苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的：研究苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(fibroblast，FB)作用的机制。方法：实验于2000-01／2004-06在武装警察部队总医院烧伤整形科实验室完成。将苦参碱以不同浓度梯度作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞，采用四唑盐比色法检测苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响，采用免疫组织化学检测增殖性细胞核抗原(proliferativecell nuclear antigen，PCNA)的表达，采用流式细胞仪对异硫氰荧光素一连接素V／碘化丙啶双染情况(FITC-Armexin V／PI)检测细胞凋亡率。结果：苦参碱在O．10-10g／L对人瘢痕疙瘩成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制作用；增殖性细胞核抗原经苦参碱作用后表达明显减弱；FTTC-Armexin V／P1示苦参碱组的凋亡率为40．7，对照组为1．6(P＜O．01)。     

瘢痕成纤维细胞的分化与凋亡

目的：研究正常皮肤、增生性瘢痕（ＡＴＳ）及瘢痕疙瘩成纤维细胞（ＦＢ）向肌成纤维细胞（ＭＦＢ）的分化、ＦＢ凋亡，以及它们与瘢痕的关系。方法：正常皮肤、ＨＴＳ、瘢痕疙瘩各取１０例培养ＦＢ，利用流式细胞仪测定ＭＦＢ比例以及ＦＢ凋亡率。结果正常皮肤、ＨＴＳ、瘢痕疙瘩培养ＦＢ的ＭＦＢ分化比例无差异；正常皮肤与ＨＴＳＦＢ凋亡率无差异，瘢痕疙瘩培养ＦＢ凋亡率较正常皮肤及ＨＴＳ低。结论：ＨＴＳ、瘢痕疙瘩ＦＢ向ＭＦ     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞抑制增殖和促进凋亡的实验观察

目的：研究苦参碱（matrine,Mat)对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期和细胞核内增殖性抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达影响。方法：将不同浓度梯度Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞，利用通过流式细胞仪检测其细胞周期，DNA相对含量，利用用免疫组织化学的检测PCNA的表达。结果：不同浓度梯度的Mat作用增生性瘢痕成纤维细胞72h后，出现G0-G1期细胞数量明显增加，S期细胞，G2-M期细胞明显减少，DNA相对含量无明显变化，PCNA表达逐渐减弱，（P＜0．01），结论：Mat能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性和细胞的有丝分裂，但对DNA含量无明显影响。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞P53基因突变检测

目的探讨瘢痕疙瘩体外培养成纤维细胞是否存在P53基因突变及形成发展机制。方法对所取新鲜组织标本进行细胞培养,设计P53基因外显子4,5,6的引物序列,从所培养各组成纤维细胞中提取细胞总DNA,采用PCR技术对所需基因片段进行扩增,并对目的基因进行测序。结果对PCR产物DNA序列分析后发现,所有体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(6/6)均存在P53外显子4的基因突变,有2例(2/6)P53外显子5存在基因突变,表现为点突变及移码突变,而正常皮肤成纤维细胞则未发现有任何形式的基因突变。结论瘢痕疙瘩成纤维细胞存在P53基因突变,这可引起其细胞增殖凋亡异常。     

芦荟大黄素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的量效影响

目的：观察天然药物芦荟大黄素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用。方法：实验于2001—06／2004—12在广东医学院整形外科研究所完成。成纤维细胞取自广东医学院附属医院整形外科患者手术切除的增生性瘢痕组织，瘢痕组织经处理后进行成纤维细胞原代及传代培养至第3—8代细胞。用剂量为40mg／L的芦荟大黄素分别处理对数生长期成纤维细胞[0（为对照组），24，48，72h]，以流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率；观察加入不同浓度（0，20，40，60，80mg／L）芦荟大黄素后24h对成纤维细胞凋亡的影响，采用特异性荧光染色和原位末端标记技术分别检测凋亡指数。结果：①芦荟大黄素作用不同时间对成纤维细胞周期和凋亡的影响：流式细胞术检测发现，用药24h出现“亚二倍体峰”即凋亡峰，凋亡指数为（10．81&;#177;1．43）％，到48和72h凋亡指数为（16．02&;#177;1．30）％和（21．58&;#177;1．56）％。随着作用时间的延长，DNA合成前期细胞百分数增多，DNA合成期的细胞含量逐渐减少，亚二倍体峰百分数增多（F=122．514，225．552，105．346，P〈0．05）。②芦荟大黄素对成纤维细胞凋亡的量效影响：荧光染色和原位末端标记法检测凋亡指数，均呈剂量依赖性增高[荧光染色：0mg／L为（4．52&;#177;1．22）％，20mg／L为（25．56&;#177;1．12）％，40mg/L为（56．20&;#177;2．20）％，80mg／L为（80．05&;#177;2．12）％，F=1350．737；原位末端标记法：0mg／L为（3．85&;#177;1．15）％，20mg／L为（11．66&;#177;1．20）％，40mg／L为（23．12&;#177;1．06）％．80mg／L为（40．31&;#177;1．43）％．F=511．487，P〈0．011。结论：芦荟大黄素以时间依赖性的方式调节细胞周期并诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡，还可呈量效关系促进成纤维细胞发生凋亡。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞P53基因突变检测

