hIGF-1基因在退变椎间盘中的表达

[目的]探讨hIGF-1基因在退变椎间盘中的表达.[方法]参考文献[1～3]制备出椎间盘退变(intervertebral disk degeneration,IVDD)动物模型24只,随机分为Ad/CMV-hIGF-1、hIGF-1生长因子及PBS组,每组有新西兰大白兔8只.L4、5、L5、6椎间盘中分别注射第2代Ad/CMV-hIGF-1(8×108 PFU)、hIGF-1生长因子(100 μg/L)、PBS 25 μL.注射后1、2、4、8周,Western blot检测椎间盘中hIGF-1蛋白表达.[结果]hIGF-1蛋白带出现在7 539.96μ.Ad/CMV-hIGF-1、hIGF-1蛋白表达持续达4周以上,hIGF-1组表达持续约2周;PBS注射组无hIGF-1蛋白表达.[结论]hIGF-1基因能够在退变椎间盘中表达;hIGF-1基因转染表达的持续时间长于单纯hIGF-1生长因子直接注射.     

转化生长因子β对椎间盘细胞Ⅱ型胶原基因表达的调节作用

目的 探讨转化生长因子β（ＴＧＦ－β）对椎间盘细胞Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。方法 应用原位杂交技术检测ＴＧＦ－β１对人胚椎间盘原代培养及传代培养的纤维环细胞、髓核细胞中Ⅱ型胶原ｍＲＮＡ的调节作用,其中ＴＧＦ－β１浓度分别为０ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ和１０ｎｇ／ｍｌ;采用ＶＩＤＡＳ软件计算杂交涂片中细胞的平均光密度值,进行胶原ｍＲＮＡ相对定量。结果 （１）原代培养的椎间盘纤维环细胞,ＴＧＦ－β１浓     

腺病毒介导人胰岛素样生长因子1基因转染退变椎间盘的实验研究

退变性椎间盘病是下腰痛最为常见的病因，其发生与椎间盘退变密切相关。椎间盘退变时活细胞数量减少，蛋白多糖和水的含量减低，胶原的排列和类型发生改变，Ⅱ型胶原减少而Ⅰ型胶原增多。如果能调节椎间盘细胞的生物学特性，促进退变椎间盘的细胞分裂增殖，再生蛋白多糖和胶原，恢复水分含量，就有可能阻止退变发展。     

PCI-hTGF-β1转染体外培养成人退变椎间盘细胞及其表达产物的测定

目的：测定真核表达载体PCI-hTGF-β1转染体外培养成人退变椎间盘细胞的表达产物hTGF-β1，为椎间盘退变的基因治疗提供实验基础。方法：用免疫组织化学方法对转染细胞进行表达产物测定：用VIDAS数据分析系统对实验数据进行定量分析。结果：原代纤维环细胞转染中真核表达载体PCI-hTGF-β1阳性细胞产物的光密度值为PCI组的3．49—3．56倍，为未转染组的3．43～3．55倍；原代髓核细胞转染中真核表达载体PCI-hTGF-β1阳性细胞产物的光密度值为PCI组的3．46-3．69倍，为未转染组的3．33．3．63倍。结论：真核表达载体PCI-hTGF-β1可以成功转染体外培养的成人退变椎问盘细胞，并可获得hTGF-β1基因产物的高表达。     

