加味四逆散对HSC-T6增殖影响的实验研究

目的:观察加味四逆散药物血清对瘦素刺激肝星状细胞增殖的影响,探讨其抗肝纤维化的机制。方法:实验动物灌胃加味四逆散煎剂7d,制备各药物含药血清,并将药物血清用培养基配制成5%、10%、20%、40%四个浓度;培养肝星状细胞,取对数生长期细胞,使用噻唑兰(MTT)比色法检测药物血清对100ng/ml的瘦素刺激HSC-T6增殖的影响。结果:结果显示加味四逆散和秋水仙碱药物血清均有抑制肝星状细胞增殖的作用(P<0.05),且在5%～40%的血清浓度范内,两组对抑制HSC-T6细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性的关系,但在10%～40%的血清浓度范围内对HSC-T6细胞增殖抑制率加味四逆散组高于秋水仙碱组(P<0.05)。结论:加味四逆散药物血清具有抑制瘦素刺激HSC-T6增殖的作用。     

加味四逆散药物血清对HSC-T6增殖的影响

目的: 观察加味四逆散含药血清对瘦素刺激肝星状细胞增殖的影响,探讨其抗肝纤维化的机制。方法: SD大鼠30只,随机分为3组:正常血清组、秋水仙碱对照组、加味四逆散组(37.5 g ·kg^-1),每组均10只,将正常血清组大鼠每只按10 mL ·kg^-1给予生理盐水ig,1次/日;秋水仙碱对照组大鼠每只按0.2 mg ·kg^-1给予秋水仙碱ig,1次/日;加味四逆散组给予加味四逆散药液10 mL ·kg^-1ig,1次/日。以上各组均连续ig 7 d,制备各药物含药血清,并将药物血清用培养基配制成5%,10%,20%,40% 4个浓度;培养肝星状细胞,取对数生长期细胞,使用噻唑蓝(MTT)比色法检测药物血清对100 mg ·L^-1的瘦素刺激肝星状细胞-T6(HSC-T6)增殖的影响。结果: 加味四逆散药物血清对瘦素刺激的肝星状细胞增殖有抑制作用(P<0.05或P<0.01), 在5%~40%的血清浓度范围内,抑制作用呈剂量依赖性关系;秋水仙碱对照组亦能抑制HSC-T6细胞的增殖(P<0.05),但在10%~40%的血清浓度范围内加味四逆散组对HSC-T6增殖的抑制率显著高于秋水仙碱对照组(P<0.05)。结论: 加味四逆散药物血清具有抑制瘦素刺激HSC-T6增殖的作用。     

加味四逆散对肝星状细胞增殖的实验研究

目的:观察加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖的影响,探讨加味四逆散抗肝纤维化的作用机制。方法:以不同浓度的加味四逆散含药血清作用于体外培养的HSC-T6细胞,分别作用12h、24h、48h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组HSC-T6的增殖。结果:加味四逆散含药血清作用于大鼠HSC-T6后,细胞增殖受到明显抑制,呈时间和浓度依赖性,各浓度组与空白对照组比较差异有极显著性(P<0.01),加味四逆散低、中、高浓度组与鳖甲软肝片组比较,除低、中浓度组作用12h、24h时无差异外(P>0.05),其余各浓度组均优于鳖甲软肝片组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加味四逆散含药血清可明显抑制体外培养HSC-T6的增殖。     

加味四逆散含药血清对HSC凋亡影响的实验研究

目的:观察加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)凋亡的影响。方法:以不同浓度的加味四逆散含药血清作用于体外培养的HSC-T6细胞,分别作用12h、24h、48h后,采用流式细胞仪和TUNEL法检测加味四逆散对HSC-T6凋亡的影响。结果:(1)流式细胞仪分析结果显示:加味四逆散各浓度组、复方鳖甲软肝片组与HSC作用12h、24h、48h后,细胞凋亡与空白对照组比较均有差异(P<0.05);与鳖甲软肝片组比较,除加味四逆散低浓度组作用12h时细胞凋亡无差异外(P>0.05),其余各浓度组细胞凋亡均优于鳖甲软肝片组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)TUNEL检测表明:加味四逆散各浓度药物血清作用48h后,细胞凋亡率与空白对照组及鳖甲软肝片组药物血清比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:加味四逆散含药血清可显著促进HSC-T6凋亡,且以高剂量和作用48h最为明显。     

