不同浓度葡萄糖与脂多糖对SD大鼠胰腺β细胞胰岛素分泌的影响

目的:探索不同浓度葡萄糖(Glu)及脂多糖(LPS)对SD大鼠胰腺β细胞胰岛素分泌的影响。方法:体外原代培养8周龄大鼠胰腺组织,根据析因分析设计为4组:C+LPS 40(Glu 5 mmol/L+LPS 40pg/mL),C+LPS 200(Glu 5 mmol/L+LPS 200 pg/mL),HG+LPS 40(Glu 25 mmol/L+LPS 40 pg/mL),HG+LPS 200(Glu 25 mmol/L+LPS 200 pg/mL)。培养48 h后,利用实时荧光定量-聚合酶链反应(Q-PCR)检测这4组培养基内胰岛素m RNA表达,免疫荧光观察比较高糖和高LPS对大鼠胰腺内胰岛素合成情况的差异。结果:高糖和高LPS均能显著降低大鼠胰腺胰岛素的表达量(P0.05)。高糖能使胰腺中胰岛素mRNA的表达下降39.58%(P0.05),高LPS能使胰腺中胰岛素m RNA的表达下降40.50%(P0.05),2种因素之间存在交互作用(P0.05)。结论:高糖和高LPS均能对胰腺β细胞造成损伤,显著减少胰岛素的合成与释放。LPS对胰岛β细胞的损伤作用在T2DM的发生发展过程中起着重要作用。     

损伤胰腺组织提取液诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化的实验研究

目的：探讨胰岛损伤的胰腺组织提取液诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素样细胞分化的作用.方法：通过大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立1型糖尿病模型,6 d后剥离胰腺提取胰腺组织提取液,与SD大鼠骨髓间充质干细胞共同培养18 d,体外诱导骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化,RT-PCR法检测诱导分化后细胞的胰岛细胞相关基因的表达,葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测诱导后细胞在高糖作用下分泌胰岛素的功能.结果：经损伤胰腺组织提取液诱导后,间充质干细胞在形态上由梭形变成多边、不规则形,且逐渐聚集成岛状.免疫荧光检测诱导细胞的胰岛素表达呈阳性,RT-PCR检测诱导细胞表达胰岛素1（Ins1）、胰岛素2（Ins2）、葡萄糖转运子2（Glut-2）、神经源素3（Ngn3）、胰腺十二指肠同源盒1（Pdx1）、同源框蛋白（Isl-1）及脑神经源性分化因子（NeuroD）等胰岛相关基因,且具备高糖诱导促进胰岛素分泌的功能.结论：在损伤胰腺组织提取液诱导下,骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞,并且具有表达胰岛相关基因和胰岛素分泌功能.     

内毒素耐受对脓毒症大鼠肠道功能的保护作用

目的：动态观察内毒素耐受大鼠在内毒素血症时肠道炎症反应和免疫功能的变化,探讨内毒素耐受对内毒素血症大鼠肠道的保护作用及其机制。方法：选择健康成年雄性SD大鼠70只,随机分成3组：正常对照组（10只）、内毒素（LPS）组（30只）和内毒素耐受组（30只）。内毒素耐受组大鼠于实验第1日经腹腔注射LPS 0.25 mg/kg,24h后经腹腔注射LPS 0.5 mg/kg,LPS组在上述时间均给予等量生理盐水;实验第5日上述两组大鼠均腹腔注射大剂量LPS 10 mg/kg,于注射大剂量LPS前（0h）和注射后2、4、6、12h取大鼠肠组织制备肠黏膜上清液,用双抗体夹心法测定肠黏膜组织中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的含量,用免疫组化技术检测肠组织细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达,并与正常对照组进行比较;光学显微镜下观察3组大鼠肠组织病理学变化,并进行病理学评分。结果：内毒素耐受组在给予小剂量LPS后没有出现体重下降。内毒素耐受组肠黏膜中slgA的含量较正常对照组明显升高,6 h最为明显（P〈0.05）,LPS组sIgA含量2 h明显升高（P〈0.05）,从6 h开始下降（P〈0.05）。内毒素耐受组给予大剂量LPS后肠黏膜ICAM-1的表达没有呈上升趋势,各时间点ICAM-1的表达与正常对照组比较差异有显著性,以6h ICAM-1的表达最低,而LPS组肠黏膜ICAM-1的表达随时间的延长逐渐升高,明显高于内毒素耐受组。肠组织病理学观察可见：LPS组肠黏膜水肿,绒毛脱落,并伴有大量炎性细胞浸润;内毒素耐受组上述表现较LPS组减轻。两组肠黏膜炎症损伤病理学评分[LPS组（3.89±0.45）分;内毒素耐受组（2.65±0.36）分]差异有显著性（P〈0.01）。结论：内毒素耐受可减轻内毒素血症导致的肠道黏膜屏障的损害,升高sIgA水平,减少ICAM-1表达,从而起到肠保护作用。     

