ROS、GRP78水平变化及凋亡情况。结果葡萄糖浓度为7．80、11．10、13．30 mmol／L组ROS产量均高于5．56、6．10、7．00 mmol／L组（P＜0．05）。细胞凋亡率组间差异均有统计学意义（P＜0．05）。GRP78表达结果为5．56 mmol／L组（1．02±0．12）、6．10 mmol／L组（0．97±0．06）,7．80 mmol／L组（0．49±0．04）,高于7．00 mmol／L组（0．46±0．06）;11．10 mmol／L组（0．22±0．03）与13．30 mmol／L组（0．15±0．07）低于其他各组,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论细胞内ROS增多及凋亡增加与布比卡因增强细胞内质网应激（ERS）有关。GRP78功能减弱进一步增强细胞ERS。