加味四逆散对大鼠肝星状细胞株HSC-T6JAK2-STAT3信号通路的影响

目的观察加味四逆散对大鼠肝星状细胞株HSC-T6 JAK2-STAT3信号通路的影响。方法正常大鼠灌胃加味四逆散药物煎剂7 d,制备含药血清;应用蛋白印迹试验检测加味四逆散对100 mg/L瘦素刺激HSC-T6中JAK2、STAT3蛋白的表达水平。结果加味四逆散作用6 h后,JAK2、STAT3蛋白表达水平开始降低,且JAK2降低较为明显,24 h STAT3降低最明显。结论加味四逆散能降低增殖后的肝星状细胞JAK2、STAT3蛋白表达,并阻断JAK2-STAT3经典通路的信号转导作用,这可能是加味四逆散抗肝纤维化的作用之一。     

扶正活血不同组方大鼠含药血清对HSC-T6增殖的影响

目的:观察不同扶正活血组方大鼠的含药血清对肝星状细胞增殖的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常血清对照组(简称正常组)、秋水仙碱对照组(简称阳性组)、扶正活血组(1号、2号、3号组)共5组,每组6只,HSC-T6细胞复苏后常规培养,采用MTT法观察药物对HSC-T6细胞增殖的影响。结果:与正常对照组比较,扶正活血各方组大鼠高浓度含药血清对HSC-T6增殖抑制率具有明显抑制作用(P﹤0.01)。结论:扶正活血不同组方大鼠含药血清对HSC增殖均有不同程度的抑制作用。     

芪蚣抗纤方及拆方药物血清对HSC-T6增殖及TGF-β1 mRNA蛋白表达的影响

目的:探讨芪蚣抗纤方(QKD)及拆方抗免疫损伤性大鼠肝纤维化作用机制及配伍意义.方法:采用改良型血清药理学对比方法,观察各组血清对肝星状细胞(HSC-T6)增殖及转化生长因子(TGF-β1)mRNA受体蛋白表达的影响.结果:与正常大鼠血清组比较,模型组大鼠血清组HSC-T6增殖明显增强(P＜0.01);与模型组比较,药物血清各组能抑制HSC-T6增殖(P＜0.01或P＜0.05).与正常对照组比较,模型组大鼠HSC-T6细胞上清液中TGF-β1mRNA含量明显升高(P＜0.01).药物血清各组TGF-β1 mRNA含量均明显下调(P＜0.01).结论:芪蚣抗纤方及拆方抗肝纤维化的主要机制之一是抑制HSC-T6增殖,使TGF-β1mRNA受体蛋白表达下调,芪蚣抗纤方全方较活血方和软坚方更具配伍意义,且呈剂量依赖性.     

加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞-T6 (HSC-T6)增殖与凋亡的影响.方法 以不同浓度的加味四逆散含药血清[(加味四逆散低浓度组(含生药量0.78 g/ml)、加味四逆散中浓度组(含生药量1.56 g/ml)、加味四逆散高浓度组(含生药量3.12 g/ml)]作用于体外培养的HSC-T6细胞,作用时间分别为12、24、48 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组HSC-T6.采用流式细胞仪和TUNEL法检测对HSC-T6凋亡的影响.结果 ①加味四逆散含药血清作用于大鼠HSC-T6后,细胞增殖受到抑制,呈时间和浓度依赖性,加味四逆散各浓度组与空白对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);加味四逆散高浓度组[48 h:(0.399±0.041)％]与鳖甲软肝片组[48 h:(0.429±0.037)％]比较差异有统计学意义(P＜0.05).②流式细胞仪分析结果:与空白对照组比较,加味四逆散各浓度组、复方鳖甲软肝片组与HSC作用12、24、48 h后,细胞凋亡增加.与鳖甲软肝片组[12 h:(8.31±0.30)％,24 h:(16.25±0.25)％,48 h:(27.12±0.39)％]比较,加味四逆散中浓度组[12h: (17.83±0.25)％,24 h:(26.06±0.26)％,48h:(39.30±2.25)％]、加味四逆散高浓度组[12h:(27.15±0.29)％,24h:(38.96±0.51)％,48h:(49.34±0.77) ％]细胞凋亡均增加(P＜0.05).③TUNEL检测,与鳖甲软肝片组[(30.0±3.92) ％]比较,加味四逆散各浓度[低浓度组(25.1±1.48)％、中浓度组(39.30±2.25)％、高浓度组(39.30±2.25)％]药物血清作用48 h后,细胞凋亡率均增加(P＜0.01).结论 加味四逆散含药血清可抑制体外HSC-T6的增殖、促讲其凋亡,以高剂量作用48 h最明显.     

