氧自由基损伤在烫伤大鼠延迟复苏后肠道细菌和内毒素移位中的作用

为了了解烧伤延迟复苏后肠粘膜氧自由基损伤情况及其对肠源性细菌、内毒素移位的影响，将６６只悉生大鼠分为以下四组：（１）对照组（ｎ＝６）。（２）立即复苏组（ｎ＝２４），４０％烫伤后立即按Ｐａｒｋｌａｎｄ公式复苏。（３）延迟复苏组（ｎ＝２４），伤后６小时开始复苏。（４）药物治疗组（ｎ＝１２），大鼠延迟复苏加上维生素Ｃ、Ｅ联合治疗。在伤后８、２４、４８和７２小时活杀动物（各时间点６只）进行下列指标检测：回肠粘膜超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）及丙二醛（ＭＤＡ）含量，回肠粘膜病理形态学观察、二胺氧化酶（ＤＡＯ）活性，血和肠系膜淋巴结、肝、脾、肾、肺细菌培养，血浆内毒素水平。结果显示，伤后ＳＯＤ、ＧＳＨＰｘ含量下降，ＭＤＡ升高，同时肠粘膜病理改变加重、ＤＡＯ活性下降，血和脏器细菌移位率、血浆内毒素水平增高。这些改变在延迟组更明显，使用维生素Ｃ、Ｅ治疗后减轻。表明，烧伤延迟复苏加重肠粘膜氧自由基的损伤，促进肠道细菌和内毒素移位。     

HBeAg对单核细胞来源树突状细胞TLR4及MAPK信号通路的影响

目的探讨HBeAg对脂多糖（LPS）刺激成熟的单核细胞来源树突状细胞（MoDC）表面Toll样受体4（TLR4）及下游丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的影响。方法将健康者外周血单核细胞经重组人粒细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组白细胞介素-4（rhIL-4）诱导分化为未成熟MoDC,加或不加入HBeAg（即HBeAg刺激组与对照组）,再加入LPS刺激成熟后,采用Westernblot法检测MoDC表面TLR4、磷酸化p38（pp38）、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（pJNK）、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（pERK1/2）蛋白表达,同种异基因混合淋巴细胞反应试验检测MoDC刺激同种异基因淋巴细胞增殖能力,ELISA法检测MoDC分泌下游细胞因子（IL-12、IL-6）水平。结果与对照组比较,HBeAg刺激组MoDC表面TLR4、pp38、pJNK、pERK1/2蛋白表达均明显降低（均P＜0.05）,MoDC刺激同种异基因淋巴细胞增殖能力均明显下降（均P＜0.05）,MoDC分泌IL-12、IL-6水平均明显减少（均P＜0.05）。结论HBeAg能降低MoDC表面TLR4及下游MAPK信号通路传导,减少IL-12、IL-6分泌,减弱其刺激淋巴细胞增殖能力。     

谷氨酰胺(GLN)对烧伤大鼠肠道粘膜损伤的保护作用

目的：观察肠饲谷氨酰胺（GLN）对烧伤大鼠肠粘膜的保护作用。方法：采用30%Ⅲ°烧伤大鼠早期肠道喂养模型，将20只大鼠随机分为GLN组（n =10）和NON-GLN（n =10）组，一周后处死动物，无菌取肠系膜淋巴结行细菌培养，统计细菌移位率；取门静脉血检测内毒素；对回肠粘膜行光镜检查，并用显微图像分析仪对大鼠回肠粘膜的厚度、绒毛高度和隐窝深度进行计算机图像分析。结果：GLN组大鼠回肠粘膜的厚度、绒毛高度和隐窝深度较NON-GLN组明显增加；GLN组门静脉血内毒素含量及GLN组肠系膜淋巴结细菌移位率明显低于NON-GLN组。结论：提示肠道补充GLN能有效地维护严重烧伤后肠道粘膜的结构，减少细菌移位和减少内毒素进入门静脉。     

