邻苯二甲酸单丁酯和邻苯二甲酸单乙基己酯联合染毒对小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的探讨邻苯二甲酸单丁酯(MBP)、邻苯二甲酸单乙基己酯(MEHP)联合染毒对小鼠睾丸间质细胞(TM-3)睾酮合成的影响。方法将TM-3细胞分为对照(完全培养基)组、MBP(LC50,500μmol/L)单独染毒组、MEHP(LC50,450μmol/L)单独染毒组和MBP(500μmol/L)+MEHP(450μmol/L)联合染毒组,培养24 h后,观察线粒体超微结构,检测细胞线粒体膜电位和上清液中的睾酮水平。结果 MBP、MEHP单独染毒及联合染毒均可引起线粒体结构损伤。与对照组相比,MBP、MEHP单独染毒组和MBP+MEHP联合染毒组TM-3细胞线粒体膜电位和上清液中睾酮的水平均下降,差异有统计学意义(P0.01);与MBP+MEHP联合染毒组相比,MBP、MEHP单独染毒组TM-3细胞线粒体膜电位和上清液中睾酮的水平均较低,差异有统计学意义(P0.01),MBP和MEHP联合染毒对TM-3细胞线粒体膜电位和上清液中睾酮的水平的交互作用均表现为拮抗作用。结论 MBP、MEHP联合染毒对睾酮合成水平的下降呈拮抗作用,可能与线粒体损伤机制有关。     

邻苯二甲酸单乙基己酯和镉对大鼠睾丸巨噬细胞分泌白介素-10的影响

目的研究邻苯二甲酸单乙基己酯(MEHP)及氯化镉对大鼠睾丸巨噬细胞分泌细胞因子白介素-10(IL-10)的影响。方法利用贴壁法提取SPF级成年雄性Wistar大鼠的睾丸巨噬细胞(TM),分别暴露于终浓度0(对照,0.1%DMSO)、0.1、1、10、100、1 000μmol/L的MEHP或氯化镉溶液培养24 h,采用CCK8法测定细胞活性。并将细胞分别暴露于终浓度0(对照,0.1%DMSO)及1、10、100μmol/L的MEHP和(或)0.1、1、10μmol/L的氯化镉溶液,并加入激活剂(5μg/ml LPS),培养24 h后,采用ELISA法检测细胞分泌IL-10的情况。结果与对照组比较,100、1 000μmol/L MEHP或10、100、1 000μmol/L氯化镉暴露组大鼠TM细胞抑制率均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着MEHP或氯化镉暴露浓度的升高,大鼠TM细胞抑制率均呈上升趋势。经5μg/ml LPS激活后,各暴露组细胞因子IL-10的分泌量高于对照组,除100μmol/L MEHP+10μmol/L氯化镉暴露组外,差异均有统计学意义(P0.05)。与激活剂组比较,各浓度MEHP和氯化镉单独或联合暴露对大鼠TM分泌IL-10的抑制率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着MEHP和(或)氯化镉暴露浓度的升高,对大鼠TM分泌IL-10的抑制率均呈上升趋势。与相同浓度MEHP+氯化镉联合暴露组比较,10、100μmol/L的MEHP暴露组及1、10μmol/L氯化镉暴露组大鼠TM细胞IL-10的分泌抑制率较低,差异均有统计学意义(P0.05)。析因分析结果显示,10μmol/L MEHP+1μmol/L氯化镉暴露和100μmol/L MEHP+10μmol/L氯化镉暴露对大鼠TM分泌IL-10的抑制作用表现出协同作用。结论在本实验条件下,MEHP和氯化镉联合暴露对大鼠TM细胞IL-10的分泌抑制作用表现为协同作用。     

