阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物诱导的人内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达影响及其机制的实验研究

目的 观察阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGE)诱导的人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响,并探讨其作用机制.方法 实验分组:(1)空白对照组.(2)牛血清白蛋白(BSA)对照组.(3)AGE诱导组:不同作用浓度的AGE(10-4、10-3、10-2及10-1g/L)与细胞共同培养24 h.(4) AGE+阿托伐他汀组:用不同作用浓度的阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)分别与细胞培养1 h,而后加入10-1 g/L AGE[根据(3)实验结果选取最佳浓度]与细胞共孵育24 h.(5)PPAR-γ激动剂(15 d-PGJ2)组:15 d-PGJ2( 10 μmol/L)与细胞孵育1 h后加入10-1 g/L AGE再与细胞共孵育24 h.(6)PPAR-γ抑制剂(GW9662)组:GW9662(5000 g/L)与细胞孵育1 h后加入AGE(10-1 g/L)和阿托伐他汀(1 μmol/L)[根据(4)实验结果选取最佳浓度]再与细胞共孵育24 h.胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞.逆转录聚合酶链反应法分析细胞MCP-1和过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPAR-γ)基因的表达.蛋白免疫印迹法测定细胞核因子-κB(NF-κB )p65表达水平.结果 (1)AGE(10-4、10-3、10-2及10-1 g/L)呈浓度依赖性提高人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达水平,分别是空白对照组的1.53倍、2.12倍、2.56倍及4.71倍;AGE浓度为10-4 g/L时,细胞MCP-1 mRNA表达明显高于空白对照组(0.26±0.02比0.17±0.04,P<0.01).(2)与AGE组比,阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)呈浓度依赖性抑制AGE诱导的人内皮细胞MCP-1 mRNA的表达;阿托伐他汀浓度为1 μmol/L时,细胞MCP-1 mRNA表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.63±0.11比1.03±0.07,P<0.01).(3)AGE(10-1 g/L)组人脐静脉内皮细胞PPAR-γ mRNA的表达水平显著低于空白对照组(0.22±0.08比0.69±0.09,P<0.01),磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著高于空白对照组(0.78±0.06比0.31±0.01和1.61±0.16 比0.59±0.14,P均<0.01).(4)阿托伐他汀(1、10 μmol/L)组人脐静脉内皮细胞PPAR-γ mRNA表达水平显著高于AGE(10-1 g/L)组(0.59±0.02和0.61±0.06比0.22±0.08,P均<0.01);阿托伐他汀(1 μmol/L)组磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.40±0.03比0.78±0.06和0.65±0.12比1.61±0.16,P均<0.01).(5)PPAR-γ激动剂(15 d-PGJ2)组细胞磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组 (0.21±0.01比0.78±0.06和0.67±0.14比1.61±0.16,P均<0.01),MCP-1 mRNA表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.17±0.02比0.93±0.12,P<0.01).(6)PPAR-γ抑制剂(GW9662)组细胞磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著高于AGE(10-1g/L)+阿托伐他汀(1 μmol/L)组(0.53±0.02比0.40±0.03和1.38±0.18比0.65±0.12,P均<0.01),MCP-1 mRNA表达水平显著高于AGE(10-1g/L)+阿托伐他汀(1 μmol/L)组(0.62±0.05比0.30±0.07,P<0.01).结论 阿托伐他汀可通过提高AGE诱导的人脐静脉内皮细胞对PPAR-γ表达抑制细胞NF-κB信号途径,进而抑制AGE诱导的人脐静脉内皮细胞的炎性反应.

