IL-22 对骨髓来源巨噬细胞相关炎症因子表达的影响

目的:探讨IL-22对骨髓来源巨噬细胞相关炎症因子表达的影响。方法:从小鼠的股骨分离骨髓细胞,经过分化培养获得骨髓来源巨噬细胞,再用脂多糖(LPS)刺激诱导为M1型巨噬细胞。IL-22干预M1型巨噬细胞后,采用流式细胞术检测巨噬细胞标志物;用ELISA分别检测IL-1β和TNF-α的分泌水平;用RT-PCR分别检测炎症因子i NOS、IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平。结果:经过分化培养,骨髓来源巨噬细胞的纯率为(99. 3±0. 4)%,IL-22干预M1型巨噬细胞后,与LPS组相比,LPS+IL-22组的M1型巨噬细胞比例下降(P0. 05),细胞炎症因子i NOS、IL-1β和TNF-αmRNA表达下降(P0. 05),IL-1β和TNF-α分泌水平降低(P0. 05)。结论:IL-22可抑制LPS诱导的骨髓来源巨噬细胞炎症因子的表达,减轻其炎性反应。     

Ca2+调控curdlan诱导的巨噬细胞炎症反应中活性氧的生成

目的 观察curdlan刺激下巨噬细胞活性氧(ROS)生成的变化及Ca2对活性氧生成的影响,探讨Ca2+参与curdlan诱导的巨噬细胞炎症反应的可能机制.方法 将Dectin-1缺失的小鼠和正对照WT小鼠来源的巨噬细胞,以100 μg/mL curdlan处理从上述小鼠中分离培养的巨噬细胞,建立巨噬细胞炎症反应模型.处理后,Amplex Red和luminol法分别检测巨噬细胞中超氧离子和过氧化氢的生成变化.用EGTA螯合检测试剂中Ca2+,观察无Ca2情况下活性氧的产生情况,以及在检测试剂中加入不同浓度的Ca2+观察其对ROS产生的影响.结果 Curdlan刺激下,巨噬细胞(骨髓来源和腹腔来源巨噬细胞)中活性氧(包括超氧离子和过氧化氢)水平显著增加.与无Ca2组相比(0 mmol/L),随着Ca2+浓度增加(1.5、2.5 mmol/L),curdlan诱导的巨噬细胞中ROS水平升高.结论 Curdlan能够结合巨噬细胞中相应的免疫识别受体(dectin-1)通过产生大量ROS从而介导炎症反应,调控ROS的水平可能是Ca2+参与炎症反应的机制之一.     

NOX1在TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤和炎症中的作用研究

目的:探索NADPH氧化酶1(NOX1)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的肺泡上皮细胞A549氧化损伤和炎症中的作用。方法:以real-time PCR和Western blot法测定TNF-α处理后肺泡上皮细胞中NOX1的m RNA和蛋白表达水平。在肺泡上皮细胞中转染NOX1 si RNA及其阴性对照,以TNF-α诱导以后,用real-time PCR和Western blot测定细胞中NOX1水平。硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA法检测细胞培养液中的白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白cleaved caspase-3的水平。结果:TNF-α诱导处理后A549细胞中NOX1 m RNA和蛋白水平均升高(P 0. 05),NOX1 si RNA转染可以下调细胞中NOX1的m RNA和蛋白表达(P 0. 05),转染si RNA阴性对照对细胞中NOX1的m RNA和蛋白表达没有影响。TNF-α处理后细胞中MDA含量升高,SOD活性降低,细胞分泌的IL-4、IL-6和IL-1β增多,细胞凋亡率和凋亡蛋白cleaved caspase-3水平均升高,与没有经TNF-α处理的细胞比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。下调NOX1的细胞经TNF-α诱导后,细胞中MDA含量降低,SOD活性升高,细胞分泌的IL-4、IL-6和IL-1β减少,凋亡率及凋亡蛋白cleaved caspase-3水平降低,与只经过TNF-α诱导处理的细胞比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论:TNF-α诱导肺泡上皮细胞表达NOX1。下调NOX1表达可减少细胞氧化损伤和炎症因子分泌,减少细胞凋亡。     