邻苯二甲酸单乙基己基酯对小鼠胚胎干细胞多能性相关转录因子表达的影响

[目的]研究邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对小鼠胚胎干细胞多能性维持能力的影响。[方法]不同浓度的MEHP(0、0.1、1、10、100、1 000μmol/L)处理小鼠胚胎干细胞(m ESCs)4 d,观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞凋亡指标;应用碱性磷酸酶染色法、real-time PCR及Western blot分别检测其分化情况、胚胎干细胞多能性相关转录因子SOX2、OCT4基因及其蛋白表达水平。[结果]随着MEHP染毒浓度的增加,m ESCs克隆的细胞团逐渐缩小,且数量也出现减少,以1 000μmol/L组尤为明显;细胞凋亡检测结果发现,随着染毒浓度增加,凋亡率呈增加趋势,与对照组相比,仅1 000μmol/L组m ESCs总细胞凋亡率[(9.58±2.02)%]的升高有统计学意义(P0.05)。碱性磷酸酶染色结果显示,1 000μmol/L组m ESCs着色较浅,甚至未着色,即出现分化倾向,而其他组m ESCs均被染成深蓝色或蓝紫色。与对照组相比,100、1 000μmol/L组中SOX2、OCT4基因表达降低(均P0.05);1 000μmol/L组SOX2、OCT4蛋白表达降低(均P0.05)。[结论]一定浓度MEHP对m ESCs存在细胞毒性,抑制m ESCs正常生长,降低m ESCs中多能性相关转录因子SOX2、OCT4的表达,进而影响胚胎早期发育。     

锰对新生大鼠神经细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响

目的 研究不同浓度锰对大鼠神经细胞凋亡及内质网应激信号分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)mRNA与蛋白以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)蛋白表达的影响.方法 以出生4～7 d的SPF级Wistar大鼠脑片为模型,分别用0(对照)、25、100、400 μmol/L锰暴露24h.检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,神经细胞凋亡率以及神经细胞内GRP78、CHOP mRNA和蛋白及caspase-12蛋白的表达.结果 与对照组比较,100和400 μ,mol/L锰暴露组培养液中LDH的释放量均较高,而各浓度锰暴露组大鼠神经细胞凋亡率均较高,差异有统计学意义(P＜O.01);且随着锰暴露浓度的升高,培养液中LDH的释放量和大鼠神经细胞凋亡率均呈逐渐升高的趋势.与对照组比较,100和400 μmol/L锰暴露组神经细胞内GRP78mRNA及各浓度锰暴露组大鼠神经细胞内CHOP mRNA的表达均较高,而100、400 μmol/L锰暴露组神经细胞内GRP78和CHOP蛋白及各浓度锰暴露组大鼠神经细胞内caspase-12蛋白的表达也均较高,差异有统计学意义(P＜0.01);且随着锰暴露浓度的升高,大鼠神经细胞内GRP78、CHOP mRNA和蛋白及caspase-12蛋白的表达均呈逐渐升高的趋势.结论 锰可促使大鼠神经细胞凋亡及GRP78和CHOP表达升高.     

邻苯二甲酸酯和双酚A联合暴露对大鼠睾丸间质细胞活性的影响

目的研究环境内分泌污染物邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)和双酚A(BPA)对原代大鼠睾丸间质细胞活性的影响。方法采用酶消化与贴壁法相结合提取大鼠睾丸间质细胞,分别暴露于终浓度0(对照)、1、10、100、1 000μmol/L的DEHP和(或)BPA溶液24 h。采用CCK8法检测细胞活性。结果与对照组比较,100、1 000μmol/L的DEHP暴露组和10、100、1 000μmol/L BPA暴露组及各浓度DEHP+BPA联合暴露组大鼠睾丸间质细胞的抑制率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着DEHP和(或)BPA暴露浓度的升高,大鼠睾丸间质细胞的抑制率均呈上升趋势。与相同浓度DEHP+BPA联合暴露组比较,1、1 000μmol/L的DEHP暴露组大鼠睾丸间质细胞的抑制率较低,1 000μmol/L的BPA暴露组大鼠睾丸间质细胞的抑制率较高,差异均有统计学意义(P0.05)。1μmol/L的DEHP与BPA联合暴露对细胞活性抑制表现为协同作用,1 000μmol/L的DEHP与BPA联合暴露表现为拮抗作用,10和100μmol/L的DEHP与BPA联合暴露对抑制细胞活性未表现出交互作用。结论 DEHP和BPA均能显著影响睾丸间质细胞活性,且以BPA作用更加明显;低剂量(1μmol/L)的DEHP和BPA联合作用为协同效应,高剂量(1 000μmol/L)的DEHP和BPA联合作用为拮抗效应。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对HepG2细胞脂质代谢的影响

