红芪多糖对脑微血管内皮细胞氧化损伤保护作用的差异蛋白质研究

目的:研究红芪多糖(Hedysari Radix polysaccharides,HRP)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(Human bain microvascular endothelial cells,HBMEC)氧化损伤模型的保护作用及对其蛋白表达谱的影响。方法:采用50μg/ml ox-LDL建立HBMEC氧化损伤模型,使用红芪多糖对细胞模型进行干预,药物作用24h后,采用MTT检测细胞存活率,倒置相差显微镜观察细胞形态。以40μg/ml的红芪多糖干预HBMEC氧化损伤模型24h后,使用细胞裂解液提取细胞总蛋白并纯化。应用双向凝胶电泳分离纯化后的细胞总蛋白,考马斯亮蓝染色后扫描细胞总蛋白图谱,使用PD Quest 8.0软件分析药物组与模型组间的差异蛋白点,应用质谱技术鉴定差异明显的蛋白点。结果:与氧化损伤模型组比较,红芪多糖组(40μg/ml)细胞存活率明显升高,细胞数目明显增多,细胞形态较模型组明显改善。红芪多糖组(40μg/ml)HBMEC细胞蛋白表达谱发生明显改变,分析得出11个差异蛋白点,采用质谱方法成功鉴定了7个差异蛋白质,分别为热休克蛋白70、谷胱甘肽合成酶、网腔钙结合蛋白、26S蛋白酶调节亚基、γ-烯醇酶、40S核糖体蛋白和78k Da葡萄糖调节蛋白,其中5个蛋白高表达,2个蛋白低表达。结论:红芪多糖对ox-LDL诱导的HBMEC氧化损伤模型具有明显保护作用,其机制与调节内质网应激及能量代谢、清除自由基、抑制细胞凋亡及抗氧化应激密切相关。     

红芪总黄酮对氧化低密度脂蛋白致内皮细胞损伤的保护作用

目的研究红芪总黄酮对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导脐静脉内皮细胞损伤的保护作用.方法建立ox-LDL致脐静脉内皮细胞损伤模型,化学比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性.结果红芪总黄酮可显著降低ox-LDL损伤脐静脉内皮细胞的LDH释放,使细胞分泌的NO含量升高,提高细胞内SOD及NOS活性.结论红芪总黄酮对ox-LDL诱导脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高脐静脉内皮细胞的抗氧化能力有关.     

补气化痰方对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究补气化痰方对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤后的影响及可能的机制.方法:将经氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞分为5组:补气化痰方药物血清低、中、高剂量组,模型组和正常对照组.用MTT法观察补气化痰方药物血清对经氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞抑制作用的保护;采用west-ernblot检测法测定细胞VEGF蛋白水平探讨其可能的机制.结果:补气化痰方药物血清能减少经氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤生长的抑制,并通过上调VEGF蛋白途径达到抑制氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞的损伤.结论:补气化痰方对氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用,其可能的机制是上调VEGF蛋白表达实现.     

补气化痰方对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的抑制及凋亡保护作用

目的 研究补气化痰方对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤后的保护及可能的机制.方法 将经氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞分为5组:补气化痰方药物血清低、中、高剂量组,模型组和正常对照组.用MTT法观察补气化痰方药物血清对经氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞抑制作用的保护;采用westernblot检测法测定细胞Bax与Bcl-2蛋白水平探讨其可能的机制.结果 补气化痰方药物血清能减少经氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤生长的抑制,并通过上调Bax蛋白及下调Bcl-2蛋白途径达到抑制氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞的损伤.结论 补气化痰方对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤具有一定的保护作用.     

