枳黄方对急性酒精性肝病大鼠TNF-α和内毒素的影响

目的：通过观察枳黄方对大鼠急性酒精性肝损伤肝组织TNF—α的变化及其血浆内毒素水平的改变，验证此方对大鼠急性酒精性肝病的防治作用。方法：将75只Wistar大鼠随机分为枳黄方组、模型组及正常组，采用免疫组化法测量肝组织内TNF—α值，用生化法检测血浆内毒素水平。结果：枳黄方组大鼠血浆内毒素水平高于正常组（P〈0．05），但显著低于模型组（P〈0．01），肝组织TNF-α和血清ALT水平高于正常组（P〈0．01），但显著低于模型组（P〈0.01）。并且血浆内毒素水平与肝组织TNF—α活性变化呈正相关（r=0．993，P〈0．01）。结论：枳黄方合剂可显著降低急性酒精性肝病大鼠血液中内毒素水平及肝脏中TNF-α水平，对大鼠急性酒精性肝病有较好治疗作用。     

枳黄方对酒精性肝损伤大鼠肝胃ADH1 mRNA的影响

目的:探讨枳黄方对大鼠酒精性肝损伤的防护作用及其机理。方法:将30只SD大鼠随机分为3组:空白对照组、酒精攻击组、枳黄方防护组,每组10只。10天后,处死大鼠,取大鼠肝脏进行HE染色观察肝病理变化,RT-PCR法测定肝、胃组织ADH1mRNA的变化。结果:枳黄方能缩短大鼠醉酒时间(P<0.05),枳黄方防护组肝、胃病理表现较模型组明显改善,其肝、胃ADH1mRNA表达量高于模型组(P<0.01)。结论:枳黄方对大鼠酒精性肝损伤有较明显的防护作用,这可能与其能提高肝、胃ADH1mRNA的表达有关。     

枳黄方对急性酒精性肝损伤大鼠肝脂质过氧化水平的影响及其机制研究

目的:观察枳黄方对急性酒精性肝损伤大鼠肝脂质过氧化水平的影响,并探讨其机制。方法:通过酒精灌胃法制造急性酒精性肝损伤大鼠模型,采用HE染色观察肝病理变化;羟胺法检测肝脏SOD活力;TBA法检测肝脏MDA含量;采用RT-PCR技术检测肝脏NADPH氧化酶gp-91phox mRNA的表达量。结果:枳黄方能改善急性酒精性肝损伤之肝脏病理变化;下调肝脏NADPH氧化酶gp-91phox mRNA的表达;显著降低肝脏MDA含量(P<0.05);显著提高肝脏SOD活力(P<0.01)。结论:枳黄方能对抗酒精性肝损伤大鼠肝脏脂质过氧化,这可能与其能降低肝脏NADPH氧化酶gp-91phox mRNA的表达有关。     

枳黄方对急性乙醇性肝损伤大鼠肝脂质过氧化水平的影响及机制

目的探讨枳棋子、大黄水提液（枳黄方）对急性乙醇性肝损伤大鼠（ALD）的保护作用。方法将30只大鼠随机分为A、B、C三组每组10只,其中A组予枳黄方6．0ml／kg灌胃,B、C组予6．0ml／kg生理盐水灌胃;间隔45min后A、B组予56。白酒14ml／kg灌胃,C组予50％葡萄糖14mL／kg灌胃,均为1次／d,连续10d。最后1次灌胃后禁食14h,以2％戊巴比妥钠40mg／kg腹腔注射麻醉大鼠,采集肝组织。羟胺法检测肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活力,TBA法检测肝脏丙二醛（MDA）水平;采用RT—PCR技术检测肝脏NADPH氧化酶gp-91phox mRNA及p22phox mRNA表达。结果与B组比较,A组SOD活性显著升高,MDA水平及gp-91phox、p22phoxmRNA表达显著降低。结论枳黄方能对抗ALD大鼠肝脏脂质过氧化,可能机制为降低肝脏NADPH氧化酶gp-91phox mRNA及p22phox mRNA表达。     