谷氨酰胺对大鼠脊髓损伤后肠道细菌移位的影响

目的观察大鼠脊髓损伤致截瘫后肠道细菌移位的特点，并探讨谷氨酰胺对大鼠脊髓损伤后肠道细菌移位的影响。方法Wistar大鼠56只随机分为4组。A组（10只）：正常对照组；B组（10只）：假手术对照组，大鼠仅作皮肤切口；C组（18只）：手术对照组，大鼠脊髓完全横断损伤；D组（18只）：治疗组，大鼠脊髓完全横断损伤后灌胃丙氨酰一谷氨酰胺液。上述处理6d后，在无菌操作下，采集肝、脾、肠系膜淋巴结、门静脉血和回肠腔内容物的样本作细菌培养。同时，另采集肝、脾、肠系膜淋巴结、空回肠样本行组织学检查。结果（1）A组大鼠各器官细菌培养为阴性，B组仅在一只大鼠的肠系膜淋巴结细菌培养为阳性。D组大鼠的总的脏器细菌培养阳性率、细菌移位率显著低于C组大鼠（P〈O．0005，P=0．012）。（2）C组和D组脊髓损伤大鼠的组织学改变主要有①肝中央静脉淤血，肝细胞浊肿；②肠系膜淋巴结浅层皮质出现淋巴小结并增厚、副皮质区扩大；③脾小体增多增生、动脉周围淋巴鞘增厚；④小肠固有层血管充血，粘膜上皮坏死，肠壁淋巴组织增生；⑤回肠粘膜上皮细胞间隙增宽。但D组大鼠较C组明显减轻。结论通过本实验研究，进一步证实了脊髓损伤可促进肠道细菌移位的发生。而应用谷氨酰胺肠内营养可有效保护肠屏障功能，对防止肠道细菌移位有一定作用。     

蛙皮素对梗阻性黄疸时肠道细菌移位的影响

目的：观察梗阻性黄疸大鼠肠道细菌移位状况及蛙皮素对肠道细菌移位的影响。方法：健康雄性Wistar大鼠40只,随机分成4组,Ⅰ空白对照组（m=10）、Ⅱ假手术组（n=10）、Ⅲ阻塞性黄疸组（n=10）、Ⅳ蛙皮素治疗组（n=10,30μg／kg·d）,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ用生理盐水作对照。检测第10天各组静脉血内毒素水平、取静脉血、肠系膜淋巴结作细菌定性培养,并取腹水作细菌定量培养,同时测定末端回肠粘膜厚度和绒毛高度。结果：Ⅳ组静脉血内毒素（129．58±13．79）pg／ml较Ⅲ组（239．03±32．0）pg／ml明显降低（P〈0．05）,Ⅳ组静脉血、肠系膜淋巴结细菌培养阳性率较Ⅲ组明显降低（P〈0．05）,Ⅳ组腹水作茵落集数（113．67±8．0）CFU／ml较Ⅲ组（363．19±15．1）CFU／ml明显降低（P〈0．05）,Ⅳ组回肠末端粘膜厚度和绒毛高度较Ⅲ组明显增加（P〈0．05）。结论：蛙皮素可保护梗阻性黄疸时小肠粘膜屏障功能,减少肠道细菌易位和内毒素血症。     

GLP-2对脓毒症大鼠肠道细菌移位的影响

目的探讨胰高血糖素样肽-2(glucagon like peptide-2,GLP-2)对脓毒症大鼠肠道细菌移位的影响。方法Sprague Dawley大鼠60只,随机分为3组,A组:对照组,B组:内毒素组,C组:治疗组。分别以生理盐水、EcolliO55:B5、GLP-2腹腔注射,留取末端回肠组织检测肠黏膜上皮细胞间紧密连接occludin蛋白表达,肠系膜淋巴结、肝、肺组织匀浆后细菌培养计算细菌移位率,同时观察肠黏膜超微结构变化。结果①电镜下A组肠黏膜微绒毛及紧密连接未见异常,B组紧密连接增宽,微绒毛变细、稀疏,部分断裂、脱落。C组改变较B组明显减轻。②免疫组化平均光密度值及western blot净光密度值结果可见:occludin表达B组明显低于A组,C组明显高于B组。③肠系膜淋巴结、肝、肺器官细菌移位率水平B组明显高于A组,C组明显低于B组。结论 GLP-2可以降低肠道屏障功能损伤的程度,减少细菌移位率,对脓毒症的肠道损伤有一定治疗作用。     

