雷公藤多甙抑制大鼠精子发生的研究

目的探讨雷公藤多甙对大鼠精子发生的抑制作用及其可能的信号通路。方法成年雄性大鼠给予雷公藤多甙(16 mg/kg)灌胃,每日1次,在2及6周检测血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和可的松水平;光镜观察睾丸组织的形态学变化;原位末端标记法(TUNEL)观察睾丸生精细胞凋亡;免疫组织化学法观察凋亡通路相关蛋白Bax/Bcl-2的表达。结果给药组与对照组相比,性激素、肾上腺皮质激素均无显著变化(P均>0.05);给药2周后精子数下降和畸形率上升(P<0.05),给药4和6周精子数下降和畸形率升高更显著(P<0.001);组织学检查给药组大鼠生精小管内各级精母细胞和精子细胞数明显减少,生精细胞排列紊乱,原始精原细胞和支持细胞(Sertoli细胞)未见明显改变。与正常对照组相比,生精小管内生精细胞凋亡显著增加(2周P<0.05,4和6周P<0.001)。凋亡相关蛋白Bax表达明显上调,Bcl-2表达无显著差异。结论雷公藤对大鼠精子发生的抑制作用表现为增加生精细胞凋亡,导致精子计数下降,精子的畸形率升高。雷公藤多甙使睾丸Bax表达增加,与诱导生精细胞凋亡相关,可能是相关的信号通路之一。进一步研究雷公藤多甙作用的分子信号机制有助于今后降低剂量、减少毒副作用,探讨其作为一种安全的男性避孕药可能性。     

手机频率电磁辐射对大鼠睾丸超微结构损伤的研究

目的:观察手机频率(900 MHz)电磁辐射对雄性大鼠睾丸组织超微结构和生精细胞凋亡的影响。方法:将30只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为3组:正常组、辐射2 h组和辐射4 h组,每组10只。正常组不辐射,辐射2 h组和辐射4 h组每天暴露于900 MHz手机频率分别辐射2、4 h,连续辐射30 d。透射电镜观察睾丸组织超微结构的变化,原位末端标记(TUNEL法)检测生精细胞凋亡。结果:与正常组比较,辐射2 h组大鼠生精小管基膜肿胀,支持细胞紧密连接分开,细胞间隙明显增大,部分线粒体内出现空泡,见线粒体髓样化,生精细胞凋亡增多[(25.62±1.33)%vs(18.71±1.76)%,P0.05],以初级精母细胞凋亡为主;与辐射2 h组比较,辐射4 h组生精小管基膜肿胀,支持细胞紧密连接分开,细胞间隙明显增大,精原细胞胞膜不完整,可见胞质碎片、胞核固缩和切迹,核周隙轻度扩张,细胞内线粒体畸形,内有空泡,结构模糊,部分嵴融合或消失,其损伤程度增加,生精细胞凋亡增多[(29.93±1.46)%vs(25.62±1.33)%,P0.05],精原细胞、初级精母细胞和次级精母细胞均有凋亡。结论:手机频率电磁辐射可造成大鼠睾丸组织超微结构损伤,生精细胞凋亡增加,有时效关系;生精细胞凋亡可能与线粒体损伤有关。     

大鼠脊髓损伤急性期睾丸生精细胞凋亡及Fas和Bcl-2蛋白表达的改变

目的 研究脊髓损伤急性期对成年大鼠睾丸生精功能障碍的影响及其机制.方法 80只SD雄性大鼠随机分为脊髓损伤组(40只)和脊髓非损伤组(40只),采用原位细胞凋亡TUNEL法检测脊髓损伤后第1、2、4、8、1 6天睾丸生精细胞的形态及数量变化.采用免疫组化SABC法检测大鼠脊髓损伤后第1、2、4、8、16天睾丸生精细胞Fas、Bcl-2表达情况.结果 大鼠脊髓损伤后睾丸TUNEL标记阳性凋亡细胞第4天开始出现,多表达于初级、次级精母细胞及精原细胞,至第16d,随时间点推移阳性凋亡细胞数逐渐增多.脊髓损伤后第4～16d损伤组睾丸生精细胞Fas表达与非损伤组比较显著增强(P＜0.05),Bcl-2表达损伤组与非损伤组差别无显著性(P＞0.05).结论 大鼠脊髓损伤急性期存在睾丸生精细胞凋亡现象,睾丸生精功能障碍与Fas高表达密切相关,和Bcl-2表达无明显相关性.     