红芪多糖对人肺腺癌A549细胞蛋白表达图谱影响的研究

目的:研究红芪多糖(Hedysari Radix polysaccharide,HRP)对人肺腺癌A549细胞蛋白双向电泳图谱的影响。方法:以300μg/ml红芪多糖体外作用于A549细胞后提取细胞总蛋白,使用丙酮沉淀法和2-DE Cleanup Kit对蛋白进行纯化。采用双向凝胶电泳分离纯化后的细胞总蛋白,银染显色并扫描凝胶图片,使用PDQuest 8.0图像分析软件对不同处理组双向凝胶电泳图谱进行对比分析,筛选出差异蛋白点,并分析差异蛋白的理论等电点和分子量。结果:应用双向电泳方法建立了A549细胞分辨率较高和重复性较好的蛋白表达图谱。红芪多糖处理可使A549细胞2-DE图谱中35个蛋白点发生明显变化,其中24个表达上调,8个表达下调,3个仅在对照组中表达,并分析得出了35个蛋白点的理论等电点和分子量。结论:红芪多糖可使人肺腺癌蛋白表达图谱发生明显改变,应用蛋白质组学筛选出的35差异蛋白点可能是红芪多糖抑制人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的关键调控蛋白质。     

桃红四物汤对人脑微血管内皮细胞OGD损伤的保护作用及机制

目的:通过建立糖氧剥夺(OGD)诱导的人脑微血管内皮细胞(h-BMECs)损伤模型,观察桃红四物汤对细胞的保护作用及机制。方法:体外建立人脑微血管内皮细胞糖氧剥夺损伤模型,随机分为正常组、模型组、桃红四物汤高、中、低质量浓度组(0.8,0.4,0.2 g·L-1)和阳性药尼莫地平组。噻唑蓝(MTT)比色法检测h-BMECs细胞活性,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平、细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平。结果:桃红四物汤可显著提高拟缺血损伤的人脑微血管内皮细胞活性,降低LDH漏出率(P0.05,P0.01),改善细胞形态,降低MDA水平(P0.05),增强SOD活性(P0.05,P0.01)。增加内皮细胞VEGF和HIF-α蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:桃红四物汤对拟缺血损伤人脑微血管内皮细胞具有保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力,通过HIF-α途径增强VEGF表达有关,显示中药组方可发挥整体调节的治疗优势。     

通络救脑注射液对Aβ1-42诱导原代大鼠脑微血管内皮细胞氧化应激反应及细胞凋亡的影响

目的：探讨通络救脑注射液对Aβ诱导下原代大鼠脑微血管内皮细胞氧化应激反应及细胞凋亡因子Caspase-3蛋白表达的影响。方法：模型组以Aβ1-42加入内皮细胞培养基中制备阿尔茨海默病（AD）内皮细胞损伤模型,通络救脑注射液（简称TLJN）组在造模前先行加入通络救脑注射液干预。采用生化法检测各组内皮细胞中MDA含量、SOD活性,运用Western Blot法检测各组Caspase-3蛋白表达。结果：TLJN组能明显降低AD内皮细胞损伤模型中MDA含量、提高SOD活性;抑制Caspase-3蛋白表达。结论：在本实验观察范围内,通络救脑注射液对Aβ诱导下原代大鼠脑微血管内皮细胞的凋亡有抑制作用,其作用机制可能是通过提高SOD抗氧化酶活性、降低MDA含量,进而下调Caspase-3蛋白表达以抑制细胞凋亡。     

通络救脑注射液对Aβ致脑微血管内皮细胞损伤的保护作用

摘要：目的 通过观察复方通络救脑注射液及其单体成分对Aβ损伤脑微血管内皮细胞活性及其受体高度糖基化终产物（RAGE）表达的影响，探讨其对脑微血管内皮细胞的保护作用。方法 采用人脑微血管内皮细胞 (BMECs)，培养液中加入Aβ淀粉样蛋白建立脑微血管内皮细胞损伤模型，复方通络救脑注射液及其有效单体成分在不同的时间段进行干预，采用CCK-8染色法测定细胞活性，采用乳酸脱氢酶漏出量检测细胞损伤程度，免疫蛋白印迹法检测脑微血管内皮细胞RAGE 的表达。结果 复方通络救脑注射液可显著提高Aβ损伤的脑微血管内皮细胞活性，减少细胞损伤后LDH的漏出和脑微血管内皮细胞RAGE的表达，与模型组相比， 差异具有统计学意义（P<0.01），复方注射液作用明显优于两个单体成分。结论 复方通络救脑注射液可提高Aβ损伤的脑微血管内皮细胞的活性，对其具有保护作用，其机制可能与减少血管内皮细胞RAGE 的表达有关，中药复方的作用优于有效单体成分。     

