环介导等温扩增技术在呼吸道感染病原体检测中的应用

目的 应用环介导等温扩增法(LAMP)对肺炎患者下呼吸道分泌物进行11种常见致病菌的核酸检测,探讨其临床应用价值.方法 收集福建省立医院2009-2010年呼吸科诊断为下呼吸道感染患者的合格痰标本289例,行LAMP方法检测,与痰培养结果比较,分析其灵敏性和特异性.结果 LAMP检测时间仅需2～3 h,明显短于痰培养;...     

环介导等温扩增法快速检测手足口病病原体

目的：建立逆转录（RT）-环介导等温扩增方法（LAMP）,以快速检测手足口病最重要的两种病原体：肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CA16）。方法：收集手足口病患儿咽拭子标本93份,针对EV71和CA16病毒的VP1基因特异性序列8个区域各设计6条LAMP引物,分别于63℃（EV71）、65℃（CA16A）扩增1 h,日光下观察结果,与实时荧光定量PCR比较检测特异性和敏感性。结果：EV71、CA16的LAMP最低检测限均为500拷贝/管,与对照病毒无交叉反应。93份标本中,RT-PCR方法检测显示EV71阳性44例,CA16阳性36例;RT-LAMP方法检测显示EV71阳性46例,CA16阳性36例,两种方法间比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论：应用RT-LAMP检测手足口病病原体EV71、CA16快速、灵敏、经济、特异性高,适合在基层医疗机构推广应用。     

环介导等温扩增技术的应用

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,利用一种链置换型DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在恒温65℃左右保温几十分钟快速进行核酸扩增的方法。由于其具有快速、简便、特异性好、灵敏度高、成本低等优点,已经应用于临床诊断、食品卫生检疫及基因芯片的开发,特别是在细菌和病毒的检测方面有重要意义。     

环介导等温扩增技术在食品检测中的应用

环介导等温扩增技术（LAMP）是一种新兴的快速扩增技术,以其快速、灵敏、特异、简便等优点在食品检测中得到了广泛应用。作者在介绍LAMP技术的原理和特点的基础上,就其在国内外食品致病菌安全检测方面的一些应用进行了综述,以期为我国食品检测和同类研究提供参考。     

环介导等温扩增技术及其在食源性疾病检测中的应用

食源性疾病是重要的公共卫生问题,食品中病原微生物是引起食源性疾病的主要因素之一,病原微生物的检测是影响食品安全性的最主要生物因素。本文综述了近年来环介导等温扩增技术（LAMP）在食源性疾病检测中的具体应用实例和目前的研究进展,并对LAMP方法在食源性疾病检测中的应用前景做了展望。     

环介导等温扩增技术用于消化道细菌检测的研究现状

消化道细菌是消化道疾病的一种病原体。环介导等温扩增技术（LAMP）是一种新的核酸扩增技术,具有敏感性高、特异性强和简便快速等优点,可用于消化道细菌的快速诊断。本文拟就 LAMP 检测消化道细菌的研究现状加以阐述。     

嗜肺军团菌的环介导等温扩增检测技术研究

目的建立一种简便、快速和高灵敏度的嗜肺军团菌的检测方法。方法利用环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,根据嗜肺军团菌mip基因的特征性保守序列,设计LAMP检测引物,建立LAMP检测方法,用常规PCR检测平台和其他21种致病菌评估该方法的特异性、灵敏度、重复性及实用性,同时以荧光法建立反应阈值与模板初始浓度之间的线性标准曲线。结果建立的LAMP方法检出限为1.0×102copies/μl,与其他致病菌无交叉反应,反应阈值与初始模板浓度有良好的线性关系(R2=0.9843),LAMP检测结果与传统分离培养方法具有良好的吻合性。结论环介导等温扩增技术检测嗜肺军团菌简便、快速、敏感度高,具有广阔的应用前景。     

霍乱弧菌环介导等温扩增LAMP技术检测

目的 应用环介导等温扩增技术(LAMP)进行霍乱弧菌的快速检测。方法 针对霍乱弧菌的管家基因(mdh)设计4条特异性引物(2条内引物和2条外引物),建立快速检测食品中霍乱弧菌的环介导等温扩增方法;应用该方法对17种细菌共42株菌进行LAMP扩增,并进行确证,全面评估该方法的灵敏度、特异性、准确性等。结果 该方法检测21株霍乱弧菌均得到阳性扩增结果,其余21株非霍乱弧菌均未扩增出条带,扩增反应最佳反应时间为60min,反应温度为65℃。霍乱弧菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别约为40 fg和50 cfu/mL。对模拟食品样品进行直接检测,检测限为70 cfu/g。结论 该方法具有特异性强、灵敏度高,操作简便快速、不需要复杂仪器设备,适用于食品的快速检测     