酒精染毒后大鼠睾丸生精小管超微结构的改变

目的:观察酒精染毒后大鼠睾丸生精小管超微结构的变化。方法:将48只W istar雄性性成熟健康大鼠随机分为对照组(A组)、染毒组(B组),每组24只,B组用50度酒精(6 m l/kg)每天灌胃染毒1次,连续39 d,A组用生理盐水灌胃(6 m l/kg);在第14、27、40 d分别从A、B两组中各处死8只大鼠,取睾丸组织,常规电镜制片,透射电镜观察大鼠睾丸生精小管超微结构。结果:透射电镜发现:对照组各时间段睾丸生精小管超微结构无明显变化,基膜平滑、致密、厚薄均匀,支持细胞胞质丰富、粗面内织网及线粒体较多,核大、核质均匀、核仁清楚,精原细胞与基膜和支持细胞之间连接紧密,紧密连接层次清楚。染毒组第1生精周期末(相当于第14 d)超微结构开始变化;第2、3个生精周期末(分别相当于第27、40 d)超微结构变化最明显,主要表现为:①支持细胞溶酶体增多,线粒体肿胀空泡化,细胞器模糊且数量减少,支持细胞内出现较大空泡,甚至支持细胞出现萎缩;②精原细胞与支持细胞及生精小管的基膜之间出现较多较大空泡;③精原细胞凋亡,凋亡小体边集;④生精小管内的精子有过多的胞质且有大小不一的空泡,尾部断面线粒体排列不整齐、缺失或堆积;⑤紧密连接层次改变、模糊不清;⑥基膜厚薄不均,基膜外胶原组织疏松增厚,成波浪式皱褶,可见基膜断裂。结论:酒精可引起大鼠睾丸生精小管的基膜、紧密连接、支持细胞等超微结构异常,并可引起精原细胞凋亡。     

五子衍宗丸对实验性少弱精子症大鼠的保护作用与机制研究

目的:观察五子衍宗丸对实验性少弱精子症大鼠的保护作用与机制研究。方法:取60只雄性SD大鼠,随机分成正常组、模型组、阳性药组(生精胶囊1.6 g/kg),五子衍宗丸低、中、高剂量组(1、2、4 g/kg),除正常组外,其他各组灌服雷公藤多苷30 mg/(kg·d),连续6周,建立少弱精子症模型。从造模的第3周开始,各组按剂量灌胃给药,连续给药4周后计算睾丸和附睾脏器指数,检测附睾精子质量、精子凋亡率、精子线粒体通透性转换孔(MPTP)开放情况,HE染色观察大鼠睾丸病理组织学改变,Hochest染色观察大鼠睾丸细胞凋亡情况。结果:五子衍宗丸能提高少弱精子症大鼠睾丸和附睾脏器指数,增加附睾精子浓度、精子活力和精子活率,降低精子凋亡率,抑制MPTP异常开放;HE染色显示五子衍宗丸能增加少弱精子症大鼠睾丸生精小管内各级生精细胞层次和数量,Hochest染色显示五子衍宗丸明显抑制睾丸生精小管内生精细胞凋亡。结论:五子衍宗丸能明显提高少弱精子症大鼠精子质量,降低少弱精子症模型大鼠的各级生精细胞(包括精子)凋亡率,其机制可能与抑制大鼠精子线粒体MPTP开放有关。     