基于Rho/Rock通路当归红芪多糖对H9C2细胞放射性心肌损伤的影响

目的基于Rho/Rock通路观察当归红芪多糖对H9C2细胞放射性损伤的影响,探讨其干预放射性心肌损伤作用机制。方法将细胞随机分为空白组(不干预)、模型组(2GyX线照射并予生理盐水干预)、阳性对照组(2 Gy X线照射并予阳性药干预)和中药低、中、高剂量组(2 Gy X线照射并予当归红芪多糖干预),ELISA检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的表达,RT-PCR检测各组细胞一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、Rhoa、Rock mRNA的表达,Western blot检测细胞诱导型iNOS、eNOS、Rhoa、Rock蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与空白组比较,模型组细胞SOD、GSH、eNOS蛋白及eNOS mRNA表达下调,MDA、iNOS、RhoA、Rock蛋白及iNOS、RhoA、Rock mRNA表达上调,细胞发生凋亡;与模型组比较,药物干预组细胞SOD、GSH、eNOS蛋白及eNOS mRNA表达上调,MDA、iNOS、RhoA、Rock蛋白及iNOS、RhoA、Rock mRNA表达下调,细胞凋亡减少。结论当归红芪多糖可通过抑制氧化应激、Rho/Rock通路活化、细胞凋亡等干预放射性心肌损伤。     

红芪多糖对S180细胞体内化疗增效作用的差异蛋白质研究

目的:研究红芪多糖对S180瘤细胞化疗协同增效作用的差异蛋白质。方法:以环磷酰胺和红芪多糖联合环磷酰胺治疗S180荷瘤小鼠14天后测定小鼠免疫器官指数及抑瘤率,利用双向电泳分离提取的瘤细胞总蛋白,考染显色后应用PDQuest8.0软件分析电泳图谱,找出差异表达的蛋白质。结果:与环磷酰胺(20 mg/kg)组相比,红芪多糖(200 mg/kg)联合环磷酰胺(20 mg/kg)可明显抑制小鼠S180瘤生长(P<0.05),显著减轻环磷酰胺所致免疫器官指数的下降(P<0.01);建立了背景清晰、重复性好、分辨率高的S180瘤细胞双向电泳图谱,环磷酰胺组与红芪多糖联合环磷酰胺组蛋白质点数分别为:776±22和721±16;平均匹配率分别为:91.13%和89.37%。比较分析环磷酰胺组与红芪多糖联合环磷酰胺组双向电泳图谱,筛选出差异明显的蛋白质点28个,其中8个表达上调,19个表达下调,1个仅在环磷酰胺组表达。结论:红芪多糖联合环磷酰胺可减轻其对S180荷瘤小鼠的免疫抑制作用,增强环磷酰胺对S180瘤细胞的化疗效果,其作用可能与筛选出的28个差异蛋白质点有关,对这些差异蛋白质点的鉴定将为揭示红芪多糖的化疗协同增效作用提供实验依据。     

