用酶释放试验检测小鼠的自然杀伤细胞活性

用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测小鼠自然杀伤细胞(NK)活性,以YAC-1为靶细胞,小鼠脾细胞为效应细胞,用分光光度计测定受损靶细胞释放的LDH,探讨靶细胞的最适培养时间和浓度,效靶比例和测定时温度的影响。实验证实了小鼠NK活性水平与鼠龄及鼠的品系有关,并观察到非纯化白细胞介素-2(IL-2)与鼠脾细胞体外共育1h对NK活性有增强作用。     

~(51)Cr释放方法测定LAK细胞活性若干实验条件的选择

本文探讨了(51)~Cr释放试验测定LAK细胞活性的若干实验条件。应用200μCi国产铬酸钠(Na_2~(51)CrO_4),在细胞浓度2×10~8/ml、容积0.5ml、2小时的标记条件下,1×10~4k_(562)细胞的同位素掺入量大于1800cpm,自然释放率为17～20％。以IN HCI与等容量k_(562)靶细胞共育为最大释放,其最大释放率为70.08％。效/靶比例为50∶1、共育6小时的基本条件下,(51)~Cr释放方法测定的LAK细胞杀伤K_(562)细胞活性为65.33±7.4％。     

人外周血中自然杀伤细胞活性检测(~(51)Cr释放法)简报

正常人和动物的淋巴细胞能杀伤多种肿瘤细胞。这种正常淋巴细胞称为自然杀伤细胞(Natural Killer Cell)简称NK细胞。73年以来国外不少研究报导NK细胞对防止肿瘤和白血病发生以及防止肿瘤扩散转移都起着重要作用。NK细胞可以杀伤病毒感染细胞;干扰素可以促进NK细胞成熟及增进NK细胞的活性;NK细胞可以产生干扰素,因此干扰素—NK细     

应用~(125)I—UdR释放法检测LAK细胞的杀伤作用

本文利用~(125)I-UdR标记K562、Raji靶细胞技术,建立体外测定LAK细胞的细胞毒方法。Raji细胞与K562细胞的标记条件相似,即在标记时间为4h、5×10~(-5)SMFUdR条件下,标记1×10~6细胞/ml。~(125)I-UdR最适用量为2—3μCi,效靶细胞孵育最佳时间为16-18h。~(125)I-UdR释放法检测的结果符合LAK细胞的一般特性。     

~(51)C_r释放试验测定人自然杀伤细胞功能的研究

1973年,Takasugi和Herberman分别发现人和小鼠的淋巴细胞没经过特异性免疫,也无需抗体参与就能在体外杀伤某些肿瘤细胞,因而称为自然杀伤(NK)细胞。各国学者对这种细胞的性质进行了大量的研究,公认NK细胞与肿瘤发生、发展有密切关系,是机体免疫监视的重要效应细胞。体外培养的人白血病细胞系K_(562)对NK细胞敏感,以它为靶细胞的~(51)C_r释放试验,是国外最常用的测定人NK细胞功能的方法。近年,我国也开展了对NK细胞的研究,我们摸索了应用该法的各项条件,测定了部分正常人的NK细胞功能,现将结果报告如下:     

~(51)Cr释放试验测定人自然杀伤细胞功能的研究

1973年,Takasugi等分别发现人和小鼠的淋巴细胞没经过特异性免疫,也无需抗体参与就能在体外杀伤某些肿瘤细胞,因而称为自然杀伤(NK)细胞。各国学者对这种细胞的性质进行了大量的研究,认为NK细胞与肿瘤发生、发展有密切关系,是机体免疫监视的重要效应细胞。体外培养的人红白血病细胞系K_(562)对NK细胞敏感,以它为靶细胞的~(51)Cr释放试验是国外最常用的测定人NK细胞功能的方法。近年,我国也开展了对NK细胞的研究,我们摸索了应用该法的各项条件,     

天然杀伤活性的测定——(1)体外8h(125)I-UdR释放试验

用~(125)I—UdR标记靶YAC—1细胞建立8h~(125)I-UdR释放试验(8IRA),体外测定小鼠脾脏细胞NK活性。靶细胞标记的理想条件是:YAC—1细胞2×10~5/ml;加~(1250I-UdR74～111kBq/L;FUdR3×10~(-5)mol/L;在37℃、5%CO_2湿环境中培养5～7h,其~(125)I-UdR掺入量(标记率)为0.5cpm/细胞以上。影响~(125)I-UdR释放因素的研究表明,采用8IRA时,自发释放率在20%以下,而且NK活性的测定结果也稳定。     

