儿童患者外周血干细胞采集的影响因素分析

目的探讨血细胞分离机采集儿童患者外周血干细胞的方法和经验.方法对10例儿童患者在经化疗 生长因子方案动员后使用CS-3000 Plus血细胞分离机(Baxter公司)、儿童专用SVCH分离夹并选择儿童单个核细胞收集程序进行外周血干细胞采集.结果所有病例均采集成功,采集次数2～4次,平均2.3次,单个核细胞数(MNC):5.4(3.6～7.8)×108/kg,CD34 细胞为6.1(3.1～18.5)×106/kg,CFU-GM为3.3(1.6～5.1)×105/kg,台盼蓝拒染率:98.5(97～100)%,副作用小.结论由于儿童自身的特殊性,外周血干细胞采集较成人不同,为确保采集成功应选用专用器械和程序,做好采集前准备、控制血液总量、抗凝剂比例并积极处理并发症.     

人类白细胞抗原不相合造血干细胞移植治疗白血病的临床研究

目的 :探讨应用人类白细胞抗原 (humanleukocyteantigen ,HLA)不相合供体造血干细胞移植治疗白血病。方法 :总结我所于 2 0 0 0年 7月至 2 0 0 1年 12月进行的 7例HLA不相合造血干细胞移植 ,其中包括 3例慢性髓性白血病、3例急性非淋巴细胞性白血病、1例急性淋巴细胞白血病。干细胞来源 :6例为外周血干细胞 ,1例为骨髓干细胞。预处理方案为改良马利兰 (busulfan ,BU) /环磷酰胺 (cyclophosphamide,CY)或BU/CY +抗胸腺细胞球蛋白 (antithymocyteglobulin ,ATG)。预防急性移植物抗宿主病 (graftversushostdisease,GVHD)采用环孢霉素A及短疗程氨甲喋呤 ,5例患者加用霉酚酸酯 (骁悉 )。结果 :1例为骨髓造血干细胞 ,采集骨髓单个核细胞数 3 .4 1× 10 8kg-1,6例为粒细胞集落刺激因子 (granlocytecolony stimulatingfactor,G CSF)动员后外周血干细胞 ,平均接受8.4 6× 10 8kg-1(4.3 0× 10 8～ 15 .3 5× 10 8kg-1)供者外周血单个核细胞 ,平均 + 13天 (+ 11～ + 16天 )中性粒细胞(absoluteneutrophilcount,ANC)大于 0 .5× 10 9L-1。平均 + 16天 (+ 11～ + 2 3天 )血小板大于 2 0 .0× 10 9L-1。发生急性Ⅰ～Ⅱ度GVHD 3例 (42 .9% ) ,无 1例严重的急性GVHD ,发生慢性广泛性GVHD 2例 (2 8.6% )。中位随访时间 1     

自体外周血干细胞动员和采集的研究

目的　探索理想的血液肿瘤外周血干细胞动员方案。方法　选择 15例恶性血液病患者 ,14例应用米托蒽醌 (2 0mg/m2 ) 阿糖胞苷 (8g/m2 ) 粒细胞集落刺激因子 (G -CSF ,惠尔血 30 0 μg/d ,从白细胞 <1× 10 9/L开始至采集完成 ) (MAG) ;1例多发性骨髓瘤应用环磷酰胺 (4 g/m2 ) G -CSF(CG)。用CS - 30 0 0Plus血细胞分离机采集单个核细胞。处理血量约 2 0 0ml/kg ,历时 3～ 4h。直至CD34 细胞数 >4× 10 6/kg为止。 结果　 14例用MAG方案者中 ,一次采集即采到CD34 细胞 2× 10 6/kg以上者 11例 (79% ) ,其中 9例 (6 4% ,9/14)达 4× 10 6/kg以上。通过测定采集日外周血中CD34 细胞数可预测一次采集足量干细胞的可能性 (P <0 .0 0 1)。 2例部分缓解者动员后获完全缓解 ,1例Ph阳性小克隆和 1例AML1/ETO基因在动员后转阴。移植 14例可评价者中 10例存活至今 (3～ 5年 ) ,4例 (Ph 杂白、L2和L3型急淋、急单各 1例 )复发死亡。结论　MAG具有抗瘤和动员双重作用。外周血CD34 细胞数与采集成功与否相关性佳     