内毒素血症时肺动脉和胸主动脉内一氧化氮合酶表达的比较

目的 观察内毒素血症时肺动脉和胸主动脉中诱导型一氧化氮合(iNOS)基因和蛋白表达的时间依从性变化。方法 48只Wistar大鼠350－450g，雌雄兼备，随机均分成对照组（C组），3h组，8h组和48h组。对照组腹腔内注射2ml生理盐水，余各实验组腹腔内注射脂多糖（LPS）4mg/kg，溶于2ml生理盐水，分别在LPS腹腔内注射后3h,8h和48h颈椎脱臼法处死大鼠取肺动脉和胸主动脉，RT－PR和Western blot法测定各组肺动脉和胸主动脉中iNOS的mRNA和蛋白表达。结果 LPS注射后大鼠肺动脉中iNOS的mRNA和蛋白表达逐渐上升，8h达到高峰，48h恢复到LPS注射前水平；胸主动脉中iNOS的蛋白表达3h即达峰值，以后逐渐下降，48h恢复到LPS注射前水平。LPS注射后3h和8h大鼠iNOS的mRNA及蛋白表达水平肺动脉比胸主动脉高。结论 内毒素大鼠的肺动脉和胸主动脉中iNOS的mRNA和蛋白的表达呈现时间依从性变化，iNOS的mRNA和蛋白表达峰值胸主动脉早于肺动脉，肺动脉中iNOS的mRNA和蛋白表达程度高于胸主动脉。     

异氟烷预处理改善内毒素诱导大鼠急性肺损伤和死亡率

背景异氟烷预处理对肺脏促炎症介质和多种内毒素诱导的急性肺损伤后生存率的作用鲜有系统报道。我们研究异氟烷预处理对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的作用。方法雄性SD大鼠重250—300g,随机被分为4组：假手术组,即假手术-空白组（腹腔注射盐水）空白预处理（100％O2）;假手术．异氟烷组,假手术大鼠用异氟烷预处理;LPS组,即空白．LPS组,腹腔注射脂多糖,空白预处理;ISO—LAP组,腹腔注射脂多糖大鼠,异氟烷预处理。腹腔注射脂多糖,诱导内毒素血症,异氟烷预处理在注射内毒素前30分给予1．4％处理,然后观察动物6小时,监测动脉压、心率、血气。肺损伤程度通过肺湿／干比、伊文思蓝染料外渗、组织学检测评估。同时,检测肺脏NO、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,另外,进行生存分析和肺iNOS（诱导NO合酶）基因表达检测。结果脂多糖诱导系统性低血压和重型肺损伤,以急性肺损伤程度增加、伴随肺功能的改变、肺组织NO、TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高为证。异氧烷预处理减弱了系统性低血压和急性肺损伤发展,调节脂多糖诱导的肺脏硝酸盐／亚硝酸盐升高和促炎症介质释放,提高败血症大鼠生存率。iNOS表达可被脂多糖处理上调,被异氟烷预处理下调。结论异氟烷预处理可减弱肺脏促炎症介质释放,减少重度败血症大鼠死亡率,其保护作用可能由部分抑制iNOS—NO信号通路活性所介导.     