大黄对重症急性胰腺炎的影响及细菌移位研究

目的：采用牛磺胆酸钠诱发大鼠重症急性胰腺炎模型,探讨大黄对重症急性胰腺炎的影响及细菌移位。方法：健康Wistar大鼠30只,雌雄不限,随机分成三组。1组为SAP模型组（M组,n=10）,开腹后肝端胰胆管用小动脉夹夹闭,肠端胰胆管用丝线结扎。5%牛磺胆酸钠溶液0.1ml/100g胰胆管内以0.2ml/min速度逆行推注,复制SAP模型; 2组为中药大黄治疗组（T组,n=10）,按M组方法复制SAP模型,并在复制模型后即刻胃管内注入生大黄粉溶液1ml（5mg/100g）。3组为假手术组（SO组,n=10）,开腹后自胰管内逆行注入生理盐水0.1ml/100g后关腹。术后取血液、胰腺和肠系膜淋巴结进行细菌培养。结果：脏器及血细菌培养结果显示,SO组血培养阴性,除2只大鼠肠系膜淋巴结培养出细菌外,其他脏器培养均阴性。M组细菌培养阳性率较高（P〈0.01）,T组细菌培养阳性率明显低于M组（P〈0.01）。结论：SAP时细菌移位的发生率较高,可能与机体的细胞免疫功能下降有关。大黄能抑制肠菌及清理肠道,从而降低胰腺感染率,对SAP有一定的治疗作用。     

雌激素对创伤失血性休克肠道细菌移位的影响

目的探讨雌激素对创伤失血性休克(Trauma/hemorrhageshock,T/HS)肠粘膜屏障损伤以及肠道细菌移位的影响。方法雌性青春期Wistar大鼠40只,随机分为卵巢切除组10只,对照组10只,雌二醇组10只,大剂量雌二醇组10只,观察T/HS60min,复苏4h后的肠粘膜损伤程度(Chiu氏评分),并取肠系膜淋巴结、肝组织及门静脉血进行细菌培养,改良鲎试剂法测定血浆内毒素含量。结果雌二醇组和大剂量雌二醇组与其他两组相比,肠粘膜Chiu氏评分显著降低,细菌培养计数及内毒素含量明显减少,P均<0.05。结论雌激素能改善创伤失血性休克大鼠的肠粘膜损伤程度,降低肠道细菌及内毒素移位的发生率。     

谷氨酰胺对大鼠急性坏死性胰腺炎肠道细菌移位的影响

目的 观察谷氨酰胺（ＧＬＮ）对急性坏死性胰腺炎（ＡＮＰ）大鼠肠道细菌称位的影响。方法 将实验大鼠１２０只,随机分成对照组、ＡＮＰ组及ＧＬＮ组,每组各４０只,ＡＮＰ模型采用结扎胰胆管诱发,ＧＬＮ组制作ＡＮＰ后灌入ＧＬＮ,观察３组肠粘膜组织学和ＤＮＡ含量,肠系膜淋巴结,胰腺组织细菌培养及吖啶橙标记菌实验。结果 ＡＮＰ后７２ｈ,肠粘膜出现明显损伤,ＤＮＡ含量下降,肠系膜淋巴结,胰腺组织细菌培养计数明显升     

黄芪注射液对烫伤大鼠肠源性感染及其肠道机械屏障功能的影响

目的：观察黄芪注射液对大鼠烫伤后肠源性感染的影响，给药剂量及时间对药效效的影响，并初步研究其作用机制。方法：采用大鼠40％TBSA Ⅲ度烫伤模型，腹腔注射黄芪注射液0.2ml/100g、0.4ml/100g，分别进行预防性3d给药、治疗性3d、5d给药；活杀动物，进行（1）肠粘膜组织学分析；（2）肠系膜淋巴结（MLN）、肝、脾匀浆细菌培养；（3）血清内毒素检测；（4）肠粘膜MDA检测；（5）存活率观察。结果：烫伤后大鼠存活率降低，细菌大量移位于肠系膜淋巴结（MLN）、肝、脾，血清内毒素值明显增加，肠粘膜结构受损，肠粘膜MDA含量增加；黄芪注射液大剂量组可增加大鼠存活率（P＜0．05），但小剂量无明显影响；大、小剂量组均能显著降低肠道细菌移位（P＜0．05），对血清内毒素虽有减少趋势，但无统计学差异（P＞0．05）。黄芪注射液对烫伤后肠粘膜结构有明显改善作用，肠粘膜MDA含量也较烫伤组减少（P＜0．05）。黄芪小剂量组对细菌迁移的抑制作用较大剂量组有更强趋势，但无统计学意义（P＞0．05）。黄芪注射液预防性3日给药组对以上指标无明显影响，5d治疗性给药组较3d给药组疗效有更强趋势，但无统计学意义（P＞0．05）。结论：黄芪注射液对烫伤大鼠肠道细菌迁移有抑制作用；黄芪注射液可改善烫伤大鼠肠粘膜结构。     

