石家庄地区PM2.5诱导A549细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨石家庄地区PM2.5染尘A549细胞对细胞凋亡的影响及其分子机制.方法 PM2.5作用于体外培养的A549细胞后,检测细胞存活率、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平,细胞凋亡及凋亡相关基因的表达水平.结果 PM2.5暴露可显著降低A549细胞存活率和MMP水平,且两者间存在相关性(R2 =0.749,P=0.037).同时,PM2.5作用24 h可诱导A549细胞发生凋亡,并观察到凋亡相关基因p53、EZH2和Sox2ot的表达上调.结论 短期暴露于PM2.5后,lncRNA Sox2ot可能通过激活转录因子EZH2,与抑癌基因p53共同参与调控细胞线粒体功能,进而诱导细胞凋亡进程.     

ERK及AP-1对二氧化硅上调人肺上皮细胞纤溶酶原激活物抑制因子-1表达的作用

目的 探讨细胞外信号调控激酶(ERK)/激活蛋白(AP-1)信号通路在二氧化硅诱导人肺上皮细胞(A549)纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达中的作用.方法 以人肺上皮细胞A549为研究对象,200 μg/ml二氧化硅刺激0-24h.干预实验采用姜黄素预处理以及c-Jun显性负性突变体(TAM67)瞬时转染阻断AP-1活性;PD98059预处理阻断ERK活性.以Western印迹检测ERK激酶活力、PAI-1蛋白表达,EMSA检测AP-I DNA结合活性.结果 (1)SiO2作用A549细胞4、8、16 h,AP-1DNA结合活性分别为对照的1.3、1.3、2.1倍,差异有统计学意义(P＜0.05);10、25、50μmol/L浓度姜黄素对二氧化硅诱导的PAI.1蛋白表达抑制率分别为20%、63%、65%,差异有统计学意义(P＜0.05);TAM-67对二氧化硅诱导的PAI.1蛋白表达的抑制率为59%,与二氧化硅刺激组比,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)二氧化硅作用A549细胞诱导ERK激酶活化;PD98059对二氧化硅诱导的PAI-1蛋白表达的抑制率为51%,与二氧化硅刺激组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)PD98059对二氧化硅诱导的AP-1 DNA结合活性的抑制率为73%,与二氧化硅刺激组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ERK/AP-1信号通路参与调控SiO2诱导的人肺上皮细胞PAl-1蛋白表达.     

泰斯巴汀对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞A549损伤的保护作用及机制研究

目的探讨泰斯巴汀对肺炎链球菌(SP)诱导的肺泡上皮细胞A549损伤的影响和其作用机制。方法将肺泡上皮细胞A549分为3组,依次为Control组、SP组和SP+泰斯巴汀组。MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax和Bcl2)、炎性因子(IL-6和IL-10)以及NF-κB信号通路相关蛋白(NF-κB p65、NF-κB p-p65和TNF-α)的表达水平。结果 SP感染可抑制A549细胞存活,泰斯巴汀可减轻SP对A549细胞存活的抑制作用,并呈一定的浓度依赖性。SP组A549细胞凋亡率、Bax、IL-6、NF-κB p65、NF-κB p-p65和TNF-α的表达水平显著高于Control组,而Bcl2和IL-10的表达水平显著低于Control组。SP+泰斯巴汀组A549细胞凋亡率、Bax、IL-6、NF-κB p65、NF-κB p-p65和TNF-α的表达水平显著低于SP组,而Bcl2和IL-10的表达水平显著高于SP组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论泰斯巴汀通过抑制NF-κB信号通路,能够抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和促炎因子表达,对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤具有保护作用。     

hOGG1基因低表达对氢醌的细胞毒性及遗传毒性的影响

目的 探讨hOGG1基因低表达对氢醌(HQ)的细胞毒性及遗传毒性的影响.方法 0、5、10、20、40、80μmol/L浓度的(HQ)染毒A549细胞和hOGG1基因低表达的A549-R细胞,噻唑蓝比色法检测2种细胞存活率,荧光法测定2种细胞内活性氧(ROS)含量,微核试验分析2种细胞染色体损伤,彗星试验观察细胞的DNA损伤和修复.结果 随着HQ染毒浓度的增加,2种细胞的存活率均下降,A549-R细胞和A549细胞IC50分别为160.49和228.42 μmol/L,且差异有统计学意义(P＜0.05).0、5、10、20、40、80 μmol/L HQ染毒组A549-R细胞ROS含量、微核率均明显高于A549细胞,差异有统计学意义(P＜0.05);各浓度HQ染毒组A549-R细胞拖尾率和Olive尾距(OTM)值均明显大于A549细胞,并有剂量-反应关系,差异有统计学意义(P＜0.05).hOGG1基因低表达的A549-R细胞比A549细胞对HQ引起的DNA损伤修复更慢,修复2.0 h后才出现拖尾率和OTM值的明显降低,3.0 h后仍未完全修复.结论 氧化损伤可能是HQ毒作用的机制之一,hOGG1基因低表达可增加A549-R细胞对HQ的敏感性.     

