Piscidinol A诱导人白血病K562细胞凋亡及其作用机制

目的:初步研究Piscidinol A对人慢性髓系白血病K562细胞的增殖抑制作用及抗肿瘤分子作用机制。方法:MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡形态;AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率;Western blot方法检测Piscidinol A对细胞中凋亡相关蛋白表达的影响。结果:Piscidinol A对K562细胞具有增殖抑制作用且呈浓度和时间依赖关系,24 h时IC_(50)为27.36 mg/L;细胞凋亡染色示有典型的细胞凋亡形态出现;流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法检测发现Piscidinol A可诱导K562细胞凋亡,其凋亡率呈浓度依赖性;Western blot法检测到Piscidinol A能上调Bax和Caspase-3的表达,同时下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:Piscidinol A能抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与凋亡相关蛋白表达量变化有关。     

白藜芦醇通过下调 mdr1/P - gp表达逆转 K562/ADM细胞凋亡抑制

目的：研究白藜芦醇对多药耐药K562/ADM细胞的诱导凋亡效应及其分子机制。方法：以白血病多药耐药细胞K562/ADM为白藜芦醇作用的靶细胞,用MTT比色法检测细胞增殖活性,形态学和DNA片段化观察细胞凋亡;RT-PCR检测mdr1基因和Caspase-3基因mRNA的表达;FCM测定P-gp蛋白表达水平;比色法测定Caspase-3活性。结果：白藜芦醇显著抑制K562/ADM细胞增殖,白藜芦醇诱导后K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学变化和DNA片段化等特征性改变。白藜芦醇下调K562/ADM细胞mdr1基因表达、抑制P-gp合成,并上调caspase-3基因表达、增强caspase-3活性。结论：白藜芦醇通过下调mdr1/P-gp表达逆转K562/ADM多药耐药细胞的凋亡抑制。     

六神丸及其成分蟾酥对K562/DOX细胞的增殖和MDR1基因表达的影响

目的:探讨传统中成药六神丸及其成分蟾酥对K562/DOX细胞的增殖和MDR1基因表达的影响。方法:采用中药血清药理学方法制备六神丸和蟾酥的含药血清,以MTT法检测六神丸以及蟾酥含药血清、阿霉素处理后K562/DOX细胞的抑制率;RT-PCR检测MDR1 mRNA表达;Western blot检测MDR1蛋白的表达。结果:与对照组相比,蟾酥和六神丸对K562/DOX细胞均有抑制作用;六神丸组MDR1 mRNA表达降低,MDR1蛋白表达下降;而蟾酥组、阿霉素组未有明显变化。结论:六神丸可能通过下调MDR1表达水平进而逆转K562/DOX细胞的耐药性,而其成分蟾酥作用不明显。     

番茄红素诱导K562细胞凋亡及机制的探讨

目的:研究番茄红素(lycopene)对人慢性髓系白血病K562细胞凋亡的影响,探讨其凋亡的作用机制。方法:用不同浓度(0,20,40,60μmol·L-1)的番茄红素作用K562细胞24,48,72 h,0μmol·L-1番茄红素为空白组。采用MTT法检测不同浓度的番茄红素作用24,48,72 h时K562细胞增殖抑制率;Annexin V/PI双染色法检测不同浓度的番茄红素作用48 h时K562细胞凋亡率;RT-PCR法及Western blot法检测不同浓度的番茄红素作用48 h时K562细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA及蛋白的表达。结果:与空白组比较,细胞增殖抑制率随番茄红素浓度升高而明显升高,细胞凋亡率逐渐明显增加,随番茄红素浓度明显升高,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显降低,Caspase-3mRNA及蛋白的表达明显升高,均具有统计学差异(P0.05)。结论:番茄红素诱导人慢性髓系白血病K562细胞凋亡,其凋亡机制与下调Bcl-2及上调Caspase-3表达有关。     

