血必净对大鼠肢体缺血再灌注后肾脏NF-κB的表达及影响

目的探讨大鼠后肢缺血再灌注(I/R)后肾组织核因子-κB(NF-κB)的变化及血必净对骨骼肌I/R后肾损伤的保护作用。方法雄性SD大鼠制作I/R模型,随机分为3组:A组为对照组,仅进行常规麻醉,不阻断后肢血流;B组为缺血组,即缺血4h无再灌注组;C组为I/R组,即缺血4h后再灌注6h;D组为I/R+血必净低剂量组,即缺血4h再灌注6h,并于缺血前10min及再灌注开始时即刻分别尾静脉注射血必净8mL/kg;E组为I/R+血必净高剂量组,即缺血4h再灌注6h并于缺血前10min及再灌注开始时即刻分别尾静脉注射血必净16mL/kg。检测血清中肌酸激酶(CK)含量,肾组织中MDA含量,NF-κB基因在肾组织中的表达。结果肾组织中NF-κB表达A组不明显;在B,C组呈上升趋势;D,E组表达下调;其余4组与A组比较,差异均有统计学意义(P0.01);D,E两组与C组比较,差异有统计学意义(P0.01);而D,E两组差异无统计学意义(P0.05)。CK和MDA含量:B,C组逐渐升高,C组较B组升高明显(P0.01);药物治疗后的D,E组相应下降,与C组比较,差异均有统计学意义(P0.01)。结论在I/R后肾组织中NF-κB的表达明显上调,血必净可抑制NF-κB表达上调,对I/R肾损伤有明显保护作用,此作用与本实验设计的剂量无关。     

三碘甲状腺原氨酸在心肌保护中的药理性预适应作用

目的探讨三碘甲状腺原氨酸(T3)预处理对离体大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及相关机制。方法40只SD大鼠随机均分为5组正常对照组,缺血损伤(I/R)组,缺血预适应(IP)组,三碘甲状腺原氨酸(T3)组,三碘甲状腺原氨酸+格列本脲(Glib+T3)组。采用Langendorff灌注实验装置,观察各组心肌缺血再灌注前后心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)、心肌乳酸脱氢酶(LDH)、心肌激酸肌酶同工酶(CK-MB)的含量变化,并取心肌组织行电镜超微结构检查。结果与I/R组相比,T3组(3.0ng/L)明显增加心肌组织SOD的活性[(66.44±7.53)对(46.18±7.81)μmol/mg,P<0.05],减少MDA[(56.17±8.57)对(73.47±7.38)μmol/mg,P<0.05]含量;减少大鼠冠脉流出液中心肌LDH[(29.9±4.5)对(58.1±4.6)IU/L,P<0.05]和CK-MB[(36.7±3.4)对(56.2±3.1)IU/L,P<0.05]的含量,而30μmol/L的Glib与T3合用后,上述心肌保护作用被部分抵消。结论经T3预处理的大鼠心肌具有确切的抗再灌注损伤作用,这一保护作用与KATP通道开放有关。     

异丙酚对肺缺血再灌注损伤大鼠肺上皮细胞凋亡的影响

目的拟通过观察肺上皮细胞凋亡的变化,探讨异丙酚减轻大鼠肺缺血再灌注损伤的作用机制。方法雄性SD大鼠136只,随机分为3组:假手术组(S组,n=24)、缺血再灌注组(I/R组,n=56)、异丙酚组(P组,n=56)。I/R组、P组制备大鼠肺原位热缺血模型,缺血1h。P组于缺血前30min静脉输注异丙酚20mg·kg~(-1)·h~(-1)至再灌注4h。S组除不作缺血处理外,其余处理与I/R组相同。分别于再灌注0.5、1、2、4h随机处死大鼠(S组每个时点处死6只,I/R组、P组每个时点分别处死14只大鼠),每组每个时点的一半大鼠用于测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞百分比、蛋白浓度,另外一半大鼠用于测定肺组织丙二醛(MDA)含量、湿,干重比(W/D)及肺上皮细胞凋亡指数(TUNEL法),并在光镜下观察肺组织的病理学改变;I/R组、P组肺上皮细胞凋亡指数与W/D进行直线相关分析。结果与S组相比,I/R组和P组再灌注各时点BALF中中性粒细胞百分比、蛋白浓度及肺组织MDA含量、W/D、肺上皮细胞凋亡指数均增加(P<0.05或0.01);与I/R组比较,P组上述指标均降低(P<0.05或0.01),肺组织病理学损伤减轻;I/R组、P组肺上皮细胞凋亡指数与W/D之间的相关系数分别为0.784、0.830(P<0.01)。结论异丙酚抑制肺上皮细胞凋亡可能是减轻大鼠肺缺血再灌注损伤的机制之一。     

