改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌

摘要：目的：用改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌,初步推测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的流行情况。 方法：筛选出2009年4月~2010年4月对碳青霉烯类抗生素耐药以及敏感性下降或者碳青霉烯类抗生素敏感而一种以上三代头孢菌素耐药的肠杆菌科细菌23株,用改良Hodge试验检测其碳青霉烯酶。 结果：23株菌中21株（91.3%）呈多重耐药,其中5株菌改良Hodge试验阳性,分别为肺炎克雷伯菌1株、弗劳地枸橼酸杆菌1株、大肠埃希菌1株和霍氏肠杆菌2株。 结论：改良Hodge试验阳性提示所测菌株中有产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌的存在,因此要加强对此类细菌的院内感染管理监测。     

改良Hodge试验检测肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶的研究

目的 用改良Hodge试验(MHT)检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的产生,了解碳青霉烯酶基因分布.方法 从浙江大学医学院附属第二医院、浙江省东阳市人民医院、北京医院和四川大学附属华西医院4家医院收集3 718株肠杆菌科细菌,用纸片法检测细菌对厄他培南的敏感性,用MHT检测碳青霉烯酶的产生情况,并用PCR扩增常见的碳青霉烯酶基因.结果 4家医院的肠杆菌科细菌对厄他培南的不敏感率为3.04％ (113/3718),上述4家医院的不敏感率依次为5.09％、2.15％、2.59％和1.72％.MHT的总阳性率为2.29％ (85/3718),4家医院的阳性率依次为4.73％、1.21％、1.06％和1.58％.113株厄他培南不敏感菌株中,MHT阳性82株,阴性31株.85株MHT阳性菌株中,82株对厄他培南耐药或中介耐药,仅有3株敏感.82株MHT阳性、厄他培南不敏感的菌株中,肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因阳性65株,亚胺培南水解酶(IMP)基因阳性15株,其中2株KPC和IMP同时阳性,其他4株未扩增到常见碳青霉烯酶基因.31株MHT阴性、厄他培南不敏感的菌株和3株MHT阳性、厄他培南敏感的菌株均未扩增到常见碳青霉烯酶基因.结论 MHT可有效地检测肠杆菌科细菌中的碳青霉烯酶,具有敏感性高、假阳性率低的特点.肠杆菌科细菌所产碳青霉烯酶主要为KPC,其次为IMP.     

改良Hodge试验检测肠杆菌科IMP型碳青霉烯酶的性能评价

目的探讨改良Hodge试验（modified Hodge test,MHT）在检测肠杆菌科细菌IMP型碳青霉烯酶中的应用价值。方法以VITEK2Compact全自动细菌鉴定及药敏系统进行细菌鉴定和药敏试验,筛选2010-2012年非重复临床分离的碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科细菌,以MHT进行产碳青霉烯酶表型确证试验,PCR检测碳青霉烯酶blaKPC、blaIMP;6如VIM、blaoXA-48及blandm-1基因型,阳性结果进行测序并Blast比对确定基因型。以基因测序结果为金标准,分析统计MHT检测肠杆菌科碳青霉烯酶的各项性能指标。结果本实验共收集62株碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科细菌,包括肺炎克雷伯菌42株,阴沟肠杆菌12株,大肠埃希菌5株,产酸克雷伯菌3株;MHT检测阳性51株,占总株数的82．26％,肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、产酸克雷伯菌分别占各自菌种的比例为83．33％,75．0％,80．0％,100．0％;经PCR扩增并测序证实27株为产IMP-4型菌株,20株为产IMP-8型菌株,其他15株为碳青霉烯酶阴性菌株;MHT检测肠杆菌科细菌产IMP型碳青霉烯酶的灵敏度为97．87％％,特异性为66．67％,阳性预测值为90．2％,阴性预测值为90．91％,检验效能为90．32％。结论MHT检测肠杆菌科细菌产IMP型碳青霉烯酶具有良好的灵敏度,但特异性偏低,建议进一步使用分子生物学技术检测碳青霉烯酶肠杆菌科细菌基因型。     

