淋球菌营养型与耐药性及质粒的关系

目的 为了解淋球菌的营养型、耐药性及质粒之间的关系.方法 对重庆市收集的83株淋球菌进行营养型、抗生素敏感性和质粒检测.结果 83株菌共分为8个营养型,以Pro-型(51-8%)和Proto型(18-1%)为主.利用琼脂稀释法检测菌株对青霉素、四环素和壮观霉素的敏感性.青霉素耐药株占15.6%,四环素耐药株占70%,壮观霉素耐药株占1-2%.通过快速碱裂解法对其中的44株菌进行质粒检测,70%菌株含24-5Md质粒,80%含2.6Md质粒,66%同时含24-5Md和2.6Md质粒,16%未查到质粒.并发现Pro^-型菌株中青霉素耐药株高于其它营养型(P<0.05),且含24-5Md质粒菌也显著高于其它营养型(P<0.05).含24-5Md+2.6Md质粒菌株中四环素耐药株更常见(P<0.05).检测到1株产青霉素酶淋球菌(PPNG),经质粒消除试验证实其耐药性由4-4Md质粒介导.结论 本研究不仅表明了重庆地区淋球菌营养型、耐药性及质粒的分布状况,而且揭示了它们之间存在一定关系.这将对该地区淋球菌的流行病学调查和淋病防治提供帮助.     

1999-2002年南京地区淋球菌分离株抗生素敏感性监测

目的 监测南京地区淋球菌对抗生素的耐药性,报告1999-2002年的结果。方法 采用纸片酸度定量法测定菌株是否产β-内酰胺酶。采用琼脂稀释法测定青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素和头孢曲松对淋球菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果 共对417株淋球菌进行了检测,产青霉素酶淋球菌(PPNG)的阳性率由1999年的8.0%上升到2002年的31.31%(P<0.001),质粒介导的耐四环素淋球菌(TRNG)的阳性率由1999年的1.8%上升到2002年的22.2%(P<0.001)。在非PPNG中,染色体介导的青霉素耐药菌株的阳性率介于64.08%~87.80%。耐环丙沙星淋球菌的阳性率介于83.93%~97.17%。未检出对头孢曲松耐药的淋球菌,但低敏菌株的比例从1999年的17.9%上升到2002年的50.5%(P<0.005)。在2001与2002年各检测出1株对大观霉素耐药的淋球菌。结论 南京地区分离的淋球菌中,质粒介导的耐药性(包括PPNG和TRNG)增长速度较快,染色体介导的对青霉素和环丙沙星耐药的淋球菌比例很高,大观霉素耐药性淋球菌偶见。头孢曲松和大观霉素为治疗淋病的有效药物。     

淋球菌mtr系统的IR区基因突变与其多重耐药性的关系

目的 探索多传递耐药(mtr)系统反向重复序列(IR)区基因突变与淋球菌染色体介导多重耐药性的关系。方法 琼脂稀释法做淋球菌药敏试验,选择耐不同药物的菌株,聚合酶链反应扩增包含IR区的目的基因,然后对扩增产物测序。结果 2株敏感株及5株仅耐青霉素菌株无IR区基因突变,17株多重耐药菌株中,1株同时耐青霉素和阿奇霉素的淋球菌有IR区碱基T/A,T/A插入,其余耐药株IR区均有碱基A/T缺失。结论 淋球菌染色体mtrR启动子区域的IR区基因突变会引起淋球菌多重耐药株的产生,增加淋球菌对抗生素的抗性。     

淋球菌耐药性质粒的转移性研究

目的研究淋病奈瑟菌(简称淋球菌)所携带的质粒与耐药性之间的关系。方法对淋球菌耐药株所携带的质粒进行质粒消除实验,并以此消除的质粒转化感受态的大肠杆菌,比较耐药质粒消除和转化前后菌株的耐药性变化情况。结果在亚致死浓度的十二烷基磺酸钠(SDS)作用下,淋球菌的耐药质粒可以被部分消除(仍然携带42.5kb的质粒)或者完全消除,且消除子在消除前后对抗生素的耐药性发生不同程度的改变;而耐药质粒在不同种属的菌株之间可进行传递,淋球菌的耐药质粒可以传递给感受态的大肠杆菌,筛选出的转化子分别携带含有tetM基因的42.5kb四环素耐药质粒和携带含有TEM-1基因的7.4kb青霉素耐药质粒,转化子可产生对相应抗生素的耐药性。结论淋球菌耐药质粒在介导菌株对抗生素的耐药性起着重要作用,并且可以不同菌株间进行传递。     