异丙酚对大鼠离体心脏缺血再灌注时NF-κB及iNOS的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠离体心脏缺血再灌注时核因子κB(NF-κB)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响.方法 成年SD大鼠24只,体重200～300 g,雌雄不拘,随机分为3组(n=8):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和异丙酚组(P组).建立Langendorff离体心脏灌注模型,K-H液平衡20 min后开始实验.C组灌注K-H液110 min;I/R组灌注K-H液20 min后,全心停灌30 min,再灌注60 min;P组用含50 μmol/L异丙酚的K-H液灌注20 min,全心停灌30 min,再用含50 μmol/L异丙酚的K-H液灌注60 min.于平衡末、再灌注10 min和60 min时测定冠状动脉流出液心肌肌钙蛋白(cTnI)浓度;于再灌注60 min时测定心肌SOD活性、MDA含量、iNOS活性及NF-κB、IκB的表达水平.结果 与C组比较,I/R组再灌注期间冠状动脉流出液cTnI浓度升高,P组再灌注期间60 min时升高(P＜0.05或0.01),I/R组心肌SOD活性降低,MDA含量增多,iNOS活性升高(P＜0.01),I/R组和P组心肌NF-κB表达升高,kB表达降低(P＜0.05或0.01).与I/R组比较,P组再灌注期间冠状动脉流出液cTnI浓度、心肌MDA含量、NF-κB表达、iNOS活性均降低,心肌SOD活性和IκB表达升高(P＜0.01).结论 异丙酚可抑制心肌NF-κB的激活,降低iNOS的活性,从而减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.     

川芎嗪对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤保护作用的机理研究

目的　研究川芎嗪注射液对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法　96 只SD大鼠被随机均分为假手术组、肝脏缺血再灌注组(I/R组)和肝脏缺血+川芎嗪再灌注组(简称治疗组)3 组,分别于术前及术后30 min、6 h及24 h检测血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH),观察每组大鼠1周存活情况及肝脏病理组织学变化,并行肝细胞凋亡指数检测。结果　治疗组术后1 周大鼠存活情况好于I/R组(P<0.05); 治疗组及I/R组血浆ALT、AST及LDH均明显高于假手术组(P<0.05),但治疗组低于I/R组(P<0.05)。光镜下见,缺血再灌注后肝血窦和中央静脉明显瘀血,肝细胞坏死I/R组重于治疗组。肝细胞凋亡指数I/R组高于治疗组(P<0.05)。结论　川芎嗪对大鼠肝脏缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。     

异丙酚对肝缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响及PI3K/Akt信号通路在其中的作用

目的 探讨异丙酚对肝缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在其中的作用.方法 清洁级雄性SD大鼠102只,体重250～280g,采用结扎肝蒂30 min后再灌注的方法制备肝缺血再灌注模型.随机分为5组:假手术组(S组,n=6)仅分离肝门,不结扎;缺血再灌注组(I/R组,n=30)制备肝缺血再灌注模型;异丙酚组(P组,n=30)缺血前10 min股静脉注射异丙酚12 mg/k异的负荷剂量,随后以30 mg·kg-1·h-1的速率静脉输注直至处死;异丙酚+PI3K抑制剂组(P+LY组,n=18)缺血前10 min股静脉注射PI3K特异性抑制剂LY294002 1.5mg/kg(溶于二甲亚砜0.5 ml);溶剂对照组(P+DMSO组,n=18)缺血前10 min股静脉注射二甲亚砜0.5 ml.I/R组和P组于再灌注即刻、30、60、120和240 min(T1-55)时,P+LY组和P+DMSO组于T3-5时取6只大鼠,处死后快速取左心室壁心肌组织,测定总Akt(t-Akt)和磷酸化Akt(p-Akt),并于T3时测定Bcl-2的表达和心肌细胞凋亡情况,取肝左外叶组织,光镜下观察肝组织病理学结果.S组于T1相应时点处死大鼠,测定上述指标.结果 与S组比较,其余各组心肌p-Akt表达水平和心肌细胞凋亡率升高(P＜0.05),P+LY组心肌Bcl-2表达差异无统计学意义(P＞0.05),其他各组心肌Bcl-2表达均上调(P＜0.05);与I/R组比较,P组和P+DMSO组心肌p-Akt和Bcl-2表达上调,心肌细胞凋亡率降低(P＜0.05),P+LY组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与P组比较,P+LY组心肌p-Akt和Bcl-2表达下调,心肌细胞凋亡率升高(P＜0.05),P+DMSO组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);各组心肌t-Akt表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).P组和P+DMSO组肝组织病理学损伤较I/R组和P+LY组减轻.结论异丙酚可减轻大鼠肝缺血再灌注诱发心肌损伤,该作用与激活PI3K/Akt信号通路有关.     

