siRNA抑制CDH13表达对膀胱癌5637细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨通过siRNA 抑制CDH13表达对膀胱癌5637细胞增殖和侵袭的影响。方法 以膀胱癌5637细胞为研究对象,用siRNA抑制CDH13表达,用western blot检测干扰后CDH13的表达水平,用MTT法检测细胞增殖,Transwell 法检测细胞侵袭能力。结果 westernblot 检测结果显示干扰组CDH13表达显著减少;干扰组5637细胞增殖明显加快,与空白对照组和阴性对照组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）;siRNA抑制CDH13表达后细胞的侵袭能力明显增强,与空白对照组和阴性对照组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论 siRNA能够特异性地抑制CDH13在膀胱癌5637细胞中的表达,CDH13表达减少后细胞增殖加快、侵袭能力增强; CDH13表达减少是膀胱癌发生发展的一个重要促进因素。     

MTUS2-AS2在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)MTUS2-AS2在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测63例膀胱癌组织和癌旁组织、膀胱癌细胞系(BIU-87、J82、T24、5637)和正常膀胱上皮细胞系SV-HUC-1中的MTUS2-AS2表达。以MTUS2-...     

PBK/TOPK表达对膀胱癌BIU-87细胞株增殖及迁移的影响

目的 探讨PBK/TOPK在膀胱癌中的表达及其表达对BIU-87细胞株增殖及迁移的影响。方法 采用QRT-PCR及Western blot检测3例配对膀胱癌及癌旁正常组织中PBK/TOPK的表达。随后,对膀胱癌BIU-87细胞株中PBK/TOPK的表达分别干扰及过表达,通过CCK-8实验检测细胞的增殖,Transwell实验检测细胞的迁移能力。结果 结果一致表明PBK/TOPK在膀胱癌中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。干扰PBK/TOPK表达后,BIU-87细胞的增殖及迁移能力下降(P<0.05) ;而PBK/TOPK过表达后,BIU-87细胞的增殖及迁移能力增强(P<0.05) 。结论 PBK/TOPK高表达于膀胱癌,有助于膀胱癌细胞的增殖及迁移。     

5-Aza-dc对膀胱癌ScaBer细胞CDH13基因甲基化状态和蛋白表达以及细胞增殖迁移侵袭的影响

目的 探讨去甲基化药物5-Aza-dc对膀胱癌ScaBer细胞CDH13基因甲基化状态和蛋白表达以及细胞增殖迁移侵袭的影响.方法 以膀胱癌ScaBer细胞为研究对象,分为5-Aza-dc处理组和对照组.应用5-Aza-dc与ScaBer细胞共同孵育后,用MSP检测CDH13基因甲基化状态、western blot检测CDH13的表达水平、MTT法检测细胞增殖、划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell法检测细胞侵袭能力.结果 5-Aza-dc与ScaBer细胞共同孵育后CDH13基因甲基化状态得到逆转,与对照组相比CDH13蛋白表达明显增加(P＜ 0.05);实验组细胞增殖能力下降,迁移和侵袭能力减弱,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 5-Aza-dc可逆转CDH13基因的甲基化状态并使其蛋白表达增加,CDH13表达增加后细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱,CDH13有可能成为膀胱癌治疗的新的靶点.     

VEGF-C对膀胱癌T24细胞增殖与丝裂霉素诱导T24细胞凋亡影响的研究

目的:探讨VEGF-C对膀胱癌T24细胞增殖及抑制丝裂霉素(MMC)诱导T24细胞凋亡的影响。方法:采用MTT及流式细胞术(FCM)等方法观察不同浓度(0、50、100、200μg/L)VEGF-C对T24细胞生长及MMC诱导的T24细胞凋亡的影响。所有实验重复3次。结果:随着预处理VEGF-C浓度的增加,T24细胞的增长率由27.3%上升到65.0%;MMC诱导的T24细胞凋亡率由29.5%下降至14.0%。结论:VEGF-C促进膀胱癌T24细胞的增殖和抑制MMC诱导的细胞凋亡;抑制VEGF-C作用通路可能防治膀胱癌复发。     