姜黄素介导MAPK信号通路对非小细胞肺癌细胞Bcl-2、Bcl-xl及Bax蛋白表达的影响

目的 研究姜黄素介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对非小细胞肺癌细胞Bcl-2、Bcl-xl及Bax蛋白表达的影响。方法 对非小细胞肺癌A549细胞实施体外培养、分组,并用10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L姜黄素处理24 h后,借助显微镜对A549细胞形态结构进行观察;通过MTT法、流式细胞仪对A549细胞增殖抑制率、凋亡率进行测定,经免疫细胞化学法测定MAPK的阳性表达,免疫印迹法测定Bcl-2、Bcl-xl、Bax蛋白表达。结果 姜黄素组的非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制率高于对照组(P <0.05);姜黄素组的非小细胞肺癌A549细胞凋亡率高于对照组(P <0.05);姜黄素组的非小细胞肺癌A549细胞内MAPK阳性表达率低于对照组(P <0.05)。姜黄素组A549细胞内Bcl-2、Bcl-xl蛋白浓度低于对照组,Bax蛋白浓度高于对照组(P <0.05)。结论 姜黄素能介导MAPK信号通路,通过下调Bcl-2、Bcl-xl,上调Bax蛋白表达,抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进癌细胞凋亡。     

姜黄素对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的 探究姜黄素对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法 使用不同浓度的H2O2对A549细胞进行不同时长的刺激,使用CCK-8法筛选A549细胞存活率约为50%时的H2O2浓度及刺激时间作为建模条件;通过Hoechst 33258染色及Western blot对模型进行验证;实验分为模型组（Model）、VC组（VC）和姜黄素组（CCM）;采用流式细胞术对细胞凋亡情况进行检测,采用Western blot法对凋亡及氧化应激信号通路相关蛋白进行检测。结果 CCK-8实验结果显示,采用600μmol/L的H2O2对A549细胞进行24h刺激,其存活率为56.45±5.33%,Hoechst 33258染色及Western blot结果证实了模型的可靠性。流式细胞术结果显示,VC组和CCM组细胞的凋亡率与Model组相比均降低（P＜0.05,P＜0.01）,且CCM组降低更加明显（P＜0.01）。Western blot结果显示,与Model组相比,VC组和CCM组Bax、Caspase-3和Keap1表达降低,Bcl-2和Nrf2表达升高,且CCM组较VC组改变更加明显,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 姜黄素对H2O2诱导的A549细胞急性损伤具有保护作用,可能与其激活Keap1-Nrf2/ARE信号通路,抑制细胞凋亡有关。     

青蒿琥酯联合热疗诱导肺腺癌A549细胞凋亡作用

目的 探讨青蒿琥酯联合热疗诱导肺腺癌A549细胞凋亡的线粒体途径作用机制.方法 150μmol/L青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗(43℃,1 h)作用A549细胞24 h,流式细胞技术检测细胞周期和凋亡率情况.荧光显微镜观察线粒体膜电位变化.免疫组化、western blot检测细胞色素c、Bcl-2和caspase-3表达,CaspACE<'TM>检测试剂盒检测活性caspase-3表达.结果 青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗作用A549细胞24 h后,G0/G1期细胞数增多,S期和G2/M期细胞数减少(P<0.01);凋亡率分别是16.77%和28.90%(P<0.01).线粒体膜电位下降率分别为18.05%,50.98%(P<0.01).细胞色素c蛋白、caspase-3表达增加而Bcl-2蛋白表达减少(P<0.01).活性caspase-3蛋白水平增加A值分别为0.2641±0.0027,0.3613±0.0019,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).结论 青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗可诱导肺腺癌A549细胞凋亡,激活线粒体途径可能是诱导凋亡重要作用机制.     

