管灸对面神经损伤家兔面神经核内BDNF及其受体TrkB表达的影响

目的研究管灸对面神经损伤家兔面神经核中脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体蛋白激酶B受体(Trk B)表达的影响。方法采用机械压榨法制作家兔面神经损伤模型,将家兔随机分为假手术组、模型组、管灸组、热疗组,通过免疫组化学法检测各组面神经核中BDNF及其受体TrkB的蛋白表达变化。结果家兔面神经损伤后面神经核BDNF及其受体TrkB的表达均明显下降(P0.05或P0.01),管灸组面神经核BDNF及其受体Trk B的表达均显著高于模型组(P0.05)。结论管灸疗法可显著提高面神经核中BDNF及其受体TrkB的表达,这可能对促进面神经损伤后面神经核的再生和修复有重要作用。     

管灸对面神经损伤模型家兔TrkA表达的影响

目的:探讨管灸治疗面神经损伤的机理。方法:采用机械压榨制作家兔面神经损伤模型,采免疫组化技术、原位杂交技术观察管灸对其面神核、面神经TrkA蛋白和mRNA表达的影响,并和热疗进行对比。结果:与模型组比较,管灸组各部位TrkA蛋白和mRNA表达均增加,有显著性差异(P0.05或0.01)。热疗组各部位均无明显增加。结论:管灸可显著增加各部位TrkA的表达,从而促进面神经损伤的修复和再生。     

管灸对面神经损伤模型家兔NGFmRNA表达的影响

目的:探讨管灸治疗面神经损伤的机理.方法:采用机械压榨制作家兔面神经损伤模型,采用原位杂交技术观察管灸对其面神核、面神经、面部表情肌NGFmRNA表达的影响,并和电针进行对比.结果:与模型组、电针组比较,管灸组各部位NGFmRNA积分光密度均增加,有显著性差异(P<0.05或0.01).结论:管灸可显著增加各部位NGFmRNA表达,从而促进面神经损伤的修复和再生.     

管灸对面神经损伤模型家兔Grb2、K-Ras表达的影响

目的:探讨管灸促损伤面神经修复的胞内信号转导机制。方法:建立家兔面神经压榨损伤模型,通过HE染色切片观察治疗后各组面神经组织形态改变,并运用ELISA技术检测各组面神经Grb2、K-Ras蛋白的表达。结果:①面神经组织形态改变:管灸组面神经仍可见少量空泡性变,神经纤维直径变细,髓鞘较正常变薄,但程度低于模型组和热疗组,且热疗组与模型组无明显差异;②Grb2、K-Ras蛋白表达:与模型组相比,管灸组Grb2、K-Ras蛋白表达升高,有统计学差异(P0.05);热疗组指标均无统计学差异(P0.05)。结论:管灸能上调面神经损伤家兔Grb2、K-Ras蛋白表达,增强NT-Trk信号在胞内转导的MAPK/ERK1/2途径,以促进损伤面神经的修复再生。     

管灸对面神经损伤模型家兔面神经超微结构及蛋白ERK1/2、p-ERK1/2、c-jun表达的影响

目的探讨管灸促进损伤面神经修复再生的分子机制。方法建立家兔面神经压榨损伤模型,观察管灸对家兔标记损伤段面神经超微结构及蛋白ERK1/2、p-ERK1/2、c-jun表达的影响。结果①面神经超微结构:模型组脱髓鞘较重,雪旺氏细胞内线粒体肿胀程度重;管灸组轻度脱髓鞘,雪旺氏细胞线粒体肿胀较轻;热疗组脱髓鞘病变和线粒体肿胀度介于模型组和管灸组之间。②ERK1/2蛋白表达:管灸组较模型组明显升高(P0.05);假手术组及热疗组较模型组均无明显改变(P0.05);③p-ERK1/2蛋白表达:管灸组、假手术组较模型组均明显升高(P0.01或P0.05);热疗组较模型组无明显改变(P0.05);④c-jun蛋白表达:管灸组较模型组明显升高(P0.05);假手术组及热疗组较模型组均无明显改变(P0.05)。结论面神经压榨损伤后家兔面神经ERK1/2活化水平降低,管灸能提高ERK1/2通路的活性,促进核蛋白c-jun的表达,维持损伤面神经雪旺氏细胞的存活,以促进面神经损伤的修复。     