胰岛素样生长因子-1基因在退变椎间盘中的表达及其对蛋白多糖、Ⅱ型胶原的影响

目的 观察人胰岛素样生长因子(hIGF)-1基因在退变椎间盘中的表达及对椎间盘蛋白多糖、Ⅱ型胶原的影响.方法 制备新西兰大白兔腰椎间盘退变(IVDD)模型24只,随机分为Ad/CMV-hIGF-1、hIGF-1生长因子及磷酸盐缓冲液(PBS)组,每组8只.L4～5、L5～6椎间盘中分别注射第2代Ad/CMV-hIGF-1(8×108PFU)、hIGF-1生长因子(100μg/L)、PBS 25 μl.注射后1、2、4、8周,Western blot检测椎间盘中hIGF-Ⅰ蛋白表达;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测蛋白多糖、Ⅱ型胶原mRNA的表达.结果 hIGF-1蛋白带出现在7.6×103道尔顿.Ad/CMV-hIGF-1组hIGF-1蛋白表达持续达4周以上,hIGF-1组表达持续约2周;PBS注射组无hIGF-1蛋白表达.ag-grecan电泳条带出现在200～300bp;在注射后1～4周,Ad/CMV-hIGF-1组内aggrecan mRNA相对表达量进行性增加,8周轻度下降,4个时期总的比较(F=8.51,P<0.05);注射后1～8周,hIGF-1注射组、PBS注射组aggrecan mRNA相对表达量进行性下降.三组中Ⅱ型胶原的相对表达量呈现aggrecan mRNA类似趋势.结论 hIGF-1基因能够在退变椎间盘中的表达;对椎间盘蛋白多糖、Ⅱ型胶原的影响存在时效依赖性.     

髓核内注射过氧化还原酶Ⅱ对兔椎间盘退变过程的影响

目的探讨髓核内注射人重组过氧化还原酶（Peroxiredoxin,Prx）对兔椎间盘退变过程的影响。方法通过纤维环穿刺法建立新西兰大白兔椎间盘退变模型（L3～4～L5～6）,24只兔随机分为高浓度组、低浓度组和对照组,每组各8只。4周后MRI显示造模成功,然后行L3～4～L5～6椎间盘内注射,高浓度组和低浓度组分别注射1 mg/mL、10μg/mL Prx蛋白,对照组注射0.1%磷酸盐缓冲液,注射量均为25μL。在注射后2、4、12、16周每组分别随机取2只兔行脊柱MRI检查,采用硫酸咔唑法检测髓核蛋白多糖的含量,免疫组化检测型胶原含量,并做病理切片HE染色观察组织及细胞的改变情况。结果蛋白注射后三组椎间盘均发生不同程度退变,注射后16周,高浓度组髓核内水分的含量明显低于低浓度组和对照组（P〈0.05）;髓核内蛋白多糖含量高浓度组显著低于低浓度组和对照组（P〈0.05）;细胞外基质型胶原灰度值高浓度组显著低于低浓度组和对照组（P〈0.05）,而低浓度组和对照组比较差异没有统计学意义（P〉0.05）。结论高浓度（1 mg/mL）Prx在椎间盘退变过程中起促进退变作用。     

特发性脊柱侧凸患者椎间盘中Ⅰ、Ⅱ型胶原基因mRNA的表达

目前，特发性脊柱侧凸(idiopathic scoliosis，IS)的确切原因尚不清楚。椎间盘中胶原质和(或)量的改变可能导致脊柱的稳定性降低，从而产生侧凸等畸形。本研究采用半定量逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Is患者椎间盘组织中Ⅰ型和Ⅱ型胶原基因mRNA的表达情况，探讨其在IS发生发展过程中的作用。     

骨形态发生蛋白-2和Ⅱ型胶原在退变腰椎间盘髓核组织中的表达及意义

目的:探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和Ⅱ型胶原在退变腰椎间盘髓核中的表达及其意义。方法:应用原位分子杂交(ISH)和免疫组织化学法,检测30例(男23例,女7例)退变腰椎间盘髓核(退变组)和8例(男6例,女2例)无明显退变腰椎间盘髓核(对照组)中BMP-2和Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达情况;应用Image-ProPlus5.0图像分析软件测定各指标的平均灰度值。结果:退变组BMP-2的mRNA和蛋白(109.51±8.32和104.48±14.24)表达较对照组(146.93±16.35和146.38±19.53)增强(P<0.05和P<0.01);而退变组Ⅱ型胶原mRNA和蛋白(139.49±16.05和140.34±18.26)表达较对照组(113.09±15.28和113.72±13.59)减弱(P<0.01)。退变组中,BMP-2和Ⅱ型胶原mRNA、蛋白表达均呈一定的负相关关系(r分别为-0.602和-0.614,P<0.01)。结论:在椎间盘退变过程中BMP-2可能是一个重要的调节因子;其对椎间盘退变的调节作用与Ⅱ型胶原有一定关系;BMP-2在退变椎间盘中的表达增强可能是一种保护性的反应。     

