参芪复方对糖尿病大血管病变GK大鼠PI3-K/Akt信号通路的影响

目的探讨参芪复方防治糖尿病大血管病变的作用机制。方法以Wistar大鼠18只作为空白组,73只GK大鼠随机分为4组:GK组18只、模型组19只、阿托伐他汀组18只、参芪复方组18只。模型组、阿托伐他汀组、参芪复方组给予一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME0.1mg/(ml.d),加入饮用水中进行糖尿病大血管病变造模,造模同时开始给药。35天后观测主动脉形态,检测血清C反应蛋白(CRP)含量和腹主动脉PI3-KP85a、AktmRNA表达量变化情况。结果参芪复方中药可减轻模型大鼠动脉粥样硬化的病理改变程度,降低血清CRP水平(P<0.01);参芪复方组PI3-KP85amRNA表达水平低于模型组,但无统计学意义;与模型组比较,参芪复方组能明显降低腹主动脉血管壁AktmRNA表达水平(P<0.01)。结论参芪复方可有效防治糖尿病大血管病变的发生发展,其机制可能与抑制糖尿病GK大鼠主动脉血管壁AktmRNA表达量,抑制PI3-K/Akt信号通路有关。     

参芪复方调控GK大鼠大血管病变PTEN/PI3K通路的实验研究

目的探讨参芪复方对Goto-Kakizaki(GK)大鼠2型糖尿病大血管病变的PTEN/PI3K通路与血管新生的影响及作用机制。方法选择血糖≥11.1mmol/L的GK大鼠随机分为GK组、模型组、西药[阿托伐他汀1.6mg/(kg·d)]组、中药[参芪复方1.44g/(kg·d)]组,另设正常Wistar对照组。模型、西药、中药组每天给予Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)0.1mg/mL,加入饮用水中进行造模。Wistar组喂饲普通饲料,其余各组喂饲高脂饲料,时间为35天。造模同时开始给予相应受试药物,周期35天。实验结束时,腹主动脉采血,冰上取主动脉;检测各组血糖、血脂水平,HE染色对腹主动脉进行形态学观察,实时荧光定量PCR技术检测主动脉PTENmRNA、PI3Kp85mRNA的表达水平。结果参芪复方能改善GK大鼠一般状态、糖脂代谢及腹主动脉形态学变化。大鼠主动脉PTENmRNA表达中药组(1.10±0.48)较GK组(0.63±0.16)、模型组(0.17±0.07)均显著升高(均P0.01),与西药组(1.11±0.46)比较,差异无统计学意义(P0.05);大鼠主动脉PI3Kp85mRNA表达中药组(0.19±0.05)较GK组(1.38±0.43)降低(P0.01),分别与模型组(0.33±0.09)、西药组(0.11±0.06)比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论参芪复方能增加主动脉PTENmRNA表达,抑制主动脉PI3Kp85mRNA表达,可能是参芪复方抑制血管新生、防治糖尿病大血管病变的部分作用机制。     

参芪复方对GK大鼠2型糖尿病大血管病变内皮保护作用的实验研究

目的:探讨参芪复方对GK大鼠2型糖尿病大血管病变的内皮保护作用与机制。方法:5月龄雄性SPF级GK大鼠按血糖水平随机分为GK空白组、模型组、西药阿托伐他汀组、中药参芪复方组,另设正常Wistar对照组。模型、西药、中药组给予L-NAME0.1mg·mL-1·d-1,加入饮用水中进行造模。Wistar组喂饲普通饲料,其余各组喂饲高脂饲料时间为35天。造模同时开始给予相应受试药物,周期35天。实验结束时,腹主动脉采血,冰上取主动脉。HE染色对腹主动脉进行形态学观察,双抗体夹心ABC-ELISA法测定主动脉VEGF含量,实时荧光定量PCR技术检测主动脉ICAM-1mRNA的表达水平,western blot法检测大鼠主动脉ICAM-1蛋白表达。结果:参芪复方能显著改善GK大鼠腹主动脉形态学变化。参芪复方组大鼠的主动脉VEGF含量、主动脉ICAM-1mRNA及ICAM-1蛋白表达较模型组均显著降低(P<0.05)。结论:降低主动脉VEGF含量,抑制主动脉ICAM-1mRNA及蛋白表达可能是参芪复方保护血管内皮功能、防治DM大血管病变的部分作用机制。     