线粒体心磷脂在二氮嗪预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价线粒体心磷脂在二氮嗪预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用.方法 清洁级SD大鼠72只,体重200～280 g,雌雄各半,随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、二氮嗪预处理组(DZ组)和5-羟葵酸拮抗二氮嗪组(HD组),每组18只.采用Langendorff灌流装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型,C组平衡灌注20 min,持续灌注100 min;I/R组平衡灌注20 min,持续灌注30 min,缺血40 min,再灌注30 min;DZ组平衡灌注20 min后,依次灌注K-H液15 min、50 μmol/L二氮嗪10 min和K-H液5 min,其余缺血再灌注同I/R组;HD组二氮嗪预处理前给予含5-羟葵酸100 μmol/L K-H液10 min,其余处理同DZ组.各组分别于平衡灌注末(T1)、缺血前即刻(T2)、再灌注末(T3)时随机取6只大鼠,监测心率(HR)、左心室发展压(LVDP)和左心室舒张末压(LVEDP),采用高效液相色谱仪测定心肌线粒体心磷脂含量.结果 与T1,2时比较,各组T3时HR、LVDP降低,LVEDP升高,心肌线粒体心磷脂含量降低(P<0.05);与C组比较,其余3组T3时HR、LVDP降低,LVEDP升高,心肌线粒体心磷脂含量降低(P<0.05);与I/R组比较,DZ组T3时HR、LVDP升高,LVEDP降低,心肌线粒体心磷脂含量升高(P<0.05);与DZ组比较,HD组T3时HR、LVDP降低,LVEDP升高,心肌线粒体心磷脂含量降低(P<0.05).结论 二氮嗪预处理可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤,与维持心肌线粒体心磷脂含量有关.     

上调miRNA-133a表达对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察上调miRNA-133a表达是否可改善缺血再灌注损伤后心肌损害及心脏功能.方法 建立活体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.将实验动物随机分为5组:(1)空白对照组(Sham组);(2)缺血再灌注损伤组(I/R组);(3)缺血再灌注损伤+miRNA-133a模拟物agomiR-133a组(I/R+ agomiR-133a组);(4)缺血再灌注损伤+阴性对照序列组(I/R+ scramble组);(5)缺血再灌注损伤组+生理盐水组(I/R+ NS组).于再灌注24h分别使用实时定量聚合酶链反应(Real-TimePCR)法检查心肌内miRNA-133a表达水平;经胸超声心动检查大鼠心脏功能;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死以及TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测心肌细胞凋亡.结果 I/R+ agomiR-133a组心肌内miRNA表达水平显著高于I/R组(P＜0.01).上调miRNA-133a表达水平可显著减少再灌注后心肌梗死面积[(37.0±3.1)％比(58.0±4.4)％,P＜0.01],抑制心肌细胞凋亡(38.4±6.0比15.7±5.2,P＜0.01),并改善心脏功能[LVEF:(64.8 ±2.9)％比(52.8±4.0)％,LVFS:(31.1±1.2)％比(25.2±0.8)％,P＜0.01].NS与scramble对再灌注后心肌损伤及心脏功能无显著影响.结论 上调心肌内miRNA-133a表达水平可显著减轻缺血再灌注损伤24h后心肌损害,并改善心脏功能.     