[目的]观察邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(MEHP)对人肝癌细胞株HepG2细胞脂肪代谢的影响,及其致肝损伤的作用机制。[方法]分别用不同浓度的DEHP(31.25、62.5、125、250、500、1 000μmol/L)、MEHP(3.125、6.25、12.5、25、50、100、250μmol/L)、完全培养基(阴性对照)、0.1%(体积分数)二甲基亚砜(溶剂对照)处理HepG2细胞24 h、48 h和72 h,采用MTT试剂盒检测细胞活力。不同浓度的DEHP(10.0、250.0μmol/L)、MEHP(4.0、100.0μmol/L)、完全培养基(阴性对照)、0.1%(体积分数)二甲基亚砜(溶剂对照)、0.5 mmol/L油酸(阳性对照)处理HepG2细胞48h,油红O染色法观察HepG2细胞脂肪累积。不同浓度的DEHP(2.0、10.0、50.0、250.0μmol/L)、MEHP(0.8、4.0、20.0、100.0μmol/L)、完全培养基(阴性对照)、0.5 mmol/L油酸、0.5μg/m L布雷德菌素A处理HepG2细胞24 h和48 h,Western blot法检测细胞内固醇元件调节蛋白(SREBP-1c)、肉毒碱棕榈酰基转移酶(CPT1A)、丙二酰辅酶A脱羧酶(MLYCD)和脂肪组织三酰甘油水解酶(ATGL)的蛋白表达。[结果]与阴性对照组相比,250.0~1 000.0μmol/L DEHP及50.0~250.0μmol/L MEHP染毒组HepG2细胞存活率降低,差异具有统计学意义(P0.05)。染毒48 h后,10.0、250.0μmol/L DEHP染毒组与4.0、100.0μmol/L MEHP染毒组HepG2细胞内可见红色脂滴,且伴有脂滴融合现象。与阴性质对照组相比,250.0μmol/L DEHP或100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞24 h,50.0~250.0μmol/L DEHP或4.0~100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞48 h,使CPT1A表达降低,差异具有统计学意义(P0.05);10.0~250.0μmol/L DEHP或4.0~100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞48 h使MLYCD表达降低,差异具有统计学意义(P0.05);250.0μmol/L DEHP与20.0~100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞24 h,10.0~250.0μmol/L DEHP与0.8~100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞48h,可使ATGL表达降低,差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]DEHP及MEHP染毒可引起HepG2细胞发生脂肪堆积,其过程可能与脂肪酸β-氧化受阻及三酰甘油水解受到抑制有关。     