香烟烟雾提取物对A549细胞β防御素-2表达的影响

目的研究香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对人肺腺上皮细胞A549β防御素-2(humanβ-defensin2,hBD-2)表达的影响。方法培养A549细胞,加或不加LPS(10μg/ml)情况下用5%CSE进行干预。用RT-PCR法和Western Blot法分别检测hBD-2mRNA和蛋白表达变化。结果LPS可以诱导A549细胞hBD-2的表达;5%CSE不影响A549细胞hBD-2的表达,但可抑制LPS的诱导作用。结论CSE可以抑制LPS诱导的肺腺上皮细胞hBD-2表达,这可能与CSE减弱呼吸道抵御外界微生物入侵能力,导致呼吸道感染及慢性阻塞性肺疾病有关。     

DNA氧化损伤修复基因HOGG1低表达细胞株的建立及其生物学特性鉴定

目的为研究肺癌发生机制中DNA氧化损伤修复基因HOGG1的可能作用,利用携带有HOGG1特异性锤头状核酶基因的载体与肺腺癌A549细胞株,建立HOGG1低表达细胞株并观察其生物学效应。方法HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体[pcDNA3.1(+)RZ]经脂质体介导转染A549细胞;G418筛选;Neo基因的RTPCR法鉴定阳性克隆细胞;RTPCR半定量检测核酶对HOGG1基因的抑制效应。同时比较转染细胞与正常A549细胞的生长情况、细胞周期、软琼脂克隆形成率以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果转染后G418成功筛选出了阳性转化克隆,经传代形成稳定细胞株。核酶可持续抑制A549细胞HOGG1基因的表达,RTPCR结果显示转染细胞HOGG1mRNA的表达比正常A549细胞低61.5%(P<0.05);转染后,细胞株形态无明显改变;其群体细胞倍增时间为2.05天,稍短于正常A549细胞(2.17d);细胞周期各时相及细胞凋亡率以及细胞增殖指数没有明显改变(P>0.05);软琼脂克隆形成抑制率接近50%(P<0.05);SOD活力比正常A549细胞显著增加(P<0.05)。结论成功建立HOGG1低表达细胞株,所观察的生物学效应多数指标与正常A549细胞无显著差异。     

白藜芦醇对脂多糖诱导血管内皮细胞凋亡影响

目的探讨白藜芦醇对脂多糖(LPS)致人脐静脉血管内皮(HUVEC)细胞凋亡保护效应以及对凋亡相关蛋白Bax影响。方法 LPS 1μg/ml刺激HUVEC细胞24 h建立凋亡模型,之后给予白藜芦醇160,80,40,20μg.L-1干预,CCK-8法检测细胞活力,Annexin-V/FITC双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bax表达。结果与模型组比较,白藜芦醇呈剂量依赖性的提高LPS诱导的HUVEC细胞存活率,降低HUVEC细胞凋亡率,降低Bax蛋白表达,有统计学差异(P0.05)。结论白藜芦醇对LPS致HUVEC细胞凋亡有保护效应,其效应可能与抑制Bax表达有关。     

异甘草素对小儿脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及相关机制研究

目的 研究异甘草素对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其相关分子机制.方法 取对数生长期人脑胶质瘤U251细胞,用不同浓度(0、10、20、40、60、80μmol/L)异甘草素处理,每个浓度设5个复孔.异甘草素处理24h、48h、72h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡的变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测FoxM1 mRNA的表达水平.结果 U251细胞经过浓度为0、10、20、40、60、80μmol/L的异甘草素处理24h、48h及72h后,细胞增殖均不同程度地受到抑制.在相同作用时间,不同浓度之间细胞增殖情况比较差异有统计学意义(F值分别为38.5、98.9、108.1,均P＜0.05);在相同异甘草素浓度,不同作用时间(24h、48h、72h)细胞增殖情况比较差异均有统计学意义(F值分别为11.4、20.8、43.1、53.9、30.4,均P＜0.05).不同浓度异甘草素作用于U251细胞24h后,随着异甘草素浓度的增加,细胞凋亡率增加(F=120.3,P＜0.05).不同浓度异甘草素处理U251细胞48h后,FoxM1 mRNA相对表达量分别为(71.2±5.1)％、(54.6±3.3)％、(35.4±4.1)％、(20.8±4.0)％,比较差异有统计学意义(F=83.5,P＜0.05).结论 异甘草素体外可有效抑制U251细胞的增殖并诱导其凋亡,其分子机制可能与下FoxM1基因的表达有关.     