α-硫辛酸对肾缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 评价α-硫辛酸对肾缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 健康雄性SD大鼠36只,体重250～280 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组:假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(I/R组)和α-硫辛酸组(L组),每组12只.I/R组和L组采用夹闭双侧肾动、静脉45 min后恢复灌注的方法制备大鼠肾缺血再灌注损伤模型,S组不夹闭双侧肾蒂.L组于夹闭前20 min和再灌注前20 min分别尾静脉注射α-硫辛酸30 mg/kg,I/R组分别尾静脉注射等容量溶剂(35％聚乙二醇+60％生理盐水+5％乙醇).于再灌注24h抽取腹主动脉血,测定血清肌酐(Cr)和MDA浓度,随后处死大鼠取心脏,测定心肌MDA含量和SOD活性,采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,采用免疫组化法测定心肌细胞Bcl-2及Bax的表达,计算Bcl-2/Bax比值.结果 与S组相比,I/R组和L组血清Cr和MDA浓度、心肌MDA含量和心肌细胞凋亡率升高,SOD活性降低,I/R组Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.05);与JR组相比,L组血清Cr和MDA浓度、心肌MDA含量和心肌细胞凋亡率降低,SOD活性升高,Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.05).结论 α-硫辛酸可减轻肾缺血再灌注损伤大鼠心肌损伤,与抑制心肌细胞凋亡有关.     

异丙酚对大鼠小肠缺血再灌注时粘膜上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠小肠缺血再灌注时粘膜上皮细胞凋亡的影响及其机制.方法 健康Wistar大鼠24只,随机分为3组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和异丙酚+缺血再灌注组(P+I/R组).夹闭肠系膜上动脉,缺血1 h,再灌注2 h,制备小肠缺血再灌注损伤模型.S组和I/R组缺血前10 min开始经股静脉持续输注生理盐水10 ml·kg-1·h-1,P+I/R组静脉注射异丙酚10 mg/kg,以后持续输注异丙酚10 mg·kg-1·h-1.取空肠组织3 cm,常规制备全层石蜡切片,行HE染色,光镜下观察小肠组织病理学;免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达;TUNEL法检测小肠粘膜上皮细胞凋亡,计数凋亡细胞及总细胞,计算小肠粘膜上皮细胞凋亡指数.结果 与S组比较,I/R组和P+I/R组Bcl-2和Bax蛋白表达上调,Bcl-2/Bax增加,小肠组织损伤程度增强,小肠粘膜上皮细胞凋亡指数增高(P＜0.01或0.05);与I/R组比较,P+I/R组Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调,小肠组织损伤程度减轻,小肠粘膜上皮细胞凋亡指数降低(P＜0.01).结论 异丙酚可减轻大鼠小肠缺血再灌注损伤时粘膜上皮细胞凋亡,其机制与上调Bcl-2基因的表达和下调Bax基因的表达有关.     

诱导型一氧化氮合酶在舒芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在舒芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 成年雄性SD大鼠30只,体重250～330 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n=6):假手术组(S组)只穿线,不结扎;心肌缺血再灌注组(I/R组)采用结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;舒芬太尼预处理组(SF组)缺血前24 h经尾静脉输注舒芬太尼120μg/kg,输注时间30 min;舒芬太尼预处理+iNOS特异性抑制剂S-甲硫脲组(SF+SMT组)缺血前24 h经尾静脉输注舒芬太尼120μg/kg,缺血前10 min静脉注射SMT 10 mg/kg;SMT组缺血前10 min静脉注射SMT 10 mg/kg.于缺血前30 min、缺血30 min、再灌注120 min时记录HR和MAP,计算RPP(SP× HR).于再灌注120 min时取颈动脉血样2 ml,测定血浆NO浓度,随后取心脏制病理切片,测定缺血危险区(AAR)和梗死区(IS)体积,计算心肌梗死体积(IS/AAR),测定心肌iNOS表达.结果 与S组比较,余4组再灌注120 min时MAP和RPP降低,IS/AAR升高,I/R组和SMT组缺血30 min时MAP和RPP降低(P＜0.05);与I/R组比较,SF组、SF+SMT组和SMT组HR、MAP和RPP差异无统计学意义,SF+SMT组和SMT组IS/AAR和血浆NO浓度差异无统计学意义(P＞0.05),SF组IS/AAR降低,血浆NO浓度和心肌iNOS表达升高(P＜0.05).结论 iNOS参与了舒芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的过程.