喹乙醇致肾脏毒性的内质网应激相关凋亡途径研究

目的通过喹乙醇染毒人源肾小管上皮细胞(HK-2细胞)并检测活性氧(ROS)和凋亡相关蛋白的表达,探讨喹乙醇肾脏毒性产生过程及其可能的内质网应激相关凋亡机制。方法分别以不同浓度(1、2、3、4、5、6、7和8μmol/ml)喹乙醇染毒HK-2细胞24 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖率以确定剂量-效应关系;Hoechst-33258荧光染色检测各组细胞凋亡形态,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率和细胞内活性氧含量;免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激相关凋亡蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP94)和凋亡促进因子CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达。结果根据MTT毒性实验结果 ,喹乙醇对HK-2细胞凋亡效应的适宜剂量确定为1、2、3和4μmol/ml。在喹乙醇不同剂量观察组中,喹乙醇染毒2μmol/ml以上剂量组,细胞凋亡率、内质网凋亡相关蛋白GRP79、GRP94和CHOP表达增加,喹乙醇各染毒剂量均可见活性氧水平增加(P<0.05);在喹乙醇不同染毒时间观察组中,喹乙醇染毒12和24 h组,细胞凋亡率、内质网凋亡相关蛋白GRP79、GRP94表达增加,喹乙醇染毒6、12和24 h组,活性氧水平、内质网凋亡相关蛋白CHOP表达增加(P<0.05)。结论喹乙醇可致肾小管上皮细胞发生细胞凋亡从而造成肾脏毒性,凋亡的发生可能与内质网应激相关凋亡途径相关。     

微囊藻毒素-LR急性呼吸道暴露对小鼠生殖细胞凋亡的影响及其作用机制

目的探讨微囊藻毒素(MC-LR)急性呼吸道暴露对小鼠生殖细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将30只健康8周龄SPF级ICR雄性小鼠按体重随机分为3组,分别为对照组和10、25μg/kg MC-LR组,每组10只。采取暴露式气管滴注法进行急性暴露36 h。检测小鼠睾丸组织凋亡情况以及睾丸组织内质网应激相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结果与对照组相比,各剂量MC-LR组小鼠睾丸组织阳性小管发生率和每管凋亡细胞数均较高,差异有统计学意义(P0.01);且随着MC-LR浓度的升高,阳性小管发生率和每管凋亡细胞数均呈上升趋势(P0.01)。与对照组相比,各剂量MC-LR组小鼠睾丸组织中caspase-3、caspase-12、CHOP蛋白及25μg/kg MC-LR组小鼠睾丸组织中GRP78蛋白的表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.05);而各剂量MC-LR组小鼠睾丸组织中caspase-9、IER1、PERK蛋白的表达水平均无明显改变。随着MC-LR染毒剂量的升高,小鼠睾丸组织中caspase-3、caspase-12、CHOP蛋白的表达水平均呈上升趋势。结论呼吸道急性暴露MC-LR可能通过内质网应激途径诱导小鼠睾丸生殖细胞凋亡,从而介导小鼠睾丸损伤。     

邻苯二甲酸单丁酯对雄性小鼠睾丸的氧化损伤

目的 探讨邻苯二甲酸单丁酯(mono-n-butyl phthalate,MBP)对小鼠睾丸氧化损伤的影响.方法 36只性成熟的雄性Balb/c小鼠随机分为4个MBP染毒组(25、50、100、200 mg/kg)和1个空白对照组、1个溶剂对照组(食用油),每组6只,灌胃14d后观察睾丸的组织形态学损伤;检测睾丸组织的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量.结果 100和200 mg/kg组小鼠睾丸组织不同发育时期生殖细胞的数量减少;随着MBP染毒剂量的升高,睾丸组织ROS含量与MDA含量逐渐上升,GSH含量逐渐降低;100和200 mg/kg组上述指标与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 较高剂量的MBP会引起小鼠睾丸细胞的氧化损伤.     

N-乙酰半胱氨酸激活蛋白激酶B通路减轻镉诱导的睾丸间质细胞凋亡

目的 探究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)基于蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)通路对镉诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡的调控机制。方法 将小鼠睾丸间质细胞(TM3)分为对照组、镉染毒组(Cd, 5、10、20、30、40和50μmol/L)、NAC组(NAC,500μmol/L)及NAC+镉染毒组(500μmol/L NAC+20μmol/L Cd),其中NAC+Cd染毒组先用NAC预处理30 min,再联合镉染毒24 h。CCK8测定细胞存活率,Hoechst染色检测细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡率,同时测定丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量,Western blot免疫印迹法分别检测AKT蛋白、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)的表达水平。结果 镉可抑制TM3细胞增殖且存在剂量-效应关系。细胞形态观察发现,随着镉染毒浓度的增加,细胞缩...     