参芪复方对GK大鼠2型糖尿病大血管病变氧化应激的影响

目的:观察参芪复方对GK大鼠2型糖尿病大血管病变氧化应激的影响。方法:采用在GK大鼠饮水中添加Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)0.1mg.mL-1.d-1联合高脂饲料喂饲的方法复制2型糖尿病大血管病变模型。GK大鼠随机分成GK空白组、模型组、阿托伐他丁组、参芪复方组,另设Wistar大鼠为正常对照组。造模同时给予相应药物,周期35d。实验结束后测定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性水平;RT-PCR法测定主动脉还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶亚基p22phox mRNA及p47phox mRNA表达。结果:参芪复方组GK大鼠血清SOD、GSH-Px活性较模型组升高(P0.01,P0.05),阿托伐他汀和参芪复方均能降低主动脉p47phox mRNA、p22phox mRNA的表达水平(P0.05)。结论:参芪复方可提高糖尿病GK大鼠血清SOD和GSH-Px活性,下调主动脉p47phox mRNA、p22phox mRNA表达,可能因此减轻糖尿病大血管病变机体的氧化应激水平,这可能是参芪复方治疗T2DM大血管病变的机制之一。     

参芪复方对自发性糖尿病大鼠血管内皮保护的作用机制

目的:观察参芪复方对自发性糖尿病(GK)大鼠2型糖尿病(T2DM)大血管病变血管内皮保护的影响。方法:将血糖11.1 mmol/L以上的44只大鼠随机分为模型组、雷米普利组、参芪复方低剂量组、参芪复方高剂量组。4组GK大鼠腹腔注射N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)造模,高脂饮食14天。正常对照组给生理盐水。造模后给受试药物28天。用ELISA法测细胞间黏附分子-1(ICAM-1),放免法测血浆内皮素-1(ET-1),比色法测一氧化氮合酶(NOS),硝酸还原酶法测一氧化氮(NO),实时定量PCR法测胸主动脉ICAM-1mRNA表达。结果:参芪复方组的血清NO、NOS较模型组明显升高,ET-1明显降低(P<0.01),胸主动脉I-CAM-1 mRNA的表达显著低于模型组(P<0.01),血清NO与血浆ET-1的相关系数r=-0.90,P<0.01。结论:参芪复方能下调GK大鼠内皮细胞损伤的ICAM-1 mRNA的表达,抑制ICAM-1的生成,调节NO-ET系统,可能是参芪复方治疗T2MD大血管病变的机制之一。     

基于“脾胰同源”应用养阴益气活血法减少血糖波动干预糖尿病大血管病变的研究

目的探讨基于"脾胰同源"应用养阴益气活血法观察参芪复方对糖尿病血糖波动的影响。方法建立由高脂饲料喂养的糖尿病大血管并发症大鼠模型,实验分为空白组,模型组,参芪复方组,西药西格列汀组,各组灌胃8周。实验期间观察动物一般状况,在灌胃的第4周每周1次测定1日内5个时间点的血糖情况,并计算MBG、SDBG、LABG值。灌胃8周后处死GK大鼠,检测各组血脂水平、CRP、血清胰岛素、血清胰高血糖素、血清GLP-1,对腹主动脉及胰腺组织进行HE染色后进行病理形态学观察。结果参芪组一般状况优于模型组,血糖波动方面,每日平均血糖标准差(SDBG)和最大血糖波动幅度(LAGE)值优于模型组。甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)以及C反应蛋白(CRP)较模型组降低,但与西药组无统计学意义。胰岛素(INS)与胰高血糖素(GC)与模型组相比,无统计学意义;而GLP-1较模型组有显著的差异(P<0.01)。病理方面,参芪组腹主动脉和胰腺切片优于模型组和西药组。结论应用参芪复方可以改善糖尿病大血管病变GK大鼠的一般状态,提高GLP-1的浓度,控制血糖的波动幅度;且可以改善脂代谢紊乱,降低CRP,减轻模型GK大鼠血管内皮损伤,延缓糖尿病大血管病变的进展。     