Abstract：

Objective To investigate the effects of atorvastatin on advanced glycation end products (AGE) induced monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1) expression in human umbilical vein endothelial cells(HUVECs)and whether this effect could be linked to peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPAR-γ) and nuclear factor-κB(NF-κB).Methods Grouping: (1)Blank control group;(2)BSA group;(3)AGE group:cells were incubated with different concentrations of AGE(10-4,10-3, 10-2 and 10-1g/L)for 24 hours; (4)AGE+Atorvastatin group: cells were incubated with different concentrations of atorvastatin(0.1,1,10 μmol/L)for 1 hour,then incubated with AGE (10-1 g/L) for 24 hours; (5)PPAR-γ agonist(15 d-PGJ2)group: cells were incubated with 15 d-PGJ2(10 μmol/L)for 1 hour,then incubated with AGE (10-1g/L) for 24 hours;(6)PPAR-γ inhibitor(GW9662)group:cells were incubated with GW9662(5000 nmol/L)for 1 hour,then incubated with atorvastatin (1 μmol/L)and AGE (10-1g/L) for 24 hours. Collagenase was used to isolate the endothelial cell from human umbilical vein;RT-PCR was performed to examine the mRNA expression of MCP-1 and PPAR-γ;Western blot was performed to detect NF-κB p65 protein.Results (1) The expression of MCP-1 mRNA was increased in proportion with increasing concentrations of AGEs which could be blocked by atorvastatin in a dose-dependent manner. (2) AGE(10-1g/L)significantly downregulated the expression of PPAR-γ mRNA(0.22±0.08 vs. 0.69±0.09, P<0.01) while upregulated the expression of phospho-NF-κB p65 protein (0.78±0.06 vs. 0.31±0.01,P<0.01) and nonphospho-NF-κB p65 protein (1.61±0.16 vs. 0.59±0.14,P<0.01) comparaed with the control group which could be significantly attenuated by atorvastatin. (3) PPAR-γ agonist decreased the expression of phospho-NF-κB p65 protein (0.21±0.01 vs. 0.78±0.06, P<0.01),nonphospho-NF-κB p65 protein (0.67±0.14 vs. 1.61±0.16,P<0.01)and MCP-1 mRNA (0.17±0.02 vs. 0.93±0.12, P<0.01)compared with AGE(10-1g/L)group. (4) PPAR-γ inhibitor antagonized the effect of atorvastatin on the expression of phospho-NF-κB p65 protein, nonphospho-NF-κB p65 protein and MCP-1 mRNA stimulated by AGE in HUVECs(P<0.01).Conclusion The anti-inflammatory properties of atorvastatin in AGE stimulated HUVECs may partly be attributed to the effect on upregulation of PPAR-γ and downregulation of NF-κB signaling pathway.     

他汀类调脂药对大鼠胰岛胰岛素分泌的影响及机制研究

目的 观察不同他汀类药物对大鼠胰岛葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)的抑制作用及机制.方法 新鲜分离或经24 h培养的胰岛均匀分为对照组、阿托伐他汀组、氟伐他汀组和普伐他汀组,对照组给予Kreb-Ringer碳酸氢盐缓冲液,他汀类药物组分别给予100μmol/L阿托伐他汀、氟伐他汀和普伐他汀,水浴30 min或过夜培养24 h.各组经2.8、5.5、11.1、16.7、25.0 mmol/L葡萄糖刺激后,37℃水浴法测定胰岛GSIS变化,生物化学发光法测定三磷酸腺苷(ATP)含量.结果 100μmol/L阿托伐他汀水浴30 min后,在16.7 mmol/L葡萄糖刺激下,与相应对照组比较,ATP含量[(9.54±1.64)pmol/胰岛比(12.33±1.89)pmol/胰岛]及胰岛素分泌(1.60±0.21比2.39±0.30)均下降(P＜0.05);100 μmol/L氟伐他汀过夜培养24 h后,在16.7 mmol/L葡萄糖刺激下,与相应对照组比较,ATP含量[(10.24±2.01)pmol/胰岛比(12.31±2.16)pmol/胰岛]及胰岛素分泌(3.12±0.32比4.17±0.37)也均下降(P＜0.05).结论 阿托伐他汀、氟伐他汀通过抑制胰岛ATP的生成而抑制GSIS,抑制程度与其脂溶性强弱有关.

Abstract：

Objective To evaluate the inhibitory effect of statins on glucose-stimulated insulin secretion (GSIS) of pancreatic islet in rat and to explore its mechanisms. Methods According to the average volume, freshly isolated or 24-hour cultured pancreatic islets were randomly divided into control group( incubated with Kreb-Ringer bicarbonate buffer), the atorvastatin group( incubated with 100 μ mol/L atorvastatin), the fluvastatin group (incubated with 100 μ mol/L fluvastatin)and the pravastatin group (incubated with 100 μ mol/L pravastatin). Stimulated by 2. 8,5. 5,11.1,16. 7 mmol/L and 25.0 mmol/L glucose respectively, the effect of 100 μ mol/L statins on ATP content and GSIS was compared in the four groups. GSIS was performed by the 37℃ bath incubation method and ATP content was measured by chemiluminescence method. Results Incubated with 100 μ mol/L atorvastatin for 30 minutes, in the presence of 16. 7 mmol/L glucose, the ATP content [(9. 54 ± 1. 64) pmol/islet vs ( 12. 33 ± 1.89) pmol/islet] and GSIS (1.60 ± 0. 21 vs 2. 39 ± 0. 30) were significantly reduced in comparison with the control group (P＜0. 05). Cultured with 100 μmol/L fluvastatin for 24 hours, the ATP content [( 10. 24 ±2.01 )pmol/islet vs (12. 31 ±2. 16) pmol/islet] and GSIS (3. 12 ± 0. 32 vs 4. 17 ±0. 37 ) were all significantly decreased at the higher glucose concentration of 16. 7 mmol/L ( P ＜ 0. 05). Conclusion Atorvastatin and fluvastatin may inhibit GSIS by decreasing ATP content in pancreatic islet and the inhibitory effect is related to the strength of its lipophilicity.     