甲型流感病毒逆转录环介导等温扩增快速检测方法的建立

目的采用逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术建立了一种针对甲型流感病毒的特异、灵敏、快速、可视、简便的检测方法。方法根据甲型流感病毒M基因的保守序列,利用PrimerExplorer V4软件,设计了一套针对M基因的8个区域的5条特异性引物,优化了反应体系与扩增条件,并验证其特异性与灵敏性。结果该方法能检测出H1、H3、H5、H6、H7、H9亚型流感病毒,而对乙型流感病毒、人副流感病毒、呼吸道合胞病毒、人冠状病毒、人偏肺病毒、人腺病毒、人博卡病毒均无扩增反应,其最低检测限度为50拷贝/μl。另外,扩增反应只需要40min就能判读结果,并可通过反应液是否有沉淀或向反应液中加入荧光染料来对结果进行可视化诊断。结论本研究建立的RT-LAMP检测方法具有高特异性、灵敏度、快速简便、可视化判读结果等优势,适合在基层进行甲型流感病毒的快速检测,并可以应用于大流感疫情的准确筛查。     

环介导等温扩增技术及在传染性疾病检测中的应用

介绍环介导等温扩增技术的的基本原理、特点及在传染性疾病中检测和诊断的应用。环介导等温扩增技术具有简单、快速、特异性强和扩增效率高等的特点,目前可检测HBV、流感病毒、疱疹病毒、水痘_带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、腺病毒、SARS病毒、呼吸道合胞病毒、西尼罗病毒、结核分枝杆菌、痢疾志贺菌、大肠埃希菌、螺旋体、肺炎链球菌和耶氏菌等。     

嗜肺军团菌环介导等温扩增快速检测方法的建立与应用

目的 建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速检测嗜肺军团菌的方法.方法 应用环介导等温扩增技术(LAMP),针对嗜肺军团菌mip基因设计5条引物(2条内引物、2条外引物及1条环引物),并对LAMP反应条件和反应体系进行优化.为验证该方法的特异性、敏感性,针对种系背景明确的12株嗜肺军团菌实验对照菌株、45株嗜肺军团菌地方分离株、6株非嗜肺军团菌、11株其他细菌以及59份外环境水样本进行检测,并将其结果与传统培养分离方法及定量PCR方法比较.结果 所检测的菌株样本中不同血清型嗜肺军团菌经LAMP检测均呈绿色为阳性,非嗜肺军团菌及其他菌株检测均呈橙色为阴性.实验结果表明,LAMP方法的检出率高于传统培养分离方法及定量PCR.应用该方法从菌株核酸的提取至检测完成仅需1.5 h左右,该体系检测灵敏度为5 cfu/ml,而且其检测结果在日(灯)光下通过肉眼即可判断.结论 实验建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测嗜肺军团菌,适合基层检验部门及小型实验室与现场监测等使用.     

小肠结肠炎耶尔森菌环介导管温扩增技术检测方法的建立

目的将一种新颖的核酸扩增技术——环介导等温扩增技术(LAMP)应用于小肠结肠炎耶尔森菌的快速检测。方法针对小肠结肠炎耶尔森氏菌毒素基因yruI/yru R设计5条特异性引物,进行LAMP扩增,对扩增反应进行优化。并考核方法的敏感性和特异性。结果最佳反应时间为60min,反应温度为60℃。对8种相关肠道细菌进行LAMP扩增,仅小肠结肠炎耶尔森菌得到阳性扩增结果,证明引物具有很高的特异性。小肠结肠炎耶尔森菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别约为74fg和43cfu/ml。对模拟食品样品进行直接检测,检测限为76cfu/g。结论本方法检测小肠结肠炎耶尔森菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低,1.5h即可完成,有望发展成为快速检测小肠结肠炎耶尔森菌的有效手段。     

鼠疫耶尔森氏菌环介导等温扩增检测方法的建立

目的:将环介导等温扩增技术(LAMP)应用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测。方法:针对鼠疫耶尔森氏菌F1基因设计特异性引物,进行LAMP扩增。应用LAMP技术对鼠疫菌和非鼠疫菌进行检测以确定其特异性;对倍比稀释鼠疫菌液进行检测以确定其灵敏度,并与常规PCR方法进行比较。结果:对10种非鼠疫菌进行LAMP扩增,均为阴性结果,证明该方法具有很高的特异性。LAMP方法最低检出量为20个鼠疫菌,比常规PCR方法的灵敏度高10倍。通过加入染料进行LAMP扩增可直接观察结果。结论:本方法检测鼠疫耶尔森氏菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、结果易于判定,有望发展成为快速检测鼠疫耶尔森氏菌的有效手段。     

DNA环介导恒温扩增试验检测结核分枝杆菌的研究

目的探讨建立更快速、准确的痰结核分枝杆菌检测方法。方法采用涂片抗酸染色法、罗氏培养法和DNA环介导恒温扩增(LAMP)试验对结核分枝杆菌进行检测,并对其检出率进行比较。结果 LAMP试验检出率最高,罗氏培养法次之且检测时间长,抗酸染色法的检出率最低。结论 LAMP试验检测痰结核分枝杆菌具有快速、敏感、简便、特异等优点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用。     