胰高糖素样肽-1受体激动剂通过JNK信号通路促进肝星形细胞凋亡的机制研究

目的 探讨胰高糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)通过JNK信号通路促进肝星形细胞(HSC)凋亡的机制.方法 体外培养人HSC并进行形态学鉴定,将HSC样本随机分成对照组(20份)、GLP-1RA组(20份)和JNK阻断组(20份).对照组HSC在常规培养基础上加入高糖(终浓度25 mmol/L),GLP-1RA组在对照组基础上加入GLP-1RA利拉鲁肽(终浓度10 mmol/L),JNK阻断组在GLP-1RA组基础上加入JNK信号通路阻断剂SP600125(终浓度20 μmol/L)进行培养;培养120 h后用流式细胞术检测各组的HSC凋亡情况.同时采用Western印迹法检测各组的p-JNK蛋白表达水平.结果 三组的平均凋亡率和平均p-JNK的表达水平差异均有统计学意义(F=19.412和66.451,P均＜0.01).GLP-1RA组的凋亡率和p-JNK蛋白表达水平分别为(30.61±4.07)％和(22.79±3.80)％,均高于对照组,差异均具有统计学意义(t=0.530和9.854,P均＜0.01);JNK阻断组的细胞凋亡率和p-JNK蛋白表达水平分别为(23.48±4.41)％和(10.66±4.15)％,均低于GLP-1RA组,差异有统计学意义(t=-5.428和-8.757,P均＜0.01).结论 JNK信号通路在GLP-1RA介导的HSC凋亡中起着关键作用,GLP-1RA可以通过JNK信号通路促成经高糖诱导活化的HSC发生凋亡.     

7-硝基吲唑对氟致SH-SY5Y细胞凋亡及一氧化氮合成酶含量的影响

目的探讨神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)抑制剂7-硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)对氟致体外培养细胞生长、凋亡保护作用的机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,在培养液中加入不同浓度Na F(0、0.02、0.2、2.0、4.0 mmol/L),分别培养24、48、72 h,同时在各组细胞培养液中联合应用7-NI(10~(-4)、10~(-3)、10~(-2) mmol/L);于倒置显微镜下观察细胞生长,以CCK-8试剂盒方法检测细胞存活率,以比色法和硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO含量及NOS活力,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与对照组比较,氟浓度为0.2 mmol/L(低氟组)和2.0 mmol/L(高氟组)时,24、48、72 h后细胞存活率分别下降至(83.76±1.04)%,(70.27±1.20)%,(54.40±0.98)%和(52.17±1.07)%,(40.60±1.11)%,(29.50±1.40)%。10~(-4)mmol/L 7-NI可刺激细胞增殖,24 h细胞存活率为(105.96±3.44)%;10~(-3) mmol/L 7-NI处理细胞24 h后的细胞存活率为(100±2.30)%;10~(-2) mmol/L 7-NI可使细胞存活率下降,24 h细胞存活率为(88.64±4.75)%。10~(-4)、10~(-3)、10~(-2) mmol/L 7-NI处理细胞24 h后细胞培养液中NO含量、NOS活力均降低,分别为(1.156±0.356)、(0.958±0.074)、(0.672±0.188)μmol/L和(0.403±0.089)、(0.398±0.010)、(0.103±0.076)U/ml。高剂量(10~(-2) mmol/L)7-NI组的SH-SY5Y细胞凋亡指数升高至(8.7±2.3)%,高于对照组(P0.05);低剂量(10~(-4)、10~(-3) mmol/L)7-NI组的凋亡指数分别为(0.6±0.4)%和(1.0±0.2)%,与对照组差异无统计学意义(P0.05);低剂量7-NI组凋亡指数低于高剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。染氟24、48、72 h后细胞培养液中NO含量及NOS活力升高,低氟组的NO含量、NOS活力分别为(3.074±0.160)、(5.604±1.374)、(10.173±1.307)μmol/L和(0.743±0.122)、(0.959±0.054)、(1.446±0.12)U/ml,高氟组分别为(8.974±0.919)、(14.729±1.241)、(20.976±0.712)μmol/L和(1.086±0.024)、(1.728±0.130)、(2.583±0.192)U/ml,高于对照组[(1.320±0.280)、(2.420±0.658)、(2.867±0.662)μmol/L,(0.452±0.012)、(0.517±0.072)、(0.607±0.013)U/ml],差异有统计学意义(P0.05)。与氟单独处理组相比,NaF联合应用7-NI后,各组NO含量及NOS活力均下降,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,氟可使SH-SY5Y细胞凋亡指数升高,差异有统计学意义(P0.01),并随着氟染毒剂量及时间的增加,细胞凋亡指数随之增加;联合应用7-NI后,各组细胞凋亡指数下降,差异有统计学意义(P0.01)。氟可使SH-SY5Y细胞数量减少,形态变为圆形、不规则形,细胞存活率降低;低剂量(10~(-4)、10~(-3) mmol/L)7-NI组在相同视野下细胞数增加,高剂量(10~(-2) mmol/L)7-NI组细胞数明显减少,大部分细胞呈圆形或不规则形。结论氟中毒所致细胞凋亡可能与NOS活力和NO含量升高有关,7-NI可降低细胞凋亡指数。     