管灸对面神经损伤模型家兔面部表情肌NGFmRNA、NT.3 mRNA表达的影响

目的：探讨管灸治疗面神经炎的机理。方法：采用机械压榨制作家兔面神经损伤模型,采用原位杂交技术观察管灸对其面部表情肌NGFmRNA、NF-3mRNA表达的影响,并和电针进行对比。结果：与模型组比较,电针组、管灸组面部表情肌中NGFmRNA、NT-3mRNA积分光密度均增加,有显著性差异（P〈0.05或0.01）;与电针组比较,管灸组面部表情肌中NGFmRNA表达增强（P〈0.01）,NT-3mRNA表达无显著性差异（P〉0.05）。结论：管灸可显著增加面部表情肌中NGFmRNA、NT-3mRNA表达,从而促进面神经损伤的修复和再生。     

电针对面神经损伤兔面神经核中GDNF、CHAT表达的影响

目的观察电针对面神经损伤兔面神经核中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、胆碱乙酰转移酶(CHAT)表达及神经元细胞形态的影响,探讨电针对面神经损伤再生修复的作用机制。方法将76只健康家兔随机分为假手术组、模型组、电针组、西药组,其中假手术组4只,其余每组24只。除假手术组外,其余组均制备面神经损伤模型。术后假手术组、模型组不给予干预;西药组造模后第1天开始给予维生素B110 mg、维生素B_1250μg加地塞米松2 mg肌肉注射,1次/d,地塞米松每7 d减半,连续4周;电针组造模后第1天开始进行电针治疗,每天连续治疗30 min,治疗5 d后休息2 d,疗程4周。术后4周镜下观察面神经损伤后面神经核中神经元细胞形态,并分别于术后1,2,3,4周免疫组化法检测各组兔面神经核中GDNF、CHAT表达情况。结果与模型组比较,电针组、西药组神经细胞轮廓结构清晰完整,肿胀、空泡数目减少,细胞数目增多。术后2,3,4周,电针组、西药组GDNF阳性表达数均明显高于模型组(P均0.05),且电针组明显高于西药组(P均0.05)。术后1,2,3,4周,模型组CHAT阳性表达数均明显低于假手术组(P均0.05),且呈先下降后上升的趋势;电针组、西药组CHAT阳性表达数随时间增加而增高,相邻两治疗阶段比较差异有统计学意义(P0.05),且电针组各时间段CHAT阳性表达数均明显高于模型组和西药组(P均0.05)。结论电针刺激有促进面神经损伤修复的作用,其机制可能与增加面神经核中GDNF、CHAT的表达有关。     

逍遥散对LPS所致大鼠神经损伤的保护作用机制

目的:探讨逍遥散对脂多糖(LPS)所致大鼠神经损伤的保护作用,探讨其机制。方法:56只SD大鼠随机分为空白组,假手术组,模型组,阿米替林组(10 mg·kg-1),氟西汀组(10 mg·kg-1),逍遥散高、低剂量组(30,15 g·kg-1),采用侧脑室注射LPS诱导建立神经损伤大鼠模型,连续预防灌胃给药14 d,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清脑源性神经营养因子(BDNF)和β-神经生长因子(β-NGF)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马和皮层部位BDNF,神经生长因子(NGF),原肌球蛋白受体激酶B(Trk B),原肌球蛋白受体激酶A(Trk A),c AMP反应元件结合蛋白(CREB),突触后密度蛋白95(PSD95),突触小泡蛋白(SYP) mRNA或蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清BDNF,β-NGF含量显著下降(P 0. 01),皮层、海马BDNF,NGF,Trk B,Trk A,CREB mRNA明显下调(P 0. 05,P 0. 01),BDNF,Trk B,CREB,磷酸化c AMP反应元件结合蛋白(p-CREB),PSD95,SYP蛋白表达水平明显下调(P0. 05,P 0. 01);与模型组比较,逍遥散高、低剂量组大鼠血清BDNF,β-NGF含量明显升高(P 0. 05,P 0. 01),皮层、海马BDNF,NGF,Trk B,Trk A,CREB mRNA表达水平明显上调(P 0. 05,P 0. 01),BDNF,Trk B,CREB,p-CREB,PSD95,SYP蛋白表达水平明显上调(P 0. 05,P 0. 01)。结论:逍遥散对侧脑室注射LPS诱导的大鼠神经损伤有一定保护作用,作用发挥与活化BDNF/NGF-TrkB/Trk A-CREB通路及上调突触蛋白表达有关。     