参芪复方对GK大鼠大血管病变内皮细胞凋亡影响的实验研究

目的 观察参芪复方对GK大鼠大血管病变血管内皮细胞凋亡的影响.方法 设GK组、模型组、阿托伐他汀组、参芪复方组及Wistar正常对照组,各组大鼠灌胃及喂饲相应药物或饲料35 d.原位末端标记Tunel法观察内皮细胞平均荧光强度,进行内皮细胞凋亡程度评价,免疫组组织化学染色(SP法)测定caspase-3阳性物质积分光密度情况.结果 阿托伐他汀组、参芪复方组内皮细胞平均荧光强度、内皮细胞凋亡程度、caspase-3积分光密度均低于模型组(P＜0.05或P＜0.01),阿托伐他汀组、参芪复方组间比较无差异.结论 抑制主动脉血管内皮细胞凋亡及caspase-3表达可能是参芪复方防治糖尿病大血管早期病变的机制之一.     

参芪复方对GK大鼠2型糖尿病大血管病变CD36mRNA及OX—LDL的影响

目的观察参芪复方对GK大鼠2型糖尿病大血管病变胸主动脉CD36 mRNA表达及血清ox-LDL的影响。方法SPF级GK大鼠(自发性糖尿病大鼠)44只及Wistar大鼠11只按血糖水平随机分为正常对照组、模型组、雷米普利组、参芪复方低剂量组、参芪复方高剂量组。4组GK大鼠组造模:10 mg.kg-1.d-1腹腔注射N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME),同时给高脂饮食,连续14 d造模。正常对照组给生理盐水。2周后开始给药,各组分别给相应受试药物28天。用ELISA法测ox-LDL,用实时定量PCR法测胸主动脉CD-36 mRNA表达。结果参芪复方高、低剂量组的血清ox-LDL含量较模型组明显降低(P<0.05),胸主动脉CD36 mRNA的表达显著低于模型组组(P<0.01),血清ox-LDL含量与胸主动脉CD36 mRNA的C t值进行相关性分析,相关系数r=-0.60,P<0.01。结论以益气养阴、清热生津、活血化瘀为治则的参芪复方能明显下调GK大鼠内皮细胞损伤的CD36 mRNA的表达,抑制CD36的生成,可以阻断CD36对ox-LDL的摄取,可能是参芪复方治疗T2DM大血管病变的机制之一。     

参芪复方对糖尿病大鼠血管PGC-1 mRNA的影响

目的:观察参芪复方对糖尿病GK大鼠血管内质网调节因子转录辅助活化因子mRNA(PGC~(-1) mRNA)的影响。方法:取5月龄雄性SPF级GK大鼠55只,随机分为空白组14只、模型组13只、中药组14只和西药组14只,有1只Wistar大鼠血糖6.7 mmol·L~(-1)予以剔除,把剩余的14只纳入到正常组。正常组、空白组及模型组大鼠灌服生理盐水5 m L·(kg·d)~(-1),每天1次,连续给药35 d;西药组大鼠灌服阿托伐他汀钙混悬液1.6 mg·(kg·d)~(-1),每天1次,连续给药35 d;中药组大鼠灌服参芪复方混悬液1.44 g·(kg·d)~(-1),每天1次,连续给药35 d。取大鼠腹主动脉,PCR技术检测血管组织PGC~(-1) mRNA。结果:与各组大鼠比较,中药组大鼠血管PGC~(-1) mRNA明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:参芪复方可以调节糖尿病大鼠血管内质网PGC~(-1) mRNA水平。     