红芪总黄酮对过氧化氢致脐静脉内皮细胞损伤的抗氧化作用

目的:研究红芪总黄酮对过氧化氢(H2O2)诱导脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:化学发光法检测红芪总黄酮对氧自由基的清除能力。建立H2O2致脐静脉内皮细胞损伤模型,化学比色法检测乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,单细胞凝胶电泳法检测对细胞DNA损伤的影响。结果:红芪总黄酮可清除氧自由基。100μmol/L H2O2诱导脐静脉内皮细胞4 h,细胞液LDH、细胞内MDA含量升高SOD活性降低,DNA损伤明显。红芪总黄酮可明显抑制MDA损伤,显著降低LDH释放及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论:红芪总黄酮对H2O2诱导脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高脐静脉内皮细胞的抗氧化能力有关。     

红芪多糖对糖尿病大鼠早期视网膜中核转录因子-κB影响随机平行对照研究

[目的]观测红芪多糖对糖尿病大鼠早期视网膜中核转录因子-κB影响。[方法]使用随机平行对照方法,60只大鼠喂养1周,称重后随机数字表法分为6组,空白对照组、模型组、羟苯磺酸钙组、红芪多糖高剂量组、红芪多糖中剂量组、红芪多糖低剂量组,10只/组。适应喂养1周后,造模大鼠均喂以高糖高脂饲料,第2周所有动物禁食不禁水12h以上,以剂量(30mg/Kg)链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),溶于0.1mol/L柠檬酸缓冲液,p H4.4,制成浓度为1%溶液,左侧下腹部注射,连续注射3d,72h后尾静脉取血测血糖(BG),BG≥16.7mmol/L为糖尿病模型诱导成功;高糖高脂饮食继续喂养。模型组:生理盐水,1次/d;羟苯磺酸钙组:多贝斯,90mg/kg,1次/d;红芪多糖高、中、低剂量组:分别灌胃红芪多糖150mg/kg、100mg/kg及50mg/kg,均1次/d。观测视网膜切片NF-κB免疫组化染色灰密度定量、体重、血糖。[结果]初始血糖、干预后血糖、灰度值模型组、羟苯磺酸钙组、红芪多糖高、中、低剂量组均大于空白对照组(P0.05,P0.01);初始血糖灰度值模型组、羟苯磺酸钙组、红芪多糖高、中、低剂量组与模型组无明显差异(P0.05);干预后血糖羟苯磺酸钙组、红芪多糖低组与模型组无明显差异(P0.05),红芪多糖低组与羟苯磺酸钙组无明显差异(P0.05);灰度值红芪多糖高组与羟苯磺酸钙组无明显差异(P0.05)。光学显微镜下观察发现,NF-κB在正常组主要表达于视网膜神经节细胞、血管内皮细胞的细胞质,表达较弱。在给药5周后,模型组大鼠视网膜上NF-κB的表达较正常组明显增加,细胞核着染成深棕黄色,在内核层和外核层呈微弱阳性表达。红芪多糖高、中、低剂量组与西药组均较模型组明显降低NF-κB蛋白的表达。[结论]红芪多糖可降低糖尿病大鼠早期视网膜NF-κB表达。     

当归补血汤超滤物抗H2O2致人脐静脉内皮细胞（ECV-304）氧化损伤的影响

目的研究当归补血汤超滤物对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilieal vein endothelial cells,HUVECs)ECV-304氧化损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法通过酶消化法对离体的人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞进行消化传代,建立过氧化氢(peroxide hydrogen,H2O2)诱导的ECV-304细胞氧化损伤模型。采用超滤技术对当归红芪合剂进行分离与纯化,以不同分子量(2万以下、5万以下、10万以下)且浓度均为15.0 g/L的当归红芪超滤膜提取物作用于氧化损伤的ECV-304细胞,黄嘌呤氧化酶法检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法检测细胞内丙二醛(malondialdeyde,MDA)活力,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析细胞周期的变化,RT-PCR检测细胞内AT1 mRNA的表达。结果经0.5mmol/L H2O2刺激后细胞活性明显降低,SOD活力明显降低,MDA活力明显提高,G0/G1期细胞的数目明显增加,S期细胞的数目明显减少,AT1 mRNA表达增加(P﹤0.05);与H2O2组相比,当归红芪超滤膜提取物可以增强H2O2诱导ECV-304细胞氧化损伤的细胞活性,增加细胞的存活率且以作用72 h为佳,提高氧化损伤的ECV-304细胞的SOD活力,降低氧化损伤的ECV-304细胞的MDA活力,促进氧化损伤的ECV-304细胞向S期转变,减少细胞内AT1 mRNA表达(P﹤0.01,P﹤0.05)。结论当归补血汤超滤物对氧化损伤ECV-304细胞的保护作用可能与其提高了抗氧化酶活性,降低了脂质过氧化物活性,促进了内皮细胞DNA合成复制及减少了细胞内AT1 mRNA的表达有关。     