瑞舒伐他汀与阿托伐他汀对急性冠脉综合征患者血脂与CRP疗效的比较

目的:探讨瑞舒伐他汀与阿托伐他汀治疗对急性冠脉综合征(ACS)患者脂蛋白与炎性因子疗效的比较。方法:选择我院心内科于2008年3月~2014年2月收治的74例ACS患者,采用随机数字表法分为瑞舒伐他组和阿托伐他汀组,各37例。比较两组给药24h后的临床疗效,及治疗前及治疗4周后的低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、白介素(IL)-18及C反应蛋白(CRP)水平。结果:治疗24d后,瑞舒伐他组总有效率显著高于阿托伐他汀组(83.8%比75.7%,P0.05);治疗4周后,与阿托伐他汀组比较,瑞舒伐他汀组LDL-C[(1.8±0.2)mmol/L比(1.4±0.1)mmol/L]、IL-18[(1.8±0.2)pg/ml比(1.4±0.1)pg/ml]、CRP[(1.9±0.3)比(1.4±0.2)]水平明显降低,HDL-C[(1.4±0.2)mmol/L比(1.9±0.3)mmol/L]水平明显升高(P均0.05)。结论:急性冠脉综合征患者采取瑞舒伐他汀治疗,其疗效优于阿托伐他汀,有更佳的调脂、抗炎效果,值得推广。     

罗格列酮联合阿托伐他汀对单核细胞分泌肿瘤坏死因子α的影响

目的 研究罗格列酮联合阿托伐他汀干预对无糖尿病的急性冠脉综合征（ACS）患者外周血单核细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响。方法 分离无糖尿病的ACS患者外周血单核细胞,设置对照组（等容积的二甲基亚砜）、阿托伐他汀（1 μmol/L）组、罗格列酮（1 μmol/L）组及二者联合组（阿托伐他汀1 μmol/L加罗格列酮1 μmol/L组） 4个组,分别与所分离的外周血单核细胞共同孵育24 h后,用夹心酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液TNF-α,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定TNF-α mRNA的表达。结果 与对照组相比较,阿托伐他汀组、罗格列酮组及联合组对无糖尿病ACS患者外周血单核细胞分泌TNF-α［分别为(229±24)ng/L、(236±28)ng/L、(159±29)ng/L vs (306±40)ng/L,均P<0.05］及TNF-α mRNA的相对半定量吸光值（A）比值（分别为0.35±0.12,0.39±0.11,0.26±0.06 vs 0.78±0.14,均P<0.05）均降低,且罗格列酮联合阿托伐他汀组比阿托伐他汀组、罗格列酮组降低更显著（均P<0.05）。结论 阿托伐他汀和罗格列酮都可通过降低无糖尿病的ACS患者外周血单核细胞产生分泌TNF-α,发挥阿托伐他汀和罗格列酮的抗炎作用,且二者联合干预具有协同作用,防治效果更佳。     

罗格列酮联合阿托伐他汀对单个核细胞合成组织因子的影响

目的:研究罗格列酮联合阿托伐他汀干预对无糖尿病的急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血单核细胞合成组织因子水平及组织因子活性的影响.方法:分离无糖尿病的ACS患者外周血单核细胞,分成对照组(等容积的二甲基亚砜)、阿托伐他汀(1 μmol·L-1)组、罗格列酮(1 μmol·L-1)组及二者联合组(阿托伐他汀1 μmol·L-1加罗格列酮1 μmol·L-1)组4个组,分别与所分离的外周血单核细胞共同孵育24 h后,用夹心酶联免疫吸附测定法检测细胞组织因子水平,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定组织因子mRNA的表达,同时用底物发光法检测组织因子的活性.结果:与对照组相比较,阿托伐他汀组、罗格列酮组及罗格列酮联合阿托伐他汀组对无糖尿病ACS患者外周血单核细胞合成组织因子分别为[(3.69±0.91)ng/L、(3.27±0.46)ng/L、(1.90±0.26)ng/L:(5.78±1.29)ng/L,均P<0.01]、组织因子的活性分别为[(4.28±0.84)pmol/L、(5.37±0.59)pmol/L、(2.15±0.37) pmol/L:(16.21±3.23)pmol/L, 均P<0.01),及组织因子mRNA的相对半定量A值分别为[(0.22±0.07), (0.31±0.09), (0.14±0.05):(0.42±0.11),均P<0.01)均降低,且罗格列酮联合阿托伐他汀组比阿托伐他汀组、罗格列酮组降低更显著(P均<0.01).结论:阿托伐他汀和罗格列酮都可通过降低无糖尿病的ACS患者外周血单核细胞合成组织因子及组织因子活性,发挥抗组织因子、抗血栓形成的作用,且二者联合干预具有协同作用.因此,罗格列酮联合阿托伐他汀,可能有更佳的防治ACS作用.     