小鼠自然杀伤细胞在乌贼墨作用下的活性表达

目的：研究乌贼墨对BALB／c小鼠脾细胞自然杀伤（NK）细胞活性的诱生作用。方法：用5％的乌贼墨给小鼠灌胃，连续5d后取不同时间的小鼠脾细胞，应用乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性。同法观察乌贼墨对S180和Meth A荷瘤鼠的抑瘤作用。结果：口服乌贼墨后可使小鼠NK细胞杀伤活性增强，实验组与对照组比较有显著性差异，（P＜0.01）；诱生后24h至7d NK细胞杀伤活性处于高峰期，2周左右恢复正常水平；乌贼墨可使荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性增强，瘤体缩小。结论：乌贼墨能诱导小鼠NK细胞杀伤活性，抑制荷瘤鼠瘤体的生长。     

胃癌病人自然杀伤细胞活性检测及变化因素分析

以Na_2~(51)CrO_4标记K562靶细胞,应用放射性同位素释放法,对正常人和胃癌病人外周血NK细胞活性进行了检测,发现胃癌病人NK活性的高低与肿瘤组织分化程度的高低相平行,即高分化胃癌病人NK细胞活性无显明改变,低分化与不良分化胃癌病人NK细胞活性明显降低;而无论是限局型还是浸润型病人,NK细胞活性均明显降低。干扰素浓度为500IU/ml时,可提高正常人(40.5%)和病人(36.6%)的NK细胞活性,其中限局型病人对干扰素的反应能力优于浸润型病人。     

鼻咽癌外周血NK细胞活性的分析研究

作者测定了１１７例鼻咽癌患者外周血ＮＫ细胞活性水平，并与４０例健康者进行比较，结果发现鼻咽癌患者外周血ＮＫ细胞活性低于对照组（Ｐ＜０．０１），低分化鳞状细胞癌、未分化细胞癌患者ＮＫ细胞活性显著低于中分化鳞状细胞癌和对照组（Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０１）；ＵＩＣＣ－ＴＮＭ分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期和复发病例的ＮＫ细胞活性均数各为２５．７５±１４．６３、２４．７０±１２．４２、１９．１５±８．２９、１５．６５±７．２５，Ⅳ期和复发者显著低于Ⅱ、Ⅲ期者（Ｐ＜０．０５）。血ＮＫ细胞活性与鼻咽癌患者血清ＥＢ病毒ＶＣＡ－ＩｇＡ抗体水平呈负相关（γｓ＝－０．８５，Ｐ＜０．０５）。结果表明鼻咽癌患者外周血ＮＫ细胞活性受抑制，并随病情进展而下降。作者认为检测外周血ＮＫ细胞活性可作为评估鼻咽癌预后的一项辅助指标。     

PGE_1对NK细胞活性的影响及杀伤肿瘤细胞的超微结构特征

用间接ELISA法检测前列腺素E_1(PGE_1)对小鼠血清抗体形成的影响;用台盼蓝排斥试验检测NK细胞活性;用相差显微镜及透射电镜观察PGE_1作用的小鼠脾NK细胞杀伤S_(180)肿瘤细胞的形态及超微结构。结果表明PGE_1浓度在0.01μmol/L时可抑制小鼠血清抗体生成,抑制脾NK细胞活性,由PGE_1作用的NK细胞杀伤S_(180)肿瘤细胞的损伤程度小于对照组。     

小鼠移植性肿瘤U_(14)作为体内自然杀伤靶细胞的探讨

用国产~(125)碘——脱氧尿嘧啶核甙标记小鼠移植性肿瘤,以比较各种移植性肿瘤对~(125)碘——脱氧尿嘧啶的摄取率、体外孵育时间、细胞存活率、标记物自然释放率从而确定何者宜用作体内自然杀伤靶细胞。实验结果表明,小鼠移植性肿瘤U_(14)可作为体内自然杀伤靶细胞。     

胆系恶性肿瘤NK细胞计数及意义

目的：研究胆系癌组织中NK细胞计数及其意义。方法：应用LINK－1单克隆抗体ABC免疫组化法染NK细胞。结果：高分化，组织学分级I级和未转移组织系癌NK细胞计数均明显地低于低或未分化，组织学分级Ⅲ级和转移组胆系癌。结论：NK细胞计数可能是反映胆系癌恶性程度，生物学行为和预后的重要指标。     