异基因外周血干细胞移植治疗二例急性白血病

目的 :评价异基因外周血干细胞移植 (allo PBSCT)治疗急性白血病的疗效。方法 :预处理方案 :改良BUCY。预防移植物抗宿主病 (GVHD)方案 :CsA +短程MTX ,用G CSF 5 μg/kg·d-1× 4～ 5d进行造血干细胞动员。分离单个核细胞 5 .5 3～ 6 .92× 10 8/kg。结果 :2例患者移植后均重建造血。粒细胞 >0 .5× 10 9/L ,+12d ;血小板 >2 0×10 9/L ,+13d。 1例发生慢性GVHD。结论 :allo PBSCT有造血重建快 ,采集干细胞方便 ,供者易接受之优点 ,是一种治疗急性白血病的有效方法     

外周血干细胞收集物中有核细胞成分分析

目的　探讨癌症患者用环磷酰胺 (CTX)、粒细胞集落刺激因子 (G CSF)动员后 ,外周血干细胞收集物的成分及数量。方法　 2 1例诊断明确的癌症患者 ,男 15例 ,女 6例 ,平均年龄 30 .1岁 ( 19～ 6 2岁 )。动员方案为 :CTX 4.0g/m2 ,同时碱化、水化 ,应用美司那和别嘌呤醇 ,在WBC降至最低点时 ,开始应用G CSF(惠尔血 ) 15 0 μg/d ,当WBC≥ 10 .0× 10 9/L或MNC≥ 2 .0× 10 9/L或CD34+细胞≥ 30× 10 6/L时 ,用FenwalCS 30 0 0PLUS连续式血细胞分离机分离单个核细胞 ,通过瑞氏染色和荧光标记单克隆抗体流式细胞仪分析干细胞收集物细胞成分和比例。当收集CD34+ >2× 10 6/kg时停止采集。结果　T淋巴细胞、NK细胞、粒细胞、B淋巴细胞、单核细胞、CD34+ 细胞所占的比例分别为 5 6 .75 %、14 .5 0 %、10 .89%、7.32 %、7.2 9%、2 .18%。结论　外周血干细胞收集物成分复杂、多样 ,T淋巴细胞、NK细胞是干细胞收集物的主要成分。有待开发干细胞收集物多种成分的潜在用途     

MOEP化疗联合G-CSF动员外周血干细胞的临床观察

目的　报告 8例恶性血液病患者采用MOEP联合rhG CSF动员外周血干细胞的疗效和副作用。方法　 8例住院病人中 ,急性淋巴细胞白血病 2例 ,非何杰金淋巴瘤 5例 ,何杰金病 1例。其中 5例移植前疾病完全缓解 ,1例部分缓解 ,2例疾病处于进展期。动员方案为米托蒽醌 :0 2mg/kg分 3d ;长春新碱 :2mg ,第一天 ;足叶乙甙 :10mg/kg分 2～ 5d ;强的松片 :30～ 6 0mg共7d。白细胞降至低谷开始回升时加用rhG CSF(10 μg·kg-1·d-1)动员 ,白细胞升至 5 0× 10 9/L以上开始采集外周血干细胞。共采集干细胞 (2 0～ 7 8)× 10 8/kg。结果　回输干细胞后均获快速造血功能重建 ,白细胞开始回升 (ANC >0 5× 10 9/L)的时间为移植后 9～ 16d,血小板的恢复 (PLT >2 0× 10 9/L)稍滞后于白细胞 ,为移植后 10～ 2 8d。结论　采用MOEP方案动员外周血造血干细胞效果显著、副作用轻、且经济实惠     