消黄方对二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化氧化应激的影响

目的探讨消黄方对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)肝纤维化大鼠肝组织氧化应激的影响。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为正常组及DMN模型组,DMN模型组大鼠DMN(10 mg/kg)每周前3天连续腹腔注射共4周制备大鼠肝纤维化模型,造模第3周,DMN大鼠随机分为模型对照组和消黄方组(例数10),消黄方组每天造模的同时给予方剂煎出液灌胃2周。造模4周末,处死全部大鼠,获取肝组织,检测肝组织羟脯氨酸(hydroxy prone,Hyp)含量,检测肝组织超氧化物歧化酶活性(superoxidedismutase,SOD)、谷胱甘肽转移酶(glutathione-S-transfcrase,GST)活性、谷胱甘肽(glutathione,GSH)及丙二醛含量(malondialdehyd,MDA)等氧化应激指标,实时定量PCR检测肝脏Ⅰ型胶原mRNA表达。结果与正常组相比,DMN模型组大鼠肝组织MDA含量及GST活性显著升高(P<0.01),分别为正常组的2.37倍和2.04倍,而GSH含量和SOD活性则显著降低(P<0.01),分别是正常组的0.37和0.47倍。与模型对照组相比,消黄方组显著降低肝组织MDA含量(P<0.05),增高GSH含量和SOD活性(P<0.01),实时定量PCR结果显示Ⅰ型胶原造模后达到正常组的34倍,消黄方组显著降低(P<0.01)。结论氧化应激是肝纤维化形成的重要病理因素之一,消黄方能显著改善DMN纤维化大鼠肝组织氧化应激。     

罗格列酮对脂多糖诱导的核因子-κB信号转导通路的影响

本研究通过对小鼠内毒素脂多糖(LPS)急性肝损伤动物模型应用过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR γ)的特异忡激动剂罗格列酮,探讨其对LPS诱发的急性肝损伤中肝脏核因子(NF)-κB信号转导通路方面的影响.     

肝样腺癌患者的癌组织甲胎蛋白、CAR-T靶点蛋白及白细胞分化抗原133表达观察

目的观察肝样腺癌癌组织甲胎蛋白(AFP)、CAR-T靶点蛋白(Glypican-3)及白细胞分化抗原133(CD133)的表达变化。方法 36例肝样腺癌患者(观察组)及20例普通型胃腺癌患者(对照组),均行肿瘤切除术,术中保留癌组织,免疫组化法检测两组癌组织AFP、Glypican-3及CD133,并分析AFP、Glypican-3及CD133表达与肝样腺癌患者临床病理参数及预后的关系。结果观察组、对照组癌组织AFP阳性表达率分别为47.2%(17/36)、10.0%(2/20),Glypican-3阳性表达率分别为61.1%(22/36)、5%(1/20),CD133阳性表达率分别为52.8%(19/36)、35.0%(7/20),与对照组比较,观察组癌组织AFP、Glypican-3阳性表达率升高(P均<0.05)。CD133表达与肝样腺癌患者血清AFP水平升高有关(P <0.05)。结论肝样腺癌患者癌组织AFP、Glypican-3、CD133表达均升高。AFP、Glypican-3可能参与肝样腺癌的发生发展。     