加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的研究

目的 探讨加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验在碳青霉烯酶类药物敏感性降低的细菌中检测碳青霉烯酶的临床应用价值.方法 收集2009年～2010年南京军区总医院对碳青霉烯酶类药物敏感性降低(亚胺培南、美罗培南或厄他培南的MIC≥2 μg/ml)的肠杆菌科细菌65株;采用琼脂倍比稀释法测定其对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的MIC;通过改良Hodge试验和加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;采用PCR检测多种β-内酰胺酶基因,并对PCR阳性产物测序鉴定.结果 65株临床分离菌中,53株菌对亚胺培南不敏感(MIC＞4 μg/ml),51株菌对美罗培南不敏感(MIC＞4 μg/ml),58株菌对厄他培南不敏感(MIC＞2 μg/ml).65株菌中38株改良Hodge试验阳性,包括7株弱阳性和31强阳性;33株加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验阳性,包括改良Hodge试验弱阳性2株和强阳性31株.经过对菌株进行β-内酰胺酶基因PCR和测序,发现加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验阳性菌株均携带blaKPC-2;32株阴性菌株均未携带碳青霉烯酶酶基因,但其中5株改良Hodge试验弱阳性菌株携带blampC/blaESBL.结论 加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验可快速、有效地区分改良Hodge试验的真、假阳性,是检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的简便可靠方法,适用于临床微生物实验室.     

低产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的筛选及耐药基因检测

目的:了解临床分离碳青霉烯类表型敏感的肠杆菌科细菌碳青霉烯酶耐药基因携带情况。方法:VITEK-2系统进行药物的最低抑菌浓度(MIC)检测;改良Hodge试验(MHT)筛查低产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌;EDTA双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶(MBL);PCR法检测相关耐药基因。结果:115株实验菌有12株MHT阳性;12株阳性菌中,3株EDTA双纸片增效试验阴性,9株阳性,这9株菌除阿米卡星、多粘菌素B敏感外,其他抗菌药物均呈耐药,含I类整合子,且检出IMP-4(blaIMP-4)和IMP-1(blaIMP-1)型的MBL基因,未检出KPC型碳青霉烯酶基因及其他MBL基因。结论:厄他培南对肠杆科细菌产碳青霉烯酶的筛选比亚胺培南、美洛培南敏感;经MHT筛选阳性的,潜在产碳青霉烯酶的肠杆科细菌,应进一步用基因检测法确认。     

肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的检测

目的调查本院肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的情况。方法收集2010年1～5月临床分离的肠杆菌科细菌,采用K-B纸片法进行药敏试验,以三代头孢菌素、亚胺培南、美罗培南为检测药物,筛选出可能产碳青霉烯酶的菌株120株,采用改良的Hodge试验进行确证。结果在120株耐一种或多种三代头孢菌素,提示可能产生碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌中,通过表型确证试验确证为阳性的细菌有4株,肺炎克雷伯菌2株,大肠埃希菌1株,弗劳地枸橼酸杆菌1株。结论表型确证试验阳性的细菌中,如需准确辨别亚型,最好用分子生物学方法检测基因序列。     

mCIM与eCIM在产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌表型筛查中的价值

目的 分析改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)与乙二胺四乙酸碳青霉烯灭活试验(eCIM)对产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌表型筛查的效能及应用价值.方法 收集碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)117株(实验组)、碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌50株(对照组).分别采用改良Hodge试验(MHT)、mCIM和eCIM进行表型筛查,采用...     

CIM，mCIM 和MHT 筛选肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的方法评价

目的 评估碳青霉烯类抑制法(carbapenem inactivation method,CIM)、改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,mCIM)和改良Hodge试验(modified hodge test, MHT )对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型筛选能力。方法 以PCR检测碳青霉烯酶基因作为金标准,对120株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant enterbacteriaceae,CRE)和50株碳青酶烯类敏感的肠杆菌科细菌,分别进行CIM,mCIM和MHT表型筛选试验,评估三种方法的表型筛选能力。结果 120株CRE中,93株携带碳青霉烯酶耐药基因,表型筛选试验显示,CIM,mCIM和MHT的敏感度分别是95.6%,96.8%和95.8%,特异度分别为72.7%,92.3%和50%。三种方法筛选碳青霉烯酶,差异有统计学意义(χ²=12.796,P<0.05)。与PCR结果相比较,CIM,MHT和mCIM的一致率分别为90%,95%和77.4%,Kappa值分别为0.898,0.949和0.771。mCIM和CIM试验与PCR高度一致。50株碳青酶烯类敏感的肠杆菌科细菌PCR检测和三种方法均为阴性。结论 三种表型筛选方法均有较高的敏感度,但mCIM较CIM,MHT具有更高的特异度和一致率,是筛选CRE的有效方法。     

rCIM与mCIM对产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的检测性能比较

目的 比较快速碳青霉烯灭活试验(rapid carbapenem inactivation method,rCIM)与改良碳青霉烯灭活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)对产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌(carbapenemase-producing Enter-o...     