RNA干扰技术抑制诱导型一氧化氮合酶基因表达对大鼠胰岛细胞凋亡和功能的影响

目的 探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因在大鼠胰岛细胞培养过程中对胰岛细胞凋亡和胰岛素分泌的影响及其机制.方法 从30只Wistar大鼠获得胰岛,随机分为5组.大鼠胰岛体外培养中,使用针对iNOS的siRNA转染胰岛.根据RNA干扰(RNAi)条件以及培养液中是否加入细胞因子TNF-α和IL-1β将胰岛分为5组:空白对照组、细胞因子组、阴性对照组、RNAi组以及RNAi+细胞因子组.通过RT-PCR和Western blot检测RNAi效果,RT-PCR和TUNNEL法检测胰岛凋亡情况,胰岛素释放实验检测胰岛功能.结果 每只大鼠可获得500～600 IEQ胰岛.RNAi可以沉默大鼠胰岛组织iNOS基因,抑制iNOS生成.胰岛经细胞因子IL-1β和TNF-α处理后,促凋亡基因Bax和Fas表达明显升高,胰岛素释放减少.经RNAi抑制iNOS基因后,胰岛与细胞因子IL-1β和TNF-α共同培养时,促凋亡基因表达明显下降,凋亡细胞减少,胰岛素释放增加.结论 RNAi技术抑制胰岛iNOS基因表达后,可减少胰岛细胞凋亡,改善胰岛的存活和功能.     

胰岛素对大鼠急性脊髓损伤后细胞凋亡及诱导型一氧化氮合酶、环氧化酶-2表达的影响

目的:研究胰岛素对大鼠急性脊髓损伤(SCI)后细胞凋亡及相关炎症因子诱导型一氧化氮合酶(in-duciblenitricoxidesynthase,iNOS)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响。方法:60只SD大鼠随机分为损伤对照组和胰岛素治疗组,每组30只,采用改良Allen's法建立SCI模型。SCI后30min内治疗组经腹腔注射普通速效胰岛素1IU/kg·d+50%葡萄糖1g/kg·d,分3次给药,每8h1次,连续给药7d;对照组给予等量生理盐水。伤后8h、1d、3d、7d、14d每组各处死6只动物取材,采用原位末端标记(TUNEL)和免疫组织化学染色方法观察脊髓细胞凋亡及iNOS、COX-2表达的变化。结果:SCI后各时间点胰岛素治疗组TUNEL阳性细胞数明显少于损伤对照组,差异有显著性(P<0.05或P<0.01);胰岛素治疗组iNOS、COX-2的表达率均明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论:胰岛素对大鼠急性脊髓损伤有保护作用,抑制炎症因子iNOS、COX-2的表达可能是其作用机制之一。     

MafA基因治疗糖尿病的研究进展

糖尿病是一种严重危害人类健康的疾病.1型糖尿病主要因胰岛β细胞破坏引起胰岛素绝对缺乏,2型糖尿病患者晚期也以胰岛素分泌严重不足为主,需要外源性胰岛素治疗.MafA蛋白在胰腺中表达,是胰岛素基因转录的有效活化剂.与Pdx-1和Beta2联合作用,MafA基因发挥明显的促胰岛素生成作用.如果能利用MafA基因诱导糖尿病患者体内胰腺外细胞表达胰岛素,替代病变的胰腺β细胞,将极大的改善糖尿病患者的预后.     

氨基胍对大鼠胰岛保护作用的实验研究

目的 探讨在细胞因子与大鼠胰岛细胞共同培养过程中,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基胍对胰岛细胞功能和存活的影响及其机理.方法 分离纯化大鼠胰岛,进行胰岛细胞培养.根据培养基中是否加入氨基胍或细胞因子IL-1β和TNF-α,按随机对照原则分为空白对照组(完全培养基)、细胞因子组(加IL-1β和TNF-α)、氨基胍组(加氨基胍)及氨基胍+细胞因子组(加氨基胍及细胞因子).检测指标包括: 培养液中NO水平、胰岛组织中iNOS活性、胰岛细胞存活情况(丫啶橙/溴乙锭染色)、胰岛细胞凋亡情况(TUNEL法)及胰岛功能(胰岛素释放试验).结果 与空白对照组比较,细胞因子组大鼠胰岛组织中iNOS的活性明显提高,培养液中NO的水平明显上升,同时胰岛细胞的存活率下降,大量细胞凋亡,胰岛素分泌明显减少(P＜0.01).与细胞因子组比较,氨基胍+细胞因子组的iNOS的活性[(3.17±0.51) U/ml比(38.93±4.72) U/ml]及NO水平[(50.5±10.4) μmol/L比(313.0±35.4) μmol/L]明显下降,胰岛细胞存活率活明显升高[(72.73±3.14)%比(57.07±5.07)%],凋亡率明显下降[(20.11±8.48)%比(41.17±6.87)%],胰岛素分泌指数明显升高(3.50±0.27比1.96±0.19),差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 氨基胍通过抑制iNOS活性,控制NO过量产生,从而减轻细胞因子对胰岛的损害,改善胰岛的存活与功能.     