非骨髓清除性异基因外周血造血干细胞移植(NST)治疗恶性血液病的初步临床研究

目的　探讨NST治疗恶性血液病的效果及毒性。方法　急性粒细胞白血病未分化型 (AML -M1)、慢性髓细胞白血病 (CML)、骨髓增生异常综合征 (MDS -RA)患者各 1例 ,供体为其HLA配型完全相合的同胞。供体动员方案 :G -CSF 30 0 μg/ 12h× 5d后分离采集外周血干细胞。所获CD34 + 细胞数分别为 6 .36× 10 6/kg、9.72×10 6/kg、6 .6 2× 10 6/kg ;单个核细胞数 (MNC)分别为 14.0× 10 8/kg、10 .47× 10 8/kg、8.5 8× 10 8/kg ;T细胞总数分别为 8.80× 10 8/kg、7.12× 10 8/kg、5 .6 7× 10 8/kg ;CFU -GM数分别为 16 2个 / 2× 10 5MNC、184个 / 2× 10 5MNC、182个 / 2× 10 5MNC。预处理方案 :Fludarabine:30mg/m2 ·d-1× 6d ,Bu :4mg/kg·d-1× 2d ,ALG :12mg/kg·d-1× 4d ,Ara-C :10 0mg/m2 ·d-1× 3d。单用环胞菌素 (CSA)预防移植物抗宿主病 (GVHD)。移植后未用造血生长因子。结果　患者均能顺利完成预处理方案 ,没有严重并发症出现。移植后 10～ 13d造血重建。未发生急性GVHD。随访10 0～ 16 0d ,血常规、骨髓象均正常 ,1例发生肝脏型慢性GVHD。结论　NST能有效治疗恶性血液病 ,方案相关毒性小 ,适用范围广 ,移植相关并发症少 ,造血重建迅速。     

自体外周血干细胞移植治疗恶性肿瘤24例报告

目的 :评价自体外周血干细胞移植 (APBSCT)联合超大剂量化疗治疗恶性肿瘤的近期疗效。方法 :对 2 4例恶性肿瘤患者采用化疗联合粒细胞集落刺激因子动员外周血干细胞 ,动员结束 2周后采用超大剂量化疗预处理 ,预处理结束 48～ 72 h后全部回输外周血干细胞。结果 :回输单个核细胞 0 .83～ 0 .90× 1 0 8/ L,CD3 4 +细胞 1 .1～ 9.4× 1 0 6/ L。白细胞计数恢复到≥ 1 .0× 1 0 9/ L时间为 8～ 1 6 d,2 1例患者血小板计数达到≥ 5 0× 1 0 9/ L时间为1 3～ 2 2 d,无 1例患者出现移植相关性死亡。随访 3～ 2 4月 ,2 4例患者中 1 2例持续完全缓解(5 0 .0 %) ,8例部分缓解或好转 (3 3 .3 %) ,无效 4例 (1 6 .7%)。结论 :APBSCT联合超大剂量化疗是一种治疗一些恶性血液病及敏感实体瘤的安全方法 ,近期疗效肯定。     

骨髓联合外周血造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血

目的　探讨非清髓性、骨髓和外周血造血干细胞移植治疗高风险重型再生障碍性贫血 (SAA)及移植后供者干细胞输注 (DSI)的疗效和并发症。方法　移植治疗 3例高风险SAA。预处理 :抗淋巴细胞球蛋白 (ALG)联合环磷酰胺 (CTX) ,CTX总量为 60～ 12 0mg/kg ,ALG为 12 0mg/kg。移植物抗宿主病 (GVHD)的预防 :环孢素A(CSA)联合甲氨蝶呤 (MTX)或甲基强的松龙 (MP) ,CSA和MP分别用至 6个月和 2个月逐渐减量并停药。供者外周血造血干细胞 (PBSC)动员 :G -CSF 5 μg/ (kg·d)× 5d。移植细胞数分别为MNC :7 2 4× 10 8/kg ,6 0 0× 10 8/kg ,6 66× 10 8/kg ;CD3 4+ 细胞 :4 2 6×10 6/kg ,8 95× 10 6/kg ,4 66× 10 6/kg。移植后形成混合性嵌合体 (MC)者 ,进行DSI。结果　移植后 3例白细胞最低值 :0 2 6× 10 9/L ,0 5 0× 10 9/L ,0 10× 10 9/L ,中性粒细胞 >0 5× 10 9/L和血小板 >2 0× 10 9/L时间分别为移植后第 12 ,3 ,15天和 0 ,5 ,10天。 3例均获得造血细胞成功植入。 1例形成供者完全嵌合体 (CC)并长期维持造血。 2例MC者 ,1例出现排斥 ,1例巨核细胞植入不良 ,均经DSI ,造血均有恢复。 3例分别存活 10 ,6,3 4个月。结论　非清髓性骨髓联合外周血高剂量造血干细胞移植治疗高风险的SAA ,增加植入率、减少     