用改良Hodge试验筛查低产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌

目的 筛查临床分离的对碳青霉烯类表型敏感但携带碳青霉烯酶耐药基因的肠杆菌科细菌,分析改良Hodge试验(MHT)的筛查效果。 方法 用MHT筛查低产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌;M-H琼脂稀释法和纸片扩散法（K-B）检测对第三代头孢菌素和碳青霉烯类药物的敏感度;EDTA 双纸片协同试验检测金属碳青霉烯酶;PCR检测细菌相关耐药基因。 结果 203株表型第三代头孢菌素耐药的碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌中,24株MHT阳性,EDTA双纸片协同试验均阴性;M-H琼脂稀释法结果对头孢他啶（CAZ）2株敏感,2株中介,其余均耐药;对厄他培南（ETP）、亚胺培南（IPM）和美洛培南（MEM）均敏感;碳青霉烯酶、β内酰胺酶基因特异性PCR扩增,4株扩增出KPC基因,2株扩增出CTX-M基因,13株扩增出TEM基因。 结论 经MHT筛检出临床分离株中存在潜在的产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌。阳性结果需用基因检测的方法进一步确认。     

CIM和Carba NP筛选肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的比较

目的评估碳青霉烯类失活法(carbapenem inactivation method,CIM)和Carba NP对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型筛选的能力。方法以PCR及测序技术检测菌株携带碳青霉烯酶相关基因结果为标准,评估CIM和Carba NP对75株耐碳青酶烯类抗生素肠杆菌科细菌及25株敏感菌株碳青霉烯酶表型筛选能力。结果 75株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌中,CIM和Carba NP阳性菌株均为53株(70.67%);PCR检测碳青霉烯酶耐药基因阳性48株,阴性27株,其中blaKPC-2阳性29株,blaNDM-1阳性17株,同时携带blaKPC-2和blaNDM-12株。25株敏感菌株2种表型筛选试验均阴性,PCR未检出相关基因。与PCR检测结果相比较,CIM试验的一致率是87%,Kappa值为0.74;Carba NP试验的一致率是79%,Kappa值为0.58。结论 CIM试验简便、低成本,与测序方法具有较高的一致率,是碳青霉烯酶表型筛选的有效方法。     

肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的主要类型和流行病学分析

目的：了解对碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌（CRE）中碳青霉烯酶的主要类型及流行情况。方法收集上海瑞金医院2011年5月至2013年6月对亚胺培南或美罗培南药敏纸片抑菌圈直径≤22 mm的CRE共114株,采用PCR方法扩增常见的碳青霉烯酶基因（blaKPC 、blaIMP 、blaOXA‐48、blaVIM 、blaNDM ）并对PCR扩增产物进行测序;所有菌株均进行了质粒接合试验;采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对KPC‐2检测阳性的肺炎克雷伯菌进行同源性分析。结果114株CRE以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和肠杆菌属细菌为主,其中98株产碳青霉烯酶,以K PC‐2酶为主要类型（78／98）、其次为IM P‐4酶（15／98）, IMP‐8酶（2／98）,1株肺炎克雷伯菌同时携带有 blaKPC‐2和 blaIMP‐4基因,还发现4株产 NDM‐1酶的菌株,未见OXA‐48酶及VIM酶阳性菌株。21株（21．4％,21／98）CRE菌株转移接合试验成功。PFGE结果显示49株 blaKPC‐2阳性肺炎克雷伯菌共分为12个型,其中34株属于同一谱型（type A ）。CRE菌株主要分离自ICU ,共39株,其次为普外科14株,血液科11株,呼吸科9株,其余科室共41株。结论本次分离的肠杆菌科细菌所产碳青霉烯酶的基因型以blaKPC‐2为主,其次为blaIMP‐4,并发现4株blaNDM‐1阳性CRE菌株,产KPC‐2酶的肺炎克雷伯菌在外科ICU、呼吸科及胸外科等科室间存在克隆株的流行传播,应采取及时有效的防控措施。     

改良快速Carba NP试验检测碳青霉烯酶的应用价值

目的探讨改良快速Carba NP试验用于检测碳青霉烯酶的可行性,并对比分析其与Carba NP试验的差异。方法选取264株革兰阴性杆菌,其中耐药菌株164株,敏感菌株100株。分别采用Carba NP试验、改良快速Carba NP试验检测碳青霉烯酶表型,并以PCR检测结果为参比,评价上述检测方法的差异。结果 164株耐药菌株中,耐药基因阳性144株;100株敏感菌株耐药基因均为阴性。164株耐药菌株中Carba NP试验阳性135株;改良快速Carba NP试验阳性130株。100株敏感菌株中,2种方法均为阴性。与PCR检测结果相比,Carba NP试验的敏感性和特异性分别为91.7%(132/144)和97.5%(117/120),Kappa值0.886;改良快速Carba NP试验敏感性和特异性分别为89.6%(129/144)和99.2%(119/120),Kappa值0.879。Carba NP试验与改良快速Carba NP试验的阳性检出率差异无统计学意义(χ~2=1.45,P0.05)。结论改良快速Carba NP试验与PCR方法一致性高,较Carba NP试验更为快速、廉价,适用于流行病学调查和院内感染的早期监测。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌临床感染现状分析