瑞舒伐他汀对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2表达和细胞迁移的影响

目的 观察瑞舒伐他汀对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2(MMP 2)表达以及对血管平滑肌迁移的影响,探讨Hcy致动脉粥样硬化以及他汀药物逆转的可能机制.方法 体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,加入不同浓度的Hcy分别作用 24 h、48 h和72 h,在1000 μmol/L Hcy浓度下分别加入不同浓度的瑞舒伐他汀干预,采用免疫印迹法和明胶酶谱法检测细胞培养上清液中MMP 2的表达及酶的活性.在Transwell小室外室中加入1000 μmol/L浓度的Hcy,内室加入定量的大鼠平滑肌细胞悬液,培养48 h,观察Hcy对平滑肌细胞迁移侵袭力的影响;同时加入不同浓度瑞舒伐他汀溶液,分别培养24 h、48 h和72 h,观察瑞舒伐他汀对Hcy诱导平滑肌细胞迁移侵袭力的影响.结果 Hcy浓度在50～5000 μmol/L时促进血管平滑肌细胞MMP 2蛋白的表达,Hcy浓度在50～1000 μmol/L时增强血管平滑肌细胞MMP 2的酶活性,浓度在5000 μmol/L时抑制MMP 2的活性(F值分别为9.31、6.44、5.97,均P＜0.05);瑞舒伐他汀浓度在10-9～10-5 mol/L时,能抑制Hcy对血管平滑肌MMP 2表达和酶活性的增强作用(F值分别为3.92、4.78、2.14,均P＜0.05).Hcy在50～5000 μmol/L浓度下能刺激血管平滑肌细胞迁移,Hcy浓度为0、50、100、500、1000、5000 μmol/L时平滑肌细胞迁移分别为(18.32±2.17)个、(32.68±4.34)个、(44.75±4.08)个、(61.39±5.21)个、(79.74±5.54)个 和(90.78±5.83)个(F=5.31,P＜0.05);而瑞舒伐他汀可以抑制Hcy对血管平滑肌细胞迁移的刺激作用,在瑞舒伐他汀浓度为10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L时平滑肌细胞迁移分别为(79.74±5.54)个、(62.53±6.41)个、(48.37±5.66)个、(31.41±4.79)个、(19.27±3.62)个和(11.17±2.33)个(F=4.99,P＜0.05).结论 Hcy能影响血管平滑肌细胞MMP 2蛋白的表达,瑞舒伐他汀能抑制Hcy对血管平滑肌细胞MMP 2的表达和酶活性的增强作用,并能抑制Hcy对血管平滑肌细胞迁移的刺激作用,这可能是瑞舒伐他汀抗动脉粥样硬化的作用机制之一.

Abstract：

Objective To observe the effects of rosuvastatin on the homocysteine (Hcy)-induced expression of matrix metalloproteinase 2 (MMP 2) and cell migration in rat vascular smooth muscle cells (VSMCs), and to explore the possible mechanism of Hcy-induced atherosclerosis and the role of statins in reversing atherosclerosis. Methods In one cell culture plate, the cultured rat VSMCs were incubated with different concentrations of Hcy (0, 50, 100, 500, 1000 μmol/L and 5000 μmol/L) in vitro for 24 h, 48 h and 72 h. And in another cell culture plate, the different concentrations of rosuvastatin (10-9, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 mol/L and 0 mol/L) were added to the cultured rat VSMCs (while the concentration of Hcy was 1000 μmol/L). The MMP 2 expression and enzyme activity were determined by gelatin zymography and Western blotting. The effects of Hcy and rosuvastatin on cell migration and invasiveness of VSMCs were observed. Results Hcy (50-5000 μmol/L) increased the protein expression, and Hcy (50-1000 μmol/L) increased enzyme activity of MMP 2 significantly. But Hcy (5000 μmol/L) inhibited activity of MMP 2 (F=9.31, 6.44 and 5.97, all P＜0.05). Rosuvastatin (10-9-10-5 mol/L) inhibited Hcy-induced expression and enzyme activity increasing of MMP 2. The counts of cell migration of VSMCs were 18.32±2.17, 32.68±4.34, 44.75±4.08, 61.39±5.21, 79.74±5.54 and 90.78±5.83, while the concentration of Hcy was 0, 50, 100, 500, 1000 μmol/L and 5000 μmol/L respectively (F=5.31, P＜0.05). The counts of cell migration of VSMCs were 79.74±5.54, 62.53±6.41, 48.37±5.66, 31.41±4.79, 19.27±3.62 and 11.17±2.33, while the concentration of rosuvastatin was 10-9, 10-8, 10-7, 10-6 and 10-5 mol/L respectively (F=4.99, P＜0.05). Rosuvastatin could decrease the stimulation of Hcy-induced migration of VSMCs. Conclusions Hcy can influence the MMP 2 protein expression/activity in VSMCs, and rosuvastatin can inhibit augmentation of Hcy-induced MMP 2 expression/activity and migration of VSMCs. It may be one of the multiple-effects of rosuvastatin reducing atherosclerosis.     