Abstract：

Objective To investigate the role of inducible nitric oxide synthase (iNOS) in reduction of myocardial ischemia-reperfusion (I/R) injury by sufentanil preconditioning in rats. Methods Thirty adult male SD rats, weighing 250-330 g, were randomly divided into 5 groups ( n =6 each): sham operation group (group S),I/R group, sufentanil preconditioning group (group SF), sufentanil preconditioning + a specific inhibitor of iNOS S-methyl thiourea (SMT) group (group SF+ SMT) and S-methyl thiourea group (group SMT). In I/R,SF,SF+SMT and SMT groups, myocardial I/R was produced by occlusion of left anterior descending coronary artery for 30 min followed by 120 min reperfusion. Group SF received 30 min infusion of sufentanil 120 μg/kg via caudal vein 24 h before ischemia. Group SF + SMT received infusion of sufentanil 120 μg/kg via caudal vein 24 h before ischemia and then SMT 10 mg/kg was injected 10 min before ischemia. In group SMT, SMT 10 mg/kg was injected 10min before ischemia. MAP and HR were recorded at 30 min before ischemia, at 30 min of ischemia and at the end of reperfusion. The rate-pressure product (RPP) was calculated. Arterial blood samples were obtained immediately at the end of reperfusion to determine the plasma concentration of NO. Then the animals were sacrificed and myo cardial tissues were obtained to determine the area at risk (AAR), infarct size (IS) and iNOS expression. IS/AAR was calculated. Results Compared with group S, MAP and RPP were significantly decreased, while IS/AAR was significantly increased at 120 min of reperfusion in the other four groups, and MAP and RPP were significantly decreased at 30 min of ischemia in I/R and SMT groups ( P ＜ 0.05). Compared with group I/R, no significant change was found in HR, MAP and RPP in SF, SF + SMT and SMT groups, and in IS/AAR and plasma NO concentrations in SF + SMT and SMT groups ( P ＞ 0.05), but IS/AAR was significantly decreased, and the plasma NO concentration and iNOS expression were significantly increased in group SF ( P ＜ 0. 05). Conclusion iNOS is involved in reduction of myocardial I/R injury by sufentanil preconditioning in rats.     

七氟醚延迟预处理对大鼠缺血再灌注心肌ARC表达的影响

目的 评价七氟醚延迟预处理对大鼠缺血再灌注心肌带有Caspase富集功能域的凋亡抑制蛋白(ARC)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠64只,体重270～350 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=16):假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚+假手术组(S-S组)和七氟醚延迟预处理+心肌缺血再灌注组(S-VR组).S-S组和S-I/R组分别吸入33%氧气和2.5%七氟醚2 h,停止吸入后24 h行假手术或心肌缺血再灌注;I/R组和S-I/R组采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h的方法制备心肌缺血再灌注模型.于再灌注2 h时处死8只大鼠,取左心室组织,测定心肌梗死范围及细胞凋亡情况,计算凋亡指数,于缺血前即刻及再灌注2 h时各处死4只大鼠,取左心室组织,测定ARC及Caspase-8的表达水平.结果 与S组比较,I/R组和S-I/R组心肌梗死范围及细胞凋亡指数升高,缺血前即刻S-S组和S-I/R组ARC表达上调,再灌注2 h时I/R组Caspese-8、表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,S-I/R组心肌梗死范围和细胞凋亡指数降低,再灌注2 h时S-S组和S-I/R组ARC表达上调,Caspase-8表达下调(P＜0.05).结论 七氟醚延迟预处理可上调心肌ARC表达,减少细胞凋亡的发生,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effects of sevoflurane delayed preconditioning on caspase recruitment domain (ARC) expression during myocardial ischemia-reperfusion (I/R) in rats. Methods Sixty-four adult male SD rats weighing 270-350 g were randomly divided into 4 groups ( n = 16 each): sham operation (group S); myocardial I/R group; sevoflurane + sham operation group (group S-S) and sevoflurane delayed preconditioning + myocardial I/R group (group S-I/R) . Myocardial I/R was induced by occlusion of anterior descending branch of left coronary artery for 30 min followed by 2 h of reperfusion in groups I/R and S-I/R. Group S-S inhaled 33% oxygen for 2 h, and sham operation was performed 24 h later. Group S-I/R inhaled 2.5% sevoflurane for 2 h, and then myocardial I/R was induced 24 h later. Eight animals were sacrificed at the end of 2 h reperfusion in each group and the hearts removed for determination of myocardial infarct size (IS) as a percentage of area at risk (AAR) by triphenyl tetrazolium chloride staining (IS/AAR) . Myocardial apoptosis was detected using TUNEL and apoptosis index was calculated. Another 4 animals were sacrificed immediately before ischemia and at the end of 2 h reperfusion to determine the expression of ARC and Caspase-8 in myocardium by Western blot. Results Compared with group S, the infarct size and apoptosis index were significantly increased in groups I/R and S-I/R, and ARC expression was up-regulated immediately before ischemia in groups S-S and S-I/R, and Caspase-8 expression was up-regulated at 2 h of reperfusion in group I/R ( P ＜ 0.05) . Compared with group I/R, the infarct size and apoptosis index were significantly decreased in group S-I/R, and ARC expression was up-regulated, while Caspase-8 expression was down-regulated at 2 h of reperfusion in groups S-S and S-I/R ( P ＜ 0.05) . Conclusion Sevoflurane delayed preconditioning can attenuate myocardial I/R injury through up-regulating the ARC expression and decreasing the myocardial apoptosis.     