隐睾及睾丸固定术后对大鼠生精能力的影响

目的 观察隐睾及睾丸固定术后对睾丸生精能力的影响.方法 通过手术方法对80只SD大鼠制作单侧隐睾模型,随机分为10组,其中4组(每组10只)于隐睾术后7、14 d切取患侧睾丸组织,6组于隐睾术后7、14d行睾丸固定术,分别于术后2、4、6周取材.将所取得的睾丸组织称重后行流式细胞仪检测其细胞凋亡率和各生精细胞百分比以及组织中B淋巴细胞/白血病-2( bcl-2)和bax基因表达量.结果 隐睾睾丸重量明显下降,隐睾组1C细胞(7d组:10.61 ±1.10,14d组:11.79 ±0.91)较对照组降低(16.48±1.60,P＜0.05)、4C细胞也明显降低,而2C细胞(7d组:40.41±2.93,14 d组:51.41±6.45)较对照组增加(30.17±3.24,P＜0.05).隐睾各组生精细胞凋亡率(7d组:14.9±1.26,14 d组:6.90±0.96)高于正常对照组(2.50±0.44,P＜0.01),而睾丸复位固定术后各组生精细胞凋亡率均下降(P＜0.05).隐睾7、14 d睾丸中bc1-2蛋白表达量(7d组:4.68±0.47;14 d组:5.66 ±0.71)较对照组(7.47±1.01)降低而bax蛋白表达量(7d组:8.27±1.08;14 d组:6.26±0.21)较对照组(5.82 ±0.47,P＜0.05)升高,睾丸固定术后各组bcl-2蛋白表达量升高而bax蛋白表达量降低(P＜0.01).结论 隐睾可以使睾丸生精细胞凋亡增加,睾丸复位固定术后,睾丸生精功能可部分或全部恢复,其恢复程度和隐睾时间长短有关;bcl-2和bax表达在生精细胞凋亡的调控中起重要作用.     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠精索静脉曲张生精细胞Caspase-3酶及bcl-2基因的影响

目的 探讨精索静脉曲张大鼠睾丸组织中一氧化氮(NO)与生精细胞凋亡之间的关系并研究其机制.方法 实验分3组:对照组(假手术组)、曲张组(精索静脉曲张组)和药物组,每组10只大鼠.(45±5)d的SD雄性大鼠复制左侧曲张模型.药物组为术后8周起腹腔注射N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME),剂量:50mg/lg·d-1),每组10只大鼠.术后10周用流式细胞仪检测睾丸生精细胞凋亡,分光光度法检测Caspase3活性,用硝酸还原酶法测定睾丸组织NO含量和NOS活性.逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2基因mRNA的表达.结果 与对照组对应侧相比较,曲张组大鼠双侧睾丸组织NO含量增加,NOS活性显著升高(P＜0.01),流式细胞仪枪测生精细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),生精细胞Caspase-3酶的活性显著升高(P＜0.01),bcl.2基因mRNA表达明显减少(P＜0.01).药物组较曲张组大鼠对应侧睾丸组织NO含量、生精细胞凋亡显著减少(P＜0.01),生精细胞Caspase-3酶的活性显著降低(P＜0.01),bcl-2基因mRNA表达明显增加(P＜0.01).结论 精索静脉曲张明显诱导大鼠睾丸组织生精细胞凋亡.其机制可能与NO含量增加,NOS活性升高,生精细胞中Caspase-3酶的活性升高及bcl-2基因表达下调有关.L-NAME对曲张大鼠乍殖细胞有保护作用.曲张对睾丸的影响是是双侧性的.     

实验性精索静脉曲张大鼠生精状态评价

目的 通过对大鼠实验性精索静脉曲张(varicocele,VC)模型睾丸生精小管生精上皮结构、性激素水平的分析,探讨精索静脉曲张致不育的机制.方法 40只雄性青春期Wistar大鼠随机分为VC8周组(n=12)、VC12周组(13=12)和相应对照组(分别n=8);左肾静脉部分结扎建立实验性大鼠VC模型.术后8周或12周,分别测量各组大鼠:(1)左侧精索静脉直径、睾丸温度及体质量、睾丸生精小管生精上皮;(2)外周血中促卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和睾酮(T)的水平.结果 VC8周和VC12周组大鼠左侧精索静脉明显扩张,与对照相比血管直径差异有统计学意义(P<0.01);VC8和VC12周组大鼠左侧睾丸体质量均低于自体右侧睾丸和对照组睾丸,差异有统计学意义(P<0.05);光镜下,VC组大鼠双侧睾丸生精小管生精上皮精子发生阻滞、细胞脱落和细胞层数减少等,VC12周组损伤程度较VC8周组明显加重,左侧较右侧显著;与对照组相比,VC组大鼠外周血FSH、LH升高,T降低,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 本研究提示:VC对大鼠双侧睾丸生精小管生精上皮产生明显的损害作用,并导致大鼠血中T水平降低和FSH、LH水平升高.     