耐药淋球菌差异DNA消减文库的构建及初步筛选

目的 克隆和研究耐药性淋球菌相关基因。方法 从耐药淋球菌株RSM292C4和淋球菌标准参考菌株WHO-A细胞中提取DNA,经RsaⅠ酶切后,应用抑制性消减杂交技术构建耐药性淋球菌差异DNA消减文库并进行初步筛选。结果 耐药淋球菌差异DNA消减文库经扩增获得约2500个白色克隆,随机挑取96个白色克隆,进行PCR扩增鉴定,发现克隆中插有100~600bp大小的片段。分别以RsaI酶切样本和参照DNA为探针,与随机挑取的96个白色菌落质粒作点杂交,有5个克隆仅能与样本DNA探针杂交,而不能与参照DNA探针杂交,表明它们为RSM292C4基因组DNA所特有,可能代表某些淋球菌新基因。对这5个克隆插入的DNA片段进行测序,经送基因库和淋球菌基因组部分测序基因库检索分析,发现5个片段均为未知新序列。结论 淋球菌耐药菌株DNA消减文库的构建为进一步筛选、克隆淋球菌耐药的新基因奠定了基础。     

1988-2002年上海分离的淋球菌对抗菌药的敏感性监测

目的 了解上海地区1988-2002年淋球菌对多种抗菌药耐药的发生率、流行情况和耐药特征.方法 采用琼脂稀释法测定抗菌药耐药性,纸片酸度定量法测定青霉素产β-内酰胺酶菌株(PPNG).结果 青霉素敏感性从1988年的11.28%降至2002年的0,MIC50和MIC90分别增加了8倍和4倍,2002年的耐药率达到94.29%,PPNG株达到了50.95%;高度耐四环素株(TRNG)从1995年的0上升到2002年的20.95%;头孢曲松敏感株已由1995年的100%下降至2002年的23.80%;大观霉素的敏感性维持在高点(>97%);环丙沙星敏感性有较大幅度下降,其耐药率在2002年达到了99.05%.分析多重耐药株,同为耐青霉素、环丙沙星和四环素3种药物的菌株从2001年的20.87%上升到2002年的23.30%.同为耐青霉素和环丙沙星2种药物的菌株近2年都已接近70%.结论 近15年来,淋球菌对多种药物产生了耐药,耐药率逐年提高.建议上海地区将大观霉素和头孢曲松作为治疗淋病的首选药物,并且尽早研制出对淋球菌敏感的抗菌药.     

淋球菌染色体mtrR基因突变对淋球菌多重耐药性的影响

目的 对淋球菌的染色体耐药机理进行了一定的探索。方法 聚合酶链反应及Sanger双脱氧链终止法,测定淋球菌mtrR基因的碱基序列,并做相应淋球菌的药敏试验。结果 具有青霉素耐药性的淋球菌毫无例外都有mtrR基因的单碱基突变,而耐壮观霉素的淋球菌在mtrR基因上有两个位点突变。结论 淋球菌染色体上mtrR基因的突变会引起淋球菌多重耐药性的产生,增加淋球菌对脂溶性细胞毒因子如脂溶性抗生素、去污剂类脂肪酸的抗性。     

贵阳市淋球菌耐药质粒及其与淋病流行的关系

目的：为了了解贵阳市淋球菌耐药质粒的大致范围及淋球菌耐药质粒在细菌间的流向。方法：采用改良的Jo.Annes法对20株淋球菌临床分离株进行质粒提取,测定其分子量的大小;从中筛选出产青霉素酶淋球菌菌株（PPNG）,分别与大肠杆菌和淋球菌青霉素敏感菌株进行接合和转化试验。结果：20株淋球菌临床分离株检出7株PP－NG菌株,淋球菌4.5Md质粒的携带为40％,3.7Md质粒的携带率为25％。3株带有24.5Md质粒的PPNG菌株,其耐药（R）质粒均可通过接合而传递给大肠杆菌和淋球菌敏感菌株;2株PPNG菌株可通过转化将R质粒传递给大肠杆菌和淋球菌敏感菌株。结论：贵阳市流行的淋球菌中有2种耐药质粒存在,以4.5Md质粒为主;PPNG菌株可通过接合和转化的传递方式,将耐药质粒在淋球菌青霉素敏感菌株和大肠杆菌中传递,与淋病的流行有密切的关系。     