应用LAMP技术对4种疟原虫进行属种鉴定的初步研究

摘要：目的建立对4种感染人的疟原虫虫属及定量的环介导等温扩增法（100p—mediated isothermal amplification,LAMP）基因检测方法。方法根据恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫、间El疟原虫的18SrRNA基因共有保守序列及LAMP技术原理,设计一套含有6条疟原虫虫属特异性引物的LAMP反应体系,产物经SYBRGreenI进行显色反应及电泳分析,观察其特征条带的情况,利用LAMP技术检测上述4种疟原虫DNA及其它12种相关寄生虫DNA评价反应特异性,利用PCR技术为参照对LAMP技术检测疟原虫虫属试验的敏感性,利用疟原虫重组质粒探索建立疟原虫LAMP定量的可能性。结果4种疟原虫LAMP产物经显色后呈绿色,经电泳后呈特征性梯状条带,阴性对照及其它相关寄生虫DNA无明显扩增,重组质粒浓度在1．42X10^4～1．42X10^9拷贝机l范围内时,反应循环阈值与模板浓度有良好的线性关系（r=0．9995）。与PCR方法相比较,建立的疟原虫虫属LAMP检测方法的敏感性是其10倍,检出限达到1．42X10^1拷N／μl。结论建立的检测疟原虫属种、数量的LAMP方法具有较高的特异性和敏感性,适合疟疾防治检测的需要。     

贝氏柯克斯体可视化等温扩增法建立

目的 建立针对贝氏柯克斯体的快速可视化环介导等温扩增（LAMP）方法。方法 体外合成贝氏柯克斯体的IS1111a基因,构建重组质粒。利用在线引物设计软件设计3组LAMP引物,用实时浊度仪筛选出最佳引物,同时对羟基萘酚蓝浓度进行优化,建立可视化LAMP反应体系,并评价其敏感性和特异性。结果 建立的可视化LAMP反应可准确检测出贝氏柯克斯体的重组质粒和新桥株,不与其他立克次体产生交叉反应,最低可检测到3.6×10²拷贝/反应,较普通聚合酶链反应（PCR）法的灵敏度提高了一个数量级,等同于实时浊度法和实时荧光定量PCR方法的检测灵敏度。结论 建立的可视化LAMP方法可敏感、特异地检测出贝氏柯克斯体感染,操作简单快捷,适用于基层卫生防疫和疫情现场的病原筛查。     

环介导恒温扩增结合纳米横向流生物传感技术对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌快速检测方法的建立与应用

目的 基于环介导恒温扩增结合纳米生物传感技术（loop - mediated isothermal amplification combined with nanoparticle - based lateral flow biosensor, LAMP - LFB）对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin - resistant Staphylococcus aureus,MRSA）快速、准确、便捷检测技术的构建及应用评价。方法 以MRSA菌株特异性基因mecA为检测靶点,设计并修饰LAMP引物。采用实时浊度仪、孔雀石绿扩增指示剂（Malachite green, MG）及纳米生物传感器（nanoparticle - based lateral flow biosensor, LFB）为检测手段对LAMP扩增产物进行鉴定。对MRSA - LAMP - LFB检测体系的扩增温度和扩增时间进行优化,分析MRSA - LAMP - LFB检测方法灵敏性和特异性。应用微生物培养技术,PCR技术和新构建的MRSA - LAMP - LFB方法分别对48份临床疑似MRSA感染患者全血样本进行检测,进而评价MRSA - LAMP - LFB技术的临床应用性。结果 MRSA - LAMP - LFB技术优化后的反应条件为67 ℃,40 min。该技术的检测结果可直接通过观察LFB板条上的CL和TL条带显色进行结果判定。该技术的灵敏度为100 fg/μl（32 copies/μl）,其检测特异性为100%,与非MRSA菌株无交叉反应。经临床样本验证,LAMP - LFB技术对MRSA的检测结果与传统的“细菌培养 - 药敏鉴定”检测结果一致,其灵敏度高于传统的PCR方法。结论 基于LAMP和LFB技术建立的MRSA - LAMP - LFB检测方法特异性强、灵敏度高,能准确、快速地检测MRSA菌株,能为临床用药和MRSA防控提供准确、快速的实验室诊断依据。     

环介导等温扩增技术及其在传染性疾病检测中的应用简

环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification method,LAMP）是近年来发展起来的新型恒温核酸扩增技术,与传统的聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）相比具有简便、快速、灵敏度高、特异性强等优点,已被广泛应用于传染性疾病的检测。本文就LAMP技术的原理、特点及其在常见传染性疾病检测中的应用进行综述。