电针不同刺激量对急性期面神经损伤兔细胞因子信号转导抑制因子1、3蛋白表达的影响

目的观察电针对急性期面神经损伤兔细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)1、SOCS3蛋白表达的影响,确定其较佳刺激量。方法将新西兰兔面神经用特制止血钳压榨5 min,损伤长度约2.5 cm,制作面神经损伤模型。实验分为空白组、假手术组、模型组和电针弱、中、强刺激组。电针各组术后1 d予不同刺激量治疗,连续7 d,模型组术后不予任何干预。治疗结束后截取各组受损面神经,采用ABC-ELISA检测介导JAK-STAT负反馈调节SOCS1、SOCS3的蛋白表达。结果与空白组比较,模型组兔SOCS1、SOCS3蛋白表达增加(P0.01);与模型组比较,电针弱刺激组SOCS1、SOCS3蛋白表达降低(P0.01)。结论面神经损伤急性期电针弱刺激可使SOCS1、SOCS3蛋白表达趋于正常,电针治疗效应不随刺激量的增强而增加。     

益肾化浊方对阿尔茨海默病模型大鼠海马区BDNF及其受体TrkB蛋白表达的影响

目的:观察益肾化浊方对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马区脑源性神经营养因子(BDNF)及其酪氨酸蛋白激酶受体B(Trk B)蛋白表达的影响,探讨益肾化浊方治疗AD的作用途径。方法:雄性SD大鼠随机分为5组,即假手术组、AD模型组、益肾化浊方低、中、高剂量组。参照《大鼠脑立体定位图谱》,选取左侧侧脑室注射聚集态的β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35),制备AD大鼠模型。造模成功后予益肾化浊方低、中、高剂量(2.8,5.6,11.2 g·kg-1),每日灌胃1次,共灌胃4周。采用Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力,Western blot法检测海马区BDNF及其受体Trk B蛋白表达的变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期时间延长,穿越平台次数减少,海马区BDNF及其受体Trk B蛋白表达显著下降,差异均有统计学意义(P0.05);与模型组相比,益肾化浊方低、中、高剂量组大鼠逃避潜伏期时间缩短,穿越平台次数增加,海马区BDNF及其受体Trk B蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:益肾化浊方可能通过促进AD模型大鼠海马区BDNF及其受体Trk B蛋白的表达,进而改善其学习记忆功能。     

电针“足三里”、“阳陵泉”穴对坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠脊髓背角酪氨酸激酶B受体的影响

目的:观察电针治疗后,坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)大鼠行为学变化与脊髓背角酪氨酸激酶B(Trk B)受体的表达情况,探讨Trk B受体是否参与电针镇痛。方法:大鼠随机分为4组:正常组、假模组、模型组、电针组,电针组于术后7 d开始电针"足三里"、"阳陵泉"穴。各组于术前及术后3、5、7、10、12、14 d分别测量患侧足机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)的表达,术后14 d处死大鼠取L4~6脊髓段用免疫组化检测Trk B受体表达。结果:与假模组相比,CCI模型组痛阈明显降低,电针组MWT和TWL值相对于模型组有所提高(P<0.001),且术后14 d电针组较模型组L4~6脊髓背角中Trk B受体表达明显减少(P<0.05)。结论:脊髓背角Trk B受体可能参与了大鼠神经病理性疼痛的产生和维持,电针可能是通过减少大鼠脊髓中Trk B受体的表达产生镇痛作用。     