阴道分离的念珠菌体外抗真菌药物敏感性分析

目的 探讨念珠菌在女性阴道黏膜所致的不同表现与其对抗真菌药物敏感性之间的关系。方法 应用NCCLSM27-A方案推荐的微量液体稀释法,测定对来自外阴阴道念珠菌健康携带者、外阴阴道念珠菌病和复发性外阴阴道念珠菌病的念珠菌对抗真菌药物的敏感性。结果 8种抗真菌药对光滑念珠菌和克柔念珠菌的MIC值几乎均比白念珠菌高。来自复发性外阴阴道念珠菌病患者的菌株MIC值较高,而健康带菌者菌株的MIC值较低。耐药菌株主要来源于复发组,健康带菌者来源的白念珠菌菌株对伊曲康唑、氟康唑、酮康唑和制霉菌素未见有耐药菌株出现。结论 外阴阴道念珠菌病治疗中应重视非白念珠菌的耐药性,长期或间断应用抗真菌药物治疗,可能诱导耐药株的产生。     

淋球菌对抗生素耐药性研究

目的:研究广州地区2001年度分离的淋球菌对青霉素、四环素、壮观霉素、头孢曲松和环丙沙星的耐药性。分析耐药菌株的流行特点。方法:采用琼脂稀释法测定菌株对5种抗生素的最小抑菌浓度(MIC),判断敏感性按WHO西太区淋球菌耐药性监测统一标准。用纸片酸度法检测产青霉素酶淋球菌(PPNG)菌株。结果:153株淋球菌中检出127株对青霉素耐药(83.0％),产青霉素酶淋球菌(PPNG)占17.0％(26/153);四环素耐药129株(84.3％);其中质粒介导高度耐四环素淋球菌菌株(TRNG)占总数的24.1％(37/153);环丙沙星耐药117株(76.5％),其中92株同时对青霉素和四环素有耐药性,三重耐药占60.1％;壮观霉素和头孢曲松敏感性最高,分别为100.0％和81.0％。结论:淋球菌对青霉素、四环素和环丙沙星耐药率较高;壮观霉素和头孢曲松敏感,应作为临床的首选药物。     

Transfer of beta-lactamase plasmids by conjugation in Neisseria gonorrhoeae.

Conjugation experiments in vitro have been used in an attempt to explain certain epidemiological phenomena seen amongst penicillinase producing Neisseria gonorrhoeae (PPNG) isolated at St Mary's Hospital, London. These include changes in plasmid profiles, a lack of beta-lactamase encoding plasmids in PAOU-requiring strains and a difference in the serological classification of strains of PPNG and non-PPNG isolated from the same clinic. It was shown that acquisition of the conjugative plasmid by beta-lactamase producing transconjugants does vary, but is not related to the auxotype/serovar (A/S) class of, or type of beta-lactamase plasmid carried by the donor. It was not possible to transfer either the 3.2MDa or 4.4MDa plasmids to PAOU-requiring strains of N gonorrhoeae. The conjugation frequency from a single donor to different recipients was shown to be variable, but was not influenced by the serovar of the recipients. It was shown that the transfer and acceptance of beta-lactamase encoding plasmids is variable but it was not possible to identify the factors responsible.     

Characterization of proline, citrulline, and uracil auxotrophic plasmid-carrying Neisseria gonorrhoeae strains in Canada, 1993-2003

BACKGROUND AND OBJECTIVE: Proline, citrulline, and uracil (PCU) Neisseria gonorrhoeae is a common auxotroph in Canada and resistance to antibiotics in this auxotroph is rare. GOAL: The goal of this study was to determine the characteristics of the PCU strains that have plasmids. STUDY DESIGN: PCU strains sent between 1993 and 2003 for reference work to the National Microbiology Laboratory were analyzed for their plasmid profiles and antimicrobial susceptibilities. PCU strains containing plasmids and/or antimicrobial resistant were serotyped, and por and tbpB genes were sequenced to determine their antigenic types. RESULTS: Forty strains containing plasmids were identified; serotype IB-11 and por/tbpB sequence type 2 was the most common pattern (28 of 40 strains [70%]). One strain had plasmids that conferred resistance to penicillin and tetracycline and 4 plasmidless strains were resistant to tetracycline. CONCLUSION: PCU auxotrophic N. gonorrhoeae carrying plasmids and/or that have chromosomal genes mutated to resist antimicrobials have been identified in Canada. This shows the competency of this pathogen to survive under antimicrobial pressure and the importance of continuous surveillance.     