环磷酰胺干扰精原干细胞功能的初步研究

目的:初步探讨环磷酰胺对精原干细胞分化功能的干扰作用。方法:根据W istar大鼠生精细胞发育不同阶段分为1、3、9周龄组,每组24只,随机均分为实验组和对照组,实验组腹腔内注射环磷酰胺100 mg/(kg.体重),对照组注射等量生理盐水,24 h后用原位缺口末端标记法检测生精细胞凋亡。另取仅有精原干细胞的1周龄W istar雄性大鼠60只,随机均分为实验组和对照组(给药方法同上),在给药后24 h、3周、9周分别用免疫组化法检测c-K it蛋白,流式细胞仪分析细胞周期。结果:环磷酰胺干预后,1周龄实验组与对照组大鼠生精细胞凋亡差异无显著性(P>0.05),其余各周龄组实验组生精细胞凋亡均显著增高(P<0.01)。1周龄实验组大鼠睾丸在环磷酰胺处理后不同时间点的细胞周期S期细胞比例、精原细胞c-K it蛋白表达水平均明显低于对照组(P<0.01)。结论:环磷酰胺诱导精原干细胞凋亡不明显,可能更重要的是干扰精原干细胞的增殖分化功能。     

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠单侧隐睾组织中干细胞因子及抗氧化酶活性的影响

目的:探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对大鼠隐睾睾丸组织中干细胞因子(SCF)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量的影响。方法:选取雄性SD大鼠左侧隐睾成功模型48只,体重(200±20)g,完全随机法分为4组,每组12只。A组为对照组,B组为GDNF 7 d组,C组为GDNF14 d组,D组为GDNF 21 d组。每组根据设定处理方式的不同分别进行处理,采集左侧睾丸并行生化指标(SOD、CAT活性及MDA含量)检测;TUNEL检测隐睾组织细胞调亡指数(AI);HE染色观察睾丸组织学形态;实时定量PCR法检测隐睾组织中SCF基因的表达情况,Western印迹检测各组隐睾组织中SCF蛋白表达情况。结果:与GDNF组相比,其中GDNF 14 d组中各项指标有明显变化;生精细胞凋亡明显减少,其中对照组、GDNF 7 d组、GDNF 14 d组、GDNF 21 d组AI分别为13.5±0.64、8.42±0.16、4.45±0.34、7.32±0.09。对照组与GDNF 14 d组相比差异有明显统计学意义(P<0.01),与对照组相比,各GDNF组生精细胞凋亡减少,SOD活性明显上升,MDA含量下降明显,SCF表达较对照组有明显增高,差异有明显统计学意义(P<0.01)。结论:GDNF对大鼠单侧隐睾组织生精功能具有保护作用,增强抗氧化酶系统的抗氧化能力,提高SCF表达含量,从而改善睾丸生育能力,其以GDNF 14 d时作用最明显。     

胶质细胞源性神经营养因子对体外培养大鼠精原干细胞PLZF和c-Kit表达的影响

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对大鼠原代培养的精原干细胞(SSC)早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)、原癌基因c-Kit基因转录及表达的影响.方法 采用含不同浓度GDNF(0、10、50、100 ng/m1)的DMEM培养液原代培养大鼠SSC.RT-PCR检测SsC中PLZF mRNA、c-Kit mRNA水平,蛋白质印迹法检测PLZF、c-Kit蛋白表达情况.结果 对照组和GDNF 10 ng/nl组细胞随着培养时间延长,生长速度无明显变化,而GDNF 50和100 ng/ml组细胞生长速度明显加快.对照组PLZF和c-Kit mRNA表达量分别为0.28±0.13、0.65±0.21,GDNF 10 ng/ml组分别为0.27±0.14,0.62±0.19,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);GDNF 50 ng/ml组分别为0.64±0.28、0.34±0.15.与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);GDNF 100 ng/ml组分别为0.68±0.27、0.28±0.18,与50 ng/ml组比较差异无统计学意义(P＞0.05).对照组PLZF和c-Kit蛋白表达量分别为0.34+0.13、0.72±0.27 GDNF 10 ng/ml组分别为0.38±0.18、0.69±0.26,与对照组比较差异元统计学意义(P＞0.05);GDNF 50 ng/ml组分别为0.68±0.26、0.35±0.15,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);GDNF 100 ng/ml组分别为0.70±0.27、0.32±0.11,与50 ng/ml组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 随着GDNF浓度增加,SSC增殖水平升高,而分化受抑制.GDNF对SSC增殖和分化有一定的调控作用.     