IRE1通路在高碘诱导甲状腺细胞凋亡中的作用

目的 观察IRE1通路在高碘诱导甲状腺细胞凋亡中的特征,进一步分析高碘诱导甲状腺细胞凋亡的作用机制.方法 用0(对照)、1、10、50 mmol/L的碘化钾(KI)染毒体外培养的Nthy-ori 3-1细胞,24h后采用流式细胞术检测Nthy-ori 3-1细胞凋亡率,用荧光定量PCR及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、肌醇需求酶-1(IRE1)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)基因蛋白的表达水平.结果 与0(对照)、l、10 mmol/L KI染毒组相比,50 mmol/L KI染毒组细胞凋亡率升高(P＜0.05);与对照组相比,各染毒组GRP78、IRE1 mRNA表达水平均无统计学差异(P＞0.05),CHOP mRNA表达水平升高(P＜0.05),GRP78、IRE1和CHOP蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 内质网应激中IRE1通路可能没有参与高碘诱导的Nthy-ori 3-1细胞凋亡过程.     

氧化苦参碱对亚砷酸钠致人肝细胞损伤的拮抗作用

目的探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OM)对亚砷酸钠致人胎肝(L-02)细胞株损伤的拮抗作用。方法将处于对数生长期的L-02细胞分别培养于0μmol/L亚砷酸钠(对照)、OM(200μg/ml)、亚砷酸钠(100μmol/L)及亚砷酸钠(100μmol/L)+OM(50、100、200μg/ml)的培养基中暴露18 h。检测细胞培养液中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平和细胞葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)蛋白的表达水平及细胞凋亡率。结果OM组与对照组各项指标差异均无统计学意义(P0.05)。与对照组及OM处理组比较,亚砷酸钠组细胞培养上清液中AST、ALT水平、细胞凋亡率、GRP78及CHOP蛋白表达水平显著升高(P0.05);而不同浓度OM干预后,上述指标均有不同程度下降(P0.05)。且随着OM干预浓度的升高,上述指标均呈下降趋势。结论砷可致L-02细胞损伤,OM可通过抑制L-02细胞内质网应激及减少肝细胞凋亡,从而发挥对肝细胞的保护作用。     

邻苯二甲酸二丁酯与邻苯二甲酸单丁酯对睾丸间质细胞睾酮水平和胰岛素样因子3表达的影响

目的 观察邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)、邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)对小鼠睾丸间质瘤细胞(MA-10)中胰岛素样因子3(insulin-like factor 3,INSL3) mRNA 及蛋白的表达量和细胞睾酮分泌水平的影响.方法 以小鼠睾丸间质瘤细胞(MA-10)为模型,经过DBP、MBP直接染毒后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养基上清中睾酮的含量,采用荧光定量PCR测定细胞中INSL3 mRNA的表达,采用蛋白免疫印迹法(western blot)测定INSL3蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,MA-10细胞睾酮合成量在低染毒剂量(10-9～10-6 mol/L)时均表现出刺激效应,睾酮含量增加;在高染毒剂量(10-3 mol/L)时表现抑制效应,随着染毒时间的延长,睾酮水平逐渐降低.荧光定量PCR以及Western blot测定结果显示,DBP在10-6、10-4 mol/L染毒时,INSL3 mRNA及蛋白表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05);随着MBP染毒剂量的增加,INSL3 mRNA及蛋白表达水平呈现下降趋势,但MBP在10-7 mol/L时,与对照组相比,对MA-10细胞中INSL3蛋白表达表现出刺激作用.结论 DBP、MBP染毒对MA-10细胞睾酮分泌表现出高剂量抑制、低剂量刺激的双向效应;DBP、MBP染毒可抑制MA-10细胞中INSL3 mRNA和蛋白的表达.     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对小鼠精母细胞凋亡及孤核受体TR4 mRNA表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)对小鼠精母细胞(GC-2 spd)凋亡及TR4 mRNA表达的影响。方法将GC-2 spd细胞分别暴露于含终浓度0(溶剂对照)、50、100、200μmol/L DEHP的培养基培养24 h。采用MTT法检测细胞活性,采用Real-time PCR方法检测细胞TR4 mRNA的相对表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与溶剂对照组比较,200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞的存活率均较低,100、200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞的凋亡率均较高,仅200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞TR4 mRNA的表达水平较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着DEHP染毒剂量的升高,GC-2 spd细胞的存活率呈下降趋势,凋亡率呈上升趋势。结论 DEHP对生精细胞具有生殖毒性作用,可通过促进孤核受体TR4诱导生精细胞凋亡。     