参芪复方对GK大鼠主动脉血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达的影响

目的 观察参芪复方对GK（Goto-Kakizaki）大鼠大血管病变主动脉血管紧张素Ⅱ1型受体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R） mRNA表达的影响。方法 67只GK大鼠随机分为GK组（18只）、模型组（16只）、阿托伐他汀组（17只）及参芪复方组（16只）,另设正常Wistar对照组（18只）。以L-NAME 0.10 mg/（mL·d）加入大鼠饮用水中复制糖尿病大血管病变模型。除正常Wistar对照组外,其他4组均喂饲高脂饲料。阿托伐他汀组及参芪复方组分别按1.60 mg/（kg·d）、1.44 g/（kg·d）灌胃相应药物,均每天1次,连续35天。采用葡萄糖氧化酶法每周测定血糖1次;给药5周后,夹心酶联免疫吸附法测定甘油三酯（TG）及总胆固醇（TC）水平,放射免疫法检测血清血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）水平,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测主动脉AT1R mRNA表达。结果 给药4周末阿托伐他汀组和参芪复方组血糖水平均较本组给药前明显降低（P<0.05）,且参芪复方组明显低于模型组同期（P<0.05）。模型组TC、TG、血清AngⅡ及主动脉AT1R mRNA水平均明显高于正常Wistar对照组（P<0.01）。给药5周后,阿托伐他汀组和参芪复方组TC、TG、AngⅡ及AT1R mRNA水平明显低于模型组（P<0.01,P<0.05）。阿托伐他汀组AT1R mRNA明显低于参芪复方组（P<0.05）。结论 参芪复方可降低GK大鼠早期大血管病变模型的血糖、血脂,减少血清AngⅡ含量及主动脉AT1R mRNA表达。AT1R可能是参芪复方治疗糖尿病大血管病变的有效靶点之一。     

参芪复方中活血组分早期应用调控KKAy小鼠糖尿病大血管病变内质网应激相关基因的实验研究

目的通过基因芯片观察参芪复方中活血组分早期应用对KKAy小鼠主动脉内质网应激的调控,探讨早期应用活血法对糖尿病大血管病变的作用机制,为早期使用活血法防治糖尿病大血管病变提供理论依据及治疗新靶点。方法随机血糖2次≥13.9mmol/L的7～8周龄SPF级雄性KKAy小鼠50只,随机分为空白组(n=10);参芪复方组(简称复方组,n=10);活血组(n=10);阿托伐他汀组(简称他汀组,n=10);模型组(n=10)。适应性饲养1周后,除空白组以外,其他各组每日予以一氧化氮合成酶抑制剂—L-NAME[0.2mg/(ml·d)],加入饮用水中,同时给予高脂饲料连续造模5周,建立糖尿病动脉粥样硬化模型。在造模的同时给予药物治疗,空白组、模型组均按10ml/(kg·d)灌服生理盐水,复方组14.4g/(kg·d)、活血组按2.7g/(kg·d)灌服浸膏,他汀组按3.2mg/(kg·d)灌服阿托伐他汀悬液。实验期间观察各组小鼠的一般状况、检测造模前后随机血糖,检测血脂及高敏C反应蛋白,干预后第5周末处死小鼠,取出腹主动脉做内质网应激相关基因筛选。结果复方组与活血组一般状况优于模型组,活血组降糖效果不明显,活血组降低小鼠血清TC、TG、LDL—C水平、hs—CRP水平,升高小鼠血清HDL—C水平。基因芯片筛选后显示,通过模型组VS空白组与活血组VS模型组比较Hspa5、Casp12在模型组VS空白组比较中表达上调,经活血组分药物治疗后Bc12/XIAP在模型组VS空白组比较中表达下调。结论参芪复方活血组分可能直接通过缓解ERS,调控主动脉内质网UPR通路及细胞凋亡通路,影响炎症因子及ERS相关基因的表达,促进细胞生存保护大血管;同时,也可能通过调节内质网应激从而改善糖、脂代谢来防治糖尿病大血管病变的发生、发展。     