目的：了解该院临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的临床分布及产碳青霉烯酶情况。方法采用改良Hodge 试验确认 CRE 菌株产碳青霉烯酶的情况,乙二胺四乙酸(EDTA)双纸片协同试验筛查 CRE 菌株产金属β-内酰胺酶情况,并对 CRE 菌株的临床分布作回顾性分析。结果该科室经仪器法筛查,标准琼脂扩散敏感试验(K-B 法)复核证实,检出37株CRE 菌株,检出菌株数从2012~2014年呈逐年递增趋势。从细菌种类看,耐碳青霉烯类菌株主要是肺炎克雷伯菌(16株),其次是大肠埃希菌(6株)、黏质沙雷菌(6株)、阴沟肠杆菌(4株)。CRE 菌株主要来源于重症监护室和老年病房。痰液、尿液、血液是检出 CRE 菌株的主要标本来源。经改良 Hodge 试验证实,36株 CRE 为产碳青霉烯酶菌株,其中肺炎克雷伯菌4株、阴沟肠杆菌3株、阿斯布肠杆菌1株,经 EDTA 协同试验筛查出产金属酶。结论有基础疾病的老年患者是 CRE 院内感染易感人群,是防控重点对象,该院 CRE 耐碳青霉烯类抗菌药物的主要机制是产生碳青霉烯酶,其中部分菌株产金属酶。     

改良Hodge试验检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的性能评估

目的 评估改良Hodge试验在碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科细菌中检测碳青霉烯酶的效能.方法 收集2004-2008年我国16家教学医院的49株碳青霉烯类药物敏感性降低(亚胺培南、美罗培由或厄他培南的MIC≥2μg/ml)的肠杆菌科细菌;采用对倍琼脂稀释法测定其对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的MIC;通过改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;利用加苯硼酸或苯唑西林的改良Hodge试验区分碳青霉烯酶或AmpCs/ESBLs导致的阳性结果 ;采用PCR检测包括NDM-1型碳青霉烯酶基因在内的多种β内酰胺酶基因,并对PCR阳性产物测序鉴定.结果 49株菌中,36株菌对亚胺培南不敏感(MIC>4μg/ml),31株菌对美罗培由不敏感(MIC>4μg/ml),47株菌对厄他培南不敏感(MIC>2μg/ml).49株临床分离菌中23株菌改良Hodge试验刚性,包括9株弱阳性和14株强阳性.经过对菌株进行β内酰胺酶基因PCR和测序,发现9株Hodge弱阳性菌株中2株携带blaKPC-2,7株不携带碳青霉烯酶基因,但携带blaampC/blaESBL;14株强阳性菌株中4株携带blaKPC-2,8株携带blaIMP-4,2株携带blaIMP-8;26株改良Hodge试验阴性菌株均未携带碳青霉烯酶基因.所有49株菌均未检测到blaNDM-1.以碳青霉烯酶基因检测为标准,则改良Hodge试验对检测碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科菌中碳青霉烯酶的敏感度为100%,特异度为79%,阳性预测值为70%,阴性预测值为100%,准确性为86%.结论 改良Hodge试验具有很好的敏感性,但存在一些假阳性结果 .利用苯硼酸和苯唑西林可有效区分改良Hodge试验的假阳性和真阳性.     

Evaluation of the modified carbapenem inactivation method for the detection of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae

Carbapenemase-producing Enterobacteriaceae (CPE) are increasing worldwide. Rapid and accurate detection of CPE is necessary for appropriate antimicrobial treatment and hospital infection control. However, CPE contains some strains that are difficult to detect depending on genotype and MIC value of carbapenem, and a detection method has not been established. The recently reported modified carbapenem inactivation method (mCIM) has been developed in CLSI M100-S27 as a phenotypic technique for detecting carbapenemase activity. In the present study, we examined mCIM as a new CPE detection method using 207 Enterobacteriaceae isolates in comparison with the three existing screening methods of modified Hodge test, Carba NP test and carbapenem inactivation method and evaluated its performance. Consequently, both the sensitivity and specificity of mCIM were 100%, indicating better results than the conventional screening methods. The mCIM is a useful tool for microbiology laboratories due to its simplicity, clear criteria, cost-effectiveness and availability at any laboratory.