红芪多糖对老年性痴呆细胞模型损伤保护作用的差异蛋白质研究

目的:研究红芪多糖对Aβ1-42诱导的AD细胞模型保护作用及差异蛋白质的影响。方法:采用Aβ1-42建立AD细胞模型,HRP作用48h后,收集细胞,提取细胞总蛋白。采用双向电泳方法建立SH-SY5Y细胞的蛋白表达谱,银染后扫描凝胶获得蛋白图谱。使用PD Quest软件分析找出模型组和HRP处理组间的差异蛋白点,计算差异蛋白的等电点和理论分子量,对差异明显的蛋白点进行质谱鉴定。采用生物信息学方法对鉴定成功的蛋白质进行蛋白-蛋白相互作用网络分析。结果:建立了SH-SY5Y神经细胞的双向电泳蛋白表达谱。差异分析结果显示,模型组与HRP处理组间有22个差异蛋白点。应用质谱方法成功鉴定了4个差异蛋白质,分别为胆碱激酶a、Rag调节蛋白复合体LAMTOR1、转录因子蛋白AP-2-δ和铁蛋白,且Rag调节蛋白复合体LAMTOR1与铁蛋白存在相互作用关系。结论:红芪多糖对AD细胞模型的保护作用与其能够调节胆碱激酶a、Rag调节蛋白复合体LAMTOR1、转录因子蛋白AP-2-delta和铁蛋白的表达密切相关。     

黑果枸杞花色苷对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

 目的 探讨黑果枸杞花色苷对体外氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)所致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用。方法 利用体外培养人脐静脉血管内皮细胞,建立了氧化低密度脂蛋白氧化损伤模型。将细胞分为6组：正常组、氧化低密度脂蛋白组、辛伐他汀组、花色苷低剂量+氧化低密度脂蛋白组,花色苷中剂量+氧化低密度脂蛋白组和花色苷高剂量+氧化低密度脂蛋白组。各剂量组经实验处理后进行细胞计数及形态观察,利用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖能力,运用流式细胞术（FCM）检测内皮细胞增殖周期及凋亡率,并对细胞代谢中的超氧化物歧化酶(SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -Px)、丙二醛（MDA）、过氧化物酶（POD）的活性进行检测。结果 中高浓度的花色苷可以有效的抑制氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞的损伤,减缓被损伤细胞的G₀/G₁比率及凋亡率,增高S期细胞比率、G₂/M 比率;同时提高细胞代谢中超氧化物歧化酶、过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化酶的活性,降低丙二醛的含量。结论 黑果枸杞花色苷对氧化低密度脂蛋白所损伤的人脐静脉内皮细胞具有保护作用,其机制可能与抗氧化作用有关。     

木贼有效部位抑制氧化低密度脂蛋白致内皮细胞凋亡及Caspase-3的表达

目的探讨木贼有效部位抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC-ECV304)凋亡的可能机制。方法体外ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤,用木贼有效部位进行干预;采用流式细胞术检测细胞凋亡率及Caspase-3蛋白;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮细胞Caspase-3mRNA表达。结果 ox-LDL可明显诱导内皮细胞凋亡,上调Caspase-3mRNA及Caspase-3蛋白表达,木贼有效部位干预后细胞凋亡率明显下降(P0.05),Caspase-3mRNA及Caspase-3蛋白表达明显下调(P0.01)。结论木贼有效部位通过对凋亡相关基因的调控最终抑制Caspase-3蛋白的表达来减少内皮细胞的凋亡。     