AIM2炎性体识别胞浆鼠巨细胞病毒DNA的实验研究

目的 观察AIM2( absent in melanoma 2)在感染早期识别胞浆小鼠巨细胞病毒(MCMV) DNA的变化状况.方法 建立MCMV全身播散型感染模型,接种MCMV Smith株后第1、3、5和7天各处死3只小鼠;同时设模拟感染小鼠作为正常对照.Western blot检测脾脏巨噬细胞中AIM2、衔接子凋亡相关点样蛋白(ASC)和caspase-1蛋白的表达状况;同时应用ELISA法检测血清中IL-1β和IL-18的水平;空斑法测定感染小鼠唾液腺感染性病毒滴度.结果 MCMV感染后第3、5、7天,小鼠唾液腺组织中感染性病毒滴度逐渐增加;MCMV感染鼠脾脏巨噬细胞中AIM2、ASC和caspase-1蛋白的表达呈现一致的变化,与模拟感染对照鼠比较,AIM2、ASC和caspase-1蛋白相对吸光值在感染后第1天开始升高(P＞0.05),第3天明显升高并达峰值[分别为(1.121±0.243) vs(0.240±0.046),(1.318±0.333) vs (0.248±0.090),(1.085±0.243) vs (0.247±0.064); P＜0.01],其后接近正常;MCMV感染鼠血清IL-1β和IL-18水平在感染后第3天也明显高于模拟感染对照鼠[分别为(112.72±5.20) pg/ml vs (47.86±4.35) pg/ml,(42.74±4.23) pg/ml vs( 22.60±2.82)pg/ml;P＜0.01],其后均逐渐下降接近正常.结论 MCMC感染早期巨噬细胞通过AIM2炎性体识别胞浆MCMV DNA,可能成为CMV感染及感染后所引起的疾病的治疗靶点.     

熊果酸对肝纤维化大鼠NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化的影响

目的观察熊果酸(UA)对肝纤维化模型大鼠肝内胶原沉积的改善作用及其对NADPH氧化酶2(NOX2)/活性氧簇(ROS)/NLRP3炎性小体活化的影响。方法将大鼠随机分为对照组、CCl4模型组及UA治疗组。用CCl4诱导构建SD大鼠肝纤维化模型,一半用作UA治疗组。用试剂盒检测血清ALT含量;HE染色观察肝脏病理;天狼星红染色观察肝内胶原沉积;RT-q PCR法检测Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA表达量;Western blot及免疫组化检测肝脏中NOX2、NLRP3、casepase-1 p45、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达;DCFH-DA荧光探针法检测肝脏组织内ROS水平。结果与对照组相比,CCl4模型组血清ALT水平升高(P0.05),Ishak's肝纤维化评分明显上升,胶原沉积明显增多(P0.05),Nox2、Nlrp3、Caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显上升(P0.05);NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白的表达均出现明显增加,肝组织内ROS含量增加(P0.05);与CCl4模型组相比,UA治疗组血清ALT含量下降(P0.05),肝脏Ishak's肝纤维化评分及胶原沉积减少(P0.05),Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显下降(P0.05),NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达明显下降,肝脏组织内ROS水平显著改善(P0.05)。结论 UA减轻肝脏炎性反应并减少肝内胶原沉积,其机制可能与其抑制肝纤维化大鼠肝内NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化及IL-1β的释放减少有关。     

高脂饲养C57BL/6J小鼠肾周脂肪组织炎性反应的评估

目的评估高脂饲养C57BL/6J小鼠肾周脂肪组织炎性反应。方法将小鼠随机分为对照组(control组,n=6)和高脂饲养组(HFD组,n=6)。用RT-qPCR检测肾周脂肪组织中TNF-α、CD11c、IL-1β、IL-10、TGF-β1、CD206等mRNA的表达;免疫组织化学法检测肾周脂肪组织及肾实质F4/80、CD68、LCA的水平。结果与对照组比较,HFD组小鼠肾周脂肪组织TNF-α、IL-1β等mRNA相对含量升高(P0.05);HFD组的肾周脂肪巨噬细胞标志物F4/80,CD68及炎细胞广谱标志物LCA的表达均呈高表达(P0.05)。结论高脂饲养的C57BL/6J小鼠肾周脂肪组织确实存在明显的炎性反应。     