β淀粉样蛋白对人神经母细胞瘤细胞内质网应激的影响

目的研究β淀粉样蛋白(Aβ_(25~35))对人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)凋亡过程中内质网应激的影响,探讨在内质网应激过程中未折叠蛋白质反应途径(UPR pathway)在凋亡中的作用。方法将处于对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、20、30、40μmol/L Aβ_(25~35)的培养基染毒48 h,采用CCK8法检测细胞活性。将对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、15μmol/L Aβ_(25~35)的培养基染毒24、48和72 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白GRP78以及跨膜蛋白活化转录因子-6(ATF-6)、蛋白激酶-1(IRE1α)和RNA-激活蛋白激酶样内质网激酶(PERK)蛋白的表达水平。结果与对照组比较,各浓度Aβ_(25~35)染毒组SHSY-5Y细胞的存活率均较低,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高,SHSY-5Y细胞的存活率呈下降趋势。与对照组比较,各浓度Aβ_(25~35)染毒组SHSY-5Y细胞的凋亡率均较高,除5μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h外,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高和染毒时间的延长,SHSY-5Y细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,各剂量、时间点Aβ_(25~35)染毒组SHSY5Y细胞内质网ATF-6蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24、48 h和各剂量Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网GRP78蛋白的表达水平较高;10、15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h和15μmol/L Aβ_(25~35)染毒48 h及各剂量Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网IRE-1α蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h和10、15μmol/L Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞质网PERK蛋白的表达水平较高,差异均有统计学意义(P0.05)。随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高和染毒时间的延长,细胞内GRP78、ATF-6、IRE1α和PERK蛋白的表达水平均呈上升趋势。结论 Aβ_(25~35)可以诱导SHSY5Y神经细胞内质网应激,导致SHSY5Y细胞发生凋亡。     

MEHP对小鼠生精细胞凋亡及Bcl-2 mRNA表达的影响

目的研究邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯(Mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP)对小鼠生精细胞(GC-2 spd细胞)凋亡率及Bcl-2 mRNA表达的影响。方法培养GC-2 spd细胞,用二甲基亚砜(DMSO)溶解MEHP,用不同浓度的MEHP溶液(0、1、10、100、200μmol/L)对细胞进行24 h染毒。采用MTT法测定细胞活性,荧光定量PCR检测Bcl-2 mRNA的表达情况,流式细胞法测定细胞的凋亡情况。结果随着MEHP染毒浓度的增加,GC-2 spd细胞活力逐渐降低,细胞凋亡逐渐上升,而Bcl-2 mRNA的表达水平则下降。结论 MEHP可能是通过影响Bcl-2介导的线粒体途径诱导生精细胞凋亡,从而影响雄性生殖功能。     