目的：探讨瘢痕疙瘩体外培养成纤维细胞是否存在P53基因突变及形成发展机制。方法：对所取新鲜组织标本进行细胞培养，设计P53基因外显子4，5，6的引物序列，从所培养各组成纤维细胞中提取细胞总DNA，采用PCR技术对所需基因片段进行扩增，并对目的的基因进行测序。结果：对PCR产物DNA序列分析后发现，所有体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞（6／6）均存在P53外显子4的基因突变，有2例（2／6）P53外显子5存在基因突变，表现为点突变及移码突变，而正常皮肤成纤维细胞则未发现有任何形式的基因突变。结论：瘢痕疙瘩成纤维细胞存在P53基因突变，这可引起其细胞增殖凋亡异常。     

苏拉明对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学特性的影响

目的探讨苏拉明（suramin）对立体培养条件下瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFb）的药物学作用。方法建立以人纤维蛋白原为支架的KFb三维培养系统,分别通过测定细胞的生长曲线。细胞的胶原合成量及I型前胶原mRNA的表达情况来观察苏拉明对KFb影响及其与转化生长因子(TGF－β1)的相互作用。结果苏拉明对KFb的生长及胶原合成均有抑制作用,且能明显抑制TGF－β1对KFb胶原合成的诱导作用。结论苏拉明能明显抑制KFb的生物学功能且对TGF－β1有明显的拮抗作用,这可能使其成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物之一。     

姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响

背景：近期研究提示姜黄素可能是一种抗纤维化制剂。目的：以瘢痕疙瘩成纤维细胞为靶细胞，观察不同浓度姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞合成胶原的影响。设计、时间及地点：随机对照实验，于2006-10／2007—11在懈放军第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科完成。材料：瘢痕疙瘩患者的手术标本5份，患者均知情同意。治疗方案经医院医学伦理委员会批准。姜黄素为美国Sigma公司产品。方法：瘢痕疙瘩成纤维细胞体外原代培养，待细胞融合后传代，取第3-6代对数生长期的成纤维细胞用于实验。将不同浓度姜黄素（5，10，20μmol／L）分别对瘢痕疙瘩成纤维细胞干预24～48h，以空白组做对照。主要观察指标：蛋白免疫印迹检测姜黄素作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后结缔组织生长因子的表达。荧光定量聚合酶链反应检测姜黄素作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后Ⅰ、Ⅲ型前胶原及结缔组织生长因子基因的表达。结果：①姜黄素作用瘢痕疙瘩成纤维细胞48h后，结缔组织生长因子蛋白的表达减少，均低于对照组（P〈0.01）。②与对照组相比，不同浓度姜黄素干预组Ⅰ、Ⅲ型前胶原及结缔组织生长因子表达均降低（P〈0．01），并且Ⅰ型前胶原表达随着药物浓度的增加，有逐渐降低的趋势，成明显的量效关系。姜黄素20μmol／L组Ⅲ型前胶原表达低于姜黄素10μmol／L组，但差异无显著性意义（P〉O．05），姜黄素10μmol／L组结缔组织生长因子表达低于姜黄素5μmol／L组，但差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：姜黄素对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成有明显抑制作用，其作用机制可能与姜黄素抑制结缔组织生长因子在瘢痕疙瘩成纤维细胞的表达有关。     

三七总甙对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用

目的:观察三七总甙对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,以寻找治疗人瘢痕疙瘩的有效药物。方法:体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别应用噻唑蓝(MTT)比色法和H3-脯氨酸掺入法检测三七总甙作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果:与空白对照组相比,三七总甙含量在0.5,1.0和1.5g/L时均能够显著抑制成纤维细胞增殖及胶原合成(P<0.01),但在1.5g/L时对细胞具有毒性作用。结论:三七总甙具有体外抗纤维化作用,可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物。     