淋球菌130株对7种抗生素的耐药性结果分析

目的了解2018年本单位淋球菌对7种抗生素耐药趋势及产青霉素酶淋球菌(PPNG)和质粒介导的高度耐四环素淋球菌(TRNG)流行情况。方法琼脂稀释法测定青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、阿奇霉素、头孢曲松、头孢克肟的最低抑菌浓度(MIC),根据世界卫生组织(WHO)的标准判定其敏感性;用纸片碘量法检测β-内酰胺酶。结果 130株淋球菌检出PPNG达43.85%(57/130),(TRNG)达22.31%(29/130),环丙沙星耐药率高达96.92%(126/130),阿奇霉素耐药率达16.15%(21/130),大观霉素未发现耐药菌,头孢曲松、头孢克肟敏感率都是90.77%(118/130),中度敏感率达9.23%(12/130)。结论头孢曲松、头孢克肟、大观霉素都未见耐药菌株,仍可推荐为广州地区淋病患者首选药物,但前二者中度敏感率呈动态变化,提示临床应长期监测耐药性动态变化的重要性。     

Preliminary studies on activity of Ocimum sanctum, Drynaria quercifolia, and Annona squamosa against Neisseria gonorrhoeae

BACKGROUND: Despite the progressive increase of antimicrobial resistance of Neisseria gonorrhoeae worldwide, there are limited reports of alternative remedies from plants. GOAL: The aim of the current study was to screen 3 plants, Ocimum sanctum, Drynaria quercifolia, and Annona squamosa, for activity against Neisseria gonorrhoeae. STUDY: By disc diffusion method, extracts of these 3 plants were screened for activity against Neisseria gonorrhoeae; their antimicrobial activity was calculated as percentage inhibition and compared with penicillin and ciprofloxacin. RESULTS: The extracts of all 3 plants caused inhibition of Neisseria gonorrhoeae clinical isolates and World Health Organization (WHO) strains, more so than the multidrug resistant Neisseria gonorrhoeae. CONCLUSION: Neisseria gonorrhoeae clinical isolates and WHO strains were sensitive to extracts of Ocimum sanctum, Drynaria quercifolia, and Annona squamosa. This motivates us to isolate the active component/second from the 3 plants.     

Transfer frequency of various 25.2 Mdal tetracycline resistance plasmids in Neisseria gonorrhoeae

We examined ten Neisseria gonorrhoeae strains, all of which carried the tetracycline resistant 25.2 Mdal plasmid, for their ability to act as donors in conjugation. All strains transferred the 25.2 Mdal plasmid and tetracycline resistance to the recipient N. gonorrhoeae strain F62 at a frequency that ranged from 10(-2) to 10(-7) per recipient. The four strains carrying the beta-lactamase plasmid and the 25.2 Mdal plasmid transferred the beta-lactamase plasmid at a frequency of 10(-6) to 10(-8) per recipient. The results indicate that most of the N. gonorrhoeae strains carrying the 25.2 Mdal plasmid can act as donors of this plasmid and can also mobilize the transfer of the 3.2 Mdal plasmid and the 4.4 Mdal plasmid to recipient strains.     

100株淋球菌对7种抗生素的耐药性结果分析

 目的:监测2019年本单位淋球菌对7种抗生素的耐药性趋势及产青霉素酶淋球菌(PPNG)和质粒介导的高度耐四环素淋球菌(TRNG)流行情况,为临床有效选择抗生素提供实验室依据。方法：收集本单位门诊临床分离培养的100株淋球菌,用琼脂稀释法测定青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、阿奇霉素、头孢曲松、头孢克肟的最低抑菌浓度（MIC）;用纸片碘量法检测β 内酰胺酶。结果：产青霉素酶淋球菌（PPNG）株占35％（35/100）,质粒介导的高度耐四环素淋球菌（TRNG）株占32％（32/100）。环丙沙星和青霉素的耐药率分别高达99％（99/100）、93%（93/100）。阿奇霉素耐药率达10%（10/100）。头孢曲松和头孢克肟未见耐药菌株,低敏率分别为22%（22/100）和19%（19/100）,敏感率分别为78%（78/100）和81%（81/100）。大观霉素未发现耐药菌株和低敏菌株。结论：头孢曲松、头孢克肟、大观霉素仍可推荐为广州地区淋病患者首选药物。建议临床制定合理抗菌治疗方案以提供科学指导时,应长期监测淋球菌耐药性。