经食道-胸壁电刺激建立兔心脏骤停模型

 目的：建立一种更为简单、便捷、成功率高的兔心脏骤停模型。方法：经食道插入食道调搏电极至心脏水平,在心前区心搏最明显处皮下插入针灸针形成电流回路,用恒定35mA交流电诱发心脏骤停,无干预观察5min后进行心肺复苏。分别记录15只新西兰大白兔达到心脏骤停标准的时间、停止刺激时的心律、复苏开始前的心律、心肺复苏时间、除颤次数、给药次数、自主循环恢复率、自主循环恢复后机械通气时间、自主循环恢复后生存时间及72h生存率。结果：本实验中的15只兔全部诱发心脏骤停成功。从有效电刺激开始到成功诱发心脏骤停的时间为26.47±10.36s。电刺激结束时室颤发生率为100%（15/15）,无心脏停搏及无脉性电活动发生,在无干预观察期内无自动复律现象。在心肺复苏开始时心电图表现为室颤的比例为73.3%（11/15）,无脉性电活动的比例为26.7%（4/15）。心肺复苏用时200.07±136.00s,除颤次数1.00±0.76次,静脉注射肾上腺素次数2.40±1.12次,自主循环恢复率93.3%（14/15）,自主循环恢复后机械通气时间40.46±17.05min。自主循环恢复后0-6h死亡率为6.7%（1/15）,6-24h内死亡率60（9/15）,24-72h时存活率为26.6%（4/15）。结论：经食道-胸壁定流电刺激方式诱发兔心脏骤停模型操作简单、重复性好、复苏成功率高,并发症少,是一个较为理想的研究心肺脑复苏的模型。     

急性肝衰竭小鼠Occludin表达与血脑屏障通透性的关系

目的探讨乙酰氨基酚/扑热息痛(acetam inophen/paracetam ol,APAP)导致的急性肝衰竭(acute liverfailure,ALF)小鼠模型中血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性与脑组织紧密连接(tight junction,TJ)蛋白O ccludin表达的关系。方法应用APAP复制ALF小鼠模型,检测脑中伊文思蓝(evans blue,EB)的含量反映BBB通透性,电镜下观察TJ的结构变化。应用W estern blotting方法检测脑组织中O ccludin蛋白的表达。结果小鼠脑组织EB含量于2 h开始升高(2.29±0.42)μg/g,6 h达到峰值(3.61±0.33)μg/g,脑组织中O ccludin蛋白表达2 h开始下降,6 h表达最低,同时电镜下观察到TJ结构出现破坏。结论在APAP所致的ALF动物模型中,BBB通透性增加,表明血管源性脑水肿机制参与脑水肿形成,与其相反,O ccludin表达呈下降趋势,提示脑水肿的发生与O ccludin表达下降引起TJ结构破坏有关。     

胆道梗阻患者肠道细菌易位的临床观察

对３５例胆道疾病患者的肠系膜淋巴结,外周静脉血,门静脉血及胆汁进行细菌学研究。３５例中胆道梗阻２３例,胆道未梗阻１２例。结果显示：６５％的胆道梗阻患者出现细菌易位,而非胆道梗阻患者未见细菌易位发生,易位至肠系膜淋巴结者为Ｇ＾－肠杆菌,提示肝外胆道梗阻可导致人体肠道细菌易位。     

胆道梗阻患者肠道细菌易位的临床观察

对３５例胆道疾病患者的肠系膜淋巴结、外周静脉血、门静脉血及胆汁进行细菌学研究。３５例中胆道梗阻２３例，胆道未梗阻１２例。结果显示：６５％的胆道梗阻患者出现细菌易位，而非胆道梗阻患者未见细菌易位发生；易位至肠系膜淋巴结者多为Ｇ－肠杆菌。提示肝外胆道梗阻可导致人体肠道细菌易位。     

