血管内皮诱导培养基促进结肠癌细胞向血管内皮细胞方向分化的研究

  目的   探讨结肠癌细胞在血管内皮诱导环境下向血管内皮细胞方向分化的潜能。   方法   将3种不同分化程度的结肠癌细胞HCT116、SW480和HT29分别置于含有内皮细胞诱导因子的条件培养基中培养15 d后，利用Western blot检测血管内皮特异性指标白细胞分化抗原31（cluster of differentiation 31，CD31）和白细胞分化抗原34（cluster of differentiation 34，CD34）的表达变化；利用细胞免疫荧光检测HCT116细胞在内皮诱导培养基及普通培养基中CD31、CD34的表达变化；通过三维培养观察内皮诱导培养基对HCT116细胞体外成管能力的影响。   结果   Western blot显示诱导培养15 d后的3种细胞中低分化HCT116细胞的CD31、CD34表达增强最明显，而中分化的SW480细胞和高分化的HT29变化不显著。细胞免疫荧光显示与普通培养基相比，内皮诱导培养基中HCT116细胞的CD31、CD34表达显著增强。体外三维培养发现经内皮诱导培养后的HCT116细胞较对照细胞成管能力显著增强。   结论   血管内皮诱导培养基促进具有较强干细胞样特性的结肠癌细胞向血管内皮细胞方向分化。      

大肠癌浸润的细胞外基质变化和内皮细胞的关系探讨

目的　探讨大肠癌浸润的细胞外基质变化和血管内皮细胞的关系,为了解大肠癌生物学行为改变和临床应用抑制细胞外基质降解治疗大肠癌的作用。　方法　应用免疫组化半定量分析。　结果　癌旁组、各期浸润组的细胞外基质成分和内皮细胞变化与正常组比较,有显著差异(P<005或P<001),LN、F8,CD34和肌动蛋白的增加,均与大肠癌的浸润有关。　结论　提示抑制癌细胞对细胞外基质的降解和对血管内皮细胞的损伤,可起到阻止癌细胞的游走和浸润     

TNP-470对肺癌细胞诱导的血管内皮细胞增殖的抑制作用

应用体外培养的人脐带静脉内皮细胞 (HUVEC)和人肺腺癌细胞株AZGY82A ,探讨了TNP 4 70对肿瘤细胞诱导的血管内皮细胞增殖的抑制作用及其机制。人脐静脉内皮细胞的培养采用本实验室改进的Jaffe氏培养法 ,并且将人肺癌细胞株进行传代培养。制备肺癌细胞条件培养液和肺癌细胞粉碎液。待血管内皮细胞生长至亚融合状态后 ,与肺癌细胞条件培养液或细胞粉碎液同时加入TNP 4 70作用液 (TNP 4 70浓度分别为 :10 - 12 ,10 - 10 ,10 - 8,10 - 6 g/ml)。用免疫细胞化学方法检测内皮细胞PCNA ,Flk 1,FGFR的表达。肿瘤细胞可合成和释放多种活…     

肝素酶介导的肝癌细胞与血管内皮细胞黏附及穿内皮迁移

目的:探讨肝素酶(heparanase,HPSE)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCc)细胞与血管内皮细胞黏附及穿内皮迁移的影响.方法:选用人正常脐静脉内皮细胞株HUVEC-C,肝LO-2细胞,肝癌HepG2、BEL-7402和HCCLM3细胞,用Real-time PCR筛选高表达HPSE的HCC细胞;设计4个HPSE基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)序列、构建质粒,并筛选出最优RNAi质粒;用该RNAi质粒转染高表达HPSE的HCC细胞,同时设空白对照组、阴性对照组和未转染的HCC细胞组;黏附试验观察各组HCC细胞与HUVEC-C细胞的黏附情况;Transwell小室法观察HCC细胞穿HUVEC-C细胞迁移情况;癌细胞均以0.25％玫瑰红染色、光镜下观察;酶标仪法分别测定脱色后各组细胞D值并分析比较.结果:HCCLM3细胞HPSEmRNA表达水平显著高于肝LO-2、HepG-2和Bel-7402细胞[(5.72±0.62) vs (1.05 ±0.09)、(2.65±0.31)和(3.43±0.58),均P＜0.01)l;设计的4个HPSE之RNAi载体,以siHPSE-3158对HPSE基因表达的抑制效果最佳(P＜0.05).RNAi组HCCLM3细胞与HUVEC-C细胞黏附率显著低于空白对照组、阴性对照组和未转染的HCCLM3细胞组[(0.31 ±0.04) vs (0.46±0.06)、(0.45 ±0.05)和(0.64±0.09),均P＜0.01)].RNAi组HCCLM3细胞穿HUVEC-C细胞迁移率也显著低于空白对照组、阴性对照组和未转染的HCCLM3细胞组[(0.28 ±0.03) vs (0.41 ±0.04)、(0.41±0.05)和(0.43±0.05),均P＜o.05)].结论:HPSE参与介导HCC细胞与血管内皮细胞的黏附及HCC细胞穿内皮迁移,可能是HCC微血管捕获、血行转移的重要因素.     