自体外周血干细胞移植治疗难治性恶性血液病8例

目的　评价自体外周血干细胞移植联合大剂量化疗治疗恶性血液病的近期疗效 .方法　 8例恶性血液病 (非霍奇金淋巴瘤 7例 ,多发性骨髓瘤 1例 )采用化疗联合G CSF动员外周血干细胞 ,CobeSpectra血细胞分离机采集循环血中的单个核细胞 ,8例平均单个核细胞数 3.0× 10 8·kg-1,平均CD34+ 细胞为 3.5× 10 6·kg-1,- 80℃冰箱冻存 .8例均在大剂量化疗后回输细胞 .结果　外周血干细胞回输后WBC恢复至 2× 10 9·L-1平均为 11d ,血小板恢复至 5 0× 10 10 ·L-1平均为 13d .8例移植后短期内均达缓解 .结论　化疗联合G CSF是一高效、低毒的动员方案 ;自体外周血干细胞移植联合大剂量化疗是治疗难治性恶性血液病的一种安全、近期疗效肯定的治疗方法 .     

﹣80°C冰箱长期冻存外周血造血干细胞研究

目的对外周血造血干细胞活性在深低温（-80℃）下保存3年的效果进行评价。方法对30例经MCS＋血细胞分离机采集所得的外周血造血干细胞加入细胞冻存保护剂分别予以-196℃液氮冻存和-80℃冰箱深低温冻存,并检测和比较冻存前后单个核细胞（mononuclear cells,MNC）、CD34＋细胞的计数及细胞回收率,细胞活性。结果 -80℃冰箱冻存组MNC、CD34＋细胞冻存3年与冻存前比较差异均无统计学意义冻存3年后MNC回收率与冻存1年后比较差异无统计学意义。3年后-80℃冰箱冻存组干细胞与-196℃液氮冻存组比较,差异无统计学意义。结论 -80℃冰箱深低温保存法快速、简便、安全、费用低廉,可有效用于外周血造血干细胞长期保存。     

-80℃条件下不同细胞浓度外周血干细胞冻存效果的实验观察

目的　观察不同细胞浓度外周血干细胞在 - 80℃条件下的冻存效果。方法　采用一种简便的 - 80℃干细胞冻存方法 ,其干细胞保护剂终浓度为 5 %二甲基亚砜 (DMSO) ,3%羟乙基淀粉 (HES)和 4 %人血白蛋白 (HSA) ,不经程序降温 ,直接 -80℃冰箱冻存外周血干细胞 ,并在不同时相点 (冻存后 1、3、6、9、1 2个月 )对推荐细胞浓度组 (1 .3～ 3.9)× 1 0 7/ml、调整细胞浓度组 (8.0～ 2 9.9)× 1 0 7/ml和高细胞浓度组 (30 .1～ 70 .1 )× 1 0 7/ml的外周血干细胞的细胞活性进行检测 ,观察台盼蓝拒染率和MNC、CFU GM、CD34+ 细胞的回收率。结果　 3组干细胞活性在 1 2个月内无明显下降 ;干细胞冻存后 9个月期间 ,3组冻存细胞的台盼蓝拒染率 ,MNC回收率、CFU GM回收率、CD34+ 细胞回收率都在 80 %以上。冻存 1 2个月中 ,3组在冻存后同一时间相互比较无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ,说明该 - 80℃干细胞冻存方法适用于不同浓度的细胞液 ,短期内具有良好的冻存效果。结论　5 %DMSO、3%HES和 4 %HAS作为干细胞冷冻保护剂直接 - 80℃冰箱冻存外周血干细胞的方法能有效地保护不同浓度细胞液的外周血干细胞活性 ,适当地提高细胞保存时的浓度 ,减少回输量 ,可避免因干细胞冻存而引起的副作用     