阿托伐他汀对急性心肌梗死患者血清生长分化因子15和C反应蛋白水平的影响

目的探讨阿托伐他汀对急性心肌梗死患者血清生长分化因子15(GDF-15)和C反应蛋白(CRP)水平的影响。方法选择行冠状动脉造影的急性心肌梗死患者60例,根据服用阿托伐他汀剂量分为阿托伐他汀20mg组(小剂量组)30例,阿托伐他汀40mg组(大剂量组)30例。采用ELISA检测服用阿托伐他汀治疗4、8、12周后急性心肌梗死患者血清GDF-15和CRP表达水平;分别在阿托伐他汀治疗1、3、6个月记录患者血糖、血脂、血肌酐、肝肾功能等指标。结果与治疗前比较,小剂量组和大剂量组治疗4、8、12周血清GDF-15较治疗前明显降低[(1078.54±229.16)ng/L、(931.10±205.36)ng/L、(862.47±189.67)ng/L vs(1106.32±231.98)ng/L,P0.05;(1025.65±133.25)ng/L、(815.72±112.93)ng/L、(759.54±98.99)ng/L vs(1278.53±120.69)ng/L,P0.05],CRP较治疗前明显降低。与小剂量组比较,大剂量组治疗4、8、12周血清GDF-15、CRP水平明显降低(P0.05)。结论阿托伐他汀能有效降低急性心肌梗死患者GDF-15和CRP水平,降低炎性反应,改善临床预后。     

阿托伐他汀序贯疗法对择期PCI治疗患者降脂和抗炎作用的疗效

目的:探讨阿托伐他汀(立普妥)序贯疗法对择期经皮冠状动脉介入治疗(PCI)患者降脂和抗炎作用。方法:94例择期冠心病PCI患者被随机分为常规治疗组(47例,入院至PCI术后长期口服阿托伐他汀20mg/d维持治疗)和序贯疗法组(47例,入院后口服阿托伐他汀80mg/d,术前4h再次口服阿托伐他汀40mg,术后40mg/d口服1个月后改为20mg/d,长期维持),比较两组用药前、用药后3d及3个月的血脂及炎性因子水平。结果:与治疗前比较,治疗后3d、3个月两组患者的TC、LDL-C、hsCRP、髓过氧化物酶(MPO)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平均明显下降(P0.05或0.01);且与常规治疗组比较,序贯治疗组治疗后3d和3个月的TC[3d:(4.16±1.04)mmol/L比(3.57±0.81)mmol/L,3个月:(3.36±1.01)mmol/L比(3.17±0.64)mmol/L]、LDL-C[3d:(2.23±0.54)mmol/L比(1.86±0.57)mmol/L,3个月:(1.89±0.58)mmol/L比(1.52±0.37)mmol/L]、hsCRP[3d:(7.42±2.75)mg/L比(5.35±1.94)mg/L,3个月:(2.57±0.31)mg/L比(1.89±0.18)mg/L]和MMP-9[3d:(859.45±221.36)pg/ml比(672.59±213.62)pg/ml,3个月:(675.75±141.63)pg/ml比(437.96±114.38)pg/ml]水平降低更显著(P均0.01)。两组的药物不良反应和心血管不良事件发生率差异不显著(P均0.05)。结论:阿托伐他汀常规和序贯疗法均能有效降低择期PCI术后患者的血脂和炎症因子水平,而序贯疗法降脂和抑制炎症因子的效果优于常规治疗。     

充血性心力衰竭患者血清细胞因子与心功能的关系及阿托伐他汀的干预作用

目的:探讨充血性心力衰竭(CHF)患者血清肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6水平的变化与心功能的关系及阿托伐他汀对其水平的影响。方法:84例CHF患者被随机分为阿托伐他汀治疗组(42例)和常规治疗组(42例),另选30例健康人作为正常对照组,采用放射免疫方法检测各组治疗前后血清中TNF-α及IL-6的水平,并作心脏超声检查,评估心功能。结果:①84例心功能I~IV级CHF患者血清中TNF-α水平:[(0.52±0.16)μg/L∶(0.64±0.17)μg/L∶(0.79±0.17)μg/L∶(0.88±0.18)μg/L],IL-6[(96.67±17.79)μg/L∶(119.19±25.48)μg/L∶(143.51±26.63)μg/L∶(154.21±23.39)μg/L]随着心功能损害程度加重而显著升高(P0.05);②阿托伐他汀组与常规治疗组治疗后血清TNF-α,IL-6水平均较治疗前明显下降(P均0.05),且阿托伐他汀组较常规治疗组治疗后血清中TNF-α[(0.63±0.21)μg/L∶(0.74±0.19)μg/L],IL-6[(108.87±20.86)μg/L∶(113.92±15.37)μg/L]降低更明显(P0.05);③治疗后阿伐他汀治疗组左室射血分数[(40±6)%∶(36±5)%]、左室收缩末容积指数[(31±6)ml/m2∶(34±5)ml/m2]、左室舒张末容积指数[(47±12)ml/m2∶(51±11)ml/m2]较常规治疗组明显改善(P均0.05)。结论:①充血性心力衰竭患者TNF-,αIL-6水平与心功能状态密切相关;②阿托伐他汀能降低血浆细胞因子(肿瘤坏死因子、白细胞介素-6)水平,改善心脏功能,有益于慢性心力衰竭的治疗。     

阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响

目的观察阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响。方法用50mg/L氧化型低密度脂蛋白与不同浓度的阿托伐他汀(0、0.312、1.25和5μmol/L)共同孵育THP-1巨噬细胞24h,以空白组作对照,用液体闪烁计数法检测细胞[3H]胆固醇流入情况,油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平,逆转录聚合酶链反应与免疫印迹分析法分别检测THP-1巨噬细胞CD36mRNA和蛋白的表达。结果阿托伐他汀使THP-1巨噬细胞胆固醇流入减少,对照组胆固醇流入为35.90%±2.36%,0、0.312、1.25和5μmol/L阿托伐他汀组胆固醇流入分别为47.10%±3.18%、41.20%±2.88%、35.10%±2.35%和28.30%±1.98%;阿托伐他汀能抑制THP-1巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取,油红O染色可见氧化型低密度脂蛋白 阿托伐他汀组细胞内脂滴较氧化型低密度脂蛋白组明显减少,且脂滴颗粒体积变小;高效液相色谱分析发现,对照组细胞总胆固醇含量为78.24±11.35mg/g,0、0.312、1.25和5μmol/L阿托伐他汀组细胞总胆固醇含量分别为123.13±15.92mg/g、115.36±13.18mg/g、107.52±12.05mg/g和98.03±10.24mg/g。阿托伐他汀使氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞CD36mRNA和蛋白的表达下调。结论阿托伐他汀引起氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞CD36表达下调,并使脂质蓄积减少。     

辛伐他汀对C反应蛋白诱导的单核细胞白细胞介素-6合成的影响

目的　探讨辛伐他汀对C反应蛋白 (C reactiveprotein ,CRP)诱导的人外周血单核细胞白细胞介素 6 (interleu kin 6 ,IL 6 )合成的影响 ,观察辛伐他汀的抗炎作用。方法　密度梯度离心法分离人外周血单核细胞 ,应用酶联免疫吸附测定法观察CRP刺激单核细胞产生IL 6的时间 剂量效应 ,其峰值与辛伐他汀抑制剂组比较。结果　CRP刺激IL 6合成开始的时间是 4h ,呈时间依赖性和剂量依赖性 ,在 2 4h达高峰。辛伐他汀 (10 - 8～ 10 - 6 mol L)呈剂量依赖性抑制单核细胞IL 6合成。结论　辛伐他汀能抑制CRP诱导的单核细胞IL 6合成 ;辛伐他汀对炎症反应的抑制作用提示该药物可用于预防和治疗冠心病。     

脂多糖对大鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达及炎性因子分泌的影响

目的 探讨脂多糖刺激大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白-2(MD-2)mRNA表达和炎性因子分泌的影响,以及MD-2小干扰RNA(MD-2 siRNA)对脂多糖刺激下NR8383细胞炎性因子分泌的作用.方法 体外培养NR8383细胞,以不同浓度脂多糖(0.01～10 mg/L)刺激2 h,以1 mg/L脂多糖刺激2～24 h.运用脂质体Lipofectamine 2000将MD-2siRNA转染至细胞.半定量RT-PCR方法检测细胞TLR4和MD-2 mRNA的表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1β的含量.统计学处理采用单因素方差分析、独立样本t检验和Pearson相关分析.结果 对照组NR8383细胞TLR4和MD-2mRNA的相对表达量分别为0.52±0.05和0.44±0.09,0.01 mg/L浓度脂多糖刺激前后表达量无明显改变,0.1 mg/L浓度时表达增加,随脂多糖浓度的升高表达量进一步增加,10 mg/L刺激后相对表达量分别为0.72±0.06和0.65±0.10(F=17.26、6.04,P<0.01);TNF-αIL-6和IL-1β含量具有类似改变趋势,对照组分别为(25.8±3.4)ng/L、(62.4±4.7)ng/L和(31.6±1.7)ng/L;在10 mg/L脂多糖刺激下分别增加至(58.9±5.3)ng/L、(96.5±3.9)ng/L和(55.4±5.4)ng/L(F=29.55、54.47、31.45,P<0.01).在1 mr/L脂多糖刺激下,TLR4和MD-2 mRNA的表达量在2 h后明显增加,6 h达高峰,8 h开始回落,至24 h时仍高于基础值(F=5.28、4.11,P<0.01);TNF-α、IL-6和IL-1β含量具有类似变化(F=10.64、11.23、17.58,P<0.01),其中TNF-α和IL-1β含量在6 h达高峰,持续至8 h,IL-6含量在8 h达高峰,持续至12 h.TLR4和MD-2 mRNA表达呈正相关(r=0.513,P<0.01).MD-2 siRNA对NR8383细胞MD-2基因的干扰效率为67%,在脂多糖刺激下干扰组细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6水平未见明显升高.结论 高浓度脂多糖可较长时间上调大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞TLR4和MD-2基因的表达,并促进TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌.MD-2 siRNA可抑制脂多糖刺激下NR8383细胞分泌TNF-α、IL-1 β和IL-6.     