维生素C对脂多糖所致SW480细胞氧化损伤的保护

目的 探讨不同剂量维生素C（VC）对脂多糖（LPS）所致SW480细胞氧化损伤的保护。方法 将SW480细胞随机分为对照组（0 μmol/ml VC）、模型组（0 μmol/ml VC）、低VC组（0.1 μmol/ml VC）、中VC组（1 μmol/ml VC）、高VC组（10 μmol/ml VC）,除对照组外,其余各组均加入终浓度为0.1 μg/ml的 LPS。采用CCK - 8法检测细胞活力;使用倒置显微镜观察细胞划痕修复;采用微量酶标法检测胞内还原型谷胱甘肽（GSH）含量及培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活力;分别采用WST - 1法、TBA法检测胞内超氧化物岐化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量。结果 CCK - 8结果显示,VC可以抑制SW480细胞的增殖,且呈浓度依赖性递减;与对照组相比,模型组、低、中、高剂量VC组MDA水平[分别为（1.88±0.22）、（1.26±0.19）、（2.11±0.48）、（1.56±0.30） nmol/mgprot]均显著升高（P＜0.05）,与模型组相比,低VC组和高VC组MDA和LDH水平明显降低,且低VC组的SOD、GSH水平［分别为（16.62±0.48） U/mgprot、（126.26±1.20） μmol/gprot］显著升高（P＜0.05）;与对照组相比,细胞划痕后 48 h, 高VC组细胞划痕掩盖最为显著。结论 低剂量VC可以保护细胞膜的功能结构,增强细胞清除自由基的能力,高剂量VC有助于伤口愈合,从而保护细胞免受LPS导致的氧化应激损伤。     

DNA聚合酶β表达水平对苯代谢物氢醌致细胞凋亡及线粒体膜电位的影响

目的 探讨DNA聚合酶β(DNA polymerase beta,polβ)对氢醌(HQ)所致细胞凋亡的影响及其可能的分子机制.方法 以polβ野生型(polβ+/+)、polβ缺陷型(polβ-/-)及polβ高表达型(polβoe)小鼠胚胎成纤维细胞为研究对象,以不同浓度的HQ溶液染毒后,采用流式细胞术分别检测HQ对细胞凋亡和线粒体膜电位( △Ψm)的影响,试剂盒法测定细胞内活性氧(ROS)和羟自由基(·OH)含量;化学发光法分析细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力.结果 与对照组相比,各染毒组凋亡细胞率和△Ψm降低的细胞比例明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).与polβ+/+细胞比较,20.00、40.00、80.00 μmol/L染毒组polβ-/-细胞凋亡率明显增高,10.00、20.00、40.00、80.00μmol/L染毒组polβ oe细胞凋亡率明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与polβ+/+细胞(20.60％±0.57％、37.95％+0.64％、44.50％±1.27％、57.55％+1.06％)比较,10.00、20.00、40.00、80.00 μmol/L染毒组polβ-/-细胞△Ψm降低的细胞比例(33.60％±1.55％ 、46.05％±1.77％、52.75％±2.05％、75.20％±0.56％)明显增高,polβ oe细胞△Ψm降低的细胞比例(16.05％±1.20％、29.80％±1.21％、35.15％±1.06％、53.80％±0.85％)明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与polβ+/+细胞比较,各染毒组polβ-/-细胞产生的荧光强度明显增高,polβ oe细胞的荧光强度明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与polβ+/+细胞相比,20.00、40.00 μmol/L染毒组polβ-/-细胞内·OH含量明显增高,polβ oe细胞内·OH含量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).在相同浓度HQ染毒剂量下,polβ-/-细胞内SOD和GSH-Px消耗最快,polβ oe细胞内的SOD和GSH-Px消耗速度缓慢.结论 HQ可诱导细胞产生ROS,降低△Ψm,从而介导凋亡的发生;polβ可以帮助细胞对抗ROS的产生,降低线粒体发生去极化的几率,从而对HQ介导的凋亡起到一定的保护作用.     