氧化苦参碱对肿瘤诱导血管内皮细胞增殖的抑制作用

目的 探讨氧化苦参碱（Ｏｘｙ）对肺癌和胃癌细胞诱导血管内皮细胞（ＶＥＣ）增殖的抑制作用。方法 用ＭＴＴ法检测不同浓度Ｏｘｙ对ＶＥＣ、人肺腺癌ＳＰＣ－Ａ－１细胞、人低分化胃癌ＭＫＮ－４５细胞增殖及ＳＰＣ－Ａ－１和ＭＫＮ－４５细胞诱导ＶＥＣ增殖的抑制。结果 Ｏｘｙ浓度为２．５～１０ｍｇ／ｍｌ时,对ＶＥＣ增殖的抑制率为４．６％～３６．４％;Ｏｘｙ浓度为０．１５６～１０ｍｇ／ｍｌ时,对肺癌ＳＰＣ－Ａ－１和     

自发及诱导性过氧化氢生成增强胃肠道肿瘤细胞与血管内皮粘附作用的研究

目的探讨胃肠道肿瘤细胞内活性氧生成在肿瘤进展中的作用.方法选择三种胃癌细胞系SGC-7901、MKN-45、MKN-28及三种结肠癌细胞系LS174T、LoVo、HCT-8,以过氧化物酶-荧光法检测癌细胞自发的过氧化氢生成量,以及癌细胞在佛波酯刺激后,诱导的过氧化氢生成,同时观察癌细胞与血管内皮粘附作用的变化特点.结果胃、结肠癌细胞不同程度地自发生成过氧化氢,平均浓度为0.9 nmol@L-1@10-6细胞,在佛波酯的作用下,这种生成被诱导性增加,平均浓度为2.1nmol@L-1@10-6细胞.常规培养的肿瘤细胞与内皮细胞均有粘附作用,当以过氧化氢酶作用后,SGC-7901、MKN-45的粘附力有明显的下降(P＜0.05);癌细胞在佛波酯作用后,SGC-7901、MKN-45、LS174T及LoVo在过氧化氢生成增加的同时,与内皮细胞的粘附力均比作用前为高,并可被过氧化氢酶所抑制.结论胃、结肠癌细胞组成性及诱导性过氧化氢生成可能有利于癌细胞转移的实现.     

人参皂甙Rg3对胃癌诱导血管内皮细胞增殖的抑制作用

新生血管形成是肿瘤生长和转移的重要步骤,而血管内皮细胞(VEC)的增殖是新生血管形成的基础.本研究拟探讨红参特有成分——人参皂甙Rg3(申报中药国家一类新药,已完成二期临床试验)对胃癌细胞诱导VEC增殖的抑制作用.血管内皮细胞采用原代培养的小牛主动脉内皮细胞,小牛主动脉经1%胶原酶消化下来的小牛主动脉内皮细胞,用抗Ⅷ因子抗体免疫组化鉴定后用于实验.VEC以10~4/孔的密度接种于96孔板,24h后加入Rg3(大连天富科技开发公司天然药物研究所提供),浓度分别为0.0313,0.0625,0.125,0.25及0.5mM,作用24h后,MTT法检查细胞增殖情况.观察经Rg3作用后的胃癌细胞条件培养液对VEC增殖的影响及Rg3对胃癌细胞条件培养液诱导的血管形成的影响.试验结果发现,Rg3对VEC增殖没有直接的影响;对胃癌NKM-45细胞增殖没有影响,经Rg3作用后的胃癌细胞条件培养液不影响对VEC的促增殖作用,但Rg3能抑制胃癌细胞条件培养液诱导的VEC增殖.作用机制尚未阐明,推测可能通过下调增殖期VEC相关生长因子受体的表达,使VEC对肿瘤细胞分泌的生长因子的敏感性降低,从而影响VEC的增殖.综上所述,人参皂甙Rg3对胃癌细胞无细胞毒,但对肿瘤细胞条件培养液诱导VEC增殖具有抑制作用,值得在抗血管形成方面进行更深入的研究.     