异基因外周血干细胞移植治疗白血病27例

目的: 探讨异基因外周血干细胞移植治疗白血病的疗效及主要并发症的处理.方法: 接受异基因外周血干细胞移植的白血病患者27例,年龄16～50岁,其中急性髓细胞白血病(AML)10例, 急性淋巴细胞白血病(ALL) 8例,慢性髓细胞白血病(CML) 9例.HLA完全相合同胞供者25名, 1～2个HLA主要位点不合同胞供者2名.采用环磷酰胺联合全身放疗(CYTBI)为主的预处理方案或白消安联合环磷酰胺(BuCY2 )方案预处理.采用标准环孢霉素A(CsA)联合短期甲氨蝶呤(MTX)预防移植物抗宿主病(GVHD).2个HLA主要位点不合的1例移植患者加用兔抗人胸腺球蛋白(ATG)及抗CD25单克隆抗体.结果: 全部患者均获得稳定植入,Ⅱ-Ⅲ度急性GVHD 3例(11%),慢性GVHD 7例.并发特发性间质性肺炎1例.ABO血型主要不合及Rh血型不合的CML患者并发纯红细胞性再生障碍性贫血1例.随访2～30 mo,存活20例(74%),移植后4～11 mo死于白血病复发7 例(26%). 结论: 异基因外周血干细胞移植是治疗白血病的有效方法,但移植前处于高危难治状态的病例复发率仍较高.     

外周血造血干细胞的某些特性研究

本文就外周血造血干细胞的某些性能作了观察,结果表明:外周血CFU-S的辐射敏感性较低,较能耐受辐射损伤,但GM-CFUc的辐射敏感性与骨髓GM-CFUc相比则相对较高;外周血CFU—S的自杀率数据提示它处于较活跃的增殖状态;外周血CFU—S群体中7～9天亚群和11天后亚群的相对数量与骨髓比较无显著差异,但两个亚群的自我更新能力均较骨髓的为弱。     

23例外周血干细胞采集过程中不良反应及其预防处理措施

目的探讨外周血干细胞采集过程中出现的不良反应及其预防处理措施。方法对23例患者或供者,使用MCS 血细胞分离机采集外周血干细胞,对采集过程中出现的不良反应进行观察、分析和处理。结果每例采集1~2次,共44次,出现不良反应24次(54.55%),其中枸橼酸盐毒性反应15次,血流通路障碍6次,低血容量反应1次,回输过快反应1次,微量渗血1次。采取相应处理措施后,不良反应消失,23例均能采集到足量的单个核细胞和CD34 细胞。结论运用MCS 血细胞分离机采集PBSC总体上是安全的,但不良反应时有发生,其中以枸橼酸盐毒性反应最多。     

自体外周血干细胞移植治疗恶性淋巴瘤的临床研究

目的　观察自体外周血干细胞移植 (APBSCT)治疗恶性淋巴瘤的初期疗效。方法　自 2 0 0 1年 4月～ 2 0 0 2年 3月 ,以APBSCT治疗恶性淋巴瘤患者共 10例 ,其中 :非霍奇金淋巴瘤 (NHL) 8例 ;霍奇金淋巴瘤 (HD) 2例。动员方案为 :MOEP/CMOP +G CSF ,获得MNC中位数为 5 1× 10 8/kg ,CD34+ 细胞为 6 8× 10 6/kg ,CFU GM为 3 1× 10 5/kg。预处理方案 :Cy/TBI(7例 )及CEAC(3例 )。结果　所有患者移植后造血功能均快速重建。WBC >1 0× 10 9/L、中性粒细胞 >0 5× 10 9/L、PLT >2 0× 10 9/L ,分别为 (9± 4 )d、(10± 3)d、(14± 5 )d。随访至 2 0 0 2年 8月 ,2例患者于移植后 1月和 2月分别死于感染和疾病复发 ,其余患者已无病存活 6～ 14个月。结论　疗效显示 ,对于常规化疗无效的NHL ,APBSCT疗效较差 ,而经治疗后获得PR或CR及复发后再治疗获得PR或CR的淋巴瘤患者 ,治疗效果较好     