体外诱导LAK细胞活性方法及其意义

目的：比较不同诱导方法对LAN细胞杀伤活性的影响。方法：外周血单个核细胞（PBMC）用重组白细胞介素-2（rIL-2）体外诱导LAK细胞，采用3H－TdR释放法测定LAK活性。结果；（1）PBMC诱导3h后，LAK活性高于或至少不低于24～72h者；（2）PBMC诱导3h后洗去游离的rIL-2，并不影响继续诱导LAN细胞活性；（3）PBMC分离后以清洗2次为佳；（4）PBMC用正常人血浆培养比用肝炎病人自体血浆培养诱导的LAK活性高。结论：在本试验系统中，PBMC分离后，清洗2次，以正常人血浆经IL-2诱导3h为最佳回输条件。     

~(51)C_r-释放法检测肿瘤病人外周血细胞及外周血LAK细胞的NK活性

本文以国产~(51)Cr-铬酸钠为标记物,应用~(51)Cr-释放法进行了肿瘤病人的 NK 细胞活性检测。评价了国产~(51)Cr-铬酸钠用于~(51)Cr-释放法检测细胞毒活性的可行性(NR=21.3±4.6);检测晚期癌症病人外周血淋巴细胞(PBL)NK 活性7例(SR=8.1±3.3).良性肿瘤病人 PBL NK 活性15例(SR=22.9±9.8);并研究了天然人白细胞介素-2(hlL-2)激活肿瘤病人 PBL 诱生 LAK 细胞 NK 活性的变化规律,一次性激活(1000U/ml)NK 活性高峰出现在24～48小时。     

癌性腹水抑制自然杀伤细胞活性及消炎药物逆转作用的研究

本文报道转移性肝癌12例,淋巴瘤8例,卵巢癌10例患者的腹水在体外培养系统中对正常人自然杀伤细胞(NK)活性的抑制性影响。三种癌性腹水(1:10稀释)可使正常人周血淋巴细胞 NK 活性由55.77±4.3%分别下降到23.7±2.7%,34.5±3.3%,38.1±3.4%(P<0.01～0.05)。而且抑制性影响可因腹水浓度降低而减弱。三种癌性腹水对同一正常人的 NK 活性抑制程度有明显的差别。当腹水中加有消炎痛(4μg/m1)或炎痛喜康(6μg/ml)可使正常人的 NK 活性分别回升到46.1±1.5%,48.0±2.4%,50.0±2.4%;29.9±3.0%,40.0±2.5%,47.0±2.4%。消炎痛(4μg/ml)可以大部分抵消卵巢癌、淋巴瘤腹水对正常 NK 的抑制,而炎痛喜康的逆转作用较消炎痛差。癌性腹水中淋巴细胞 NK 活性低,但培养系统中有消炎痛或炎痛喜康时,可使 NK 活性明显提高。     

甲巯咪唑对鼠T细胞亚群及NK细胞杀伤活性的免疫抑制作用研究

以Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠为模型，研究了甲巯咪唑（ＭＭＩ）对小鼠脾Ｔ淋巴细胞亚群及ＮＫ细胞杀伤活性的影响。结果表明，ＭＭＩ使小鼠血清中甲状腺素Ｔ３，Ｔ４水平明显降低，使脾Ｔ淋巴细胞中Ｌ３Ｔ４＋细胞数量显著减少、Ｔｈｙ１．２＋细胞和Ｌｙｔ２＋细胞数量降低、Ｌ３／Ｌｙｔ２比值下降。而且实验鼠脾ＮＫ细胞对腹水型Ｓ１８０靶细胞的细胞毒活性明显降低。表明ＭＭＩ对小鼠的细胞免疫有非特异的免疫抑制作用。     

164例正常人白细胞吞墨率测定

应用国产印度墨汁为标准试剂,检测164例正常人周围血液中的中性粒细胞对墨汁的吞噬功能,结果为:中性粒细胞吞噬率81.74%((?)±SD81.74±11.87),吞噬指数219.09±65.60,单核细胞吞噬率为82.46%((?)±SD82.46±13.46),吞噬指数209.51±71.62.此方法简便、易行,可作为临床检测机体免疫功能的手段之一