冠状动脉旁路移植术对犬急性心肌梗死心肌神经相关因子表达的影响

目的 探讨犬急性心肌梗死早期冠状动脉旁路移植术对梗死周边区心肌神经相关因子表达的影响及其意义.方法 结扎犬冠状动脉前降支制备心肌梗死模型(30只).随机分为心肌梗死旁路移植实验组(22只)和心肌梗死不旁路移植对照组(8只).分别在心肌梗死后1、2、4、6周行冠状动脉旁路移植术作为实验组,其中第2周4只,其余每组6只;对...     

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾精子结合抗原11 mRNA及其蛋白异构体表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸和附睾中精子结合抗原11(SPAG11)mRNA及其蛋白异构体SPAG11E表达的影响,并探讨其与精索静脉曲张导致男性不育的关系。方法:40只SD大鼠随机分为ELV2周组、4周组,假手术对照2周组、4周组,每组10只。ELV组行部分结扎左肾静脉建立青春期SD大鼠ELV模型,假手术对照组仅显露左肾静脉过程,但不结扎。应用RT-PCR和免疫组化法(n=5)检测SPAG11 mR-NA及SPAG11E蛋白在ELV2周组和ELV4周组及各自对照组大鼠双侧睾丸、附睾中的表达变化。结果:RT-PCR结果显示,SPAG11基因376bp的特异扩增产物仅见于大鼠附睾组织中。免疫组化结果显示,SPAG11E蛋白主要与睾丸生精上皮的圆形和长形精子细胞的顶体泡和顶体、睾丸间质细胞的胞质相结合;在附睾管上皮主细胞胞质和顶部静纤毛中表达。对RT-PCR的相对吸光度值和免疫组化的灰度值进行统计学分析显示:①左侧附睾ELV2周和4周组SPAG11 mRNA和SPAG11E蛋白的表达与各自右侧组及各自对照组比较均有显著减弱(P<0.05或P<0.01);左侧附睾ELV4周组SPAG11mRNA与SPAG11E的表达较ELV2周组显著减少(P<0.05或P<0.01);右侧附睾ELV4周组SPAG11E的表达也较ELV2周组显著减少(P<0.01);②两实验组双侧睾丸SPAG11E蛋白的表达与相应对照组比较均未见明显差异(P>0.05),且在ELV2周组和ELV4周组之间该蛋白的表达也无显著性差异(P>0.05)。结论:SPAG11是特异表达于附睾的基因,在大鼠睾丸和附睾中均可见其蛋白异构体SPAG11E免疫阳性反应,其定位及表达水平具有细胞特异性和区域特异性,而且SPAG11 mRNA及SPAG11E蛋白在ELV模型鼠附睾中的表达发生了明显变化,这提示SPAG11不仅可能在大鼠精子发生、成熟过程中发挥重要作用,还可能与精索静脉曲张所致的男性不育相关。     

口服丙烯酰胺对雄性大鼠生长发育及生殖机能的影响

目的:研究丙烯酰胺对雄性大鼠的生殖毒性作用。方法:30只21日龄断奶未成熟雄性大鼠随机分为3组,实验组Ⅰ和实验组Ⅱ分别通过自由饮水方式口服5 mg/kg.d和10 mg/kg.d的丙烯酰胺溶液8周,对照组饮用自来水。分两批(第4周和第8周时)对体重、脏器重等指标进行检测,并做睾丸和附睾的组织形态学观察;第8周时,同时检查附睾尾精子密度和精子形态。结果:两实验组大鼠体重增加显著低于对照组(P<0.05),至实验8周时,睾丸、附睾性器官发育已受到影响,实验组Ⅱ大鼠附睾尾部精子密度明显低于对照组(P<0.05),实验组Ⅰ与对照组差异不显著(P>0.05)。睾丸出现不同程度的病理变化,发生调亡的生精小管周围间质细胞显著增多(P<0.05)。结论:丙烯酰胺会对生精小管产生毒性作用而导致雄性大鼠精子生成减少。     