邻苯二甲酸-单-乙基己基酯对原代培养新生大鼠海马神经元细胞活性和凋亡率的影响

目的探讨邻苯二甲酸-单-乙基己基酯[mono-(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]对新生大鼠海马神经元细胞活性和凋亡率的影响。方法取出生24 h内清洁级SD大鼠海马组织神经元原代培养8 d后,分别加入含终浓度0(溶剂对照)~100μmol/L MEHP的培养液暴露12、24 h。采用MTT法检测细胞活性,采用Hoechst 33258染色法检测神经元的凋亡情况。结果随着MEHP暴露剂量的升高,新生大鼠海马神经元的存活率、凋亡率均呈先上升后下降的趋势。结论 MEHP可抑制新生大鼠海马神经元细胞活性,促进神经元凋亡。提示MEHP对新生大鼠的海马神经元具有毒性作用。     

活性氧在氯化镉诱导的小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的 探究活性氧(reactive oxygen species, ROS)在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导的睾丸间质细胞毒性中的潜在作用及机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒小鼠睾丸间质TM3细胞24 h。CCK-8法检测CdCl₂对TM3细胞活性的影响;Hoechst33342染色法检测凋亡小体;DCFH-DA探针法检测TM3细胞ROS水平;1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)预处理1 h后用10μmol/L CdCl₂染毒TM3细胞24 h, Western blot检测细胞内促凋亡蛋白Caspase-9和cleaved Caspase-3的表达水平;RT-qPCR检测细胞内抗凋亡基因Bcl-2以及促凋亡基因Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,TM3细胞活力降低且凋亡小体数量增加。10μmol/L CdCl<...     

硫酸镍对体外培养大鼠睾丸间质细胞超微结构的影响

目的通过观察硫酸镍(NiSO4)对体外培养大鼠睾丸间质细胞超微结构的改变,初步探讨镍致睾丸间质细胞损伤的特点。方法采用胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心和差速贴壁法体外分离、纯化睾丸间质细胞,采用3β-HSD染色法鉴定其纯度;采用MTT法观察NiSO4(浓度为0.0、62.5、125.0、250.0、500.0和1000.0μmol/L)染毒3、6和12h后,对睾丸间质细胞生长抑制的影响;采用透射电镜观察染毒6h后大鼠睾丸间质细胞超微结构的变化。结果纯化的睾丸间质细胞采用3β-HSD染色后,镜下可见睾丸间质细胞被染成蓝黑色,细胞纯度可达到95%以上;与对照组比较,染毒6h,NiSO4浓度为125.0μmol/L及其以上浓度组对间质细胞生长具有明显的抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);NiSO4可引起大鼠睾丸间质细胞线粒体和内质网超微结构改变,主要表现为线粒体肿胀,滑面内质网扩张及脱颗粒现象,溶酶体增多,尤其NiSO4浓度为500.0和1000.0μmol/L变化明显。结论 NiSO4可引起大鼠睾丸间质细胞超微结构改变。     

T-2毒素对小鼠睾丸间质细胞相关功能基因mRNA表达的影响

目的探讨T-2毒素对小鼠睾丸间质细胞相关功能基因mRNA表达的影响。方法对分离出的4~5周龄BABL/c小鼠睾丸间质细胞进行体外培养,分别暴露于含10 ng/ml hCG(对照)和10-9、10-8、10-7mol/L T-2毒素+10 ng/ml hCG的培养液中24h。采用RT-PCR方法检测相关功能基因(3β-HSD-1,P450scc和StAR)mRNA的表达水平。结果与对照组相比,10 ng/ml hCG+10-8mol/L T-2毒素和10 ng/ml hCG+10-7mol/L T-2毒素染毒组小鼠睾丸间质细胞3β-HSD-1 mRNA的表达水平及10 ng/ml hCG+各剂量T-2毒素染毒组小鼠睾丸间质细胞P450scc/HPRT、StAR/HPRT mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);且随着T-2毒素染毒剂量的升高,10 ng/ml hCG诱导小鼠睾丸间质细胞3β-HSD-1、P450scc和StAR mRNA的表达水平呈下降趋势。结论 T-2毒素可通过抑制小鼠睾丸间质细胞3β-HSD-1、P450scc和StAR mRNA表达而对雄性小鼠产生生殖毒性。