体外人牙髓细胞的连续培养

目的 探讨体外连续培养过程中人恒牙牙髓细胞向成牙本质样细胞分化的可行性。方法 采用细胞连续培养、酶动力学法、透射电镜观察、免疫组化等方法，对体外人牙髓细胞在连续培养过程中的生物学特性进行研究。结果 部分人牙髓细胞在体外可以出现复层生长，形成细胞结节，并可进一步钙化；与成牙本质细胞相似，它们具有高碱性磷酸酶活性，可合成Ⅰ型胶原，其超微结构有许多与成牙本质细胞相似的特征，胞间基质中可见膜被基质小泡，某些基质小泡内含针状晶体。结论 体外连续培养的人牙髓细胞可向成牙本质细胞分化，此过程可作为研究体内牙髓损伤修复细胞增殖、分化的体外模型。     

体外组织培养模式的构建及转化生长因子促进牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的研究

目的通过构建体外组织培养模式,观察牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的潜力及转化生长因子-β1(TGF-β1)的促进作用。方法获取人第三磨牙牙髓组织,剪碎后与牙本质陶瓷粉(CDP)及2μg/mL TGF-β1混合,将混合物以骨基质明胶(BMG)为载体构建牙髓组织培养模型,在培养3、7、14和21 d后,通过HE和组织特异性染色鉴定有无骨-牙本质基质成分形成,免疫组化检测细胞有无牙本质特异性蛋白——牙本质涎蛋白(DSP)的表达。结果牙髓组织经TGF-β1诱导培养后可进一步矿化,甲苯胺蓝和Mallory染色表明在牙髓组织的中心出现骨-牙本质样基质的沉积,免疫组化检测牙髓细胞开始出现DSP的表达。结论成功构建体外牙髓组织培养模型,该模型能维持牙髓细胞的生长和存活,可用于体外对牙髓细胞的诱导分化观察;该模型模式下TGF-β1可明显促进牙髓细胞向成牙本质细胞的分化诱导潜能。     

体外组织培养模式的构建及转化生长因子促进牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的研究

目的通过构建体外组织培养模式，观察牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的潜力及转化生长因子-β1（TGF-β1）的促进作用。方法获取人第三磨牙牙髓组织，剪碎后与牙本质陶瓷粉（CDP）及2μg／mL TGF-β1混合，将混合物以骨基质明胶（BMG）为载体构建牙髓组织培养模型，在培养3、7、14和21d后，通过HE和组织特异性染色鉴定有无骨-牙本质基质成分形成，免疫组化检测细胞有无牙本质特异性蛋白——牙本质涎蛋白（DSP）的表达。结果牙髓组织经TGF-β1诱导培养后可进一步矿化，甲苯胺蓝和Mallory染色表明在牙髓组织的中心出现骨-牙本质样基质的沉积，免疫组化检测牙髓细胞开始出现DSP的表达。结论成功构建体外牙髓组织培养模型，该模型能维持牙髓细胞的生长和存活，可用于体外对牙髓细胞的诱导分化观察；该模型模式下TGF-β1可明显促进牙髓细胞向成牙本质细胞的分化诱导潜能。     

牙髓牙本质复合体体外培养模型的建立

目的建立牙髓牙本质复合体体外培养模型。方法取20~30岁成人新鲜、健康、完整的第三磨牙,纵向将牙齿切成厚约2 mm的片状结构,每片牙片均包含牙釉质、牙本质和牙髓,运用DMEM培养液进行体外培养,隔天换液,连续培养21 d。分别在培养的第7、14、21天,通过光镜和电镜观察,并行免疫组化检测,对模型进行鉴定。结果光镜和电镜观察显示,成牙本质细胞和牙髓细胞在培养的第7天和第14天时,均保持良好的细胞形态;培养第21天时,部分细胞开始发生变性。免疫组化检测表明,成牙本质细胞牙本质涎磷蛋白表达阳性。结论该模型能够在体外进行较长时间的培养,为人类牙髓牙本质复合体的体外研究提供了一种新的方法。     

牙髓牙本质复合体体外培养模型的建立

目的 建立牙髓牙本质复合体体外培养模型.方法 取20～30岁成人新鲜、健康、完整的第三磨牙,纵向将牙齿切成厚约2 mm的片状结构,每片牙片均包含牙釉质、牙本质和牙髓,运用DMEM培养液进行体外培养,隔天换液,连续培养21 d.分别在培养的第7、14、21天,通过光镜和电镜观察,并行免疫组化检测,对模型进行鉴定.结果 光镜和电镜观察显示,成牙本质细胞和牙髓细胞在培养的第7天和第14天时,均保持良好的细胞形态;培养第21天时,部分细胞开始发生变性.免疫组化检测表明,成牙本质细胞牙本质涎磷蛋白表达阳性.结论 该模型能够在体外进行较长时间的培养,为人类牙髓牙本质复合体的体外研究提供了一种新的方法.     