参芪复方对糖尿病大血管病变大鼠胸主动脉差异基因表达的影响

目的探讨参芪复方防治糖尿病大血管病变的可能分子机制。方法 160只自发性2型糖尿病GK大鼠给予高脂饲料喂养12周建立糖尿病大血管病变模型,随机分成模型组、西药组、参高组、参中组、参低组,每组32只。另设32只Wistar大鼠为空白组。造模后西药组给予二甲双胍片0.1 g/(kg·d)灌胃,参高、中、低组分别给予参芪复方2.88、1.44、0.72 g/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予生理盐水5 ml/(kg·d)灌胃,各组均灌胃16周。分别在给药前及给药第8、16周时检测空腹血糖;第8、16周时采用Masson染色观察胸主动脉病理形态,计算胶原纤维/血管壁面积(PVCA/LA);16周时进行差异基因筛选。结果与空白组同时间比较,模型组在给药前及给药8、16周时大鼠空腹血糖升高,第8、16周时PVCA/LA明显升高(P0.05或P0.01);第16周时西药组和参高、中、低组大鼠空腹血糖低于同时间模型组,PVCA/LA均显著下降(P0.05或P0.01)。参中组与模型组、模型组与空白组共同存在的显著性差异基因共15个,其中与糖尿病血管病变有关的基因为Elavl1、Lama4,且参中组Elavl1、Lama4基因较模型组下调。结论参芪复方防治糖尿病大血管病变作用机理可能与下调胸主动脉Elavl1、Lama4基因表达,从而抑制血管新生,减少胶原纤维产生有关。     

黄地安消胶囊调控PI3K/Akt通路改善自发性2型糖尿病大鼠血管病变损伤

目的:探讨黄地安消胶囊调控PI3K/Akt通路改善自发性2型糖尿病大鼠血管病变损伤的作用机制。方法:选取符合2型糖尿病大鼠模型的GK大鼠随机分为模型组、参芪降糖1. 08g/kg组、二甲双胍0. 72g/kg组、黄地安消胶囊12. 0、6. 0、3. 0g/kg组,另设Wistar大鼠为正常组,每组10只。通过在GK大鼠的饮用水中加入0. 1mg/ml Nω-精氨酸甲酯(L-NAME)联合高脂饲料喂养的方法复制2型糖尿病大血管病变的模型。造模同时开始给药,每日1次,连续6周。实验结束后,HE、Masson、Verhoeff染色法观察腹主动脉组织病理学损伤程度;免疫吸附法测定大鼠腹主动脉ET-1、HIF-1α和VEGF含量;免疫组织化学染色法观察腹主动脉I型胶原(Collagen I)、III型胶原(Collagen III)分布情况; Western blot技术检测大鼠腹主动脉内的TRIB3、PTEN、PI3K、Akt、p-PI3K、pAkt、HIF-1α、VEGF的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠腹主动脉中膜的厚度、胶原含量增加,弹力纤维减少,病理损伤程度明显增加,ET-1、HIF-1α、VEGF、Collagen I和Collagen III水平以及PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、HIF-1α、VEGF蛋白表达显著增加,PTEN、TRIB3蛋白表达明显降低;与模型组比较,黄地安消胶囊不仅可改善GK大鼠腹主动脉组织病理学损伤程度,明显降低ET-1、HIF-1α、VEGF、Collagen I和Collagen III水平以及PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平,还可显著升高PTEN、TRIB3蛋白表达水平。结论:黄地安消胶囊能够改善自发性2型糖尿病大鼠血管病变损伤,其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路、抑制腹主动脉胶原蛋白的沉积有关。     

