蚊虫检测与扩增病毒的方法

本文较系统介绍了蚊虫检测与扩增病毒的方法,包括实验蚊虫的麻醉、接种和感染蚊的饲养及检测方法等。     

天津市蚊虫西尼罗病毒携带调查

目的了解天津市蚊虫携带西尼罗病毒（WNV）情况。方法以灯诱法进行蚊虫采集,采用荧光定量PCR检测方法对WNV进行检测。结果天津市有候鸟栖息的湖泊、洼地周边主要蚊种为淡色库蚊（占93．68％）,同时存在凶小库蚊和三带喙库蚊。对1091只蚊虫进行西尼罗病毒检测,结果均为阴性。结论本次调查未发现蚊虫携带WNV,为预防和控制WNV传人及可能发生的流行,有必要开展对媒介蚊虫及WNV的长期监测。     

云南省西双版纳地区2011年蚊虫及虫媒病毒调查

目的了解云南省西双版纳地区蚊虫媒介的分布特点及当地虫媒病毒情况,为虫媒病毒病防治提供科学依据。方法在云南省西双版纳州采集蚊虫标本,用细胞培养法分离病毒,并用RTPCR法检测常见虫媒病毒核酸;在西双版纳州采集发热患者血清及脑脊液标本,并用ELISA法检测常见病毒性脑炎IgM抗体。结果共采获蚊虫5属29种13337只,其中三带喙库蚊、中华按蚊、带足按蚊分别占蚊虫标本总数的79.98%(10667/13337)、7.95%(1060/13337)和7.38%(984/13337),三带喙库蚊为当地优势蚊种。采用流行性乙型脑炎(乙脑)病毒、版纳病毒、甲病毒属、环状病毒等多种虫媒病毒引物对214批蚊虫标本进行PCR检测,结果均为阴性;采用多种细胞对蚊虫标本进行病毒分离,结果也为阴性。用相关脑炎病毒试剂盒对采集到的52份急性期血清标本及54份脑脊液标本进行ELISA检测,发现乙脑病毒IgM阳性16例,单纯疱疹病毒IgM抗体阳性4例,腮腺炎病毒IgM抗体阳性13例,埃可病毒IgM抗体阳性3例,登革热病毒IgM抗体阳性1例。结论 2011年西双版纳地区采集到的蚊虫标本中未检测到乙脑、版纳及环状病毒等虫媒病毒,但血清学检测结果表明当地发热患者存在乙脑等多种病毒性脑炎感染。     

云南省耿马县孟定镇蚊虫及虫媒病毒调查

目的 :调查蚊虫种类及其带病毒情况。方法 :用吸蚊管和人诱法捕蚊 ,用C6 / 36细胞和乳鼠分离病毒 ,用血清学方法检测人血清中病毒抗体。结果 :1985年 7～ 8月捕获雌性成蚊 6属32种 94 10只 ,三带喙库蚊、棕头库蚊、中华按蚊、迷走按蚊是农村畜厩主要蚊种 ,白纹伊蚊是竹林区优势蚊种。从阿萨姆伊蚊中分离出 1株乙脑病毒。当地人血清中乙脑、登革、基孔肯雅和肾综合征出血热 (HFRS)病毒抗体阳性率依次为 39.6 8% (77/ 194 )、13.73% (14/ 10 2 )、2 0 .10 % (39/ 194 )和 0 .57% (1/ 94 )。结论 :云南耿马县孟定镇存在乙脑和其它虫媒病毒病     

云南省蚊虫媒介与蚊传虫媒病毒研究现状

虫媒病毒是指通过吸血昆虫叮咬敏感的脊椎动物而传播疾病的一类病毒,目前全世界已发现537种,其中蚊虫传播虫媒病毒有300余种,占总数的50%以上[1]。蚊传虫媒病毒可以引起人、畜共患病,如引起脑炎的虫媒病毒黄病毒科黄病毒属流行性乙型脑炎     