Palomo和改良Palomo曲张精索内静脉结扎术对大鼠同侧睾丸的影响

目的 评估PMomo曲张精索内静脉结扎术(PV)和改良Palomo曲张精索内静脉结扎术(MPV)对大鼠同侧睾丸的影响.方法 检测实验性左侧精索静脉曲张(ELV)组(9只)、PV组(10只)、MPV组(8只)、和对照组(8只)大鼠左侧睾丸的Johnsen's评分、生精小管的超微结构、和生殖细胞凋亡指数(AJ).结果 对照组Johnsen's评分(9.46±0.52)显著高于ELV组(7.72±0.31,P＜0.05)和PV组(2.86±0.31,P＜0.01),与MPV组(9.42±0.63)比较差异无统计学意义(P＞0.05);对照组AI(2.21±1.15)显著低于ELV组(5.32±1.23,P＜0.05)和PV组(9.26±1.98,P＜0.01),与MPV组(2.32±1.18)比较差异无统计学意义(P＞0.05);ELV和PV组生精小管的超微结构明显异常.结论 MPV可以修复ELV所导致的同侧睾丸的损伤,PV则使损伤进一步加重.     

皮瓣重建阴囊对家兔生殖功能的影响

目的 通过检测皮瓣重建阴囊后睾丸生精细胞凋亡及增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况,以探讨皮瓣重建阴囊后对兔生殖功能的影响.方法 以育龄期新西兰大白兔作为实验动物,雄性动物随机分为实验组(皮瓣重建阴囊组)48只、对照组(皮瓣重建阴囊假手术组)24只和空白组18只.建模后的第3～8周末应用原位末端标记法(TUNEL)检测生精细胞凋亡和免疫组织化学法(SABC法)检测PCNA表达情况;第8周末各组分别对未取睾丸活检的12只雄性家兔与雌兔配对喂养,观察生育情况.结果 凋亡检测结果 :空白组正常睾丸生精细胞的凋亡指数为7.73±4.95.在第3周末实验组凋亡指数为22.59 4-3.04,对照组为21.13±1.68;在第8周末实验组凋亡指数为71.85±2.69.对照组为13.64±2.09.实验组在重建阴囊后3～8周内随着时间延长生精细胞凋亡指数逐渐增加,其凋亡指数明显高于空白组(P＜0.05);在第3周末实验组与对照组凋亡指数比较差异无统计学意义(P＞0.05);在第8周末实验组与对照组凋亡指数比较差异具有统计学意义(P＜0.05);第3周末对照组凋亡指数与空白组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);第8周末对照组凋亡指数与空白组比较差异无统计学意义(P＞0.05).PCNA检测即增殖指数检测结果 :空白组正常睾丸生精细胞的增殖指数为43.07±2.25.第3周末及第4周末实验组增殖指数分别为9.32±9.30及12.52±3.87,对照组第3周末为45.69±4.98,实验组第3、4周末增殖指数分别与对照组第3周末及空白组增殖指数比较差异具有统计学意义(P＜0.05);实验组第7周末及第8周末增殖指数分别为46.98±18.92及49.53±9.79,对照组在第8周末为39.90±5.10,实验组第7、8周末增殖指数分别与对照组第8周末及空白组增殖指数比较差异无统计学意义(P＞0.05);对照组增殖指数在第3周末和第8周末分别与空白组增殖指数比较差异均无统计学意义(P＞0.05).配对结果 :空白组、对照组配对后对应母兔均受孕生崽,平均生崽数分别为(6.0±1.28)只、(5.92±1.31)只,两组生崽数差异无统计学意义(P＞0.05);实验组配对后对应母兔均未受孕,与空白组和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 皮瓣重建阴囊导敛的家兔生殖功能障碍主要是由于生精细胞的过度凋亡所致,生精细胞的增殖能力仪在重建阴囊早期受到一定的影响.而后期则无明显受损表现.     