晚期非小细胞肺癌循环血管内皮细胞水平的研究

目的分析晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者治疗前后外周血中循环血管内皮细胞(CEC)的变化,探讨CEC在NSCLC中的应用价值。方法采用NP方案联合内皮抑素(治疗组)及单用NP方案(对照组)治疗晚期NSCLC 67例,流式细胞法检测治疗前后外周血CEC数量及细胞角蛋白(CK)水平。结果治疗组临床有效率为44．4％,对照组为27．3％(P=0．176);治疗组临床受益率为80．0％,对照组为50．0％(P=0．012)。治疗组肿瘤进展时间(TTP)为146．7 d,对照组为91．1 d (P=0．061)。当TTP的cut-off值>170时,两组TTP比较,差异有统计学意义(cut-off值=170,P= 0．034;cut-off值=180,P=0．009)。治疗组CEC平均下降(0．29±0．47)％,对照组平均下降(0．01±0．43)％(P=0．033)。全部患者治疗前CEC与CK水平呈正相关(r=0．381,P=0．013),治疗后亦呈正相关(r=0．450,P=0．004)。结论化疗联合血管靶向治疗晚期NSCLC优于单用化疗,CEC是一个较好的预测疗效的指标。     

放射线诱导人血管内皮细胞凋亡的实验研究

目的:观察γ射线诱导人内皮细胞凋亡及G-CSF对凋亡的保护作用。方法:对人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞γ射线照射后,以形态学方法和Comet分析观察凋亡的发生,并进行流式细胞仪定量分析。结果:γ射线能诱导内皮细胞凋亡,随时间延长凋亡增多,在0.5～15Gy范围内随剂量递增凋亡亦逐渐增加,而且照射后内皮细胞死亡以凋亡为主要形式。神经酰胺可模拟γ射线诱导的内皮细胞凋亡（32.11±1.33％）,γ射线加TPA或G-CSF则抑制γ射线诱导的内皮细胞凋亡,分别为2.78±0.20％,2.77±0.25％,vs γ射线的13.80±0.46％（P<0.01）。结论:γ射线可诱导内皮细胞凋亡,并可被G-CSF抑制,其作用可能与细胞内神经酰胺和蛋白激酶C平衡的改变有关。     

氧化应激对大肠癌细胞迁移、血管内皮生长因子表达及细胞间通信的影响

目的探讨氧化应激对大肠癌细胞迁移能力、血管内皮细胞生长因子表达及细胞间通信的影响。方法使用H2O2模拟大肠腔内氧化应激环境,通过不同浓度H₂O₂刺激人结肠癌细胞HCT-8,使癌细胞处于氧化应激状态,通过Transwell小室观察大肠癌细胞迁移能力;利用免疫细胞化学观察VEGF表达;利用划痕染料传输试验LY/DT法测定细胞间通信连接,最后利用Western blot进一步检测细胞间通信连接蛋白（Connexin 43）的表达。结果当H₂O₂浓度≤10-5mol/L时,不同程度地促进细胞的迁移,上调结肠癌细胞HCT-8 VEGF的表达,抑制细胞间通信;当H2O2浓度为10-5mol/L时, 明显促进细胞的迁移（t=2.247,P<0.05）,上调结肠癌细胞HCT-8 VEGF的表达（Z=3.938,P=0.000）,抑制细胞间通信(Z=3.860,P=0.000)。 结论大肠癌细胞在过氧化物刺激的情况下,促进细胞迁移,诱导血管内皮生长,抑制细胞间通信,在大肠肿瘤的进展中可能具有促进作用。     

血管内皮细胞生长因子在非小细胞肺癌中的表达

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)、肿瘤微血管密度(MVD)2项指标与非小细胞肺癌各临床病理因素之间的关系以及两者之间的联系。方法采用免疫组织化学SABC法检测经病理检查确诊的68例非小细胞肺癌、13例癌旁和13例正常肺上皮组织VEGF、FVⅢ因子相关抗原的表达,对FVⅢ因子相关抗原标记的血管计数MVD。结果肺癌组织VEGF阳性表达率和MVD值明显高于正常肺上皮组织和癌旁组织;肿瘤直径≥5.0cm者MVD值明显高于直径<5.0cm者;腺癌MVD值明显高于鳞癌;有远处器官转移的肺癌MVD值明显高于无远处器官转移者;Ⅳ期肺癌MVD值明显高于Ⅰ期和Ⅱ期者,Ⅲ期MVD明显高于Ⅰ期,MVD值随TNM分期增加有逐渐增高的趋势;VEGF表达阳性的肺癌MVD值明显高于表达阴性者,并且随着VEGF表达程度的加强,MVD值增加。结论血管生成与肺癌的生长、浸润、转移及疾病进展密切相关;肺癌组织VEGF阳性表达率明显增加,是肺癌血管形成和维持的重要因子之一;MVD可作为判断非小细胞肺癌生物学行为,预测其发生发展的1项指标。     