牙髓牙本质复合体的nNOS阳性神经纤维

目的:研究神经型一氧化氮合酶（nNOS）在牙髓牙本质复合体中的表达,探讨其分布与功能的关系。方法:收集新鲜健康人前磨牙60颗,经固定、脱钙、石蜡包埋、切片,nNOS免疫组织化学染色。结果:在根髓nNOS阳性神经纤维呈粗大束状,向颈部逐渐变细,分支少;在颈部,束状纤维呈放射状至冠髓;在冠髓束状纤维大量分支呈网状,部分围绕于血管,部分止于牙髓基质,部分经成牙本质细胞层进入前期牙本质和成熟牙本质近髓1/3牙本质小管。结论:nNOS阳性神经纤维存在于人牙髓牙本质复合体中,部分围绕于血管周围,可能与血管功能调节有关,部分止于牙髓基质、前期本质和牙本质小管内,可能与牙内因素和牙外因素引起的感觉有关。     

BMP2在大鼠牙髓损伤修复中的表达及其对牙髓细胞的生物学效应

目的：从体内体外两方面探讨BMP2在牙髓损伤修复，尤其是牙髓细胞分化过程中的作用。方法：建立大鼠牙髓损伤修复模型和体外人牙髓细胞连续培养，采用免疫组织化学、MTT法和酶动力学等方法，检测BMP2在体内牙髓组织损伤修复过程中的表达，并比较不同浓度rhBMP2对体外人牙髓细胞连续培养各阶段细胞增殖活性及ALP活性的影响。结果：体内牙髓组织损伤修复过程中存在BMP2的表达，牙髓组织损伤修复的不同阶段其表达部位和强度发生变化；rhBMP2可提高体外培养人牙髓细胞的增殖活性，与其本身浓度有关，并可促进人虎髓细胞ALP活性，呈浓度依赖性；结论：BMP2是参与牙髓损伤修复，尤其是牙髓细胞的增殖和分化的重要因子之一。     

富血小板纤维蛋白运用于直接盖髓术的研究进展

<正>直接盖髓术是保存活髓的有效手段,将盖髓材料覆盖于暴露的牙髓组织上,隔绝外界刺激,诱导牙髓细胞向成牙本质细胞分化,并为牙髓细胞提供附着空间,最终在穿髓孔处形成管状修复性牙本质,这是直接盖髓术理想的组织学表现。牙髓细胞可在各种细胞生长因子作用下向成牙本质细胞分化,而富血小板纤维蛋白(Platelet-rich fibrin,PRF)可缓慢持续释放生长因子,进一步影响和引导牙髓细胞的增殖、分化过程。PRF膜已广泛应用于口腔领域,应用于直接盖髓     

人牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化中细胞周期变化

目的 建立成牙本质细胞样细胞体外培养体系,观察体外培养的牙髓细胞向成牙本质细胞分化过程中细胞周期的变化.方法 利用组织块酶解法培养人牙髓细胞并进行鉴定,使用矿化诱导液诱导其向成牙本质细胞样细胞分化.对细胞增殖情况使用流式细胞仪进行细胞周期测定.结果 ①获得的牙髓细胞均为波形丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证明为中胚层来源的细胞.②诱导分化的牙髓细胞在2周左右进入复层生长期;3周左右开始有细胞结节形成,周围细胞呈放射状排列,部分细胞出现细长突起并呈极性排列;4周左右细胞团中央Von Kossa染色为阳性.③在诱导开始后1周,细胞处于活跃的增殖期,以后细胞增殖变慢,3周后多数细胞处于G0G1期.结论 实验成功建立了成牙本质细胞样细胞体外培养体系,所获得的成牙本质细胞样细胞具有成牙本质细胞的部分形态和生物学功能,诱导分化后细胞增殖变慢,是研究成牙本质细胞的较好模型.     

人前磨牙牙髓牙本质复合体的增龄变化

目的 :研究人前磨牙牙髓牙本质复合体的增龄性变化 ,探讨牙衰老和老年牙病的形态学基础。方法 :收集健康人前磨牙 ,按年龄分组 ,然后脱钙 ,石蜡包埋 ,切片 ,HE染色 ,光镜观察与图像定量分析。结果 :随年龄增加 ,牙髓牙本质复合体钙盐大量沉积 ,牙髓体积缩小 ,牙髓内细胞、血管、牙本质小管和牙髓体密度减少 ;牙髓内结缔组织纤维与细胞外基质体密度增加 ,各年龄组间具有显著性差异。结论 :随年龄增加 ,牙髓牙本质复合体的生物活性成分减少 ,非生物活性成分增加。