柚皮素减轻重症急性胰腺炎小鼠心肌损伤

目的探讨小鼠重症急性胰腺炎(SAP)相关性心肌损害的发生机制和柚皮素的保护作用。方法将小鼠随机分为:对照组(control组)、模型组(SAP组)和柚皮素干预组(Nar组),每组12只。应用L-精氨酸(8%,4 mg/kg,p H=7. 0,间隔1h腹腔注射2次)制备小鼠SAP模型,Nar(200 mg/kg)溶于0. 5%CMC-Na中制备混悬液,在首次注射L-精氨酸后0、24和48 h腹腔注射。试剂盒检测血浆c Tn I、CK-MB及LDH浓度。实时荧光定量PCR和Western blot检测心脏组织NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1βmRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,SAP组小鼠胰腺组织水肿、腺泡细胞坏死、大量炎性反应细胞浸润。心肌细胞肿胀、部分细胞崩解、心肌纤维结构消失,并有较多炎性反应细胞浸润。血浆CK-MB、LDH及c Tn I水平明显升高(P0. 05),心肌NLRP3、caspase-1、ASC及IL-1βmRNA和蛋白表达显著增高(P0. 05)。柚皮素干预可以降低SAP小鼠血浆淀粉酶和脂肪酶水平、减轻胰腺组织损伤和心肌组织损伤,降低血浆CK-MB、LDH及CTn I水平(P0. 01),下调心肌组织NLRP3、caspase-1、ASC及IL-1βmRNA (P0. 01)和蛋白表达(P0. 05)。结论柚皮素可能通过抑制心脏中NLRP3炎性小体激活保护SAP相关的心肌损伤。     

大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应

目的探讨大黄素对哮喘小鼠炎症反应及对肺组织中NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NODlike receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)和胱冬肽-1(caspase-1)表达的影响。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组和大黄素组。以卵蛋白为致敏原制备哮喘小鼠模型。收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和分类计数,ELISA方法检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)与白介素-4(IL-4)水平。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变。Western-blot检测各组小鼠肺组织中NLRP3、ASC和caspase-1的表达。结果大黄素能减少BALF中炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞,降低BALF中TNF-α、IL-1β与IL-4含量,减轻肺组织炎性反应。Western-blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著高于对照组(P0.01);与哮喘组比较,大黄素组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著降低(P0.01)。结论大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应。     

丹皮酚对β-1,3-葡聚糖诱导的小鼠巨噬细胞Dectin-1 / NLRP3 信号通路抑制作用研究

目的:研究丹皮酚对β-1,3-葡聚糖诱导的巨噬细胞上Dectin-1/NLRP3信号通路的影响。方法:培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,并分成空白对照组、β-1,3-葡聚糖诱导模型组、昆布多糖组和丹皮酚组,β-1,3-葡聚糖诱导巨噬细胞24 h建立ALD炎症模型。通过MTT法检测细胞活性,通过倒置显微镜观察各组形态学变化,通过Western blot检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1蛋白的表达,通过RT-qPCR检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA的表达,通过ELISA检测各组培养液中IL-1β、IL-18的分泌水平。结果:MTT结果表明,与空白对照组相比,β-1,3-葡聚糖诱导模型组抑制细胞增殖活性减弱。与β-1,3-葡聚糖诱导模型组相比,丹皮酚干预后细胞增殖活性增强。形态学观察发现,空白对照组细胞体积小,形态圆润。β-1,3-葡聚糖诱导后细胞体积变大,分化严重,形态狭长。丹皮酚干预后细胞分化减轻,细胞形态近似圆形。Western blot、RT-qPCR和ELISA结果表明,与空白对照组相比,β-1,3-葡聚糖能显著升高巨噬细胞中Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的蛋白表达水平和Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平以及细胞上清液IL-1β、IL-18的分泌水平。而与β-1,3-葡聚糖诱导模型组相比,经丹皮酚干预后可明显降低巨噬细胞中Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的蛋白表达水平和Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平以及细胞上清液IL-1β、IL-18的分泌水平。结论:本研究结果表明丹皮酚可能通过抑制β-1,3-葡聚糖诱导的Dectin-1/NLRP3信号通路上Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的过表达从而有效降低终末炎症因子IL-1β及IL-18的释放,进而有效抑制β-1,3-葡聚糖诱导的ALD炎症反应。     