Ghrelin对大鼠离体胰腺胰岛素分泌及Glut-2蛋白表达的影响

目的探讨Ghrelin对大鼠离体胰腺组织胰岛素分泌及葡萄糖转运蛋白-2（Glut-2）表达的影响。方法将25只Wistar大鼠随机分为正常对照组（NC组）、高糖组（HCG组）、高糖＋高浓度Ghrelin（10-8mol/L）组（HCG＋HCGh组）、高糖＋中浓度Ghrelin（10-9mol/L）组（HCG＋MCGh组）及高糖＋低浓度Ghrelin（10-10mol/L）组（HCG＋LCGh组）,每组5只。建立大鼠离体胰腺灌注模型,经腹主动脉远端相应灌注低糖（5.5 mmol/L）、单纯高糖（33.3 mmol/L）溶液或加入上述不同浓度Ghrelin的高糖（33.3 mmol/L）溶液。采用ELISA法测定门静脉流出液的胰岛素水平,采用免疫组化染色方法半定量测定Glut-2蛋白在离体胰腺组织中的表达水平,采用透射电镜观察胰岛β细胞的超微结构改变。结果 5组大鼠的空腹血浆葡萄糖（FBG）、空腹血浆胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及胰岛素分泌指数（HOMA-β）比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。用低糖溶液灌注时,5组大鼠门静脉流出液的胰岛素水平比较差异无统计学意义（P〉0.05）;而用高糖溶液灌注后,胰岛素的分泌在3 min和10～12 min时出现了2个高峰（以HCG＋HCGh组最高）。NC组大鼠胰岛β细胞Glut-2蛋白的平均光密度值高于其余4组（P〈0.05）。透射电镜观察结果显示,高糖各组大鼠离体胰腺的凋亡征象较NC组严重,但HCG＋HCGh组的细胞器损害程度较HCG＋MCGh组及HCG＋LCGh组轻。结论在大鼠离体胰腺中,Ghrelin可促进高浓度葡萄糖诱导的胰岛素分泌,对胰岛β细胞起保护作用。     

重症急性胰腺炎iNOSmRNA对大鼠内分泌功能影响

目的探讨重症急性胰腺炎大鼠胰腺内分泌功能变化，研究iNOSmRNA在胰腺内分泌功能损伤中的作用。方法制作大鼠重症急性胰腺炎动物模型，对胰腺病理损伤评分；检测血清脂肪酶，血糖水平；分离胰岛，进行葡萄糖刺激胰岛素分泌试验；应用逆转录聚合酶链反应技术，检测胰岛iNOSmRNA的表达情况。结果重症急性胰腺炎大鼠病理学评分、血糖、血清脂肪酶升高，葡萄糖刺激胰岛素分泌量较对照组明显减少，差异有显著性；逆转录聚合酶链反应提示重症急性胰腺炎组胰岛的iNOSmRNA表达增强，差异有显著性。结论重症急性胰腺炎对胰腺内分泌有较大影响，重症急性胰腺炎iNOSmRNA对胰腺内分泌功能可能发挥作用。     