丹参素对大鼠肝星状细胞氨基末端蛋白激酶信号转导的影响

目的 探讨丹参素抗肝纤维化作用的机制. 方法分离大鼠原代肝星状细胞(HSC),用0.0312、0.0625、0.1250、0.2500、0.5000、1.0000 mmol/I.不同浓度丹参素作用于HSC,四甲基偶氮唑黼法检测丹参素对HSC生长增殖的抑制作用;应用免疫细胞化学法观察Ⅰ型胶原合成,酶联免疫吸附法观察Ⅰ型胶原分泌.Western blot法观察丹参索对白细胞介素-1 β(IL-1 β)刺激的HSC内氨基末端蛋白激酶(JNK)蛋白及其磷酸化表达的影响.采用随机设计的方差分析,SNK-q进行统计学处理. 结果与0 mmol/L组比较,丹参素其他浓度组明显抑制了HSC增殖,并旱剂量依赖性.丹参素(0.0625～0.2500 mmol/L)对IL-1 β引起的HSC增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性.0.25 mmol/L丹参素对正常培养的和经IL-1 β刺激的HSC作用24 h能下调Ⅰ型胶原的合成和分泌.IL-1 β能刺激ttSC中p-JNK的明显表达,丹参素能下凋亡IL-1 β诱导的ItSC中P-JNK的表达,但其对JNK表达水平没有明显影响. 结论丹参索可抑制正常传代培养的和经IL-1 β刺激的人鼠HSC增殖、Ⅰ型胶原合成与分泌,其机制可能与抑制JNK信号转导通路有关.     

蛹虫草多肽对大鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

目的探讨蛹虫草多肽对急性酒精性肝损伤大鼠肝脏的保护作用及机理。方法将60只Wistar大鼠随机分为5组,即空白对照组、模型对照组、低剂量蛹虫草多肽组、中剂量蛹虫草多肽组和高剂量蛹虫草多肽组。除空白对照组外,每组均给予10ml/kg、56°白酒灌胃,1次/d;空白对照组给予相同剂量蒸馏水每日灌胃。模型对照组和不同剂量给药组每日给予白酒灌胃后1 h,分别给予蒸馏水及蛹虫草多肽溶液(6 ml/kg)灌胃,4周后眼眶取血。检测各组大鼠血清中ALT和AST水平、肝脏内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;并在光镜下观察肝脏病理结构变化。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果与模型组比较,不同剂量给药组大鼠血清中ALT和AST水平及肝脏中MDA水平均明显下降(P值均0.05),肝脏中SOD活性均显著提高(P值均0.05),且不同剂量给药组间比较差异均有统计学意义(P值均0.05);给药组肝脏病理切片镜下可见酒精所致肝细胞脂肪变性及坏死等损伤减轻。结论蛹虫草多肽对酒精造成的急性肝损伤具有保护作用,作用机理可能与其抗氧化作用相关。     

喉鳞状细胞癌中白细胞分化抗原74和基质金属蛋白酶-7的表达及意义

目的检测喉鳞状细胞癌(喉鳞癌)中白细胞分化抗原(CD)74和基质金属蛋白酶(MMP)-7的表达,关注二者在不同临床特征中的表达差异及相关性。方法 63例喉鳞癌术后组织为观察组,31例声带息肉组织为对照组。采用免疫组织化学染色方法检测两组CD74和MMP-7的表达。结果两组中CD74和MMP-7的表达差别有统计学意义(P<0.001)。观察组中CD74的表达与肿瘤最大径、分化程度、淋巴结转移和神经侵犯密切相关。观察组MMP-7表达与肿瘤淋巴结转移和神经侵犯密切相关。相关分析显示观察组中CD74和MMP-7表达呈正相关。结论喉鳞癌术后组织中CD74和MMP-7高表达,对肿瘤的形成和进展有明显促进作用,CD74和MMP-7之间可能具有一定的协同作用。     

CD14在LPS介导KuPffer细胞激活中的作用

感染,特别是脓毒血症（ｓｅｐｓｉｓ）至今仍是造成临床患者发生多脏器损伤（ｍｕｌｔｉｐｌｅｏｒｇａｎｓｄａｍａｇｅｓ,ＭＯＤ）甚至死亡的主要原因之一．感染造成ＭＯＤ的重要机制是内毒素或脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ,ＬＰＳ）激活单核－巨噬细胞系统（ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｐｈａｇｏｃｙｔｅｓｙｓｔｅｍ,ＭＰＳ）释放多种细胞因子如ＴＮＦα,ＩＬ－１,ＩＬ－６,ＮＯ等产生的介质病．Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞（ＫＣ）占整个ＭＰＳ的８０％～９０％,是体内最大的固定巨噬细胞群;ＫＣ位于肝血窦内,与从肠…     