E-cadherin基因突变对膀胱癌侵袭能力影响的研究

目的观察Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ基因突变对膀胱癌侵袭力的影响。方法对４０例新鲜膀胱癌标本分别完成体外ｍａｔｒｉｇｅｌ穿膜侵袭实验和Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ基因的序列测定。结果病理分级Ⅰ、Ⅱ级者３２例中仅有２例出现Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ基因突变，而Ⅲ、Ⅳ级者８例中有４例出现突变，说明Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ变化与肿瘤细胞分化之间有明显的相关性。本组６例标本出现Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ结构改变，其中４例穿膜侵袭实验阳性，而３４例未发现Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ基因改变的标本中，只有７例穿膜侵袭实验阳性。结论Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ基因改变对肿瘤细胞的侵袭能力有明显影响。未发现Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ基因突变的标本也可能具有侵袭能力，说明在膀胱肿瘤的侵袭过程中存在其它机制。     

转染NK4基因对膀胱癌移行上皮细胞HGF基因表达的影响

目的观察转染NK4基因对膀胱癌上皮细胞HGF基因表达的影响。方法利用脂质体Lipofectin-2000将质粒pcDNA3（＋）／NK4导入BIU-87膀胱癌细胞，用pcDNA3（＋）作为阴性对照。G418稳定筛选阳性细胞克隆后，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染细胞和对照组细胞NK4基因mRNA水平表达，Western blot检测转染后细胞培养上清液NK4和细胞胞质HGF蛋白的表达含量。结果转染阳性细胞NK4 mRNA恒定表达，RT-PCR和Western blot分别显示在mRNA转录水平和蛋白表达水平，稳定转染的膀胱癌细胞NK4含量明显高于对照组。转染了NK4基因的肿瘤细胞HGF蛋白表达水平明显降低，而转染空载体则无作用。结论脂质体将外源NK4基因导入肿瘤细胞后能稳定表达NK4蛋白，而且可以有效降低肿瘤细胞HGF表达的水平。     

WT-PTEN高表达对膀胱癌EJ细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨外源性野生型人PTEN高表达对膀胱癌EJ细胞增殖和侵袭能力的影响.方法利用携带人PTEN基因的野生型、磷酸酶域突变型质粒体外转染人膀胱移行细胞癌EJ细胞,Western印迹法检测目的基因的表达.采用细胞生长实验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测EJ转染前后细胞增殖、细胞周期和细胞体外侵袭力的变化.以空载质粒作为对照.结果Western印迹法检测质粒转染后EJ细胞的PTEN蛋白表达明显增强,转染野生型质粒后对EJ细胞的生长有抑制作用(生长速度下降42.7%,P＜0.01),出现G0～G1期阻滞,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制(下降41.9%,P＜0.01).而转染突变型质粒的EJ细胞则无此作用(P＞0.05).结论野生型PTEN基因在体外对膀胱移行细胞癌EJ细胞增殖和侵袭能力有明显抑制作用,磷酸酶域突变型PTEN基因无此作用.增强野生型PTEN基因表达可望作为膀胱癌基因治疗的有效工具.     

TRPM7在膀胱癌细胞增殖与凋亡中的调控作用

目的 探讨薄荷醇受体7（transient receptorpotential melastatin 7,TRPM7）在膀胱癌细胞株T24细胞增殖与凋亡中的调控作用及分子机制.方法 采用RT-PCR及Western blot检测T24细胞株中TRPM7 mRNA及蛋白的表达;分别采用通道阻滞剂及基因沉默的方法阻断TRPM7离子通道的功能,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡率,Western blot检测Cdk4、Cdk6及Cyto C的表达.结果 RT-PCR及Western blot证实T24细胞株中存在TRPM7 mRNA及蛋白的表达;采用基因沉默及通道阻滞剂阻断TRPM7的功能后,T24细胞存活率分别下降了56.48％和54.87％,处于G0/G1期的细胞随阻滞剂浓度增加而显著增加,细胞凋亡率亦随之增加并呈浓度依赖性,与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）.Western blot显示阻断TRPM7后,T24细胞Cdk4、Cdk6的表达减少,而Cyto C的表达增加.结论 TRPM7可促进T24细胞增殖,抑制细胞凋亡.这一过程可能通过调节Cdk4、Cdk6及Cyto C的表达来实现.阻断TRPM7的功能,能够抑制T24细胞增殖,促进细胞凋亡,可能为临床治疗膀胱癌提供新的靶点.     

CDH13表达下调对膀胱癌细胞增殖、克隆形成及PI3K/Akt表达的影响

目的 研究膀胱癌5637细胞中CDHI3表达下调后对细胞增殖、克隆形成及PI3K/Akt表达的影响.方法 应用RNA干扰技术抑制5637细胞中CDH13的表达,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成率,MTT法检测细胞增殖能力,Western Blot检测CDH13、PI3K及Akt的表达水平.结果 膀胱癌5637细胞中CDH13表达下调后细胞克隆形成及增殖能力增强,PI3K及Akt的表达增加.结论 膀胱癌细胞中CDH13表达下调后可能通过激活PI3K/Akt通路促进肿瘤细胞增殖和克隆形成.     