急性胰腺炎胰腺iNOS mRNA的表达与肠壁通透性的关系及丹参对其的影响

目的 探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺组织诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)mRNA的表达及其与肠壁通透性的关系,并观察丹参对其的响.方法 大鼠随机分为3组:(1)SAP组(n=15);(2)SAP丹参注射液治疗组(T组,n=15);假手术对照组(C组,n=15).原位杂交法检查各组胰iNOS mRNA表达,血中一氧化氮(NO),淀粉酶(AML),内毒素(LPS)和血中与肠内125I-清蛋白累积指数,以及胰腺和回肠病理检查.结果 AP组胰腺iNOS mRNA呈强阳性表达,血中NO,AML和LPS含量及125 I-清蛋白累积指数和腹水量均显著高于C组(P<0.01).与SAP组比较,T胰腺及回肠病理损害明显减轻,胰腺iNOS mRNA表达强度较弱,血中NO,AML,LPS及腹水量均显著下降(P<0.01),125I-清蛋白累积指数降低.结论 SAP肠壁通透性增加的原因之一可能与SAP时胰腺iNOS mRNA的过度表达产生过多NO有关.丹参通过下调胰腺iNOS mRNA的达,对降低SAP的肠壁通透性有一定预防治疗作用.     

内毒素休克大鼠核因子κB活化规律及其在生物蝶呤诱生中的作用

目的观察内毒素休克大鼠血浆及主要脏器核因子(NF)κB活化规律及其对生物蝶呤(BH4)和一氧化氮(NO)表达水平的影响,探讨内毒素休克时NF-κB信号通路对BH4诱生NO的分子调控机制及其与多器官功能损害的关系。方法将47只大鼠按表格随机法分为正常组(8只)、内毒素／脂多糖(LPS)组(24只,每观察时相点8只,均同时注射LPS制成休克模型)和拮抗组[15只,每观察时相点5只,均同时注射LPS并以吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)拮抗]。休克及拮抗组于注射LPS后2、6、12 h观察,并与正常组同法处死,无菌留取大鼠血标本及肝、肺、肾组织,测定组织中NF-κB活性和三磷酸鸟苷环水解酶Ⅰ(GTP-CHⅠ)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平、血浆和组织中的BH4含量及NO水平、肝脏和肾脏功能指标、肺组织髓过氧化物酶活性。结果与正常组(例如肺组织中NF-κB活性为26±6)比较,LPS组大鼠组织中NF-κB迅速活化(P<0．01),并于注射后2 h达峰值(肺组织中为291±44);LPS组各组织中GTP-CHⅠ和iNOS mRNA表达、BH4和NO水平也较正常组明显升高(P<0．05或0．01),至伤后12 h仍持续较高水平。此外,该组相应器官功能均受到不同程度的损害。应用PDTC的拮抗组大鼠各组织中NF-κB活性均较LPS组有所降低,GTP-CHⅠ、iNOS mRNA表达及BH4、NO水平显著受抑,肝、肺、肾功能明显改善。结论内毒素休克时机体内NF-κB通路高度活化,并对BH4／NO系统具有明显调节效应;可通过下调BH4介导的iNOS的过度活化抑制NF-κB信号途径,从而减轻组织炎性反应,对机体脏器功能起到保护作用。     

硝普钠对内毒素致大鼠急性肺损伤保护作用的机制

目的 研究外源性一氧化氮（NO）供体一硝普钠对内毒索（LPS）致大鼠急性肺损伤（Au）保护作用的机制。方法 32只Wistar大鼠随机分为4组（n=8），假手术组（S组）、内毒素组（LPS组）、HO-1诱导剂氯化高铁血红素预处理组（HM组）和硝普钠治疗组（SNP组）。采用气管内滴入750μg／kg（溶于300ml生理盐水中）LPS建立大鼠ALI模型，HM组在给LPS前12h腹腔注射氯化高铁血红素40μmol／kg，SNP组将LPS与硝普钠（25μg／kg）同时滴入气管。滴人LPS后8h处死大鼠，测定肺组织湿／干重比（W／D）、丙二醛（MDA）含量、诱导型血红素加氧酶（HO-1）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达及支气管肺泡灌洗液（BALF）蛋白浓度，并观察肺组织病理变化。结果 与S组比较，LPS组、HM组、SNP组肺组织iNOS、HO-1蛋白表达均增强，LPS组、HM组肺组织W／D及MDA含量增加，LPS组BALF蛋白浓度增加；与LPS组比较，HM组和SNP组肺组织iNOS蛋白表达减弱，肺组织HO-1蛋白表达增强，肺组织W／D、MDA含量及BALF蛋白浓度降低（P〈0．05或0．01）。SNP及HM组肺组织病理损伤程度明显轻于LPS组。结论 硝普钠可通过诱导HO-1进而抑制iNOS／NO，减轻LPS所致ALI．     