羟基红花黄色素A缓解脂多糖诱导内皮细胞炎症因子表达升高的研究

目的:研究羟基红花黄色素A(HSYA)抑制脂多糖(LPS)诱导的脐静脉血管内皮细胞(Eahy926细胞)炎症因子表达升高的作用。方法:采用RT-qPCR法测定Toll样受体4(TLR4)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA表达水平及ELISA法测定IL-6、IL-1β和TNFα蛋白表达水平。结果:HSYA浓度为5×10-6mol/L、10×10-6mol/L和20×10-6mol/L时可抑制LPS(终浓度为1μg/mL)诱导的Eahy926细胞IL-6、IL-1β和TNFαmRNA(模型组vs.正常组P值均<0.01;HSYA干预中高剂量组vs.模型组P值均<0.01;HSYA干预低剂量组vs.模型组,P值均<0.05)和TNFα蛋白(模型组vs.正常组,P值均<0.01;HSYA干预IL-1β表达的中高剂量组vs.模型组,P值<0.05;HSYA干预TNFα表达的中剂量组vs.模型组,P值<0.05;高剂量组vs.模型组,P值<0.01。HSYA干预IL-6表达的低剂量组vs.模型组,P值<0.05;HSYA干预中高剂量组vs.模型组,P值<0.01)表达的升高,并随HSYA剂量升高可见药效增强。结论:HSYA对LPS诱导的Eahy926细胞TLR4、IL-6、IL-1β、TNFα表达升高有抑制作用。     

阿托伐他汀抑制C反应蛋白对肺动脉平滑肌细胞的促炎作用研究

目的观察C反应蛋白(CRP)和阿托伐他汀对人肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs)炎性因子分泌的影响。方法体外培养hPASMCs,培养液只加FBS为对照组,培养液中加5、10、20、50、100、200 mg/L CRP依次分为CRP5组、CRP10组、CRP20组、CRP50组、CRP100组、CRP200组;加入0.1、1.0、10μmo1/L阿托伐他汀依次为阿托0.1组、阿托1.0组、阿托10组,另用CRP100 mg/L刺激不同时间,以非变性凝胶电泳迁移率方法分析NF-κB的激活。以RT-PCR和ELISA方法对白细胞介素6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA和蛋白水平检测。结果CRP以浓度和时间依赖的方式促进IL6和MCP-1 mRNA表达和蛋白的合成。与对照组比较,除CRP5组外,CRP各浓度组IL-6和MCP-1蛋白和mRNA均显著增加(P<0.05,P<0.01),阿托伐他汀各浓度组无显著差异(P>0.05)。CRP显著诱导NF-κB的激活,阿托伐他汀抑制NF-κB激活。结论CRP促进hPASMCs对IL-6和MCP-1的表达,阿托伐他汀可能通过抑制NF-κB的激活而显著降低CRP对hPASMCs IL-6和MCP-1合成,起到对肺血管疾病的保护作用。     