椎间盘内注射TGF-β1对兔退变椎间盘软骨终板Ⅱ型胶原的影响

[目的]研究椎间盘内注射转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对兔退变腰椎间盘软骨终板Ⅱ型胶原的影响,以探讨局部注射 TGF-β1 对防治软骨终板退变的作用.[方法]选用 6 个月龄日本大耳白兔46只,雌雄不限,体重为(2.5±0.2)kg,随机分为对照组、预防组和治疗组.对照组 18 只,预防组 18 只,治疗组 10 只.所有实验动物均通过切开皮肤及皮下组织,剥离骶棘肌、切断 L5.6、L6.7棘上、棘间韧带、两侧关节突关节囊及关节后外 1/2 造成 L5.6、L6.7椎间失稳模型.预防组动物在完成椎间失稳手术后立即于同一切口通过侧后方入路显露 L5.6、L6.7椎间盘,并在椎间盘内注射 TGF-β1.对照组及预防组分别于椎间失稳术后 3、6 个月各 8 只取材.治疗组于椎间失稳术后第 3 个月再行侧后方入路 L5、6、L6、7椎间盘内注射 TGF-β1,第 6 个月取材.运用免疫组织化学方法对标本进行Ⅱ型胶原测定,并用SPSS 15.0 软件进行统计学分析.[结果]①术后 3、6 个月预防组软骨终板内Ⅱ型胶原与对照组相比有高表达,差异有显著统计学意义;②术后第 6 个月治疗组软骨终板内Ⅱ型胶原与对照组相比有较高表达,差异有显著统计学意义.[结论]在兔椎间盘内注射 TGF-β1 可以提高Ⅱ型胶原的表达,具有延缓软骨终板退变的作用.     

被动吸烟大鼠椎间盘中白介素-1β和白介素-1受体Ⅰ的表达及意义

目的：观察被动吸烟大鼠椎间盘中自介素-1β（IL-1β）和白介素-1受体Ⅰ（IL-1RⅠ）的表达，探讨被动吸烟诱发椎间盘退变的机制。方法：取4周龄SD大鼠60只，随机分为6组，第1组不予吸烟，10只；第2-4组分别吸烟2周、4周、8周，第5、6组吸烟8周后予停止吸烟4周、8周，每组10只。在相应时间点处死动物，取L4/5椎间盘行HE染色和IL-1β及IL-1RⅠ免疫组化染色，观察椎间盘退变情况和IL-1β及IL-1RⅠ的表达情况。结果：HE染色显示，吸烟2周时椎间盘无明显退变，吸烟4周时椎间盘出现2～3级退变，吸烟8周时椎间盘出现3-4级退变，停止吸烟后4周退变无明显修复；停止吸烟后8周退变部分修复。免疫组化染色显示，吸烟2周组IL-1β及IL-1RⅠ染色阳性细胞率增加，吸烟4周组染色阳性细胞率大于2周组；吸烟8周组达（76&#177;3．2）％和（46&#177;2．8）％，停止吸烟后4周开始下降，8周时降至（66&#177;2．9）％和38&#177;2．2％。结论：被动吸烟可以诱发大鼠椎间盘退变，且随吸烟时间延长退变加重；其导致退变的机制可能与上调椎间盘内IL-1β和IL-1RⅠ的表达有关。