Naringenin more effectively inhibits inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 expression in macrophages than in microglia

Macrophages and microglia are thought to account for initial disease progression in acute myocardial infarction and acute ischemic stroke. Before our study, the inhibitory effects of naringenin, a flavonoid, on lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammation in macrophages and microglia have not been fully reported and compared. We hypothesized that naringenin can effectively inhibit LPS-induced inflammation of macrophages and microglia at different concentrations, the range of which is broader, with the lowest concentration more easily achieved in macrophages. In this study, we compared the anti-inflammatory effects of naringenin on LPS-stimulated RAW 274.6 macrophages and BV2 microglia and the suppression effects of naringenin and vitamin C (a well-known anti-inflammatory agent) on LPS-induced nitrite production. The results show that macrophages could maintain cell viability at higher naringenin concentrations and were more easily activated by LPS in comparison to microglia (200 vs 100 μmol/L; 0.1 vs 1 μg/mL). Under LPS (1 μg/mL) stimulation in both cell types, naringenin (up to 200 μmol/L in macrophages and 100 μmol/L in microglia) inhibited nitrite production and inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 expression in a dose-dependent manner. The range of naringenin concentrations for inhibition was broader, and the lowest concentration was more easily achieved in macrophages; the lowest effective concentrations of naringenin to achieve constant suppression effect were 50 μmol/L in macrophages and 100 μmol/L in microglia, respectively. Vitamin C (100 μmol/L), compared with naringenin (100 μmol/L), had less and no suppression effect on LPS (1 μg/mL)-induced nitrite production in macrophages and microglia, respectively. In conclusion, naringenin more effectively inhibits the LPS-induced inflammatory status, including nitrite production and inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 expression, in macrophages than in microglia. The findings of the present study suggest that consumption of naringenin-containing flavonoids might be beneficial to the cardiovascular and cerebrovascular inflammatory process.     

登革热伴出血与伴出疹患者实验室检查的特征分析

目的 分析比较2014年广东省登革热暴发流行期间登革热伴出血与登革热伴出疹患者的实验室检查特征.方法 将广州市第八人民医院收治的51例登革热伴出血与151例登革热伴出疹的住院患者纳入研究,采用实时荧光PCR方法检测登革病毒(DENV)核酸,ELISA测定DENV的IgM和IgG抗体,流式细胞术检测CD37CD47CD8+淋巴细胞亚群;比较两组研究病例的实验室资料,并进行统计学分析.结果 登革热伴出血患者的中性粒细胞、AST、血浆凝血酶原时间、活化部分凝血酶时间和尿蛋白阳性率分别为(56.77±19.11)×109/L、80.00(45.00,109.00) U/L、13.40(12.85,13.95)s、47.50(42.90,53.20)s和44.7％,均高于登革热伴出疹患者,差异有统计学意义(t=2.591,Z=2.495、3.184、2.435,x2=9.786,P均＜0.05或＜0.01);登革热伴出血患者的单核细胞、嗜酸性粒细胞、CD4+、CD8+、PLT、凝血酶原活动度和血浆纤维蛋白原分别为(9.79±4.96)×109/L、[0.10 (0.00,1.00)]×109/L、372 (220,585)个/μL、258 (155,466)个/μL、[53.00 (32.00,82.00)]×109/L、[93.55(86.57,102.66)]％和2.48(2.04,2.92) g/L,均低于登革热伴出疹患者,差异有统计学意义(t=-2.045,Z=-4.054、-1.962、-2.676、-3.806、-2.876和-2.111,P均＜0.05或＜0.01).登革病毒IgM抗体阳性166例(83.42％),IgG抗体阳性33例(16.58％).89例患者DENV核酸分型分析显示,DENV-1感染81例(91.01％),DENV-2感染3例(3.37％),DENV-1和DENV-2混合感染4例(4.49％),DENV-3感染1例(1.12％).另外,51例登革热伴出血患者中重症登革热9例(17.65％),151例登革热发热伴出疹的患者中重症登革热2例(1.32％),差异有统计学意义(x2=16.684,P＜0.01).结论 2014年广东省登革热暴发流行中,大部分登革热患者为初次的DENV-1感染;登革热伴出血患者在凝血功能、肝肾功能及免疫功能等方面明显较登革热伴出疹患者差;在临床上,应警惕发热伴出血患者发展为重症登革热.     