云南省景洪市蚊虫分布特点及与虫媒病毒的关系

的：掌握蚊虫分布特点及其在虫媒病毒传播中的作用。方法：捕获蚊虫，分离病毒。结果：１９８１、１９８２、１９８６和１９８８年在景洪市采获成年雌性蚊虫３１种２２８２３只。白天在野外竹林采获蚊虫１７种，优势蚊种为圆斑伊蚊、刺扰伊蚊和白纹伊蚊；夜间在农村畜圈及其周围采获蚊虫１９种，优势蚊种为棕头库蚊、三带喙库蚊、迷走按蚊。从采获的７种蚊虫体内分离到流行性乙型脑炎病毒１０株，基孔肯雅病毒３株，登革热病毒１株。其中从白纹伊蚊分离到３株病毒（２株基孔肯雅病毒、１株登革热病毒），从三带喙库蚊分离到５株病毒（４株流行性乙型脑炎病毒，１株基孔肯雅病毒）。结论：白纹伊蚊是当地基孔肯雅和登革热病毒的主要传播媒介，三带喙库蚊是流行性乙型脑炎病毒的主要传播媒介     

海口地区蚊种分布及病毒鉴定

目的 了解海南省海口地区蚊虫种类分布及其病毒携带情况,为相关蚊媒疾病防制提供科学依据.方法 2010年6-11月选择海口市区及4个区不同生境作为蚊虫监测点,利用电动吸蚊器法对不同生境进行蚊虫采集,将捕捉蚊虫带回实验室进行分类和病毒分离鉴定.结果 共捕获蚊虫8425只,其中三带喙库蚊占捕获蚊虫总数的68.87％,致倦库蚊占20.21％,中华按蚊占6.64％,骚扰阿蚊占4.28％;分离鉴定出盖塔病毒和版纳病毒各1株.结论 依据海口地区蚊虫的生态学特点做好防蚊、灭蚊工作,为防制相关虫媒传染病的发生做好有效预防.     

甘肃省长江流域地区白纹伊蚊地理分布调查

目的了解甘肃省长江流域地区登革热媒介白纹伊蚊地理分布情况。方法采用人诱法,用口吸吸蚊管、电动吸蚊器捕捉停落在人体上吸血的雌蚊,采用捕虫网捕捉雄蚊。结果在甘肃省长江流域调查两当县、徽县、成县、西和县、礼县、康县和武都区,其中两当县、徽县、成县、康县发现有白纹伊蚊孳生,其他县未发现。调查各类孳生生境49个,有白纹伊蚊孳生的8个,占16.33%,孳生生境以废旧轮胎收购加工厂为主。结论对甘肃省长江流域地区登革热媒介白纹伊蚊地理分布调查,为我国白纹伊蚊西北界限的重新划分提供了依据。     

湖北省荆门市2022年蚊虫流行性乙型脑炎病毒携带调查

目的 了解湖北省荆门市蚊虫流行性乙型脑炎(乙脑)病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)携带状况。方法 2022年7-8月在荆门市3个镇/街道选取7个点采集蚊虫标本,采用形态学方法鉴定蚊虫种类,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测JEV核酸,计算蚊种的批阳性率和最低现场感染率,采用逆转录聚合酶链反应对JEV的E基因进行扩增和序列分析。结果 共采集4 920只蚊虫标本,其中致倦库蚊、白蚊伊蚊、骚扰阿蚊、中华按蚊分别占56.10%、41.46%、1.83%、0.61%;仅2批次致倦库蚊的JEV核酸检测阳性,批阳性率、最低现场感染率分别为6.67%(2/30)、0.07%(2/2 760)。2株JEV分离株均为基因Ⅰ型,与中国浙江省和陕西省分离株亲缘关系最近。结论 调查地区2022年蚊虫标本JEV携带率较低,蚊虫中存在基因Ⅰ型JEV循环。需持续开展蚊种JEV监测,警惕乙脑流行风险。     

云南省德宏州2007年和2010年蚊虫及蚊媒病毒调查

目的 调查云南省德宏州蚊虫和蚊媒病毒分布特点。方法 2007年和2010年的7月在德宏州5个县市利用诱蚊灯采集蚊虫标本,采用C6/36和BHK-21细胞分离病毒,RT-PCR和序列分析方法鉴定病毒分离物。结果 共采集到6属29种43 634只蚊虫,其中三带喙库蚊构成比高达78.69%,中华按蚊构成比为14.77%,其他蚊种数量较少。从蚊虫中分离到6株病毒,经RT-PCR和进化分析表明,其中3株为基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒 （JEV）,均分离自三带喙库蚊;1株盖塔病毒 （GETV） 分离自三带喙库蚊; 2株淡色库蚊浓核病毒 （CppDNV） 分别分离自三带喙库蚊和迷糊按蚊。结论 三带喙库蚊是德宏州优势蚊种和蚊媒病毒主要传播媒介,当地存在基因Ⅰ型JEV、 GETV和CppDNV的流行,并与以往云南省及我国其他地区的分离株有较近亲缘关系。     