糖皮质激素受体通过细胞外信号调节激酶途径参与吗啡耐受机制

目的 探讨糖皮质激素受体参与吗啡耐受形成的机制及细胞外信号调节激酶(ERK)信号途径在其中的作用.方法 将40只健康雄性SD大鼠行鞘内置管后随机分为4组(n=10),盐水对照组(C组)鞘内注射生理盐水lOμl;慢性吗啡耐受组(M组)鞘内注射吗啡10μg;糖皮质激素受体拮抗剂组(MR组)鞘内注射吗啡10μg,再注射糖皮质激素受体拮抗剂RU38486 2μg;糖皮质激素受体激动剂组(MD组)鞘内注射吗啡10μg,再注射糖皮质激素受体激动剂地塞米松4μg,鞘内注射每种药物均为2次/d,连续7 d.采用甩尾实验评价大鼠热痛觉,于给药后第8天取出腰膨大处脊髓分别进行Western印迹检测μ阿片受体(MOR)、糖皮质激素受体(GR)、磷酸化ERK(pERK)蛋白表达及TUNEL染色.结果 地塞米松和RU38486分别对吗啡耐受诱导的热痛敏具有促进和抑制作用.与M组(凋亡细胞数5.4±1.1,蛋白表达MOR 37±5,GR 20±6,pERK1 39±4,pERK2 41±5)比较,MR组凋亡细胞数(3.2±0.4)显著少(P<0.01);MD组(16.0±1.6)显著多(P<0.01);MR组MOR(28±5)、GR(12±6)、pERK1(33±4)、pERK2(34±5)蛋白表达均下调(均P<0.01);MD组MOR(55±6)、GR(28±9)、pERKl(49±6)、pERK2(59±5)蛋白表达均上调(均P<0.01).结论 糖皮质激素受体的活性可影响吗啡诱导的脊髓神经凋亡及吗啡耐受中脊髓pERK的表达.

Abstract：

Objective To investigate the mechanism of glucocorticoid receptors(GR)participating in morphine tolerance development via the extracellular signal-regulated kinase(ERK)signal pathway.Methods Forty healthy male SD rats were implanted with intrathecal catheters and then randomized into 4 groups:Group C received an intrathecal injection of 10 μl saline,Group M 10μg morphine,Group MR 10μg morphine followed by 2μg GR antagonist RU38486 and Group MD 10μg morphine followed by 4μg GR agonist dexamethasone(DEX)respectively.Each intrathecal drug was administered twice daily for 7 days.Tail-flick test was employed to evaluate the thermal hyperalgesia.After tail-flick test at Day 8,the lumbar intumescentias were isolated by Western blot to examine the protein expressions of Mu opioid receptor(MOR).GR and pERK.And terminal deoxynucleotidyl transferase mediated X-dUTP nick end labeling(TUNEL)stain was performed.Results DEX and RU38486 enhanced and inhibited morphine induced hyperalgesia to heat respectively.Compared with Group M(count of spinal dorsal horn apoptotic cells 5.4±1.1,protein expression:MOR 37±5,GR 20±6,pERK1 39±4,pERK2 41±5),apoptotic cells decreased in Group MR(3.2±0.4)(P<0.01)and increased in Group MD (16.0±1.6)(P<0.01);the protein expressions of MOR(28±5),GR(12±6),pERK1(33±4)and pERK2(34±5)were down-regulated in Group MR(P<0.01)while up-regulated in Group MD(55±6,28±9,49±6,59±5)(P<0.01).Conclusion The activity of glucocorticoid receptors affects the morphine-induced spinal neural apoptosis and the expression of spinal pERK in morphine tolerance.     

紫杉醇纳米脂质体大鼠体内药物动力学研究

目的 研究紫杉醇纳米脂质体(PTXN)动物体内药物动力学参数,为临床用药提供依据.方法 HPLC法测定血浆中的紫杉醇(PTX)药物浓度,测定动物体内药物动力学参数.结果 该试验采用的高效液相法具有较高的专属性,在血浆浓度为0.51～25.60μg/mL范围内线性良好,有良好的相关(r=0.9996),回收率RSD＜9％.紫杉醇和紫杉醇纳米脂质体在大鼠体内符合二室房室模型,紫杉醇和紫杉醇纳米脂质体的t1/2β分别为(1.301±0.213)h、(0.516±0.228)h;t1/2β分别为(34.361±5.981)h、(11.223±1.191 )h;Vd分别为(0.621±0.078)L、( 0.823±0.079)L;CL分别为(0.038±0.017)L/h、(0.098±0.012)L/h;K10分别为(0.044±0.011)h、(0.136±0.018)h;K12分别为(0.238±0.041)h、(0.768±0.251)h;K21分别为(0.332±0.056)h、(0.589±0.189)h;AUC0→24分别为(341.123±19.342 )mg/(h·L)、(198.124±23.857 )mg/(h·L);AUC0→∞分别为(735.201±168.260)mg/(h·L)、(269.298±35.435 )mg/(h·L).结论 紫杉醇和紫杉醇纳米脂质体均符合二室房室模型,但紫杉醇纳米脂质体药时曲线下面积增大,有效作用时间延长,有利于抗肿瘤,降低毒性.     