肝癌常用治法复方抑制肝癌细胞恶性增殖的机制研究

目的:观察肝癌常用治法代表方及其拆方联合G418抑制肝癌细胞增殖的作用,及其与金属硫蛋白家族(MTs)的关系。方法:观察全方及其清热、活血、健脾等拆方或联合G418对SMMC7721肝癌细胞及转染MTs iRNA质粒肝癌细胞增殖的抑制作用(MTT法),后者与转染表达绿荧光蛋白质粒对照。结果:中药全方和3个不同拆方具有不同程度的抑制肝癌细胞增殖作用,且存在量效关系;联合G418用药后作用显著增强(P<0.05)。肝癌细胞被转染MTs iRNA载体后,与荧光质粒比较,无论是中药复方单独给药还是联合G418给药,对肝癌细胞增殖抑制的作用均较强(健脾方例外),提示MTs确有抵御药物治疗的作用。G418给药1d后撤药,2d后肝癌细胞出现增殖加速(P<0.05);全方、清热方、活血方、健脾方等联合G418后撤药2d,细胞增殖仍不活跃(P<0.05),提示不同治法中药联合G418用药具有减缓停药后细胞增殖反跳的作用。结论:SMMC7721肝癌细胞中MTs的过表达是该细胞耐药机制之一,临床常用防治肝癌复方及其拆方联合G418具有显著抑制肝癌细胞恶性增殖,并减缓其停药后恶性增殖加速的作用。     

虎金颗粒对肝功能及肝星状细胞增殖的影响

目的:探讨虎金颗粒对大鼠血清中血清酶成分含量的影响;探讨肝星状细胞(HSC-T6)的增殖情况,并观察虎金颗粒对HSC-T6细胞增殖的影响。方法:异种血清(猪血清)大鼠腹腔注射制作免疫性肝纤维化模型,以血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清谷草转氨酶(AST)含量检测为主要内容,随机将大鼠分为正常组、模型组、秋水仙碱组以及虎金颗粒大、中、小剂量组做比较分析;血清药理学方法培养肝星状细胞,用酶标测定仪测定OD值以测定其增殖活性。结果:模型组大鼠血清中ALT、AST含量较正常组显著上升,秋水仙碱组及虎金颗粒不同剂量组均能使上述指标发生不同程度的下调,其中中药中剂量组和大剂量组与西药组比较具有显著意义,但仍以大剂量组作用最为明显,小剂量组与西药组比较则无显著意义;当培养至24 h和48 h时,HSC-T6自身的增殖比较明显,虎金颗粒含药血清对其增殖表现出较显著的抑制作用,且随着含药血清浓度的增加,其抑制作用也有所增强,说明虎金颗粒含药血清对肝星状细胞的抑制作用有一定的量效依赖关系。结论:虎金颗粒可以改善肝功能,其抗肝纤维化的作用与其抑制肝星状细胞的增殖有关。     

姜黄素对瘦素刺激HSC增殖及JAK2-STAT3信号通路影响的研究

目的:观察姜黄素对瘦素刺激肝星状细胞(HSC)增殖及对JAK2-STAT3信号通路的影响。方法:SD大鼠36只灌胃姜黄素煎剂7 d,制备各药物含药血清,用噻唑蓝(MTT)比色法检测药物血清对100 pg·L~(-1)的瘦素刺激HSC-T6增殖的影响;应用蛋白印迹试验检测姜黄素散对100 pg·L~(-1)瘦素刺激HSC-T6中JAK2、STAT3蛋白的表达水平。结果:姜黄素药物血清有抑制HSC-T6的作用(P0.05或P0.01));姜黄素作用6 h后,JAK2、STAT3蛋白的表达水平开始出现降低,且JAK2降低较为明显,24 h后STAT3降低最为明显。结论:姜黄素药物血清具有抑制瘦素刺激HSC-T6增殖的作用;而JAK2-STAT3通路被阻断,JAK2-STAT3蛋白表达的降低可能是其发生的主要机制之一。     