内毒素预处理对内毒素血症大鼠肺的作用及机制探讨

目的 观察内毒素预处理对内毒素血症大鼠肺的作用及其机制。方法 将雄性Wistar大鼠84只随机分为7组：生理盐水(NS)组,内毒素脂多糖(LPS)2h、4h、6h组和LPS预处理2h、4h、6h组,每组12只。LPS预处理各组大鼠经腹腔注射LPS0．25mg／kg,24h后再注射LPS0．5mg/kg,NS组和LPS各组在上述时间均给予等容量NS;第2次腹腔注射72h后,LPS各组和LPS预处理各组大鼠经静脉注入(静注)LPS 10mg／kg,NS组注射等量NS。NS组在静注NS后6h,LPS2h、4h、6h组和LPS预处理2h、4h、6h组在静注LPS后2、4、6h时各取6只大鼠取血,行血气分析;取左侧肺组织检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA及抑制性κB-α(IκB-α)蛋白表达;计数右肺支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数,测蛋白含量。上述7组另取6只大鼠,在上述相同时点取全肺,计算肺体指数,测定髓过氧化酶(MPO)。结果 LPS各组大鼠较NS组大鼠肺体指数、BALF中白细胞数和蛋白及肺组织MPO含量均增加,氧分压和HCO3^-下降;而LPS预处理各组大鼠上述各指标变化明显减轻。肺组织ICAM-1 mRNA在LPS2h、4h和6h组表达递增,而在LPS预处理各组表达显著减少;LPS2h组肺组织IκB-α蛋白表达较NS组减少,而LPS预处理2h组较LPS2h组表达增加。结论 内毒素预处理可防止内毒素血症时的肺损伤,可能与内毒素预处理使肺组织IκB-α蛋白生成增加和(或)消耗减少有关。     

兴奋胆碱能抗炎通路对内毒素致心肌损害的保护作用

目的：研究兴奋胆碱能抗炎通路对内毒素引起大鼠心肌损害的保护作用。方法：① 内毒素休克模型[静注内毒素（LPS）10mg/kg]：设手术对照组、单纯LPS组、迷走神经切断（VC）＋LPS组和VC＋LPS＋迷走神经电刺激（VS）组,观察电刺激迷走神经对心肌组织炎症介质和心肌酶指标的影响。②内毒素血症模型（静注LPS5mg/kg）：设LPS＋电针非经非穴组、LPS＋电针足三里穴组、VC后注射LPS组和VC＋LPS＋电针足三里穴组,观察电针副交感神经相关穴位足三里穴对内毒素血症引起的心肌组织损伤的保护作用。各组大鼠均于注射LPS后2h处死,检测血浆肌酸磷酸激酶同工酶（CK-MB）活性和组织病理学改变,内毒素休克各组测定心肌组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。结果：刺激迷走神经可明显降低内毒素休克大鼠心肌组织TNF-α含量;刺激迷走神经或电针足三里穴能显著降低LPS注射后2h大鼠血浆CK-MB活性,减轻心肌组织病理损害;切断迷走神经能显著减轻或消除电针足三里穴的作用,进一步升高血浆CK-MB活性,加重心肌组织损害。结论：刺激副交感神经激活胆碱能抗炎通路对内毒素血症和内毒素休克大鼠心脏具有不同程度的保护作用。     

黄芩苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为胰岛素分泌细胞

目的 体外诱导大鼠骨髓间质干细胞（BMSCs）分化为胰岛样细胞。方法 采用分步法体外诱导后，间接免疫荧光法鉴定诱导前后细胞nestin、胰岛素蛋白表达；RT-PCR法检测诱导前后胰岛转录因子mRNA表达；ELISA检测诱导后细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌。结果 免疫荧光染色显示诱导5h，nestin阳性细胞为（44．6±7．3）％。诱导24h，nestin阳性细胞增至（61．8±8．4）％。此后，nestin阳性细胞数目开始下降，诱导第14天后，nestin表达基本消失；同时诱导后的细胞可以表达胰岛素蛋白。另一方面，RT-PCR结果显示诱导后细胞可以表达胰岛素-1、葡萄糖转运子-2及其转录因子mRNA。ELISA结果显示不同浓度的葡萄糖刺激的胰岛素分泌量不同，5mmol／L和25mmol／L葡萄糖刺激的胰岛素分泌量分别为（25．53±6．49）和（53．26±7．56）mU／L，而诱导前MSCs不具备上述特点。结论 大鼠BMSCs体外可以诱导成为胰岛素分泌细胞。     