外周血干细胞采集过程中不良反应的预防和处理

目的探讨外周血干细胞采集过程中出现不良反应的预防和处理.方法对24例患者或供者,使用CS-3000 Plus血细胞分离机采集外周血干细胞,对采集过程中出现的不良反应进行观察和分析.结果每例采集2～3次,共58次,出现不良反应14次(24%),其中以枸橼酸盐毒性反应最多(13次),发热反应1次,经采取相应处理措施后,不良反应消失.24例均能采集到足量的单个核细胞,顺利完成移植.结论外周血干细胞采集过程中可能出现不良反应,以枸橼酸盐毒性反应最多,处理不当,采集难以顺利进行.为确保采集成功,必须做好采集前准备、控制处理血液总量(终点量值)、全血流速及抗凝剂比例,并注意预防和及时处理.     

外周血造血干细胞体外定向诱导树突状细胞及功能鉴定

目的：以实体瘤患外周造血干细胞（PBSC）为来源，建立体外诱导扩增树突状细胞（DC）的方法，工进行表型鉴定及功能检测。方法：以血细胞分离机分离经动员的外周造血干细胞，加入rhGM-CSF,rhIL-4和nrhTfNF-α培养7－9d成为树突状细胞，进行细胞形态学、表型及刺激T细胞增殖能力分析。结果：PBSC经诱导培养后，倒置显微镜和电镜显示典型的树突状细胞形态和超微结构；流式细胞术分析显示细胞表面抗原高表达，其中CD1a 38.28%,CD11c 66.77%,共刺激分子CD80和CD86分别为51．05％，67．58％，MHCⅡ类分子HLA－DR为72．09％，为典型的DC表型特征，同种混合淋巴细胞反应结果显示DC具有高效的刺激T淋巴细胞活化增殖的能力。结论：实体瘤患PBSC可成功诱导为具有典型形态特征及功能的树突状细胞。     

外周血造血干细胞移植治疗儿童血液肿瘤的初期疗效观察

目的　观察外周血造血干细胞移植 (PBSCT)治疗儿童血液肿瘤的初期疗效。方法　 2 0 0 1年 5月至 2 0 0 2年 3月 ,以PB SCT治疗儿童血液肿瘤患者共 10例 ,其中 :ALL 5例 ;ANLL 1例 ;NHL3例 ;HD1例。除 1例同基因移植患儿采用G CSF(10 μg/kg ,1/d ,皮下注射 ,共 4d后开始采集 )对正常供体进行动员外 ,其他患儿均为自体外周血干细胞移植 ,动员方案为 :MOEP +G CSF。经 2～ 3次采集 ,获得MNC中位数为 5 4× 10 8/kg ,CD3 4+ 细胞为 6 1× 10 6/kg ,CFU M为 3 3× 10 5/kg。预处理方案 :Cy/TBI(8例 )或CEAC(2例 )。结果　所有患者移植后均重建造血。WBC >1 0× 10 9/L、中性粒细胞 >0 5× 10 9/L、PLT >2 0× 10 9/L ,分别为 (10± 3 )d、(11± 3 )d、(14± 5 )d。 1例患儿于移植后 3个月随访行常规化疗 ,因骨髓重度抑制继发感染死亡 ,1例患儿于移植后 4个月病情复发死亡。其余患者均无病存活 2～ 9个月 ,疗效仍在近一步随访中。结论　初期疗效显示 ,PBSCT是儿童血液肿瘤安全有效的治疗方法