Effect of Shenfu injection on nuclear factor-kB during myocardial ischemia/reperfusion injury in rats

Objective: To investigate effects of Shenfu injection on the concentrations of plasma tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6), activity of Nuclear Factor kappa B (NF-κB) and heart tissue ultrastructure during myocardial ischemia/reperfusion (I/R) injury in rats and its potential mechanism.Methods: Myocardial ischemia/reperfusion (I/R) was produced by ligation and release of the left anterior descending coronary artery. Ischemia lasted for 30 min and reperfusion for 60 min. Twenty-four healthy male SD rats weighing 230-280 g were randomly divided into three groups (n=8, each): Group I (Sham-operation group); Group II (I/R group); Group III (Shenfu group), in which Shenfu injection (10 ml/kg) was intraperitoneally injected 30 min before ischemia in animals with I/R. The plasma concentrations of IL-6 and TNF-α were measured by ELISA, and the heart was harvested for determination of NF-κB levels by Ecl-western blot analysis. Electron microscopy was used to study its ultrastructure.Results: After reperfusion, NF-κB binding activity in myocardial nuclei and the plasma concentrations of IL-6 and TNF-α were significantly increased in Group II, compared with Group I (P<0.01), and they were markedly reduced in Group III, compared with Group II (P<0.01). In addition, electron microscopic examination showed more serious injury of the myocardium ultrastructure in Group II, while in Group III the myocardial ultrastructure was similar to normal state.Conclusions: Shenfu injection inhibits NF-κB activity in I/R myocardium and leads to down-regulation of proinflammatory cytokine expression, which might be one of the molecular mechanisms of Shenfu injection in cardioprotection.     

心肌缺血/再灌注后多巴酚丁胺最佳应用时间探讨

目的 制作大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI)模型,比较再灌注后不同时间点给予多巴酚丁胺对心功能和心肌损伤的影响,以探索心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)后给予多巴酚丁胺的最佳时间.方法 雄性SD大鼠36只,按完全随机法分为4组(每组9只),各组在Langendorff灌注装置上建立离体心脏I/RI模型.平衡灌注15 min,缺血30 min,再灌注60 min,于再灌注期采取不同处理措施.单纯I/R组(I/R组)再灌注期全程以克-亨氏(Kreb'sHenseleit,K-H)液灌注;多巴酚丁胺一组(D1组)再灌注5 min时给予多巴酚丁胺灌注30 min,其余时间以K-H液灌注;多巴酚丁胺二组(D2组)再灌注15 min时给予多巴酚丁胺灌注30 min,其余时间以K-H液灌注;多巴酚丁胺三组(D3组)再灌注25 min时给予多巴酚丁胺灌注30 min,其余时间以K-H液灌注.其中,多巴酚丁胺输注剂量均为10 μg· kg-1·min-1.记录各组平衡灌注末(T0),再灌注10 min(T1)、20min(T2)、30min(T3)、60 min(T4)时的血流动力学指标:HR、左室舒张末压(left ventricular end diastolic pressure,LVEDP)、左室发展压(left ventricular developed pressure,LVDP)、左室内压上升/下降最大速率(the maximum rate of left ventricular pressure change,±dp/dtmax)及冠状动脉流量(coronary flow,CF).留取T0～T4各时点冠状动脉流出液,使用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸磷酸激酶(creatine kinase,CK)试剂盒测定冠状动脉流出液中LDH和CK的活性.2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色法测定心肌梗死面积(myocardial infarct size,MIS).Western blot法检测肌浆网钙泵(sarcoendoplasmic reticulum Ca2+-ATPase,SERCA2a)和兰尼碱受体(ryanodine receptors,RyR2)蛋白表达量. 结果 D1组在给予多巴酚丁胺后,HR、LVEDP、LDH、CK、MIS均比I/R组高,差异有统计学意义(P＜0.05);D2组、D3组在给予多巴酚丁胺后,HR、CF、LVDP、±dp/dtmax均高于I/R组,差异有统计学意义(P＜0.05),而LVEDP、LDH、CK、MIS比较,差异无统计学意义(JP＞0.05).多巴酚丁胺各组SERCA2a蛋白表达量和I/R组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),而RyR2蛋白表达量则高于I/R组(P＜0.05).D2组与D3组相比在给予多巴酚丁胺后上述指标比较,差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 大鼠心肌FR 15 min时应用多巴酚丁胺要优于其他时间点.在这一时间点用药可以及时而有效地提高大鼠HR,增加CF,改善心肌收缩功能,且不会加重心肌损伤.     