CD14与酒精性肝病

白细胞分化抗原14(clusterofdifferentiationantigen,CD14)为内毒素脂多糖(lipopolysac-charide,LPS)高亲和力受体,在机体免疫、防御系统引起的一系列反应中起着关键的作用.细胞膜CD14识别LPS并引起细胞酪氨酸磷酸化、核因子(nuclearfactor-κB,NF-κB)转位、触发细胞因子释放和氧自由基的产生.而可溶性CD14则与细胞膜CD14竞争结合LPS,并且介导不表达膜CD14的内皮细胞和平滑肌细胞对LPS的应答.近年来发现,CD14在酒精性肝病的发病机制中起着重要的作用.     

清肝活血方及其拆方对酒精性肝病大鼠CD14、TLR4表达的影响

目的:探讨清肝活血方及其拆方对酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)大鼠肝组织CD14、TLR4表达的影响.方法:♂ Wistar大鼠100只随机分成空白组、CCl4组各10只,余80只为造模组,采用复合因素复制ALD模型6 wk.CCl4组予微量CCl4腹腔注射,每周2次.造模4 wk后将模型组随机分成4组,清肝活血方及其拆方组各15只,余为模型组.予等效剂量清肝活血方及拆方ig 2 wk.检测血清ALT,AST水平:留取肝脏标本进行HE染色.RT-PCR检测肝组织CD14 mRNA、TLR4 mRNA表达,免疫组织化学染色检测肝组织CD14表达,Wlestern blot检测肝组织TLR4蛋白表达.结果:与模型组比较,清肝活血方及其拆方均可明显改善ALD大鼠肝脏脂肪变及肝脏炎症程度(0.67±0.50,2.15±1.28,1.38±1.06 vs4.56±0.73,均P<0.01).清肝活血方能显著降低模型大鼠血清ALT水平(725.65±111.02 vs884.68±177.54,P<0.05),清肝方和活血方无明显作用;清肝方、活血方、清肝活血方均可明显降低ALD大鼠血清AST水平(2383.81±888.18,2158.93±922.85,2001.90±519.27vs 3210.98±640.63.P<0.01或0.05),组间比较无显著差异.清肝方及清肝活血方能显著降低模型大鼠CD14 mRNA表达(1.46±0.52,1.10±0.40 vs 2.67±0.66,均P<0.01).活血方作用不明显,清肝活血方优于活血方.清肝方、活血方、清肝活血方均能显著降低模型大鼠肝组织TLR4 mRNA表达(1.91±0.03,2.11±0.03,1.53±0.01 vs 2.37±0.03,均P<0.01),组间比较无显著差异.清肝活血方显著降低模型大鼠肝组织CD14表达(13 392.28±9287.54vs 32 288.89±15 631.03,P<0.01).清肝方、活血方、清肝活血方均能显著降低模型大鼠肝组织TLR4表达(1.06±0.10,1.19±0.05,0.98±0.12 vs 1.40±0.11,均P<0.01).结论:清肝活血方及其拆方发挥对ALD的防治作用,其作用机制可能与降低CD14、TLR4基因和蛋白的表达有关.     