RIPK2介导自噬对高糖诱导的小鼠肾系膜细胞ROS、caspase-1及IL-1β表达的激活作用

目的观察受体结合丝氨酸/苏氨酸激酶2(RIPK2)介导自噬对高糖诱导的肾系膜细胞(GMCs)ROS、caspase-1及IL-1β表达的调控。方法体外培养正常小鼠GMCs,高糖作为刺激因子,设计siRNA靶向沉默RIPK2表达并构建自噬双荧光(mRFP-GFP-LC3)标记体系,激光共聚焦显微镜观察自噬流变化;DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平;Western blot及RT-PCR检测RIPK2、LC3Ⅱ/Ⅰ、caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达;ELISA检测IL-1β的分泌。结果 1)高糖呈时间-浓度依赖性增加细胞内ROS水平,诱导caspase-1和IL-1β表达(P0.05)。2)短期(0~12 h)高糖刺激可诱导RIPK2和LC3Ⅱ/Ⅰ表达(P0.05),超过12 h后RIPK2和LC3Ⅱ/Ⅰ表达下调(P0.05)。3)siRNA靶向沉默RIPK2下调LC3Ⅱ/Ⅰ表达和细胞自噬流形成,上调细胞内ROS、caspase-1及IL-1β表达(P0.05)。结论 RIPK2介导自噬负性调控高糖诱导的ROS、caspase-1及IL-1β表达,可能是防治糖尿病肾脏疾病(DKD)的新思路。     

糖尿病创面中性粒细胞胞外诱捕网生成增加对巨噬细胞黑色素瘤缺乏因子2炎症体的影响

目的探讨糖尿病创面中增高的中性粒细胞胞外诱捕网(NET)对巨噬细胞黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)炎症体表达和活化的影响。 方法腹腔注射链脲佐菌素诱导SD大鼠I型糖尿病模型,制作背部全层皮肤缺损创面。将糖尿病大鼠随机分为糖尿病组和DNase组,以正常大鼠作为正常组。正常组和糖尿病组大鼠每日创面给予0.9%氯化钠溶液(30 uL);DNase组创面给予DNase I 30 μL(10 mg/mL),连续给药8 d。伤后第1、5、9、14天,麻醉大鼠,拍摄创面照片。伤后第2、5、9、14天取创面组织,检测创面NET及AIM2炎症体相关蛋白表达。提取大鼠腹腔中性粒细胞和巨噬细胞。佛波酯(0.1 g/mL)刺激中性粒细胞诱导其形成NET,NET可被DNase I降解。巨噬细胞设为对照、NET和DNase 3组,分别与未经刺激的中性粒细胞、NET以及DNase I降解的NET共培养12 h。蛋白质印迹法和免疫荧光染色检测巨噬细胞AIM2炎症体相关蛋白AIM2、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-1β前体蛋白(pro-IL-1β)、caspase-1 p20表达和p65磷酸化水平。数据采用独立样本t检验。 结果蛋白质印迹检测糖尿病组第2、5天Cit-H3、AIM2和IL-1β蛋白表达量(0.136±0.080,1.119±0.186,0.918±0.163;1.022±0.270,1.047±0.123,1.442±0.177)均高于正常组(0.043±0.010,0.600±0.060,0.172±0.176;0.215±0.420,0.747±0.052,0.556±0.179),差异有统计学意义(t＝－21.153、－4.562、－5.367、－.232、－3.898、－6.012,P值均小于0.05)。佛波酯可诱导中性粒细胞生成NET,NET组巨噬细胞AIM2、pro-IL-1β、IL-1β、caspase-1 p20表达和p65磷酸化水平(1.113±0.132,1.098±0.170,1.129±0.114,1.083±0.162)较对照组(0.251±0.067,0.068±0.237,0.105±0.155,0.314±0.161)明显升高,差异有统计学意义(t＝－10.050、－10.388、－15.455、－5.828,P值均小于0.05)。DNase组(0.729±0.092,0.549±0.115,0.701±0.172,0.496±0.031)则明显下调以上蛋白水平,差异有统计学意义(t＝4.124、4.633、3.596、6.155,P值均小于0.05)。p65核转位阻断剂(JSH-23)显著降低巨噬细胞AIM2、pro-IL-1β和IL-1β水平,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色检测显示,DNase组显著减少创面NET和AIM2荧光水平。蛋白免疫印迹显示DNase组降低糖尿病组创面中IL-1β、caspase-1 p20水平,差异有统计学意义(P<0.05)。DNase组创面愈合较糖尿病组加快,伤后第9天和第14天创面愈合率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论糖尿病创面NET生成增加可能通过活化p65,促进巨噬细胞AIM2炎症体表达活化。外源性补充DNase I降解创面NET,可降低AIM 2炎症体活化水平,加速创面愈合。     

Aβ1-42通过TLR4影响小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症因子IL-1β和IL-6释放