参芪复方对糖尿病大血管病变KK-A~y小鼠主动脉基因表达影响的拆方研究

目的:本研究旨在通过全基因组表达谱芯片研究参芪复方及其拆方组分中药对糖尿病大血管病变KKA~y小鼠主动脉的作用,以分析参芪复方配伍的合理性和科学性。方法:8周龄SPF级雄性自发性2型糖尿病KKA~y小鼠60只,随机分为模型组、参芪复方组、益气养阴组、活血组。予高脂饲料及添加L-NAME的纯净水连续饲养8周,建立糖尿病大血管病变模型。造模后分别予生理盐水、参芪复方全方、益气养阴组分和活血组分中药对各组进行灌胃干预,疗程8周。干预后第8周末处死全部动物,取腹主动脉做HE染色及全表达谱芯片。结果:第8周末,参芪复方组动物主动脉病理损伤较模型组明显减轻,益气养阴组和活血组动物组织病变程度较模型组轻,但较参芪复方组为重。差异基因分析显示,参芪复方可能通过调节膜偶联蛋白在膜泡运输中的相互作用、不饱和脂肪酸的合成、MAPK信号通路和花生四烯酸的代谢等信号通路,调节了糖脂代谢、细胞凋亡、分化、增殖及炎症反应,从而改善糖尿病大血管病变,对整体的调节作用优于益气养阴组及活血组作用之和。结论:参芪复方对糖尿病大血管病变KKA~y小鼠主动脉的基因表达有着广泛的正面调节作用,其疗效依靠药物之间的合理配伍、协同增效,共同达到改善糖尿病大血管病变的作用。     

复方七芍降压片保护自发性高血压大鼠血管内皮损伤的作用研究

目的探讨复方七芍降压片保护自发性高血压大鼠(SHR)血管内皮损伤的作用机制。方法将30只SHR大鼠根据体质量按随机数字表法分为模型组、复方七芍降压片组和厄贝沙坦片组,每组各10只。另取10只Wistar-kyoto(WKY)大鼠为正常组;给药6周后,采用ELISA检测血清中生长素(Ghrelin)、一氧化氮合酶(NOS)和内皮素-1(ET-1)的含量变化,RT-PCR测定胸主动脉Ghrelin受体(GHSR)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的m RNA表达。结果模型组血清Grelin、NOS含量和胸主动脉GHSR、e NOS m RNA表达降低,血清ET-1含量升高,与正常组比较差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。复方七芍降压片组和厄贝沙坦组上述指标均较模型组有不同程度的改善(P0.05或P0.01),且复方七芍降压片组对血清Ghrelin、NOS、ET-1含量和胸主动脉e NOS m RNA表达的影响优于厄贝沙坦组(P0.05)。结论复方七芍降压片可能通过调节Ghrelin、NO、ET-1含量及GHSR、NOS的基因表达而起保护SHR大鼠血管内皮损伤的作用。     

糖尿病大血管病变“气阴两虚”态模型的建立

目的:建立糖尿病大血管病变"气阴两虚"态模型。方法:60只雄性GK大鼠(随机血糖11.1 mmol·L~(-1)),按随机数字表法分为GK组、模型组、中药组各20只,另设正常Wistar大鼠20只为正常组。正常组、GK组喂饲普通饲料,模型组和中药组喂饲高脂饲料,造模同时中药组给予益气养阴中药治疗。5周后检测各组大鼠糖脂代谢、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血管内皮细胞凋亡和Caspase-3表达等指标,光镜下观测大血管组织病理。结果:与正常组和GK组比较,模型组大鼠血糖、TC和TG、胰岛素抵抗、大血管内皮细胞凋亡和腹主动脉病理比较差异有统计学意义,与模型组比较中药组所有指标均有显著改善。结论:通过GK大鼠喂养高脂饲料的方法可制备糖尿病大血管病变"气阴两虚"态动物模型。     