大肠癌组织血内皮生长因子表达与血管生成和细胞增殖关系的研究

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）在大肠癌组织中的表达及其与血管生成和细胞增殖的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测98例大肠癌组织中VEGF表达及微血管密度（MVD）、PCNA标记指数（PCNA LI）,并分析VEGF与MVD、PCNA LI的相关性。结果：98例大肠癌中,VEGF表达阳性36例（３６．７％）;VEGF表达阳性的肿瘤其ＭＶＤ和ＰＣＮＡ ＬＩ显著高于VEGF阴性（Ｐ＜０．０５）。VEGF表达与ＭＶＤ、ＰＤＮＡ LI显示正相关（P＜0．05）。有转移组（有包淋结转移移和远处转移VEGF表达明显高于无转移,VEGF表达随肿瘤分期的升高而增高。结论：VEGF在大肠癌血管生成和细胞增殖中起重要作用。     

血管内皮生长因子在大肠癌诊治中的应用研究

目的 探讨血管内皮生长因子（VEGF）在结直肠癌的诊断、良恶性鉴别以及在复发中的意义。方法 收集85例结直肠癌患者术前（其中13例有术后1周对照）及21例术后半年到4年结直肠癌患者的静脉血,对照组30例,采用酶联免疫夹心法检测血清中VEGF浓度。结果 结直肠癌早期患者（Duke＇sA期）血清VEGF浓度较对照组显著升高（P＜0．01）。Duke＇sA、B期间血清VEGF浓度有显著性差异（P＜0．05）,有淋巴结转移组（Duke＇sC期）较无淋巴结转移组（Duke＇sB期）的血清VEGF浓度显著升高（P＜0．01）,有远处脏器转移组血清VEGF较淋巴结转移5组亦显著升高（P＜0．01）。高分化腺癌组（含Duke＇sA期5例和B期3例）血清VEGF与对照组比较,无显著性差异（P＞0．05）。术后半年到4年的患者,复发组血清VEGF与末复发组比较,有非常显著性差异（P＜0．01）。结论 血清VEGF水平的检测对结直肠癌的诊断有一定的临床意义,可反映疾病的进展对肿瘤恶性程度的判断有一定的帮助。血清VEGF浓度变化还可监测癌症患者术后肿瘤复发和转移。     

Interaction between Colon Cancer Cells and Human Liver Sinusoidal Endothelial Cells Promotes Liver Metastasis of Tumor Cells

OBJECTIVE To investigate the effect of co-culture between colon cancer cells(SW1116)and human liver sinusoidal endothelial cells (HLSECs)on cancer cell metastasis, and to provide a novel model for studying the mechanism of colon cancer liver metastasis.METHODS HLSECs and SW1116 were co-cultured for 21 rounds in vitro. Transwell migration,gelatin-zymography,CCK-8 proliferation and colony formation assays were used to examine the invasion, proliferation, and colony forming ability of cancer cells.Assays were carried out to examine tumor growth ability and liver metastasis. The associated molecular change was examined by western blotting.RESULTS After 21 selection rounds, colon cancer cells SW1116P21 displayed a clear boundary. Compared with the SW1116 cells,SW1116P21 cells had a greater invasive ability, cell proliferation and colony formation in soft agar.A gelatin-zymography assay showed that the ability of SW1116P21 cells to secrete matrixmetaIloproteinase-2/9 was significantly greater than that ofSW1116 cells. Additionally, the capacity for subcutaneous tumorformation of SW1116P21 was significantly increased. It was found that mice injected with SW1116P21 cells developed significantly morevisually observable liver nodules than mice injected with SW1116cells.Western blotting showed increased vimentin expression anddecreased E-cadherin expression in the SW1116P21 cells, comparedwith the SW1116 cells.CONCLUSION The interaction between SW1116 and HLSECs maypromote tumor cell invasion, proliferation and colony formation in vitro, and tumor formation and liver metastasis in vivo. Anepithelial-mesenchymal transition occurs in SW1116P21 cells, whichcontributes to the change in the characteristics of tumor cells.     