大鼠血红素加氧酶-1基因转染对大鼠离体心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的 观察重组腺相关病毒介导大鼠血红素加氧酶-1基因转染对大鼠离体心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠30只随机分成3组,对照组(C组,n=6),缺血再灌注组(I/R组,n=12),腺相关病毒介导血红索加氧酶-1基因组(A-r组,n=12).基因转染3个月后,建立大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,C组持续灌注100 min,其他各组均平衡15 rain,停灌40min与再灌注45 min,记录冠脉流量(CF),测定冠脉流出液肌酸激酶(CK)活性,测定再灌注后45 min时的心肌心肌组织超氧化物岐化酶(SOD)活性活性及丙二醛(MDA)含量,同时取每组大鼠心肌检测梗死面积、心肌细胞凋亡率以及心肌组织bax、bcl-2蛋白表达量.结果 离体心肌Langendorff灌注后,与I/R组比较,A-r组在复灌后冠脉流出液CK活性降低(P＜0.01),复灌后45min后心肌MDA含量降低(P＜0.01),SOD活性增高(P＜0.01),梗死面积较小(P＜0.01),心肌组织bax表达量、心肌细胞凋亡率均显著下降,心肌组织bel-2表达量明显增加(P＜0.01).结论 重组腺相关病毒血红素加氧酶1基因转染心肌后,可抑制离体缺血再灌注心肌细胞凋亡和增强心肌抗氧化能力,对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤有显著保护作用.     

七氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响

目的 探讨七氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响.方法 成年雄性SD大鼠64只,体重270～350 g,随机分为4组(n=16):假手术组(S组)仅穿线不结扎,心肌缺血再灌注组(I/R组)阻断左冠状动脉前降支缺血30 min,恢复灌注2 h制备心肌缺血再灌注损伤模型,七氟烷组(Sevo组)吸入2.5%七氟烷30 min,七氟烷预处理+心肌缺血再灌注组(SR组)吸入2.5%七氟烷30 min,15 min后制备模型.于再灌注2 h时随机取4只大鼠处死取左心室,采用氯化三苯四唑染色法测定心肌梗死范围,随机取4只大鼠处死取左心室,采用TUNEL法检测凋亡心肌细胞,计算凋亡指数,于缺血前即刻和再灌注2 h时分别随机取4只大鼠处死取左心室,采用Western blot法测定Bcl-2及caspase-3的蛋白表达水平.结果 与S组相比,再灌注2 h时I/R组和SR组心肌梗死范围增大,心肌细胞凋亡指数升高,caspase-3蛋白表达上调,Sevo组Bcl-2蛋白表达上调,I/R组Bcl-2蛋白表达下调,Sevo组和SR组缺血前即刻Bcl-2蛋白表达上凋(P＜0.05);与I/R组相比,再灌注2 h时SR组心肌梗死范围缩小、心肌细胞凋亡指数降低,Sevo组和SR组Bcl-2蛋白表达上调,SR组caspase-3蛋白表达下调(P＜0.05);与缺血前即刻相比,I/R组和SR组再灌注2 h时Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3蛋白表达上调(P＜0.05).结论 七氟烷预处理可通过抑制细胞凋亡减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