云南省东北等地区蚊虫及蚊媒病毒调查研究

目的了解滇东北等地区蚊虫及蚊传虫媒病毒分布特点,为虫媒病毒病防治提供科学依据。方法2009年在滇东北等地区的6个县采集蚊虫标本;蚊虫经分类鉴定后,用细胞培养法分离病毒,对病毒分离物进行分子生物学鉴定。结果共采集到4属（库蚊、按蚊、阿蚊、伊蚊）24种18562只蚊虫,其中三带喙库蚊、中华按蚊为主要蚊种,构成比分别为58．37％和28．45％;从蚊虫标本中分离到15株病毒,经分子生物学鉴定,其中2株（YN0911和YN0967）为基因I型流行性乙型脑炎（乙脑）病毒,均分离自三带喙库蚊;1株（YN0922）为版纳病毒,分离自中华按蚊;12株为淡色库蚊浓核病毒,其中9株分离自三带喙库蚊,3株分离自中华按蚊。结论三带喙库蚊和中华按蚊为调查地区的优势蚊种,并携带乙脯病毒、版纳病毒和淡仁．库蚊浓核病毒：滇东北地区首次分离到乙腩病毒。     

浙江省蚊虫及蚊媒传染病综合监测研究

目的通过整合蚊虫及蚊媒传染病监测方案及实施,分析综合监测的可行性,探索病媒生物及相关疾病综合监测模式。方法选择2个病媒生物监测点进行调查研究,整合蚊虫及蚊媒传染病监测方案,协调机构和人员在市及县两个层面上开展综合监测,成蚊综合监测采用诱蚊灯法,监测时间为6-10月。结果在浙江省疾病预防控制中心（CDC）成立执行办公室,综合协调开展工作,宁波市单独完成蚊类密度、季节消长和蚊媒传染病综合监测,建德市完成蚊类密度、季节消长和蚊媒传染病综合监测的现场调查工作,实验室标本检测由浙江省CDC完成,对机构协调、人员数量要求较高。2009年宁波市报告疟疾48例,发病率为0.73/10万;登革热1例,发病率为0.02/10万;流行性乙型脑炎（乙脑）18例,发病率为0.28/10万,死亡1例,病死率为5.56%。建德市无疟疾、登革热及乙脑病例报告。宁波市共捕获蚊类22108只,密度为9.60只/h;建德市共捕获蚊类945只,密度为4.92只/h。宁波市以三带喙库蚊为主,占90%以上,其次为淡色库蚊,白纹伊蚊仅占0.14%;建德市则以淡色库蚊为主,其次为中华按蚊,未捕到白纹伊蚊。宁波市检测三带喙库蚊1973只,乙脑病毒荧光PCR检测有2组阳性,最小阳性率为0.10%。检测建德市库蚊225只,采用巢式PCR检测黄病毒,结果均为阴性。结论蚊虫及蚊媒传染病综合监测是可行的。建议加强蚊虫及其传播疾病的综合监测、预警、控制对策和措施的研究工作。     

甘肃省河西走廊地区蚊媒调查

目的 了解河西走廊地区蚊媒传染病传播媒介分布情况,进一步确认河西走廊地区为无流行性乙型脑炎（乙脑）及其他蚊媒传染病地区.方法 采用灯诱法和人工小时法.灯诱法：用功夫小帅牌吸入式诱蚊灯悬挂于每个调查点离地面0.8～1.5 m处,每次开灯诱捕12h;人工小时法：采集者手持电动吸蚊器或口吸吸蚊管在人房、居民区楼道、猪圈、牛棚捕获蚊虫,捕蚊时间一般为30～40 min.结果 共采集蚊虫23 584只,通过初步鉴定,发现该地区蚊虫4属18种.在所捕获蚊虫中,数量最多的生境为畜舍,占捕获总数的76.39％,农户次之,占14.23％,居民区最少,占4.49％.淡色库蚊、刺扰伊蚊为优势蚊种,分别占捕获总数的55.87％和23.04％,几乎分布整个河西5市.未捕获到乙脑主要传播媒介三带喙库蚊,病毒检测未检出乙脑病毒,但在该地区首次发现蚊传黄病毒和辽宁病毒,且病毒阳性检出率较高.结论 河西走廊地区蚊虫种群分布较为广泛,部分水系分布较为丰富的区域种群密度较高;今后应加强该地区蚊虫孳生地清理工作;河西地区蚊虫携带病毒的研究不可懈怠.     