人正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞的培养及生物学差异

背景:成纤维细胞是创伤愈合过程中的主要效应细胞,对瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养可为体外研究瘢痕疙瘩提供基础.目的:比较体外培养的人正常皮肤和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞生物学特性的差异,为体外研究瘢痕疙瘩提供平台.方法:应用组织微粒贴壁法,对人正常皮肤和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞进行原代培养、传代培养、冻存及复苏,观察二者的生长增殖情况及差异.结果与结论:瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长增殖与正常皮肤来源的成纤维细胞无明显差异,二者进入对数生长期的时间大致相同;体外培养的成纤维细胞在液氮中冻存后,细胞复苏状态良好,接种后绝大部分细胞存活,与冻存前无明显差异.说明瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞及正常皮肤来源的成纤维细胞生长增殖无明显差异,且均可成功冻存和复苏.     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞周期和 PCNA表达的影响

目的研究苦参碱(Matrine,Mat)对人增生性瘢痕成纤维细胞周期和细胞核内增殖性抗原(Proliferating Cell Nuclear     

苦参碱对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增生活性抑制作用

目的研究苦参碱(matrine,Mat)对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖活性的影响。方法利用兔耳腹侧面增生性瘢痕模型,采取免疫组织化学法观察增殖细胞核抗原的表达(proliferationcellnuclearantigen,PCNA)及嗜银核仁组织区染色法(AgNORs)统计NORs颗粒数,对比研究苦参碱在治疗兔耳增生性瘢痕过程中对成纤维细胞增殖活性的影响。结果局部注射苦参碱后,兔耳腹侧面增生性瘢痕中的成纤维细胞增生活性受到明显抑制,PCNA表达明显减弱,AgNORs记数明显减少。用药12周后对照组/苦参碱组PCNA标记指数和AgNORs分别为0.87/0.35,2.31/1.07(P<0.05)。结论苦参碱明显抑制兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增生活性,对兔耳腹侧面增生性瘢痕有明显的治疗作用。     

瘢痕疙瘩及周围皮肤成纤维细胞生长差异的生物学研究

目的探讨正常皮肤、增生性瘢痕、瘢痕疙瘩周边部和中央部及瘢痕疙瘩周围皮肤(距瘢痕疙瘩边缘0.5cm范围内)的成纤维细胞呈现不同生物学性状的细胞生物学机理。方法取手术切除的正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织及周围皮肤各6例为标本,通过细胞培养6～10代后,应用流式细胞仪不同来源的成纤维细胞细胞周期的分布,同时比较它们在无血清培养条件下和在不同浓度FasMcAb作用下的细胞凋亡率。MTT比色法比较其细胞增殖活性。结果正常皮肤成纤维细胞增殖及凋亡正常。增生性瘢痕增殖活跃且细胞凋亡状况不良,瘢痕疙瘩中央部成纤维细胞处于低增殖—不凋亡状况;瘢痕疙瘩周边部成纤维细胞处于高增殖—无凋亡状况;瘢痕疙瘩周围正常皮肤大量细胞也处于高增殖及低凋亡状况。结论病理性瘢痕成纤维细胞增殖凋亡状况的异常可能是导致其不同生长特性的细胞生物学机理之一。     

己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

背景:近年来发现己酮可可碱有广泛的抗纤维化作用,但己酮可可碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制作用却少见报道,且其最大抑制剂量尚无定论.目的:观察己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用,并筛选己酮可可碱的最大抑制浓度.方法:以人瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞原代培养,传至第5～8代后将细胞分为实验组和对照组,实验组加入质量浓度为0.1,0 25,0.5,1.0,2.0,3.0 g/L的己酮可可碱,利用MTT比色法检测成纤维细胞的增殖活性.结果与结论:与对照组相比,实验组成纤维细胞增殖抑制率较高(P＜0.05),质量浓度在0.1～2.0 g/L范围内呈明显的量效、时效关系,96 h处于较高水平.实验组最大抑制率为53.37%,最大抑制质量浓度为2.0 g/L.结果表明己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,最适抑制质量浓度为2.0 g/L,发挥抑制作用最强的时间为给药后96 h.     