桂郁金提取物对人肝星状细胞增殖、凋亡影响的研究

目的:观察桂郁金提取物对人肝星状细胞的作用,了解其对该细胞的增殖和凋亡的影响。方法:将人肝星状细胞株(HSC-LX2)与药物孵育48h后,用MTT比色法测定细胞的增殖抑制率。用流式细胞术(ANNEXIN V-PE/7-AAD双染色法)检测细胞凋亡各阶段的情况。结果:低、中、高浓度桂郁金提取物均可抑制HSC-LX2细胞的增殖,48h的增值抑制率分别为15.4%、49.1%、58.3%;48h的IC50为45μmol/L;均可诱导细胞发生早期及晚期凋亡,48h的总凋亡细胞百分比分别为20.7%、29.8%、34.4%。结论:桂郁金提取物具有抑制HSC-LX2细胞增殖、诱导细胞发生凋亡的能力,从而可以干预肝纤维化病程;以上能力均具有剂量依赖性;且中、高剂量桂郁金提取物组以上能力明显比秋水仙碱组和复方鳖甲软肝片组强。     

抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞整合素信号及凋亡的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及整合素信号通路的下游信号分子FAK在其中的作用。方法:将传代培养的大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)与中药复方抗纤软肝颗粒药物血清(5%、10%、20%)共同培养48h后,应用MTT法测定细胞增殖;应用流式细胞仪测定细胞凋亡;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测FAK mRNA的表达。结果:抗纤软肝颗粒药物血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,20%药物血清组作用最强(P<0.05);流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物血清均可诱导HSC凋亡(P<0.05);抗纤软肝颗粒药物血清能够使HSC的FAK mRNA的表达下调。结论:抗纤软肝颗粒能够抑制HSC增殖及诱导凋亡HSC。其作用可能与其抑制整合素信号通路下游信号分子FAK mRNA的表达有关。     

肿节风复方含药血清对肝癌HepG2细胞增殖、端粒酶及凋亡的影响

目的： 观察肿节风复方含药血清对人肝癌细胞HepG2细胞增殖及凋亡的影响。 方法： 实验设阴性对照组（NS）、5-氟尿嘧啶（5-FU）组（0.025 g·kg^-1）和肿节风复方低、中、高剂量组（2.5,5,10 g·kg^-1）,灌服于大鼠后,提取含药血清。取上述含药血清分别作用于HepG2细胞24,48,72 h;MTT法测定细胞增殖抑制率;ELISA法测定端粒酶活性;荧光显微法及流式细胞术（Annexin V-FITC/PI法）检测肿节风复方含药血清对HepG2细胞凋亡的影响。 结果： 与对照组比较,肿节风复方含药血清低、中、高剂量组均能抑制HepG2细胞的增殖（高剂量组抑制率最高达42.5%）,呈现与时间-剂量依赖趋势;肿节风中、高剂量组能有效抑制HepG2细胞端粒酶活性,与对照组比较P < 0.05;肿节风复方含药血清具有诱导HepG2细胞凋亡的作用,与对照组比较P < 0.05,其中中剂量组作用24,48,72 h细胞凋亡率分别为（14.2±0.9）%,（30.6±1.0）%,（61.6±1.5）%。 结论： 肿节风复方含药血清能抑制HepG2细胞增殖、端粒酶活性,诱导HepG2细胞凋亡。     