甘肃省河西走廊地区2011年蚊虫种类及虫媒病毒调查研究

目的调查甘肃省河西走廊地区蚊虫种类及所携带虫媒病毒分布状况。方法使用诱蚊灯于18:00至次日06:00进行蚊虫标本采集,分类鉴定后液氮保存并运送至实验室备检;通过组织培养法分离病毒,并对病毒分离物进行血清学和分子生物学鉴定;利用生物信息学技术对新分离病毒的序列进行分析,完成同源性和系统发生分析。结果 2011年8月在甘肃省河西走廊地区7个县(市)共采集到蚊虫标本3属6种24028只,其中刺扰伊蚊最多,占采集总数的32.80%(7880/24028),淡色库蚊占30.26%(7272/24028);通过细胞培养分离到1株可以引起两种细胞(BHK-21和C6/36细胞)病变的病毒分离株(GS11-155);此外在32批蚊虫标本中检测到病毒(库蚊黄病毒、盖塔病毒、辽宁病毒)基因阳性,对其中11批核苷酸序列测定和分析发现,1批为蚊传黄病毒,3批为盖塔病毒,7批为辽宁病毒。结论甘肃省河西走廊地区优势蚊种为刺扰伊蚊,且蚊虫携带多种虫媒病毒,包括蚊传黄病毒、盖塔病毒和辽宁病毒。     

湖北省部分地区2009年蚊传虫媒病毒调查

目的调查湖北省部分地区蚊传虫媒病毒种类和分布状况。方法 2009年夏季在湖北省黄冈市武穴市和咸宁市通城县采集蚊虫标本,用组织培养法分离病毒,用血清学和分子生物学方法对阳性病毒分离物进行鉴定,利用生物信息学软件对新分离病毒进行序列同源性和系统进化分析。结果采集到3属5种9424只蚊虫标本,阳性4株(HBTC0913、HBTC0917、HBTC0919和HBTC0921),经血清学和分子生物学鉴定均为版纳病毒;版纳病毒第12节段分子进化分析显示,4株新分离版纳病毒与中国北京、云南和内蒙古地区以及越南的分离株处于同一亚群,而印度尼西亚分离株处于另外一个进化群中;新分离株与其他分离株相比,第12节段编码区核苷酸同源性为87.2%～89.8%,氨基酸同源性为86.1%～90.9%。结论在湖北省分离到版纳病毒,与中国云南毒株YN6的进化关系较近。     

甘肃省蠓科昆虫研究

目的研究掌握甘肃省蠓科昆虫。方法人帐诱法、畜诱法、灯诱法和网捕法。结果研究获得甘肃省蠓科4亚科9属59种,即细蠓亚科,细蠓属13种;毛蠓亚科,毛蠓属13种;铗蠓亚科,裸蠓属2种,铗蠓属6种,蠛蠓属4种;蠓亚科,库蠓属17种,须蠓属1种,短蠓属1种和贝蠓属2种。库蠓属种类最多,细蠓属和毛蠓属次之,铗蠓属居第3位,其余5个属的种类较少;库蠓和细蠓是甘肃省吸血蠓虫的主要构成者,毛蠓和铗蠓是非吸血蠓虫的主要构成者。在不同地理区域蠓科种类的组成、分布与优势种群不同,蠓科种类不同其活动的时域不同,同一蠓种在不同地区其活动的时域亦有变化。结论初步掌握了甘肃省蠓科昆虫,为进一步研究和防治工作提供了科学依据。     

虫媒病毒及其媒介蚊虫microRNA的研究现状和展望

目前,虫媒病毒引起的严重传染病在世界范围内流行。有关虫媒病毒与媒介蚊虫间相互作用关系成为研究的热点。随着microRNA在动物、植物,甚至是病毒中的发现,使得虫媒病毒与蚊媒之间复杂的分子作用关系有了新的研究视野。本文主要综述虫媒病毒与其媒介蚊虫在microRNA水平上的相关研究进展。