目的探讨Aβ1-42对小鼠巨噬细胞RAW264.7向炎症性细胞转变的影响及机制。方法 RAW264.7细胞分别经过LPS与Aβ1-42刺激,RT-PCR和Western blot检测GM-CSF受体CSF2RA和CSF2RB的表达水平,ELISA检测在Aβ1-42刺激下的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平;采用TLR4抑制剂分别干预LPS和Aβ1-42处理后的RAW264.7,检测CSF2RA与CSF2RB受体的表达变化,炎症因子IL-1β、IL-6的释放。结果 RAW264.7细胞表面GM-CSF受体CSF2RB在LPS与Aβ1-42处理后表达水平均比对照组升高(P0.05),而CSF2RA表达没有显著性改变;炎症因子IL-6与IL-1β在Aβ1-42刺激后分泌增加,同时TLR4抑制剂抑制LPS和Aβ1-42对细胞的刺激。结论 Aβ1-42通过TLR4促进小鼠RAW264.7细胞炎症因子IL-6、IL-1β的分泌。     

人腺病毒7型感染激活NLRP3炎症小体的机制研究

目的 探讨人腺病毒7型(human adenovirus type 7,HAdV-7)感染对于炎症小体激活的影响及作用机制。方法 采用免疫荧光检测HAdV-7对于THP-1分化的巨噬细胞的感染;应用ELISA方法检测HAdV-7感染对于IL-1β的激活;实时荧光定量PCR检测病毒感染对于NLRP3、pro-IL-1β、caspase-1等mRNA表达的影响;蛋白质免疫印迹实验(western blot,WB)检测病毒感染后细胞内NLRP3、pro-IL-1β的表达及上清中caspase-1和IL-1β蛋白表达情况。结果 免疫荧光检测显示HAdV-7可感染THP-1分化的巨噬细胞,WB显示HAdV-7感染诱导细胞内pro-IL-1β蛋白表达上调,ELISA检测表明HAdV-7感染可诱导IL-1β的分泌表达(MOI＝0.5,P＝0.0008)。使用Ac-YVDK-cmk抑制caspase-1表达后,HAdV-7感染上清中IL-1β的表达被明显抑制(P＝0.0025);HAdV-7感染caspase-1缺陷的THP-1分化的巨噬细胞,IL-1β的表达同样被显著抑制(P＝0.0191)。荧光定...     

血管紧张素Ⅱ在EAM小鼠中的表达及致病作用的初步研究

目的探讨EAM小鼠血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)水平及其在EAM发生中的作用。方法首先诱导EAM模型,ELISA检测ATⅡ的表达水平,然后实验分为对照组、EAM组、EAM+氯沙坦(ATⅡ抑制剂)组,第21天处死小鼠,HE染色观察心肌炎症浸润情况;RT-q PCR检测心脏组织中相关炎症因子(IL-1β、IL-6、TGF-β)的m RNA的表达水平;Transwell实验检测ATⅡ对巨噬细胞迁移作用及氯沙坦的抑制作用。结果成功诱导小鼠心肌炎模型,心肌组织中有大量的淋巴细胞浸润,ATⅡ水平增高,具有促进炎症因子释放及巨噬细胞迁移的作用;使用ATⅡ抑制剂氯沙坦治疗后,心肌组织炎症评分降低,减少了淋巴细胞浸润;IL-1β、IL-6水平降低,而抑炎因子TGF-β表达高于EAM组;ATⅡ对巨噬细胞的迁移作用受到抑制。结论 ATⅡ可能是EAM发生的重要因素,抑制ATⅡ能够有效缓解心肌炎症损伤。     

Vilon(L-Lys-L-Glu)对小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β、NO的影响

目的 探讨Vilon(L-Lys-L-Glu)对参与炎症反应的小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β、NO的影响.方法 以小鼠原代培养腹腔巨噬细胞为阳性参照,ELISA法检测Vilon及脂多糖(LPS)共刺激的小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β的分泌水平;还原酶法分析NO分泌水平;RT-PCR法检测IL-1β和iNOS mRNA的表达.结果 Vilon和LPS共刺激小鼠腹腔巨噬细胞时,Vilon对LPS活化的小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β及NO具有明显的促进作用,并且呈剂量依赖关系;同时也促进了IL-1β和iNOS mRNA表达.结论 Vilon对活化的小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β、NO具有明显的促进作用.     