常山酮对人瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响

目的:探索常山酮对体外培养的人成纤维细胞胶原合成和生物学行为的影响。方法:于2003-03/06在重庆医科大学附属第一医院,采用人瘢痕体外培养的成纤维细胞,分别将不同浓度的常山酮加入培养基中,在不同时相点观察常山酮对成纤维细胞生物学特性的影响,并应用放射免疫法检测Ⅰ,Ⅲ型胶原含量。结果:常山酮在0.1～10mg/L,对成纤维细胞的形态和增殖活性均未见明显影响;常山酮可抑制成纤维细胞合成Ⅰ型胶原,且随浓度增加作用增强,但不影响Ⅲ型胶原的合成。结论:常山酮可抑制人瘢痕成纤维细胞的Ⅰ型胶原合成,对瘢痕的预防和治疗有实用前景。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞生长与小干扰RNA分子抑制细胞周期蛋白D1表达的影响

目的:细胞周期蛋白是细胞周期调控的决定性因子,RNA干涉是一种高效特异的基因沉默技术,能诱使细胞表现出特定基因缺失表型.通过RNA干扰阻断细胞周期蛋白D1基因表达,观察瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞周期的影响.方法:实验于2006-07/2007-05在南方医科大学基因工程研究所(BSL-2级)完成.①实验材料:小干扰性RNA设计采用软件是ambion公司的在线软件siRNA target finder,合成采用化学合成法,委托上海吉凯基因有限公司合成,再经过变性退火处理后得到双链小干扰性RNA;瘢痕疙瘩成纤维细胞标本取自南方医院整形外科瘢痕疙瘩患者(均获得患者或其家属同意).②实验过程及分组:将瘢痕疙瘩成纤维细胞应用脂质体法将针对细胞周期蛋白D1基因的小干扰RNA分子转染为实验组,细胞用等量脂质体处理为脂质体组,未处理组作为对照.③实验评估:于转染后24,48,72 h,光学显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术分析细胞周期;MTT法检测成纤维细胞的活性并绘制细胞生长曲线.结果:①转染特异性小干扰RNA后,细胞形态发生了异常改变,细胞由正常的长梭形变为圆形或椭圆形,提示可能是凋亡或坏死细胞.②转染后细胞周期G1期延长,S期缩短.转染特异性小干扰RNA 24,48,72 h后G1期细胞高于未处理组(依次为60.13%,66.22%,67.53%,54.53%);S期细胞低于未处理组(依次为18.25%,17.11%,11.15%,22.31%),表明细胞阻滞在G1期,进入S期细胞减少.③小干扰RNA-细胞周期蛋白D1转染后MTT法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞增值明显受到抑制,细胞生长曲线图表明,转染特异性小干扰RNA组细胞生长明显减缓.结论:特异性小干扰RNA分子能够抑制细胞周期蛋白D1基因的表达,使细胞阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡.     

汉防己甲素对增生性瘢痕中成纤维细胞增殖和活力的影响

目的 :观察汉防己甲素对成纤维细胞的生物学作用。方法 :通过对增生性瘢痕中的成纤维细胞进行培养 ,然后加入不同浓度的汉防己甲素 ,继续培养后观察成纤维细胞增殖和活力的变化。结果 :当汉防已甲素的浓度达到100mg/L时 ,抑制率达到了89.4 % ,细胞的活力也下降到对照组的38.5%。结论 :汉防己甲素可能对增生性瘢痕具有预防和治疗作用     

丝裂霉素C影响增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡

背景：丝裂霉素C已逐渐开始应用于治疗增生性瘢痕领域中,但针对丝裂霉素C通过细胞凋亡作用于增生性瘢痕分子机制报道很少。目的：探讨丝裂霉素C对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响。方法：应用2.5,12.5,50,100和200mg/L丝裂霉素C作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,采用流式细胞仪检测成纤维细胞的周期分布和凋亡情况;通过Westernblot法检测细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果与讨论：丝裂霉素C可使增生性瘢痕成纤维细胞的生长阻滞于G0/G1期,并且能够诱导增生性瘢痕成纤维细胞发生凋亡,有着明显的浓度依赖性。经2.5~200mg/L丝裂霉素C作用24h后,增生性瘢痕成纤维细胞中Bax蛋白表达增高,Bcl-2蛋白表达降低（P〈0.05）。说明丝裂霉素C可能通过增加增生性瘢痕成纤维细胞Bax表达,降低Bcl-2表达,促进成纤维细胞凋亡的增加。