桂郁金提取物对人肝星状细胞增殖、细胞周期及凋亡影响的研究

目的观察桂郁金提取物对人肝星状细胞的作用,了解其对该细胞的增殖、细胞周期和凋亡情况的影响。方法将人肝星状细胞株(HSC-LX2)与药物孵育48 h后,用MTT比色法测定细胞的增殖抑制率。用流式细胞术(PI染色法)检测各周期细胞的DNA含量及细胞凋亡的概况。结果低、中、高浓度桂郁金提取物均可抑制HSC-LX2细胞的增殖,48h的增值抑制率分别为15.4%、49.1%、58.3%;48 h的IC50为45μmol/L;均可阻止HSC-LX2细胞进入DNA合成增殖周期,并诱导HSC-LX2细胞发生早期及晚期凋亡,48 h的S期+G2/M期细胞总数百分比分别为70.1%、63.6%、50.2%;凋亡概率分别为13.9%、18.9%、23.5%。结论桂郁金提取物具有抑制HSC-LX2细胞增殖、阻止细胞进入DNA合成增殖周期、诱导细胞发生凋亡的能力,从而可以干预肝纤维化病程;以上能力均具有剂量依赖性;且中、高剂量桂郁金提取物组以上能力明显比秋水仙碱组和复方鳖甲软肝片组强。     

温肾活血法中药对人乳腺癌MCF-7细胞株体内外生长的影响

目的：通过对MCF－7细胞株体内外的研究,揭示温肾活血法中药抑制乳腺癌的作用机理。方法：体外实验用MTT法测定药物血清对细胞的杀伤作用,并用FCM检测各组细胞的细胞周期,体内实验观察药物对体内移植瘤生长的影响。结果：温肾活血中药血清在培养液中浓度为10%、20％和30％时,对MCF－7的体外生长抑制率达22.7%、33.1％和37.4%(P＜0.05）。温肾活血法中药灌饲MCF－7荷瘤裸小鼠后,在剂量为8g/kg、4g/kg、2g/kg时抑瘤率分别为47.5％、44.2％、51.0％。结论：温肾活血法中药可以抑制乳腺癌,其机理可能是通过抑制癌细胞的DNA合成而达到抑制癌细胞的生长。     

淫羊藿总黄酮含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响

目的:研究淫羊藿总黄酮含药血清对体外培养成骨细胞增殖与分化功能的影响,进一步揭示淫羊藿"补肾壮阳,益精健骨"的作用机制。方法:采用中药血清药理学方法制备含淫羊藿总黄酮大鼠血清;用多次酶消化法体外培养成骨细胞;将含淫羊藿总黄酮大鼠血清(SRAT)以2.5%,5%,10%三种质量浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,研究它们对细胞增殖与分化成熟的影响。细胞增殖采用MTT法进行分析;细胞分化并于培养第4、8、12、16天检测碱性磷酸酶活性(组织化学法)、Ⅰ-型胶原(Co-l)的表达(免疫组化法)和矿化结节(组织化学法)。结果:2.5%和5%SRAT表现出强烈的刺激细胞增殖活性并显著提高碱性磷酸酶活性、矿化结节数和Ⅰ-型胶原表达。结论:淫羊藿总黄酮代谢产物强烈刺激成骨细胞的增殖并促进其分化成熟,说明淫羊藿总黄酮代谢产物具有促进骨形成活性。     

丹芍化纤胶囊对体内外活化肝星状细胞增殖的影响

目的:研究中药复方制剂丹芍化纤胶囊对体内外活化肝星状细胞(HSCs)增殖的影响.方法:(1)体内实验:雄性Wistar大鼠57只分为正常组、模型组、治疗组.除正常组外,其余各组采用CCl4、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周,然后治疗组给予丹芍化纤胶囊(1g/kg体重)灌胃治疗8周.实验结束时部分大鼠用于测定肝功能及肝脏纤维化程度;部分用于分离HSCs,流式细胞仪检测细胞周期百分比.(2)体外实验:制备丹芍化纤胶囊大鼠药物血清;分离培养大鼠HSCs,并分为小牛血清组、正常大鼠血清组、丹芍化纤药物血清组,分别加入5%、10%、20%以上3种血清干预培养的HSCs,MTT比色法测定原代HSCs增殖情况.结果:(1)体内实验:治疗组较模型组肝功能、肝脏纤维化程度及HSCs增殖明显减轻.(2)体外实验:丹芍化纤药物血清组较同浓度小牛血清组、正常大鼠血清组明显抑制HSCs增殖,且此作用呈剂量依赖性.结论:丹芍化纤胶囊能显著抑制体内外HSCs增殖.