低氧增强巨噬细胞中脂多糖诱导的IL-1β表达

目的探讨低氧对巨噬细胞表达IL-1β的作用及可能机制。方法给予巨噬细胞系RAW264.7常氧(21%O_2)、低氧(2%O_2)、常氧联合脂多糖(LPS)培养和低氧联合LPS培养,RT-q PCR检测Vegf、Nlrp3和Il1b的mRNA水平,Western blot检测HIF-1α、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1、Pro-IL-1β和IL-1β的蛋白水平;Vhlfl/fl/Apoe~(-/-)及Vhl~(ΔMac)/Apoe~(-/-)小鼠腹腔巨噬细胞给予或不给予LPS培养,RT-q PCR检测Vhl、Nlrp3、Il1b和Il6的mRNA水平。结果与常氧组相比,低氧仅显著升高RAW264.7 Vegf、Nlrp3和Il1b的mRNA水平(P0.01)。给予LPS培养后,与常氧组相比,低氧可进一步升高LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞中NLRP3和IL-1βmRNA及蛋白水平(P0.01),低氧联合LPS培养不能激活caspase-1及剪切Pro-IL-1β。给予LPS培养后,Vhl~(ΔMac)/Apoe~(-/-)小鼠腹腔巨噬细胞与Vhlfl/fl/Apoe~(-/-)小鼠相比,Nlrp3、Il1b和Il6的mRNA表达水平升高更显著(P0.05)。结论低氧可以放大巨噬细胞中LPS诱导的IL-1β表达。     

小鼠巨噬细胞极化与焦亡的关系研究

目的：探讨小鼠巨噬细胞极化与焦亡的关系。方法：RAW264.7小鼠巨噬细胞分为3组：M0组、M1组和M2组，M1组予以LPS和IFN-γ诱导，M2组予以IL-4和IL-13诱导，M0组予以等量PBS作为对照。流式细胞术检测细胞表型及焦亡，PI染色观察焦亡细胞定性，LDH检测细胞活性，ELISA检测炎症因子IL-1β、IL-18水平，RT-qPCR及Western blot检测caspase-1、caspase-11和GSDMD mRNA和蛋白水平。结果：倒置显微镜观察到极化后M1与M0、M2巨噬细胞形态差异显著；流式细胞术检测M1、M2巨噬细胞特异性分子结果证明诱导极化成功；与M0相比，M1、M2组炎症因子IL-1β、IL-18水平均升高（P<0.05）;M1组PI染色阳性率高于M0和M2组；与M0和M2相比，M1型巨噬细胞活化的caspase-1、caspase-11和GSDMD mRNA和蛋白表达增加。结论：LPS+IFN-γ和IL-4+IL-13可分别成功诱导M0型巨噬细胞向M1和M2型极化，且极化后的M1型巨噬细胞形态与M0、M2型差异显著；M0、M1和M2型巨噬细胞均可...     

SIRT1-NF-κB通路在流感病毒感染小鼠体内调节机制的研究

目的 探讨巨噬细胞SIRT1-NF-κB信号转导途径在流感病毒感染小鼠体内的调节机制.方法 用流感病毒血凝素蛋白(HA)和核衣壳蛋白(NP)蛋白免疫小鼠,取小鼠腹腔巨噬细胞,采用ELISA法检测细胞培养上清中促炎症因子IL-1β、IL-6、IL-18和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;采用实时荧光定量PCR检测细胞内沉默信息调节因子1(SIRT1)、NF-κB、IL-1β、IL-6、IL-18以及TNF-α的基因表达.结果 两组蛋白初次免疫后巨噬细胞分泌的各因子及其mRNA表达水平均无明显变化.二次免疫后,HA蛋白组仅TNF-α、IL-6蛋白表达水平增加,与对照组比较差异有统计学意义,NP蛋白组IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α蛋白表达水平均增加,与对照组比较差异均有统计学意义;而两组蛋白刺激后巨噬细胞TNF-α、IL-6 mRNA均表达上调,SIRT1 mRNA均表达下调,与对照组比较差异有统计学意义.结论 流感病毒可能通过所表达的HA、NP等蛋白影响SIRT1的活性,从而解除SIRT1对NF-κB的抑制作用,激活NF-κB信号通路调节的炎症反应或免疫应答.     