冬虫夏草人工繁育品对人白血病K562细胞增殖和凋亡的影响

该文研究冬虫夏草人工繁育品对人白血病K562细胞增殖和凋亡的影响并探讨其作用机制。将K562细胞进行常规培养后,采用MTT法检测冬虫夏草人工繁育品对K562细胞存活率的影响;DAPI染核法观察冬虫夏草人工繁育品作用K562细胞后细胞核的形态变化;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染法观察其对K562细胞凋亡的影响;JC-1染色法检测K562细胞内线粒体膜电位的变化;流式细胞术检测K562细胞周期的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测对K562细胞中Bax,Bcl-2,caspase 3,caspase 8,cyclin D1,CDK2和CDK4蛋白表达的影响。结果显示,冬虫夏草人工繁育品(0.345~5.524 g·L-1)能够剂量依赖性的抑制K562细胞的增殖(P0.05),显著诱导K562细胞凋亡,明显降低K562细胞的线粒体膜电位,选择性的将K562细胞阻滞在G1/S期,并且能够显著上调Bax的蛋白表达,同时明显下调Bcl-2,cyclin D1,CDK2,CDK4,caspase 3,caspase 8蛋白的表达。综上,冬虫夏草人工繁育品能够显著抑制人白血病K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与诱导细胞周期阻滞并调节Bcl-2/Bax的比值、激活线粒体凋亡通路相关。     

PESV干预K562细胞PI3K/Akt 信号通路凋亡调控的研究

[目的]探讨PESV对K562细胞PI3K/Akt信号蛋白及凋亡调控因子Bcl-2和Bad表达的影响。[方法]将体外培养K562细胞,经PESV处理不同时间后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化,实时荧光定量RT-PCR检测Bcl-2、Bad mRNA水平变化。[结果]与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率显著增加,PI3K及p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达降低,促凋亡基因Bad mRNA表达增加。[结论]PESV可能通过降低PI3K、Akt信号蛋白表达,调节Bcl-2和Bad表达,抑制K562细胞增殖,促进其凋亡。     

梁金菇多糖对K562细胞的促凋亡作用研究

目的研究LJPS的抗肿瘤作用及机制。方法：采用MTT法观察LJPS对K562细胞的增殖抑制．用普通光镜．荧光显微镜、电镜、FCM、DNA电泳等技术检测细胞凋亡．用RT--PCR检测bcl-2mRNA的表碉结果：LJPS对K562细胞有明显抑制增殖并诱导细胞凋亡的作用．DNA电泳出现片段化梯形带．F(、Ⅵ检测示细胞阻滞于G1期．出现凋亡峰．LJPS诱导K562细胞凋亡中下调bcl-2mRNA表达。结论LJPS对K562细胞的抑制增殖、促进凋亡的作用与其下调Bcl-2mRNA表达有关。     

复方君子汤诱导白血病K562细胞凋亡的机制研究

目的本研究探讨复方君子汤(FFJZ)对抑制白血病K562细胞生长增殖和诱导凋亡的作用机制。方法用不同浓度复方君子汤作用于K562细胞,应用MTT法观察复方君子汤对K562细胞生长增殖的影响,Annexin V/PI染色和流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-8蛋白及Fas蛋白的表达。结果在一定浓度的复方君子汤作用后的K562细胞的增殖被抑制,随着浓度的增加及使用时间的延长,K562细胞的增殖抑制率及凋亡比例明显增加;同时,Caspase-8蛋白及Fas蛋白的表达明显上升。结论一定浓度的复方君子汤可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-8蛋白及Fas蛋白的表达有关。     

青藤碱诱导人红白血病细胞株K562凋亡的实验研究

目的:通过青藤碱(Sinomeine,SIN)诱导K562细胞凋亡实验,研究SIN诱导K562细胞凋亡机制。方法:CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术(FMC)检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色细胞凋亡形态学改变,Real-time PCR检测bcl-2和bax基因表达,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:CCK-8和FCM结果显示,SIN可抑制K562细胞增殖并诱导其早期凋亡;Hoechst 33258染色结果显示,经SIN诱导48h后表现出细胞凋亡的典型变化;Real-time PCR结果显示,SIN组bax基因表达升高,bcl-2基因表达降低;Western blot结果显示,SIN组中Caspase-3、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低。结论:SIN可诱导K562病细胞凋亡从而抑制细胞增殖。     