氧化苦参碱抑制肝癌细胞诱导血管内皮细胞增殖作用的研究

目的探讨氧化苦参碱(OM)对肝癌细胞诱导血管内皮细胞(VEC)增殖的抑制作用.方法用 MTT 法检测不同浓度 OM 对 VEC、人肝癌 SMMC-7721 细胞增殖及 SMMC-7721 细胞诱导 VEC 增殖的影响.结果 OM 浓度为 2.5～10 mg/mL 时,对 VEC 增殖的抑制率为 4.6%～36.4%;OM 浓度为 0.313～10 mg/mL 时,对肝癌细胞增殖的抑制率为 2.53%～88.61% ;经浓度为 1.25～10 mg/mL OM 作用后的肝癌细胞培养液对 VEC 增殖的抑制率为 7.69%～38.46% ;OM 浓度为 0.625～10 mg/mL 时,对肝癌细胞培养液诱导的 VEC 增殖的抑制率为 3.57%～57.54%.结论 OM 对肝癌细胞诱导的 VEC 增殖具有抑制作用.     

Antitumor Effect of Streptococcus pyogenes by Inducing Hydrogen Peroxide Production

The Su strain of Streptococcus pyogenes ( S-coccus )-derived anticancer preparation, OK-432, which is immobilized by heating in the presence of penicillin G, is well known to have an immunopotentiating activity through activation of natural killer cells in vivo . In this study, a streptococcal anticancer preparation stronger than OK-432 was prepared. Live streptococci (S-cocci) of the Su strain were induced to acquire H₂O₂-producing ability by treatment with serum under aerobic conditions. The resulting preparation no longer possessed hemolytic activity, and was not viable. The serum-treated S-coccus preparation activated natural killer cells as well as OK-432 did, and had stronger antitumor activity than OK-432 did. These results suggest that the serum-treated S-coccus preparation would be a useful tool for chemotherapy, in addition to immunotherapy, for the treatment of cancer.     

手术前后血清血管内皮生长因子水平与非小细胞肺癌的关系

目的探讨非小细胞肺癌患者手术前、后血清血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的动态变化规律及其与非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer.,NSCLC)的关系。方法采用ELISA法检测120例非小细胞肺癌患者手术前、后血清VEGF水平和60例健康体检者血清VEGF水平。结果①NSCLC患者手术前、术后第1天及术后第7天血清VEGF水平显著高于正常对照组(P<0.01),分别为:(270.8±82.4)pg/ml、(302.7±85.6)pg/ml、(523.8±91.3)pg/ml和(91.4±40.7)pg/ml;②NSCLC患者术后第7天血清VEGF水平显著高于术前和术后第1天血清VEGF水平(P<0.01),分别为:(523.8±91.3)pg/ml、(270.8±82.4)pg/ml和(302.7±85.6)pg/ml;③NSCLC患者手术前、后血清VEGF水平与肺癌原发肿瘤大小、淋巴结转移和分期呈正相关(P<0.05),与肺癌细胞分化程度、组织学类型、患者性别和年龄无关(P>0.05)。结论NSCLC患者血清VEGF水平升高,且与NSCLC的发生、发展和淋巴结转移呈正相关,NSCLC患者血清VEGF水平可作为检测NSCLC患者病情进展、判断预后的参考指标。     

褪黑素对肺癌A549细胞诱导的血管内皮细胞增殖的影响

目的探讨褪黑素在体外共培养条件下对肺腺癌A549细胞诱导血管内皮细胞增殖的影响及相关机制。方法建立肺腺癌A549细胞和人脐静脉内皮细胞（HUVECS）ECV-304共培养模型,实验共分成四组：Con组(对照组),nM组(褪黑素终浓度1 nM/L),μM组(褪黑素终浓度1 μM/L),mM组(褪黑素终浓度1 mM/L)。采用BrdU法观察不同浓度褪黑素对血管内皮细胞（ECV-304）增殖的影响,细胞迁移实验观察褪黑素对血管内皮细胞活力的抑制作用,ELISA法检测褪黑素对肺腺癌细胞VEGF蛋白表达的影响。结果低浓度的MLT(1 nM/L)对HUVECs增殖无明显影响,但高浓度 MLT(1 mM/L)明显抑制HUVECs增殖,并有浓度依赖倾向; 高浓度的褪黑素明显降低肺腺癌A549细胞培养液中VEGF的表达。 结论高浓度的褪黑素可以抑制肺腺癌细胞诱导的血管内皮细胞的增殖及迁移,其作用机制可能与褪黑素抑制肺腺癌细胞VEGF的表达有关。