促红细胞生成素预先给药对大鼠内毒素性急性肺损伤的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)预先给药对大鼠内毒素性急性肺损伤的影响.方法 成年雄性SD大鼠32只,体重180～220 g,随机分为4组(n=8),C组腹腔注射生理盐水4 ml/kg(EPO溶剂对照),30 min后静脉注射生理盐水2 ml/kg[脂多糖(LP3)溶剂对照];EPO组腹腔注射EPO3 000 U/kg,30 min后静脉注射生理盐水2 ml/kg;LPS组腹腔注射生理盐水4 ml/kg,30 min后静脉注射LPS 6 mg/kg;EPO+LPS组腹腔注射EPO 3 000 U/kg,30 min后静脉注射LPS 6 mg/kg.于静脉注射LPS后4 h时处死大鼠,观察肺组织病理学结果 ,计算肺组织湿/干重(W/D)比;测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量;采用Western blot法测定肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和硝基酪氨酸(NT)的表达.结果 与C组相比,LPS组和EPO+LPs组肺组织W/D比、MPO活性、MDA和NO含量升高,iNOS和NT表达上调(P<0.01);与LPS组相比,EPO+LPS组肺组织W/D比、MPO活性、MDA和NO含量降低,iNOS和NT表达下调(P<0.01).结论 EPO预先给药可减轻大鼠内毒素性急性肺损伤,与其下调iNOS表达,减少NO生成有关.     

TNFα、NO在烧伤复合内毒素血症早期肾损害中的作用及其意义

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)、一氧化氮(NO)在烧伤合并内毒素血症早期肾脏损害中的作用及其意义。方法 以大鼠体表烧伤Ⅲ度20％TBSA合并小剂量内毒素(1mg／kg体重)腹腔注射造成多脏器损害模型,按设计分组并在致伤后不同时相点进行肾脏病理形态学观察、TNFα和NO血清浓度测定、TNFα mRNA原位杂交和iNOS免疫组化染色。结果 烧伤后注射内毒素组诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达和NO的合成以及TNFα mRNA的表达和TNFα的血浆水平均显高于和早于单纯烧伤组和单纯注射内毒素组。结论 烧伤合并内毒素血症时肾组织中NO和TNFα的水平显升高,两的升高可能是导致肾脏损害和引起肾脏血流动力学改变的重要因素之一。     

氯化镧对内毒素/脂多糖诱导巨噬细胞株一氧化氮合酶表达的抑制作用

目的了解氯化镧（LaCl3）对内毒素／脂多糖（LPS）刺激的巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响，并探讨其机制。方法将小鼠巨噬细胞株RAW264．7分为空白对照组、LaCl、组、LPS组和LaCl3＋LPS组。前3组细胞分别用常规培养液、含2．50μmol／L LaCl3的培养液、含1mg／L LPS的培养液培养24h，LaCl3＋LPS组用含2．5μmol／LLaCl，的培养液培养24h后，换为含1mg／L LPS的培养液培养24h。采用免疫细胞化学染色法检测iNOS在各组细胞中的表达强度；蛋白质印迹法检测iNOS的蛋白表达水平；反转录一PCR测定iNOS的mRNA表达水平；硝酸还原酶法测定各组细胞培养上清液中一氧化氮（NO）含量。结果免疫细胞化学染色结果显示，iNOS主要分布于各组细胞的胞质中，空白对照组和LaCl3组荧光强度极弱；LPS组荧光强度最强，阳性细胞百分率为44．4％，明显高于LaCl3＋LPS组（11．8％，P〈0．05）。LPS组iNOS蛋白及其mRNA表达量和细胞培养上清液中NO含量均高于其余各组（P〈0．05）。结论LaCl3可在mRNA水平和蛋白水平抑制LPS诱导的iNOS过度表达，减少NO生成，提示LaCl3能拮抗LPS诱导的iNOS过度活化。