光照应激对雄性大鼠生殖相关参数的影响

目的 观察比较光照应激状态下不同应激时间段SD大鼠生殖相关参数的变化.方法 建立SD大鼠的光照应激模型分为光照应激短期(2d、3d、4d、7d)和光照应激长期(14d、21d、28d),并分别取应激状态下SD大鼠睾丸、附睾称重,对附睾尾精子计数,HE染色观察睾丸结构,应用免疫组织化学和westernblot分析3 β-HSD表达,比较各实验组和对照组问上述指标的变化.结果 短期光照应激组(2d、3d、4d、7d)与对照组相比,大鼠体重、睾丸重量、附睾重量、精子数量没有明显变化(P>0.05),HE染色显示睾丸结构无明显变化,免疫组化和western blot显示3β-HSD表达无明显变化.长期光照应激组与对照组相比,大鼠重量、睾丸和附睾重量都有明显增加.与对照组相比,14 d实验组的附睾重量有显著性差异(P<0.05):21 d、28 d实验组的睾丸重量有显著差异(P<0.05),21 d、28 d实验组的体重、附睾重量和精子相对计数都有极显著差异(P<0.01).HE染色显示睾丸内生精小管变粗,管腔内生精细胞增多,免疫组化和western blot显示长期应激组14 d的3β-HSD相对表达量增加20.3%,有显著性差异(P<0.05);21d和28d实验组3β-HSD的相对含量分别增加30.4%和43.3%,差异极显著(P<0.01).结论 短期光照应激不能破坏大鼠机体内稳态的调节机制,对生殖的影响并不明显;而长期处于光照应激状态下的雄性大鼠,超出机体内稳态的调节能力,对生殖的影响不仅表现在体重、睾丸、附睾和附睾尾的重量增加,而且精子相对计数及睾丸结构都发生相应变化,3β-HSD表达量也明显增加.提示光照是影响大鼠生殖功能的一个因素.     

胶质细胞源性神经营养因子对体外培养小鼠精原干细胞增殖分化作用的影响

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对体外培养小鼠精原干细胞(SSC)增殖与分化的影响.方法 雄性昆明小鼠80只.采用Percoll密度梯度分离及差速贴壁法纯化SSC,免疫荧光染色及流式细胞检测方法鉴定.将获取的SSC随机分为实验组和对照组,以支持细胞作为饲养层培养SSC,实验组每5 ml DMEM/F12完全培养液中添加0.02 μg GDNF.酶联仪检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞生长周期;采用卵泡浆内显微注射(ICSI)技术将精子细胞与卵母细胞结合,观察卵裂细胞数,体外培养3 d后行染色体数量分析.结果 添加GDNF培养的SSC第6、9、12、15天吸光度(A)值分别为0.448±0.028、0.502±0.062、0.556±0.045、0.621±0.072,与对照组0.377±0.053、0.402±0.071、0.432±0.019、0.461±0.037比较差异有统计学意义(P＜0.05);第3、6、9、12、15天SSC DNA合成期(S期)含量分别为20.86、26.34、31.23、37.54、28.02,与对照组1.69、1.73、2.56,4.85,1.82比较差异均有统计学意义(P＜0.05);精子细胞与卵母细胞结合后可得到含有20对染色体的配子.结论 ICSI技术可为鉴定SSC体外分化为精子细胞提供较充分的依据;GDNF能促进SSC的体外增殖与分化.     

Protective effect of liposome-mediated glial cell line. derived neurotrophic factor gene transfer in vivo on motoneurons following spinal cord injury in rats

IDepartmentofOrthopedicandSpineSurgery ,NanfangHospital,FirstMilitaryMedicalUniversity ,Guangzhou 5 10 5 15 ,China (LuKW ,ChenZYandHouTS) Correspondingauthor:Tel:86 2 0 6 136 0 0 4 6 ,E mail:lukaiwu @sohu .comThisworkwassupportedbyNationalNaturalScienceFoundationofChina (30 0 0 0 0 4 8)andtheNationalBasicResearchProgram (G 19990 5 4 0 0 0 )ofChina.nrecentyears ,substantialevidencehassuggestedthatearlyadministrationofexogenousneurotrophicfactors (NTFs)intoinjuredregioncanfacilit…     