电针对抑郁症大鼠海马CREB-BDNF受体后信号转导通路的作用

目的 探讨电针对抑郁症大鼠的治疗作用及海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)的影响.方法 SD成年大鼠32只随机分为空白组、模型组、针刺组(合谷+太冲)和药物组(盐酸氟西汀),每组8只.空白组进行正常饲养,不给予其他处理;模型组大鼠采用长期不可预见性温和刺激造成抑郁症模型;电针组大鼠造模后电针合谷穴和太冲穴,每日1次,每次15 min,左右两侧穴位交替进行,持续21 d.药物组大鼠造模后进行氟西汀灌胃,每日1次,持续3 w.应激后第7、14、22天观察大鼠Open field行为学的变化,应激后22 d取材观察海马神经元形态结构、BDNF和CREB的表达.结果 (1)应激后第7、14、22天模型组大鼠水平运动及垂直运动较应激前有不同程度的减弱,针刺组于应激后第14天可有效地改善抑郁型大鼠模型的行为学表现,其效果优于药物组(P<0.05).(2)模型组海马齿状回神经元排列散乱,可见明显肿胀、固缩、变性、脱落等病理改变;针刺组和药物组大鼠海马神经元的病变程度较模型组有不同程度的减轻.(3)模型组大鼠BDNF阳性细胞数量较空白组明显减少(P<0.05),针刺组和药物组海马BDNF和CREB的表达较模型组上调(P<0.05).结论 针刺能改善抑郁症大鼠的行为学及海马神经元的病理变化,CREB-BDNF受体后信号转导通路是针刺抗抑郁的重要途径和作用靶点之一.     

乳黄制剂对肝硬化模型大鼠肝组织脂多糖结合蛋白mRNA、CD14 mRNA及Toll样受体4 mRNA的影响

目的:研究乳黄制剂对肝硬化大鼠肝组织LBP(脂多糖结合蛋白)mRNA、CD14 mRNA、TLR4(Toll样受体-4)mRNA的影响.方法:SPF级雄性Wister大鼠88只随机分为6组:正常组、模型组、预防组、预防对照组、模型治疗组、模型治疗对照组.采用CCl4复合因素法制造肝硬化模型.用乳黄制剂进行预防和治疗,并与乳果糖对照药进行比较,分别检测大鼠肝组织LBP mRNA、CD14 mRNA、TLR4 mRNA的表达水平.结果:治疗组大鼠肝组织LBP mRNA、CD14 mRNA、TLR4 mRNA表达水平明显低于模型组(P＜0.05),预防组大鼠肝组织LBP mRNA、CD14 mRNA、TLR4 mRNA表达水平与正常组比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论:乳黄制剂能有效抑制内毒素调节蛋白及其相关受体的表达,从而减少内毒素血症的发生.     

中药调肝理脾方对大鼠乙醇性肝病肝纤维化的影响

目的:研讨中药调肝理脾方和东宝肝泰片对乙醇性肝病肝纤维化的治疗效果。方法:♂SD大鼠经过9 wk乙醇混合物灌胃后,模型组被处死,取得肝脏,其他动物随机分成自然恢复组(11 wk)、东宝肝泰片组和调肝理脾方组,给予连续10 d的灌胃治疗,然后处死并取得肝脏,采用光镜、电镜观察肝细胞、肝星状细胞、肝窦内皮细胞、肝窦和窦周病理变化,并以免疫组化方法观察3种细胞外基质分子变化．结果:模型组动物肝细胞混浊肿胀,脂肪变性,间质细胞增生,细胞核深染,Masson染色并可见肝细胞周围铁丝网格样纤维化和中央静脉基底膜增厚;自然恢复组肝细胞病变有所好转,纤维化也有好转,调肝理脾方组好转最明显．电镜下显示,模型组肝窦基底膜增厚,窦周胶原原纤维大量增生,肝细胞微绒毛大量减少、倒伏,自然恢复组无明显好转,调肝理脾方和东宝肝泰片片组有好转．Ⅰ型胶原和层黏蛋白恢复结果以调肝理脾方组最好,Ⅳ型胶原恢复结果以东宝肝泰片组最好．结论:调肝理脾方对病理性堆积的Ⅰ型胶原和层黏蛋白代谢有明显促进作用,效果强于东宝肝泰片,而且也能促进过多的Ⅳ型胶原恢复正常,而东宝肝泰片在促进堆积的Ⅳ型胶原恢复方面强于调肝理脾方．     