养阴益气活血法对糖尿病大血管病变KK-Ay小鼠Epb 4.1基因超甲基化的抑制作用

目的探讨糖尿病大血管病变KK-Ay小鼠细胞膜骨架成分带4.1蛋白Epb4.1基因的表观遗传学变化,及使用中药(参芪复方)、西药(二甲双胍)分别干预后该基因甲基化修饰的改变,从而摸索Epb 4.1基因与糖尿病大血管病变发生发展之间的关联。方法 8周龄SPF级雄性自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠20只,随机分为空白组、模型组、参芪复方组、二甲双胍组。高脂饲料连续饲养8周,建立糖尿病大血管病变模型。造模后与中药参芪复方及西药二甲双胍分别干预参芪复方组和二甲双胍组,疗程均为6周。监测动物血糖、体重。第14周末处死全部动物,取腹主动脉做HE染色及TUNEL细胞凋亡检测;每组随机抽取1只小鼠胸主动脉做甲基化免疫共沉淀检测。结果第14周末,模型组小鼠血糖、体重及内皮细胞凋亡率显著高于空白组(P0.01);HE染色可见胸主动脉血管内膜不光滑,内皮细胞肿胀,炎细胞浸润,内皮细胞轻度脱落。参芪复方组小鼠血糖、体重、内皮细胞凋亡率均较模型组明显降低(P0.01),与二甲双胍组之间无明显差异(P0.05)。模型组、参芪复方组、二甲双胍组的甲基化程度均高于空白组;其中模型组的甲基化程度又高于参芪复方组和二甲双胍组;而参芪复方组的甲基化程度低于二甲双胍组。其中参芪复方降低甲基化修饰的基因片段发生于更为关键的区域(CGI、CGI shore、TTR),而二甲双胍组则发生于内含子区域。各组间甲基化差异比较的P值均小于等于0.001。结论糖尿病大血管病变动物血管Epb 4.1基因的超甲基化程度与血管病变的严重程度呈正比。益气养阴活血法(参芪复方)对糖尿病大血管病变动物的降糖、减重作用与二甲双胍基本相当,对血管的保护作用在组织水平上与二甲双胍不相上下,而在基因水平上则较二甲双胍具有更好的降低Epb 4.1基因关键位点超甲基化修饰的作用。     

基于表达谱芯片研究参芪复方对糖尿病大血管病变大鼠血管内皮生长的双向调节作用

目的:应用表达谱芯片技术研究参芪复方改善糖尿病大血管病变大鼠主动脉病理形态的分子机制,探索中医药修复血管生长与血管修剪动态平衡的基因靶点,为中医药防治糖尿病大血管并发症的研究拓宽思路。方法:将50只GK大鼠随机分为5组:模型组(M)、格华止组(G)、参芪复方高剂量组(SH)、参芪复方中剂量组(SM)、参芪复方低剂量组(SL)。连续12周以高脂饲料喂养,建立糖尿病大血管病变模型。另设正常Wistar大鼠10只,作为空白组(C),予普通饲料喂养,平行对照。造模12周后,SH、SM、SL组分别予高、中、低剂量参芪复方浸膏灌胃,G组予格华止混悬液灌胃,C、M组灌服生理盐水。干预16周后处死,HE染色观察各组动物主动脉病理形态学,TUNEL染色观察血管内皮细胞凋亡情况,应用Affymetrix IVT表达谱芯片对主动脉组织进行检测,将差异基因进行KEGG Passway富集,进一步分析其生物学意义。结果:干预16周后,主动脉形态病理改变的程度:M SL G SM SH C;血管内皮细胞凋亡程度:M SL SM G SH C;全基因组表达谱检测发现,M组与C组比较,mRNA表达量普遍减低; G、SH、SM组mRNA表达较M组显著升高,其中SH G。各组间差异基因KEGG富集所涉及的信号通路主要与激素分泌、心血管疾病、免疫调节、细胞迁移、黏附、增殖、分化等分子功能相关。通过KEGG富集筛选出2个关键基因:Map2k1、Rac1。相比M组,SH、G组主动脉组织内Map2k1基因的表达水平均显著降低; SH、SM组Rac1的表达水平较M组升高; G组Rac1的水平与M组无显著性差异。结论:参芪复方能够广泛而精准地恢复糖尿病大血管病变大鼠主动脉组织mRNA的表达水平,能够促进Rac1的表达,抑制Map2k1的表达,对细胞增殖、黏附功能发挥调节作用,进而对血管内皮细胞的生长进行了良性的双向调节。     