雄黄微生物提取液诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究

目的：观察雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,探讨其作用机制、并初步探寻雄黄溶解后表现药理活性的化学物种。方法：应用噻唑蓝（MTT）比色法、Annexin V-PI双染法染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术（FCM）观察K562/ADM细胞凋亡,FCM测定K562/ADM细胞Fas、Bcl-2、Caspase3的活性变化,并以H3AsO3（As2O3在该溶液中的主要存在形式）作为阳性对照。结果：雄黄微生物提取液可抑制K562/ADM细胞增殖;K562/ADM呈典型凋亡形态改变;DNA电泳可见梯状条带出现;FCM分析显示：G1期细胞比例增高,G2-M和S期阻滞;Fas蛋白表达明显上调、Bcl-2蛋白表达显著下调、Caspase-3活性明显增强。结论：雄黄微生物提取液可通过Fas/Bcl-2途径,激活Caspase-3而诱导K562/ADM细胞凋亡。砷酸（V）、甲基砷酸盐（V）可能是雄黄溶解后表现药理活性的主要化学物种。     

苦参碱抑制胶质瘤U251细胞增殖作用及其凋亡机制研究

目的:研究苦参碱对胶质瘤U251细胞增殖影响,并进一步探讨其作用潜在的分子机制。方法:MTT法检测苦参碱对U251细胞增殖抑制作用;TUNEL方法及流式细胞术检测苦参碱诱导U251细胞凋亡情况;采用Western blot方法检测U251细胞上凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果:苦参碱可以抑制U251细胞增殖,差异有显著性(P0.05),呈时间和浓度依赖性;而在同条件下对人正常视网膜色素上皮RPE细胞无抑制作用,差异无显著性(P0.05);其次苦参碱能诱导U251细胞凋亡,进一步研究发现苦参碱可以影响蛋白Bcl-2、Bax表达。结论:苦参碱能抑制U251细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与下调U251细胞上抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达,同时上调促细胞凋亡Bax蛋白表达有关。     

双去甲氧基姜黄素通过降低线粒体膜电位诱导人白血病K562细胞凋亡

目的:探讨双去甲氧基姜黄素对K562细胞增殖的影响及其机制。方法:以1,10,30,50,100μmol·L~(~(-1))的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用48 h或72 h后MTT法检测细胞增殖;以10,30,50μmol·L~(-1)的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用24 h或48 h实验,另设空白组,AO/EB双染法倒置荧光显微镜观察凋亡形态,Rh123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位,Annxin V/PI染色流式细胞仪检测凋亡率,Westren blot方法检测Bcl-2,Bax的表达活性。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可剂量依赖性抑制K562细胞的增殖,在30,50μmol·L~(-1)浓度下,双去甲氧基姜黄素可诱导细胞凋亡,下调Bcl-2/Bax,并可降低线粒体的膜电位(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可抑制K562细胞的增殖,作用机制可能与改变线粒体膜电位诱导的细胞凋亡有关。     

苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的:研究苦瓜蛋白对诱导K562细胞凋亡相关基因P53和Bcl-2表达的影响。方法:采用CCK-8法检测苦瓜蛋白对K562细胞体外生长的影响;采用Giemsa染色和电镜观察细胞形态学变化;利用流式细胞仪,采用Anexinn-V法检测苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡的作用;采用流式细胞仪检测苦瓜蛋白对Bcl-2和突变型P53蛋白表达的影响。结果:K562细胞经苦瓜蛋白处理后,细胞生长受到明显抑制,光镜和电镜下见到典型的细胞凋亡形态学变化;Anexinn-V法检测到细胞凋亡,凋亡率随药物作用时间延长而升高,5μg/ml苦瓜蛋白诱导凋亡效果最明显;Bcl-2和突变型P53表达下降。结论:苦瓜蛋白能够诱导K562细胞凋亡,发生机理与其调控Bcl—2和突变型P53的表达有关。     