抗菌肽merecidin通过ERK/mTOR 信号通路对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨抗菌肽merecidin通过ERK/mTOR 信号通路对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 实验分为对照组Control、抗菌肽Merecidin干预组和雷帕霉素Rapamycin干预组。通过CCK-8 法检测A549细胞的增殖能力,通过流式细胞术检测A549细胞凋亡和周期,通过平板划痕试验和Transwell检测A549细胞的迁移和侵袭能力,通过 Western blot 法检测A549细胞中MAPK1、MEK2、mTOR、PRAS40、EIF4EBP1 磷酸化蛋白的表达量。结果 抗菌肽merecidin能够明显抑制A549的增殖能力,处理24 h后的 IC50值为10.01 μmol /L(P<0.05)。与control组比较,抗菌肽merecidin处理后促进细胞凋亡(P<0.05),阻滞细胞周期于S期(P<0.05),细胞的迁移及侵袭能力均降低(P<0.05)。同时抗菌肽merecidin可抑制p-MAPK1和p-MEK2蛋白的表达,并且降低了mTOR、PRAS40和EIF4EBP1 的磷酸化水平(P<0.05)。结论 抗菌肽merecidin可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期,该作用可能与其抑制ERK/mTOR通路有关。     

MMP-9ASODN对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响及其机制初步探讨

目的 探讨基质金属蛋白酶-9反义寡核苷酸(MMP-9ASODN)对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其机制.方法 MTT法检测MMP-9ASODN转染对A549细胞生长增殖的影响;流式细胞术检测MMP-9ASODN转染对A549细胞周期和凋亡比率的影响;RT-PCR法与Western blot法分别检测MMP-9ASODN转染对A549细胞内MMP-9mRNA及蛋白表达的影响.结果 在一定范围内,MMP-9ASODN对A549细胞生长抑制呈浓度和时间依赖性,反叉寡核苷酸浓度为600 nmo/L作用48 h时其抑制作用最明显;MMP-9ASODN转染A549细胞48 h后G1期细胞数明显增多,S期细胞数明显减少,G2期细胞数则无明显变化,其凋亡百分比明显升高;与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);细胞内MMP-9mRNA及其蛋白的相对表达量明显低于对照组(P＜0.01).结论 MMP-9ASODN转染能够有效能够抑制肺腺癌A549细胞的增殖同时诱导其凋亡,其机制可能是通过下调MMP-9mRNA及蛋白的表达.     

亲环素A基因在非小细胞肺癌中的功能

目的 研究亲环素A(CyPA)基因在非小细胞肺癌中的功能.方法 设计并合成4对针对CyPA siRNA靶序列的寡核苷酸单链,退火形成双链DNA,与经Hpal和Xhol酶切后的pGCL-GFP载体连接产生Lv-shCyPA慢病毒载体,该载体含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP),经聚合酶链反应(PCR)筛选阳性克隆并测序鉴定.将Lv-shCyPA、pHelper1.0和pHelper2.0质粒共感染包装细胞293T细胞,包装成假病毒颗粒并感染非小细胞肺癌A549细胞,经免疫印迹法(Western blot)检测筛选CyPAsiRNA有效靶点和慢病毒颗粒,采用流式细胞技术分析细胞周期和凋亡率,进行裸鼠移植瘤实验.结果 PCR和测序结果证实,Lv-shCyPA慢病毒载体构建正确,经Western blot法筛选最有效的CyPA siRNA病毒颗粒滴度为2×10 9TU/ml,感染A549细胞凋亡率(5.01%±0.57%)增加,细胞周期G2-M期比例(11.40%±0.68%)减少,裸鼠移植瘤瘤体生长明显减缓,与未感染病毒的A549细胞细胞凋亡率(0.35%±0.17%)及G2-M期比例(14.52%±1.19%)相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CyPA基因沉默在非小细胞肺癌的发生中有一定的抑瘤作用,对非小细胞肺癌的预防和分子流行学研究提供了新的理论依据.