PI3-K与活动性狼疮肾炎Th2细胞因子的关系

【目的】了解磷脂酰肌醇三激酶（PI3-K）在活动性狼疮肾炎患者外周血单个核细胞中的表达,并探讨其与Th2细胞因子的关系。【方法】利用免疫沉淀、免疫印迹和RT-PCR技术检测12例正常人和14例活动性狼疮肾炎患者外周血单个核细胞PI3-K磷酸化产物、IL-6mRNA和IL-10mRNA表达,观察PI3-K特异性抑制剂PY294002对活动性狼疮肾炎患者外周血单个核细胞IL-6mRNA和IL-10mRNA表达的影响。【结果】自发培养时活动性狼疮肾炎组外周血单个核细胞PI3-K磷酸化产物明显高于健康对照（1.14±0.23vs0.46±0.12,P=0.023）,CD3单抗诱导下活动性狼疮肾炎组PI3-K磷酸化产物表达仍然高于健康对照组（2.09±0.63vs0.65±0.14,P=0.016）。活动性狼疮肾炎组外周血单个核细胞PI3-K磷酸化产物表达量与IL-6mRNA和IL-10mRNA呈正相关关系（r=0.652,P=0.008;r=0.718,P=0.007）。PI3-K特异性抑制剂PY294002明显抑制了抗CD3单抗诱导的活动性狼疮肾炎组IL-6mRNA(2.32±0.51vs0.57±0.15,P=0.009)和IL-10mRNA(1.71±0.33vs0.67±0.11,P=0.006)的表达。【结论】PI3-K过度活化可能介导了IL-6和IL-10细胞因子的高效表达而参与狼疮肾炎的发病过程。     

紫绀型先心病缺氧致脂肪组织内分泌紊乱

目的 探讨紫绀型先心病缺氧是否致脂肪组织缺氧及内分泌功能紊乱.方法 选取紫绀型先心病(CCHD)和非紫绀型先心病(ACHD)手术患者共32例,其中CCHD 17例为实验组,ACHD 15例为对照组,比较身高、体重、血红蛋白.获取皮下脂肪组织,免疫组化检测缺氧诱导因子1(HIF-1α),RT-PCR法分析脂肪因子等表达,Western blot法检测P-NF κ BP65、P-IκB α、JNK和P-JNK蛋白表达.结果 实验组与对照组相比,身高(67.1±7.8)cm vs (72.6±9.5)cm(P ＜0.05);体重(7.9±2.2)kg vs (9.5±2.6)kg(P ＜0.05);血红蛋白(186.6±22.6)g/L vs(117.4±10.5)g/L(P ＜0.05).实验组HIF-1 α、内质网应激标志和炎症相关指标表达高于对照组(P＜0.05).结论 紫绀型先心病导致脂肪组织缺氧,脂联素表达下降,炎症因子增加,其变化可能与内质网应激相关.     

mTOR信号通路在神经胶质瘤干细胞样细胞中激活的意义研究

目的 分选神经胶质瘤C6细胞中的侧群(SP)细胞,探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白对神经胶质瘤SP细胞的影响.方法 Hoechst33342染色流式细胞仪分选SP细胞,另取非侧群(NSP)细胞作为对照.荧光定量-PCR和Western blot分别检测mTOR基因和蛋白的表达.化学合成的双链SiRNA沉默mTOR基因的表达.结果 SP和NSP细胞中mTOR基因的2-△Ct值分别为(0.623±0.087)和(0.289±0.046),两者之间差异有显著性(P＜0.01),mTOR蛋白的表达在SP细胞也显著高于NSP细胞.化学合成的靶向SiRNA可以显著下调mTOR的表达(P＜0.01).SiRNA下调mTOR表达后,SP细胞在C6细胞中的比例从5.67±1.46％减少到1.33±0.26％(P ＜0.01).结论 神经胶质瘤SP细胞高表达mTOR,下调mTOR的表达可以减少SP细胞的比例.