参芪复方对糖尿病模型大鼠血管病变的保护作用及机制

目的探讨参芪复方对糖尿病模型大鼠血管病变的保护作用及机制。方法将18只SD大鼠随机分为对照组、模型组及参芪复方组,每组各6只。采用高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素（streptozotocin, STZ）注射建立糖尿病大鼠模型。参芪复方组大鼠每日以参芪复方2 g/kg灌胃,模型组及正常对照组大鼠以等量生理盐水灌胃12周。12周后采用二维和背向散射积分等超声技术观察糖尿病大鼠腹主动脉血管结构及功能变化;采用HE、Masson 染色法观察主动脉血管和心肌微血管纤维化程度;测定离体大鼠主动脉血管环张力;实时荧光定量（RT PCR）技术检测心肌转化生长因子 β（TGF β）基因表达;Western blot检测大鼠心肌TGF β、胶原Ⅰ（collagen Ⅰ）、胶原Ⅲ（collagen Ⅲ）及磷酸化P38 MAPK蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠腹主动脉收缩期内径、舒张期内径、Peterson弹性模量、僵硬度指数及背向散射积分均明显增加,背向散射积分变化幅度、横断面扩张系数明显降低（P<0.05）。经参芪复方治疗12周后,上述指标均明显改善（P<0.05）。HE、Masson染色切片结果显示,与模型组比较,参芪复方组大鼠主动脉血管及心肌纤维化程度明显减轻（P<0.05）;离体大鼠主动脉血管环张力测定结果显示,参芪复方组对乙酰胆碱诱导的血管舒张反应和最大舒张百分比明显提高（P<0.05）。与对照组比较,模型组大鼠心肌TGF β mRNA表达,TGF β、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ蛋白表达增加（P<0.05）,P38 MAPK磷酸化增加 （P<0.05）。与模型组比较,参芪复方组TGF β mRNA、TGF β、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ蛋白表达降低,P38 MAPK磷酸化水平降低（P<0.05）。结论参芪复方对糖尿病血管病变包括大血管和微血管病变均有保护作用,其机制可能是通过下调糖尿病大鼠心肌TGF β表达,进而抑制P38 MAPK信号传导途径降低Ⅰ、Ⅲ型胶原合成,从而减轻大血管和心肌微血管纤维化。     

基于氧化应激探讨通脉降脂丸对2型糖尿病大血管病变影响的实验研究

目的:观察通脉降脂丸对糖尿病模型大鼠2型糖尿病大血管病变氧化应激的影响。方法:采用对4个月龄雄性Wistar大鼠一次性腹腔注射STZ结合饮水添加Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)0.1 mg·m L-1·d-1及高脂饲料喂饲的方法复制2型糖尿病大血管病变模型。成模后大鼠随机分成模型组、阿托伐他汀钙组、通脉降脂丸组,另设15只正常Wistar大鼠为正常对照组。给药时间30 d。实验结束后测定大鼠血检测血清F2-异前列烷、血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MAD)、总抗氧化能力(T-AOC)等活性水平;检测醛糖还原酶AR、NADPH氧化酶亚基的活性;RT-PCR法测定主动脉NADPH氧化酶亚基p22phox m RNA及p47phox m RNA表达。结果:通脉降脂丸组大鼠血清SOD、GSH-Px、T-AOC等活性较模型组升高(P0.05),阿托伐他汀和通脉降脂丸均能降低主动脉p47phox m RNA、p22phox m RNA的表达水平(P0.05)。结论:通脉降脂丸可提高糖尿病GK大鼠血清SOD、GSH-Px、T-AOC活性,下调主动脉p47phox m RNA、p22phox m RNA表达,可能因此减轻糖尿病大血管病变机体的氧化应激水平,这可能是通脉降脂丸治疗T2DM大血管病变的可能机制之一。