电针不同刺激量对急性期面神经损伤兔pJAK1、pSTAT3的影响

目的明确电针不同刺激量对急性期面神经损伤兔p JAK1、p STAT3的影响。方法 :将新西兰兔面神经用特制止血钳压榨5min,损伤长度约2.5cm,造成面神经损伤模型。电针组在术后1天后立即进行不同电刺激量治疗,疗程为7天,模型组术后不进行任何治疗。治疗结束后截取各组受损面神经,运用Western Blot方法检测介导JAK-STAT调节通路的p JAK1、p STAT3表达水平。结果模型组与空白组比较,p JAK1、p STAT3表达显著减少(P0.05);经治疗后,电针组p JAK1表达与模型组比较,差异无统计学意义(P0.05);电针轻刺激量治疗后,电针组p STAT3表达与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论面神经损伤急性期电针轻刺激可以使p JAK1、p STAT3表达水平趋于正常,而电针治疗效应不随刺激量的增长而增加,电针治疗需要把握"中病即止"的原则。     

穴位电针刺激对周围性面神经损伤兔面神经核中BDNF mRNA表达的影响

目的:观察穴位电针刺激对面神经损伤兔面神经核中脑源性神经营养因子基因(BDNF mRNA)表达的影响,揭示针刺促进损伤面神经再生修复的机理。方法:日本大耳白兔120只,随机分为假手术组(切开左侧面部皮肤后缝合)、模型组(造模后不给任何处置)、西药组(给予维生素B1、维生素B12、地塞米松)、传统针刺组(手针针刺“翳风”“颧”“地仓”“颊车”“四白”“阳白”穴)、电针刺激组(穴同传统针刺组),每组分为术后7、14、212、8 d 4个时间组。应用神经卡压法造成面神经损伤模型。采用伊红染色的方法光镜下观察面神经核中神经元细胞形态的改变,用原位杂交方法对面神经核BDNF mRNA表达阳性神经元进行染色,并用阳性细胞表达数定量分析。结果:穴位电针刺激后伊红染色可见神经细胞变性、坏死现象比模型组、西药组、传统针刺组明显改善,且电针刺激组兔面神经核中BDNF mRNA的表达明显多于其它4组(P<0.01),3个治疗组均有随治疗时间的延长而BDNF mRNA表达增高的趋势(P<0.01)。结论:穴位电针刺激对损伤的面神经修复有促进作用。     

面神经损伤后穴位电针刺激对神经组织中神经营养因子-3及其受体表达的影响

目的:观察穴位电针刺激对面神经再生过程中神经组织神经营养因子-3(NT-3)及其受体表达的影响。方法:日本大耳白兔面神经压榨伤后,电针刺激翳风、颧、地仓、颊车、四白、阳白、合谷穴,每天30min,2周为一疗程。设对照组。经一二三疗程治疗后,应用原位杂交及RT—PCR技术检测针刺组及对照组面神经组织中NT-3及TrkCmRNA表达水平的变化。结果:NT-3、TrkC受体表达高峰均在神经损伤后第6周;在相同时间点,针刺组NT-3、TrkCmRNA的表达明显高于对照组(P<0.05或0.01)。结论:在面神经再生过程中,穴位电针刺激能明显增强面神经组织中NT-3及TrkCmRNA的表达,这一分子水平的表现可能是穴位电针刺激促进面神经再生的机制之一。     