内毒素上调肝细胞表达CD14基因和蛋白的实验研究

目的 观察内毒素血症时肝组织和游离肝细胞中CD14基因和CD14蛋白的表达。方法 经尾静脉注入脂多糖（LPS,E coli O111.B4）建立大鼠急性内毒素血症动物模型,并用原位胶原酶灌注法分离肝细胞。用流式细胞仪（FCM）测定异硫氢酸荧光素（FITC）－CD14阳性肝细胞数及其荧光强度。同时用逆转录－PCR和Western blot法测定肝组织和肝细胞中CD14 mRNA和CD14蛋白的表达。结果 FCM显示：内毒素血症大鼠6h和12hFITC－CD14阳性细胞数明显增多,荧光强度也明显增加。RT－PCR显示,肝组织和肝细胞中CD14 mRNA的表达在3h时明显增强,6h达高峰,24h恢复正常水平;Western blot分析示肝组织和肝细胞中CD14蛋白的表达在6h明显增高,12h达高峰,24h仍有一定表达,各时相点间比较有显著差别（P＜0.01）。结论 内毒素血症时能明显上调肝细胞CD14基因和CD14蛋白的表达。     

JNK信号通路在非酒精性脂肪肝病形成中的作用及其机制

目的 观察C-Jun氨基末端激酶(JNK)信号传导通路在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠中的表达,探讨其在NAFLD发病中的作用.方法 雄性SD大鼠64只,随机分为8周对照组、12周对照组、8周高脂组及12周高脂组各16只,对照组喂饲普通饲料,高脂组喂饲高脂饲料.正糖高胰岛素钳夹实验技术检测葡萄糖输注率(GIR),生物化学法检测空腹血糖(FBS)、ALT、AST、甘油三酯(TG)、总胆同醇(TC);放射免疫法检测空腹胰岛素(FIns)、肿瘤坏死因子α(TNFα);分光光度计测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、游离脂肪酸(FFAs);Western blot检测肝组织JNK1、胰岛素受体底物1(IRS-1)、胰岛素受体底物1丝氨酸307磷酸化(p-IRS-1~(Ser307))、蛋白激酶B(PKB)、蛋白激酶B丝氨酸473磷酸化(p-PKB~(Ser473)).正态分布数据采用t检验,偏态分布数据采用秩和检验. 结果 8周高脂组与8周对照组、12周高脂组与12周对照组比较:体质量、肝指数、血清ALT、AST、TG、TC,FIns、FFAs、TNF α,及肝匀浆TG、TC、FFAs、MDA,高脂组(8、12周)均明显高于对照组(8、12周),t值分别为5.90和7.92、9.91和7.42、5.49、4.99和5.31、7.37、2.30和5.86、2.64和3.85、3.86和6.61、10.53、7.07和8.45、T=89.5和T=100、5.20和6.18、11.90和17.83,P值均<0.05或相似文献   

肝纤维化大鼠肝组织Raf/ERK信号通路的变化及肝复康的干预作用

目的探讨中药肝复康通过Raf/ERK介导的信号转导通路治疗肝纤维化大鼠的作用机制。方法制备四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠,应用肝复康干预;采用RT-PCR法测定肝组织及HSC-T6细胞Raf、ERK和Ⅲ型胶原mRNA水平的变化;采用免疫组织化学法检测肝组织ERK的表达。结果模型组肝组织Raf、ERK和Ⅲ型胶原mRNA水平较正常对照组明显上调(P<0.01),而肝复康治疗组则明显下调(P<0.01);模型组肝组织ERK蛋白的表达上调,而肝复康治疗组表达则下调。结论肝复康对肝纤维化有明确的治疗作用,其抗肝纤维化的作用机制可能与ERK介导的信号转导通路有关。