大黄甘草汤对急性坏死性胰腺炎大鼠并发的肺损伤的影响

目的 观察大黄甘草汤对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠并发肺损伤的治疗效果,探讨其作用机制.方法 90只Wistar大鼠按完全随机法分为假手术组、ANP组和大黄甘草汤治疗(治疗)组,每组30只.采用逆行胰胆管注射4%牛磺胆酸钠方法制备ANP模型.治疗组在制模后给予大黄甘草汤(0.25 g/ml)0.6 ml/100 g体重灌胃,1次/12 h;假手术组与ANP组予等量生理盐水灌胃.术后6、12、24 h分批处死大鼠,取胰腺及肺组织行病理学检查并评分;测血清及肺组织IL-6、IL-10、TNF-α水平;免疫组化法检测肺组织Toll样受体4(TLR4)的表达量.结果 制模后12 h,假手术组、ANP组和治疗组的血IL-6水平分别为(14.4±4.0)pg/ml、(171.4±41.3)pg/ml、(156.9±34.7)pg/ml,IL-10水平为(13.7±4.5)pg/ml、(120.5±23.7)pg/ml、(148.3±44.4)pg/ml,TNF-α水平为(22.4±4.7)pg/ml、(261.3±51.4)pg/ml、(235.3±45.9)pg/ml;肺组织IL-6水平为(257.3±55.9)pg/g、(2578.3±403.0)pg/g、(2370.0±491.0)pg/g,IL-10水平为(80.8±20.8)Pg/g、(642.0±107.3)pg/g、(695.3±151.7)Pg/g,TNF-α水平为(207.6±98.6)pg/g、(1769.1±635.6)Pg/g、(1401.1±450.5)pg/g;胰腺病理评分为0、7.0±1.3、6.3±1.0;肺脏病理评分为0、6.3±1.4、5.6±1.0;肺组织TLR4表达量为0.09 ±0.03、0.59±0.09、0.52±0.08.ANP组和治疗组的上述指标均显著高于假手术组(P值均＜0.01);除IL-10外,治疗组的指标又显著低于ANP组(P值均＜0.05).肺组织病理学损伤与胰腺组织损伤呈正相关(r=0.807,P＜0.01),与TLR4表达水平亦呈正相关(r=0.519,P＜0.01).结论 大黄甘草汤可快速改善ANP并发的肺损伤,其机制可能与抑制TLR4的表达、降低IL-6和TNF-α、升高IL-10水平有关.     

沙利度胺对系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨沙利度胺(Thd)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的免疫凋节作用.方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Thd对SLE患者外周血T淋巴细胞增殖的影响,用流式细胞术检测T淋巴细胞早期凋亡及CD3~+CD28~+和CD8~+CD152~+的表达,用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测T淋巴细胞白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-a mRNA的表达,采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 在体外,500 μg/ml Thd组CD3~+CD28~+表达为(48±9)%显著低于对照组(57±9)%(P<0.05)、500μg/ml Thd组T淋巴细胞凋亡率为(36±8)%显著高于对照组(23±5)%(P<0.05);100、300、500μg/ml Thd组A_(570nm)值分别为:0.39±0.05、0.34±0.04、0.30±0.03较对照组(0.51±0.07)均有明显下降(P<0.05);100、500 μg/ml Thd组CD8~+CD152~+表达分别为(5.0±0.6)%、(7.8±0.7)%,明显高于对照组(4.2±0.6)%(P<0.05);500μg/ml Thd能抑制IL-6 mRNA的表达,各剂量组均抑制IL-10、TNF-a mRNA表达.结论 Thd可能通过抑制T淋巴细胞增殖、CD28的表达、IL-6、IL-10、TNF-a mRNA的表达和促进T淋巴细胞凋亡、CD152表达来下调SLE患者的免疫反应.     

锌指蛋白A20抑制Toll样受体4介导的人单核细胞炎症反应的实验研究

目的:观察锌指蛋白A20过度表达对人单核细胞膜Toll样受体(TLR4),下游促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素(IL)-12,以及抗炎因子IL-10表达的影响,探讨锌指蛋白A20对单核细胞炎症反应的抑制作用及可能的调节机制。方法:Ficoll细胞分离液分离人外周血单核细胞,随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、A20转染组与LPS+A20转染组。荧光显微镜检测GFP报告基因,免疫组织化学检测A20蛋白的表达,RT-PCR检测A20及TLR4的mRNA表达,流式细胞检测技术检测TLR4的蛋白表达,ELISA方法检测上清液TNF-α、IL-12及IL-10表达水平。结果:LPS刺激后,单核细胞TLR4和内源性A20的mRNA和蛋白、TNF-α、IL-12和IL-10表达较对照组均明显升高(均P<0.01);TNF-α/IL-10和IL-12/IL-10均明显高于对照组(均P<0.01);转染A20基因的单核细胞,在无LPS刺激的条件下,上述指标与对照组相比均差异无统计学意义;转染A20基因的单核细胞在LPS刺激后,TLR4mRNA和蛋白、TNF-α、IL-12的表达以及TNF-α/IL-10和IL-12/IL-10均显著低于LPS组,而IL-10的表达明显高于对照组和LPS组(均P<0.01)。结论:TLR4激活介导单核细胞的炎症反应,且正反馈调节其自身受体TLR4和内源性A20的表达;A20参与单核细胞TLR4激活所介导的炎症反应,其表达增加与TLR4表达的增加有关;单纯提高A20表达对未被激活的单核细胞TLR4及其信号通路影响不大;A20过表达可抑制TLR4激活所介导的单核细胞的炎症反应。