电针对食蟹猴前交叉韧带损伤后NT-3/TrkC信号通路的调节作用

目的观察电针对食蟹猴前交叉韧带(ACL)损伤后NT-3/Trk C信号通路的影响,探讨电针治疗ACL损伤后本体感觉减退的作用机制。方法 21只食蟹猴随机分为3组:电针干预组9只、模型对照组9只和空白对照组3只,其中对电针干预组和模型对照组进行单侧ACL损伤造模,并给予电针干预组从术后7天开始电针干预,持续时间为15 min,每天1次,共干预12周。在干预4、8、12周后,运用RT-q PCR和Western blot技术检测L2-S1脊背神经节(DRG)中NT-3、Trk C以及ACL中GAP-43的mRNA和蛋白表达水平。结果在同一时间点,与空白对照组比较,模型对照组DRG中NT-3、Trk C的mRNA、蛋白相对表达量上升,ACL中GAP-43的mRNA、蛋白相对表达量上升,差异有统计学意义(P0.05);与模型对照组比较,电针干预组DRG中NT-3、Trk C的mRNA、蛋白相对表达量下降,ACL中GAP-43的mRNA、蛋白相对表达量上升,差异有统计学意义(P0.05)。模型对照组NT-3、Trk C和GAP-43的mRNA和蛋白表达量随时间的增加而逐渐下降,电针干预组NT-3、Trk C和GAP-43的mRNA和蛋白表达量随时间的增加而逐渐上升,均差异有统计学意义(P0.05)。结论电针能够通过激活NT-3/Trk C信号通路,提升DRG中NT-3、Trk C和局部GAP-43的表达量,在ACL本体感觉的康复中发挥重要的作用。     

急性期电针对面神经损伤模型兔JAK1-STAT3信号通路的影响

目的:探讨急性期电针对面神经损伤兔JAK1-STAT3信号通路的影响,方法:将80～85日龄日本大耳白兔面神经用特制止血钳压榨5min,损伤长度约2cm,造成面神经损伤模型,电针组在术后1天后立即进行治疗,连续治疗5天,模型组术后不进行任何治疗。治疗结束后截取各组受损面神经,采用Western blot方法检测JAK1、STAT3蛋白的表达水平。结果:空白组JAK1、STAT3蛋白水平有少量表达,模型组与空白组比较,表达显著增加(P<0.01)。治疗5天后电针组JAK1、STAT3蛋白水平表达趋于正常,显著低于模型组(P<0.01)。结论:急性期电针可以通过激活JAK1-STAT3信号通路促进面神经损伤的修复。     

基于雌激素受体通路探讨青娥丸对CUMS大鼠的抗抑郁机制

目的:研究青娥丸对慢性温和不可预知应激模型(CUMS)大鼠的抗抑郁效果,及其对雌激素受体及相关信号通路的调控作用,探讨青娥丸的抗抑郁机制。方法:54只SD大鼠建立CUMS抑郁大鼠模型,实验设为正常组、模型组、草酸依他普伦组(6.3 mg·kg^-1)及青娥丸低、中、高剂量组(1.71,5.13,15.39 g·kg^-1)。CUMS造模4周后给予各组相应药物治疗2周,采用行为学[糖水消耗实验(SPT),强迫游泳实验(FST),旷场实验(OFT)]评价大鼠抑郁状态;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测雌激素受体α(ERα),雌激素受体β(ERβ),脑源性神经营养因子(BDNF)及酪氨酸激酶受体B(Trk B)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠的糖水消耗率及旷场得分均下降(P<0.05,P<0.01),游泳不动时间显著延长(P<0.01),同时ERα,ERβ,BDNF和Trk B的蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠的行为学表现得到改善,糖水消耗率及旷场得分增加(P<0.05,P<0.01),游泳不动时间减少(P<0.05),同时ERα,ERβ,BDNF和Trk B蛋白的表达明显上调(P<0.05,P<0.01),其中青娥丸中剂量组的调节作用更为显著。结论:青娥丸可改善CUMS模型大鼠的抑郁样行为,其机制可能与上调ERα,ERβ的表达,激活雌激素受体介导的ERβ/BDNF/Trk B通路起到神经保护作用有关。     