当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢致PC12细胞凋亡的影响

目的观察当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢(H2O2)致PC12细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法 H2O2诱导PC12细胞凋亡,构建氧化损伤神经细胞凋亡模型。实验分为正常对照组、模型组及中药低、中、高剂量组,中药各组给予不同剂量当归红芪超滤膜提取物。流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位变化,Western blot检测Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的蛋白表达。结果与模型组比较,中药各剂量组细胞凋亡率明显降低,线粒体膜电位升高,Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达均减弱,Bcl-2表达增强,Bcl-2/Bax比值升高(P0.05)。结论当归红芪超滤膜提取物具有抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡的作用。     

刺五加多糖对氧糖剥夺诱导神经元氧化损伤的保护作用

目的 探讨刺五加多糖对氧糖剥夺诱导神经元氧化损伤的保护作用.方法 培养PC12细胞,采用氧糖剥夺(OGD)及厌氧袋相结合法建立缺血诱导神经细胞继发损伤模型,电镜观察细胞形态,应用比色法测定细胞外液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、MDA含量和SOD酶活力.结果 与模型组比较,刺五加多糖干预后PC12细胞氧化损伤明显减轻,细胞SOD酶活力提高,细胞内MDA含量及LDH释放量降低.结论 刺五加多糖对OGD引起的神经元样细胞的损伤具有保护作用,其作用机制可能与刺五加多糖具有抗氧化、清除自由基的作用有关.     

补阳还五汤对Aβ诱导大鼠微血管内皮细胞凋亡保护作用

目的:研究补阳还五汤对Aβ诱导的大鼠微血管内皮细胞(PMVEC)凋亡的影响。方法:建立Aβ损伤大鼠微血管内皮细胞模型,不同浓度(0.1、1、10μg/ml)补阳还五汤干预,MTT法检测大鼠微血管内皮细胞活力;western-blot法检测大鼠微血管内皮细胞中凋亡蛋白bax和caspase9表达水平。结果:补阳还五汤在浓度(0.1、1、10μg/ml)能够抑制Aβ诱导的大鼠微血管内皮细胞bax和caspase9蛋白的表达并呈浓度依赖性。结论:补阳还五汤能够通过抑制凋亡蛋白bax和caspase9的表达而具有保护大鼠微血管内皮细胞的作用,可能成为是一种有效的抗脑血管系统疾病治疗剂。     

当归红芪超滤物对氧化损伤乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制

目的 探讨当归红芪超滤物对H_2O_2致乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用及其可能机制.方法 用高浓度的H_2O_2(400 μmol/L)在Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞上建立氧化损伤模型,用不同质量浓度的当归红芪超滤物(3.75、7.5、15 mg/mL)进行干预.在倒置显微镜下观察各实验组心肌细胞的搏动频率,用MTT法检测心肌细胞的存活率,用试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活性及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的量.RT-PCR技术检测caspase-3、hsp70基因在心肌细胞中的表达情况.结果 当归红芪超滤物显著提高氧化损伤心肌细胞的细胞活力;与损伤组比较,当归红芪超滤物各干预组心肌细胞LDH、CK、MPO、MDA量显著降低(P<0.01),SOD活性显著提高(P<0.01),caspase-3基因表达显著降低(P<0.05),hsp70基因表达显著提高(P<0.05),差异具有统计学意义;并且当归红芪超滤物的抗氧化损伤作用呈剂量依赖性.结论 当归红芪超滤物具有良好的抗氧化损伤作用,其机制可能与清除自由基、上调hsp70表达、抑制caspase-3活性有关.