桔梗皂苷D抑制人白血病细胞株K562的增殖和诱导凋亡的作用

目的：探讨桔梗皂苷D（PD）抑制人白血病细胞株K562增殖和诱导凋亡及其作用机制。方法：体外培养人白血病细胞株K562,加入终浓度分别为5～20μmol/l的PD。采用MTT法测定药物对细胞的增殖抑制作用,Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡,JC-1检测线粒体膜电位的变化;Western blot方法检测桔梗皂苷处理细胞后bcl-2、bax和cleaved-caspase3蛋白表达的变化。结果：PD以时间剂量依赖性方式抑制K562细胞的增殖,与对照组相比,不同浓度的PD作用24h后,细胞凋亡率明显增加且差异显著。随着药物浓度的增加,PD增加bax、cleaved-caspase3蛋白的表达,抑制bcl-2蛋白的表达。结论：PD有抑制白血病细胞K562的增殖和诱导凋亡的作用,通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

大黄虫丸对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖凋亡及PI3K/AKT信号传导通路的影响

目的观察大黄虫丸对慢性粒细胞性白血病K562细胞抑制增殖、诱导凋亡及对PI3K/AKT表达的影响,进而探讨其治疗慢性粒细胞性白血病的作用机制。方法制备大黄虫丸含药血清,应用MTT法检测对K562细胞增殖的影响,细胞克隆形成实验检测对细胞克隆形成的影响,用Annexin V FITC/PI法检测对细胞凋亡和细胞周期的影响,免疫印迹法检测PI3K/AKT信号通路重要蛋白Akt及其磷酸化形式p-Akt的蛋白水平。相关实验数据用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。结果大黄虫丸含药血清能显著抑制白血病K562细胞的增殖,且呈浓度、时间依赖性;能抑制K562细胞克隆的形成;能诱导K562细胞的凋亡,且将细胞阻滞于G0/G1期,呈浓度依赖性。随着浓度升高,p-Akt/Akt值呈降低趋势,差异有统计学意义(P0.05)。结论大黄虫丸能够体外抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡,可能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活实现。     

线粒体膜电位在三氧化二砷诱导K562细胞凋亡中的作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡的发生机制。方法分别以1、2、4、8、16μmol/LAs2O3诱导K562细胞凋亡,MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率,DNA Ladder法检测细胞凋亡,Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Rhodamine123染色流式细胞术检测线粒体膜电位(ΔΨm)变化,ELISA法检测胞浆细胞色素C(CYTC)水平,分光光度法检测Caspase-3活性,流式细胞术检测Bcl-2和Bax表达。结果MTT结果显示As2O3能抑制K562细胞生长,且呈现时间剂量依赖性;4~16μmol/L的As2O3作用24h均可诱导K562细胞凋亡,同时伴有ΔΨm下降,胞浆内CYTC蛋白浓度及Caspase-3活性增高,胞浆Bcl-2/Bax值下降,且均呈剂量依赖性。结论As2O3诱导K562细胞凋亡可能是通过降低ΔΨm,激活线粒体凋亡途径实现的,Bcl-2/Bax值下降可能与其有关。     

甘草次酸对K562细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的 研究甘草次酸对髓系白血病细胞系K562体外增殖抑制作用,分析其引起细胞周期的变化及探讨其可能的抗癌机制.方法 MTT法检测甘草次酸对K562细胞增殖活性的影响;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析细胞周期的变化以及cyclin D1和cyclin E蛋白表达的变化;RT-PCR测定细胞中cyclin D1和cyclin E mRNA表达的改变.结果 甘草次酸对K562有增殖抑制作用,其抑制作用呈现为量效和时效依赖性,作用48 h的IC50值为(93.1±3.7)μmol/L.甘草次酸可以诱导细胞发生凋亡,Hoechst染色可见细胞核内凋亡小体.甘草次酸可以诱导K562细胞周期阻滞于G0/G1期,同时G2/M期细胞比例减小,S期变化不明显,仅在最大浓度组稍有降低.甘草次酸可以同时下调K562细胞内cylin D1和cyclin E蛋白和基因的表达,下调作用与剂量呈正相关.结论 甘草次酸能明显抑制K562细胞增殖,并诱导其周期阻滞于G0/G1期.该效应可能与其下调周期蛋白cyclin D1和cyclin E表达有关,有望成为新型抗肿瘤中药.     