电针对急性束缚性应激大鼠海马组织BDNF/ TrkB表达的影响

目的观察电针对急性束缚性应激大鼠海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸B(Trk B)表达的影响,并探讨电针对急性应激的调节作用。方法将24只SD大鼠随机分成正常组、模型组、假电针组、电针组,每组6只。模型组:采用急性束缚2 h制备急性束缚性应激模型;假电针组:造模后给予针刺大鼠双侧足三里和三阴交30 min,但不予电流刺激,其余同模型组;电针组:造模后给予电针刺激大鼠双侧足三里和三阴交(2/15 Hz,2 m A,30 min),其余同模型组;正常组不作任何处理。采用实时荧光定量PCR检测大鼠海马组织中BDNF/Trk B mRNA表达水平,采用Western bolt技术检测大鼠海马组织中BDNF/Trk B蛋白表达水平,采用ELISA法检测大鼠血浆中皮质酮(CORT)和促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量。结果造模前后各组血浆中CORT和ACTH的含量比较,差异有统计学意义(P0.05);与正常组比较,模型组血浆中ACTH和CORT含量明显上升(P0.05);与模型组和假电针组比较,电针组造模后30 min血浆中ACTH和CORT含量明显下降(P0.05);与正常组比较,模型组海马组织BDNF和Trk B mRNA表达水平明显下降(P0.05);与模型组和假电针组比较,针刺组海马组织BDNF和Trk B mRNA表达水平明显上升(P0.05);与正常组比较,模型组海马组织BDNF和Trk B蛋白表达水平明显下降(P0.05);与模型组和假电针组比较,电针组海马组织Trk B蛋白表达水平明显上升(P0.05)。结论电针足三里可以缓解急性应激所导致的损害,其可能的机制是电针可以维持海马组织BDNF和Trk B的表达水平。     

加味四逆散对束缚制动心理应激大鼠HPA轴调节作用的影响

目的观察加味四逆散对束缚制动所致慢性心理应激大鼠HPA轴调节作用的影响及其胸腺免疫抑制的途径.方法大鼠随机分为正常对照组(C组)、模型组(M组)、加味四逆散组(C1组)、人参皂苷组(C2组).采用放射免疫方法检测大鼠下丘脑CRH、血浆ACTH、CORT及胸腺细胞糖皮质激素受体的数目与核转移率.结果与C组相比,M组下丘脑CRH、血浆ACTH、CORT显著增高(P＜0.01),而C1、C2组大鼠下丘脑CRH、血浆ACTH与CORT含量显著降低(P＜0.05或P＜0.01).M组胸腺糖皮质激素受体的核转移率显著高于C组(P＜0.01),而C1、C2组的核转移率均显著低于M组,且C1组各项检测数据与C组比较无统计学差异.结论加味四逆散有效参与了心理应激大鼠HPA轴的调节,并显著减轻糖皮质激素对胸腺的抑制作用,其作用途径与HPA轴糖皮质激素受体的介导密切相关.     

黄连对白假丝酵母菌性阴道炎家兔阴道组织中TGF-β1表达的影响及临床意义

目的:探讨黄连对家兔阴道组织中免疫状态的影响。方法:将雌激素化家兔随机分成黄连治疗组(A组)、克霉唑治疗组组(B组)、生理盐水组(C组),同时设未雌激素化未作任何处理的空白对照组(D组),除D组外在接种后第3、6、11天动态观察各组家兔阴道灌洗液中白假丝酵母菌菌丝生长情况,并在不同时间点处死家兔,摘取阴道组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测阴道组织中TGF-β1的表达变化。结果:接种后,A、B、C 3组阴道灌洗液均有菌丝及芽管形成;用药后,A、B组未见菌丝及芽管,仅见散在孢子,C组见大量菌丝生长、芽管形成;雌激素化后A、B、C三组阴道组织中TGF-β1表达水平均较D组明显升高(均P0.05),但三组间无明显差异(均P0.05)。用药后A组TGF-β1表达水平较B组、C组显著下降,差异有统计学意义(均P0.01)。结论:黄连既能抑制白假丝酵母菌菌丝生长,又能下调阴道组织中TGF-β1的表达,改善阴道局部的免疫状态,可能是抑制白假丝酵母菌病发生及复发的重要原因,有望成为一种新的治疗复发性白假丝酵母菌病的靶向药物。