丙泊酚预处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤中自噬潮的影响

目的 研究丙泊酚预处理对大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)期间自噬潮的影响及其机制. 方法 采用大鼠在体心肌I/R损伤模型,将90只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为5组(每组18只):①假手术组(Sham组),只穿线不结扎;②I/R组;③丙泊酚预处理组(P+I/R组);④Ⅰ型磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂A66预处理组(A+I/R组);⑤丙泊酚+A66预处理组(P+A+I/R组).采用结扎冠状动脉左前降支的方法制备心肌I/R模型.除Sham组外,其余各组均缺血30 min,再灌注120 min.缺血前15 min,P+I/R组通过股静脉输注丙泊酚15 mg·kg1·h1;A+I/R组缺血前1h腹腔注射A66溶液10 mg/kg;P+A+I/R组在缺血前1h腹腔注射A66溶液10 mg/kg,缺血前15 min再通过股静脉输注丙泊酚15 mg·kg1·h-1.模型制备后取心肌,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyhetrazolium chloride,TTC)法染色并计算梗死面积百分比,酶标法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydwgenase,LDH)活性,Western bolt法检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-Ⅱ、P62蛋白的表达量,电子显微镜定性观察自噬体、自噬溶酶体的数量.结果 与I/R组比较,P+I/R组与P+A+I/R组梗死面积[(50.1±-3.9)％比(26.5±1.3)％、(42.6±1.9)％]显著减小(P＜0.05),血清LDH活性降低,LC3-Ⅱ表达水平降低,P62表达水平升高(P＜0.05),自噬体、自噬溶酶体明显减少.与P+I/R组比较,P+A+I/R组梗死面积[(26.5±1.3)％比(42.6±1.9)％]显著增加(P＜0.05),血清LDH活性升高,LC3-Ⅱ表达水平升高,P62表达水平降低(P＜0.05),自噬体、自噬溶酶体增加. 结论 丙泊酚预处理激活PI3K/蛋白激酶B(pmtein kinase B,Akt)通路,抑制I/R心肌中自噬潮进行,对大鼠心肌I/R损伤产生保护作用.     

帕瑞昔布钠对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的 评价帕瑞昔布钠对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠54只,体重300～350 g,随机分为3组(n=18):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和帕瑞昔布钠组(P组).I/R组和P组采用电凝左侧大脑中动脉、夹闭双侧颈总动脉60 min时进行再灌注的方法制备脑缺血再灌注模型.P组分别于缺血前15 min和再灌注11 h时静脉注射帕瑞昔布钠4 mg/kg,S组和I/R组给予等容量生理盐水.再灌注72 h时进行神经功能评分,然后取脑组织,测定脑梗死体积、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及脑源性神经营养因子(BDNF)表达水平.结果 与S组比较,I/R组神经功能评分降低,脑梗死体积扩大,TNF-α和BDNF表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,P组神经功能评分升高,脑梗死体积缩小,TNF-α表达下调,BDNF表达上调(P＜0.05).结论帕瑞昔布钠可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,其机制与抑制炎性反应和上调BDNF表达有关.     

cAMP-PKA信号转导通路在缺血预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨cAMP-PKA信号转导通路在缺血预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用.方法 成年SD大鼠50只,体重300-350g,采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型后随机分为5组(n=10):缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IPC组)、H89组、脯氨酸二硫氨基甲酸组(PDTC组)和双丁酰环磷酸腺苷组(db-cAMP组).K-H液平衡灌注10 min后,R组K-H液继续灌注30 min后停灌1 h,再灌注30 min;IPC组停灌5 min,再灌注5 min.反复3次,停灌1 h再灌注30 min;PDTC和H89组停灌5 min,分别用含有PDTC 100μmol/L和含有H89 10 μmol/L的K-H液再灌注5 min,反复3次,余同IPC组;db-cAMP组用含db-cAMP 200 μmollL的K-H液灌注30 min,停灌1 h再灌注30 min.于平衡灌注10 min、再灌注10、20和30 min时记录左心室压力最大变化速率(±dp/dtmax)和左心室发展压(LVDP).于平衡灌注10 min和再灌注30 min时记录冠脉流出量(CF);测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)和磷酸肌酸激酶(CK)活性.于再灌注30 min时取心肌组织,采用EMSA法检测NF-κB-DNA结合活性,采用RT-PCR法检测TNF-α mRNA表达,采用Western blot法检测磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白(p-CREB)(Serl33)表达.结果 与IR组比较,IPC组和db-cAMP组NF-κB-DNA结合活性和TNF-α-mRNA表达降低,±dp/dt和CF升高,CK和LDH活性降低,WC组、PDTC组和db-cAMP组p-CREB(Ser133)表达升高(P<0.05或0.01);与IPC组比较,H89组和PDTC组NF-κB-DNA结合活性和TNF-αmRNA表达升高,±dp/dt、LVDP和CF降低,CK和LDH活性升高.H89组p-CREB(Serl33)表达降低(P<0.05或0.01).结论 缺血预处理通过激活cAMP-PKA信号转导通路抑制NF-κB-DNA结合活性,减少炎性因子的基因转录.从而减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.