鞘内注射不同剂量右美托咪啶对大鼠的抗伤害效应和脊髓神经毒性

目的 评价鞘内注射右美托咪啶对大鼠的抗伤害效应和脊髓神经毒性.方法 雄性SD大鼠60只,体重180～220 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=12):对照组(C组)不做任何处理;生理盐水组(N组)鞘内注射生理盐水10 μl;不同剂量右美托咪啶组分别鞘内注射右美托咪啶0.75μg/kg组(D1组)、1.50μg/kg组(D2组)、3.00 μg/kg组(D3组),均用生理盐水稀释至10 μl.于鞘内给药前和给药后30 min时测定机械缩足阈值(PWMT),于鞘内给药前和给药后60min时测定辐射热甩尾潜伏期(TFL),计算最大抗伤害效应(MPE)百分比.于给药后7、24和48 h时,取L4-6脊髓节段,观察病理学结果,并采用免疫组化法测定c-Fos蛋白表达水平.结果 与C组和N组比较,D1组、D2组和D3组给药后30min时PWMT升高,给药后60min时TFL和MPE百分比升高(P＜0.05);与D1组和D2组比较,D3组给药后30 min时PWMT升高,给药后60min时TFL和MPE百分比升高(P＜0.05);D1组和D2组PWMT、TFL和MPE百分比差异无统计学意义(P＞0.05).与C组和N组比较,D1组和D2组给药后各时点脊髓背角c-Fos蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),D3组给药后7和24 h时脊髓背角c-Fos蛋白表达上调(P＜0.05),给药后48h时脊髓背角c-Fos蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);与D1组和D2组比较,D3组给药后24 h时脊髓背角c-Fos蛋白表达上调(P＜0.05).D3组给药后24 h时可见脊髓轻度损伤.结论 鞘内注射右美托咪啶对大鼠可产生抗伤害效应.鞘内注射3.00μg/kg右美托咪啶抗伤害效应最强,但可产生短暂的脊髓神经毒性.

Abstract：

Objective To investigate the analgesic efficacy and spinal neurotoxicity of intrathecal (IT) different doses of dexmedetomidine in rats. Methods Sixty male SD rats weighing 180-220 g were randomly divided into 5 groups ( n = 12 each): groupnormal control (group C); group IT normal saline (group N); different doses of dexmedetomidine groups received IT dexmedetomidine 0.75, 1.50 and 3.00 μg/kg respectively (groups D1.3). Paw withdrawal threshold to mechanical stimulation (PWMT)with yon Frey filaments and tail flick latency (TFL) to a thermal nociceptive stimulus were measured before (To, baseline) and at 30 or60 rin after IT dexmedetomidine or normal saline administration (T1, T2 ) and the percentage of the maximum possible effect ( MPE ) was calculated. Lumbar segment of the spinal cord ( L4-6 ) was removed for microscopic examination and determination of c-Fos expression (by immuno-histochemistry) at 7, 24 and 48 h after IT dexmedetomidine or normal saline administration. Results PWMT, TFL and the percentage of MPE were significantly increased after IT dexmedetomidine as compared with the baseline values at T0 in groups D1-3 ( P ＜ 0.05). PWMT was significantly higher at T1 and TFL and the percentage of MPE were higher at T2 in groups D1-3 than in groups C and N,and in group D3 than in groups D1,2 ( P ＜ 0.05). At 7,24 h after IT dexmedetomidine c-Fos protein expression was significantly higher in group D3 than in groups C and N( P ＜ 0.05). There was no significant difference in c-Fos expression at 48 h after IT dexmedetomidine between group D3 and groups C and N ( P ＞ 0.05 ). At 24 h after IT dexmedetomidine c-Fos protein expression was significantly higher in group D3 than in other 4 groups( P ＜ 0.05). Slight spinal cord injury was observed at 24 h after IT dexmedetomidine in group D3. Conclusion IT dexmedetomidine has antinociceptive effect. High dose dexmedetomidine IT can produce transient reversible toxicity to the spinal cord.