槲皮素对白血病K562细胞增殖及PPARγ蛋白表达影响的研究

目的:研究槲皮素在诱导白血病K562细胞凋亡过程中PPARγ蛋白的表达.方法:用槲皮素作用于K562细胞一定时间后,通过胎盘蓝拒染法观察其生长曲线,MTT法检测其对细胞的抑制率,Hoechst33258染色后荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测处理后细胞的凋亡率,采用Western-blotting技术从蛋白分子水平上检测槲皮素对PPAR～蛋白表达.结果:槲皮素显著抑制K562细胞的增殖并呈浓度依赖关系.电泳的结果显示一定浓度的槲皮素能够上调PPARγ蛋白的表达,进而可能诱导K562细胞的凋亡.结论:PPARγ蛋白表达的上调可能是槲皮素抑制K562细胞增殖诱导凋亡的原因之一,其中,槲皮素起着PPARγ非特异配体的作用.     

吴茱萸碱抑制HDAC6促进人白血病K562细胞周期阻滞和凋亡的机制研究

目的探讨吴茱萸碱通过抑制组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)促进人白血病K562细胞周期阻滞以及凋亡的机制。方法采用CCK-8法检测吴茱萸碱对K562细胞增殖的影响;流式细胞术检测K562细胞周期和凋亡;化学比色法检测K562细胞HDAC6活性;Western blotting法检测K562细胞中HDAC6、Cyclin D1、CDK4、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、ERK、p-ERK、p38和p-p38蛋白的表达。结果 CCK-8法结果提示,吴茱萸碱在一定浓度范围内(1~16μmol/L)可以有效抑制K562细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;流式细胞术结果显示,吴茱萸碱可将K562的细胞周期阻滞于G0/G1期;2、4、8μmol/L吴茱萸碱诱导K562细胞48 h后,其凋亡率分别为(11.47±1.05)%、(12.77±0.79)%和(18.58±1.37)%,与对照组(2.79±1.01)%相比差异显著(P0.01);化学比色法结果显示,吴茱萸碱能有效抑制HDAC6的活性;Western blotting结果显示,吴茱萸碱能上调Bax、Cleaved Caspase-3、p38和p-p38蛋白的表达,下调CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、HDAC6、ERK和p-ERK蛋白的表达。结论吴茱萸碱可能是通过抑制HDAC6的活性,激活MAPK信号通路,进而上调促凋亡蛋白的表达,下调周期蛋白的表达,从而抑制K562细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡。     

白花蛇舌草注射液逆转K562/ADM细胞多药耐药的作用和机制

目的:研究白花蛇舌草注射液能否逆转K562/ADM细胞多药耐药性,初步探讨白花蛇舌草注射液逆转多药耐药的机制.方法:四唑盐比色法(MTT法)检测药物对K562/ADM细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪分析细胞的凋亡和bcl-2的蛋白表达.结果:加入无毒剂量的白花蛇舌草注射液后ADM对K562/ADM细胞的IC50由41.50 μg/mL降至30.34 μg/mL,逆转倍数为1.37;加白花蛇舌草注射液后,K562/ADM细胞凋亡比例增加,bcl-2蛋白表达下降.结论:白花蛇舌草注射液在一定程度上逆转了K562/ADM细胞的多药耐药性,逆转耐药的机制可能是它下调了bcl-2的表达,促进细胞凋亡.