法舒地尔对前列腺癌PC3细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察法舒地尔对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 不同浓度法舒地尔、顺铂及两药联合干预PC3细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot法检测Rock Ⅰ、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,法舒地尔、顺铂单独或联合作用PC3细胞均可抑制细胞增殖,两药联合后抑制效果更显著;法舒地尔、顺铂联合用药可明显增强PC3细胞的凋亡;凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Caspase-3表达上调,法舒地尔可明显下调Rock Ⅰ蛋白表达.结论 法舒地尔可促进PC3细胞凋亡,其作用机制可能与法舒地尔抑制Rho激酶的表达有关.     

长链非编码RNA母系表达基因3通过调控PTEN抑制膀胱尿路上皮癌细胞增殖活性的分子研究

目的 探究膀胱尿路上皮癌中长链非编码RNA（lncRNA） 母系表达基因3（MEG3）的表达情况以及MEG3调控膀胱尿路上皮癌细胞增殖活性的分子机制。方法 通过实时荧光定量PCR检测膀胱尿路上皮癌组织及癌旁正常组织中lncRNA MEG3的表达水平；通过Western blot检测过表达lncRNA MEG3后T24细胞内第10号染色体同源丢失性磷酸酶一张力蛋白基因（PTEN）蛋白水平；CCK8试剂盒检测细胞活性。结果 MEG3的RNA水平在膀胱尿路上皮癌组织中表达显著下调（P<0.01），PTEN的表达水平也明显降低（P<0.01）。T24中过表达MEG3后，PTEN水平上调，细胞活性降低（P<0.01）；而过表达MEG3并给予PTEN抑制剂时细胞活性则上升。结论 过表达lncRNA MEG3可通过上调PTEN抑制人膀胱尿路上皮癌T24细胞的细胞增殖活性，有可能成为临床治疗的潜在靶点。     

建立膀胱癌细胞系BIU-87原位移植瘤模型的实验研究

目的 探讨建立人体膀胱癌细胞系BIU-87膀胱原位移植瘤模型的有效方法,为膀胱癌实验动物的相关研究提供理论基础.方法 BALB-C系裸鼠20只,分成A、B两组(各10只),A组采用手术方法于膀胱壁内注射人体膀胱癌细胞系BIU-87,B组经膀胱灌注人体膀胱癌细胞系BIU-87,分别观察不同阶段两组裸鼠膀胱肿瘤的发生发展情况.实验终点(4周)处死裸鼠,进行瘤体大小及组织学检测.结果 A组裸鼠中,一只于术后第2d死亡,其余存活9只中,8只成瘤,成瘤率为89％;B组10只均未成瘤.结论 经膀胱灌注不能建立理想的膀胱原位移植瘤模型,手术方法建立膀胱原位移植瘤模型的效果确切,能较好地模拟人膀胱肿瘤的疾病发展过程,对国人膀胱肿瘤的研究具有一定应用价值.     

Clusterin对膀胱癌细胞增殖能力机制的研究

摘 要：目的：Cluterin（CLU）又称载脂蛋白J,在生物体中有两种存在的形式：分泌型（sCLU）和核型（nCLU）。sCLU常常与肿瘤的发生发展有密切的关系。越来越多的研究表明,sCLU与膀胱癌耐药有关,高表达常提示预后不良。然而,鲜有针对sCLU调控膀胱癌参与肿瘤发生发展机制的研究。本次实验探讨sCLU调控膀胱癌发生发展的分子机制。方法：我们收集了16对膀胱癌组织样本,通过实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测sCLU的表达。利用Si-RNA抑制膀胱癌细胞clusterin基因的表达,利用CCK-8增殖实验,平板克隆实验研究sCLU对膀胱癌细胞增殖的影响。同时,我们利用蛋白印迹分析（Western Blot）检测MAPK通路蛋白研究sCLU对膀胱癌细胞的调控机制。结果：16对膀胱癌组织验证表明sCLU在膀胱癌组织中高表达。敲低膀胱癌细胞中sCLU的表达,细胞增殖能力明显受到抑制（P<0.05）,P38/MAPK信号通路相关蛋白表达降低。结论： sCLU可能通过P38/MAPK通路调控膀胱癌细胞的增殖能力。