TREM-1促进巨噬细胞的迁移并参与脂多糖诱导的小鼠心肌功能障碍

目的探讨髓系细胞触发受体-l(triggering receptor expressed oil myeloid cells-1,TREM-1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠心肌功能障碍的作用以及对巨噬细胞RAW264.7迁移的影响。方法将健康C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、LPS组、LPS+LP17组、LPS+TAK-242组并进行相应处理,6 h后超声心电图检测小鼠心功能指标,12 h取心肌组织HE染色观察病理改变,免疫组化染色观察巨噬细胞表面分子F4/80阳性表达,ELISA检测血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β及IFN-γ的表达情况,实时荧光定量PCR检测TREM-1、BNP以及炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的mRNA水平;培养巨噬细胞RAW264.7,将细胞随机分为正常组、LPS组、LP17+LPS组、TAK-242+LPS组并进行对应处理,实时荧光定量PCR检测TREM-1与TLR4的mRNA水平,ELISA检测细胞培养液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β及IFN-γ的表达情况,Transwell小室观测RAW264.7细胞迁移情况,蛋白免疫印迹检测RAW264.7中TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白水平。结果与对照组相比,超声心电图检测结果显示LPS组小鼠的EF与FS下降,LVD增大,IVS减小,LVPW变薄,变化均显著(P0.05),实时荧光定量PCR结果显示TREM-1 mRNA与BNP mRNA表达水平上升(P0.05),免疫组化染色法显示F4/80有大量阳性表达(P0.01),ELISA检测显示炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的含量增加(P0.05),实时荧光定量PCR检测也表明这些炎性因子mRNA水平升高(P0.05);与LPS组小鼠相比,注射TREM-1抑制剂LP17使EF、FS上升,有效抑制了LVD增大、IVS减小以及LVPW变薄的现象(P0.05),TREM-1 mRNA与BNP mRNA表达水平均降低(P0.05),心肌损伤减轻,F4/80阳性表达减少(P0.01),炎症因子水平也明显下降(P0.05),与注射TLR4抑制剂TAK-242的效果一致。与对照组相比,LPS诱导RAW264.7细胞后,细胞中TREM-1 mRNA与TLR4 mRNA水平升高(P0.05),炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的含量增加(P0.05),细胞大量迁移(P0.01),细胞中TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-IκBα蛋白水平升高(P0.05);与LPS组相比,TREM-1抑制剂LP17预处理后再给予LPS诱导,细胞中TREM-1 mRNA与TLR4 mRNA水平降低(P0.05),炎症因子的含量下降(P0.05),RAW264.7细胞迁移被抑制(P0.01),TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-IκBα蛋白水平也明显降低(P0.05)。结论给小鼠注射TREM-1抑制剂可有效减轻LPS诱导的心肌功能障碍,抑制RAW264.7细胞TREM-1表达可抑制细胞的迁移,TLR4/NF-κB途径可能参与了这一过程。     

苦参碱抑制LPS诱导巨噬细胞IL-1β、TNF-α分泌及机制研究

目的:探讨苦参碱抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导巨噬细胞分泌炎症因子包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)对Toll样受体4(TLR4)、c-Jun表达的影响。方法:购买并培养小鼠RAW264.7巨噬细胞株,分成四组,即空白对照组、苦参碱组、LPS组、苦参碱干预组,通过浓度为100μg/L的LPS DMEM孵育1 h,之后将LPS弃去,然后加入不含血清的DMEM或125.25 mg/L苦参碱DMEM继续培养。分别收集上述四组细胞处理完毕后5、30、60、120min的细胞及培养液。通过PCR法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞TLR4及c-Jun mRNA的表达,通过免疫细胞化学法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞c-Jun蛋白的表达;通过ELISA法测定各组培养液中TNF-α、IL-1β的分泌。结果:苦参碱诱导组与空白对照组相比,TLR4 mRNA、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白的表达量和TNF-α及IL-1β分泌量各项指标差异无统计学意义(P0.05);LPS组各个时间点TLR4 mRNA、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白的表达量和TNF-α及IL-1β分泌量明显高于空白对照组,且高水平能够维持2 h以上(P0.05);苦参碱干预组能够有效的抑制LPS诱导的巨噬细胞TLR4 mRNA、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白的表达量,降低炎症因子TNF-α、IL-1β的分泌量。结论:苦参碱可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞丝裂原活化的蛋白激酶信号通路上TLR4、c-Jun的过表达从而有效的降低终末炎症因子TNF-α及IL-1β的释放,进而有效的抑制炎症反应,减轻内毒素炎症反应的程度。