热休克蛋白70对H2O2损伤心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对损伤大鼠心肌细胞凋亡的保护作用.方法体外培养大鼠心肌细胞,免疫组化、DNA Ladder、流式细胞仪、细胞色素C氧化酶比活力的测定、电镜观察等作为检测指标,观察过氧化氢(H2O2)造成心肌细胞损伤,以及HSP70的保护作用.结果温度诱导后HSP70在胞浆中大量表达,损伤组与保护组凋亡率、细胞色素C氧化酶比活力有显著性差异(P<0.01).电镜观察损伤组细胞膜、细胞器损伤明显,并出现凋亡小体.结论 HSP70可延迟细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用.     

七氟醚和缺氧预适应诱导乳鼠心肌细胞HSP70表达的改变

目的 :探讨七氟醚预适应和缺氧预适应对乳鼠心肌细胞热休克蛋白 70表达的影响。方法 :第 2代培养心肌细胞随机分为正常对照组 (C组 )、缺氧 /复氧组 (A/R组 )、缺氧预适应组 (IP组 )和七氟醚预适应组 (S组 ) ,每组均缺氧 2h ,复氧 48h。分别取复氧 0 ,1,12 ,2 4,36和 48h的细胞 ,用免疫组化染色检测HSP70 表达并进行图象分析。结果 :在各个时间点 ,S组和IP组间的HSP70 表达均显著高于A/R组和C组 (P <0 .0 1) ,A/R组的HSP70 表达略高于C组 ,S组和IP组间的HSP70 表达差异无显著性 (P >0 .0 5 )。随着复氧时间的延长 ,S组和IP组间的HSP70 表达从 1h开始增加 ,2 4h表达最强 ,与 1h相比差异具有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :七氟醚预处理和缺氧预处理均可诱导乳鼠心肌细胞HSP70 在延迟相呈高表达 ,提示HSP70 参与了七氟醚预适应和缺氧预适应的延迟保护相。     

热休克预适应对心脏移植供心保护作用的实验研究

目的 探讨热休克预适应产生的热休克蛋白70(HSP70)在心脏移植供心中的表达规律和对心脏移植供心的影响.方法 建立大鼠异位心脏移植模型并随机分为6组:对照组,经热处理的R0 h、R24 h、R48 h、R96 h、R192 h实验组.分别于移植后1周取出供心,测定其中HSP70含量、心肌组织生化指标变化并观察心肌组织超微结构的变化.结果 R24 h、R48 h组HSP70含量较其他4组明显升高,心肌组织生化指标也优于其他4组(P<0 01),供体心肌超微结构的损伤也较其他4组明显减轻.结论 热休克预适应可诱导大鼠心肌HSP70含量逐渐增加,并在24～48 h达高峰,一定量的HSP70表达对心脏移植的供心具有保护作用.     

七氟醚和缺氧预适应诱导乳鼠心肌细胞HSP70表达的改变

目的探讨七氟醚预适应和缺氧预适应对乳鼠心肌细胞热休克蛋白70表达的影响.方法第2代培养心肌细胞随机分为正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(A/R组)、缺氧预适应组(IP组)和七氟醚预适应组(S组),每组均缺氧2 h,复氧48 h.分别取复氧0,1,12,24,36和48h的细胞,用免疫组化染色检测HSP70表达并进行图象分析.结果在各个时间点,S组和IP组间的HSP70表达均显著高于A/R组和C组(P＜0.01),A/R组的HSP70表达略高于C组,S组和IP组间的HSP70表达差异无显著性(P＞0.05).随着复氧时间的延长,S组和IP组间的HSP70表达从1 h开始增加,24 h表达最强,与1 h相比差异具有显著性(P＜0.05).结论七氟醚预处理和缺氧预处理均可诱导乳鼠心肌细胞HSP70在延迟相呈高表达,提示HSP70参与了七氟醚预适应和缺氧预适应的延迟保护相.     

缺血预适应对大鼠乳鼠心肌细胞缺血／再灌损伤的保护作用

目的探讨缺血预适应对乳鼠心肌细胞缺血／再灌损伤的保护作用。方法复制大鼠乳鼠心肌细胞培养模型，试验分为四组：正常对照组：正常培养乳鼠心肌细胞；缺血再灌注组：缺血3h，再灌注9h；预适应组：先缺血90min，再灌注60min，再缺血3h，再灌注9h；预适应加caffeine组：缺血90min，再灌注20min后加入caffeine继续缺血40min后，再缺血3h，再灌注9h。分别测定乳鼠心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平；HE检测各组心肌细胞损伤情况。结果检测乳鼠心肌细胞培养液中LDH活力、MDA水平和SOD活力时发现，缺血再灌注组和预适应加caffeine组的培养液中LDH活力、MDA水平与对照组相比明显增加，而SOD活力与对照组相比则是降低。培养的乳鼠心肌细胞的HE染色可见缺血再灌注组细胞体积变小，胞核浓缩，胞质嗜酸性增强，其病理学改变比预适应组和预适应加caffeine组严重。结论缺血预适应对大鼠乳鼠心肌细胞缺血／再灌损伤有保护作用。     

当归红芪超滤物对氧化损伤乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制

目的 探讨当归红芪超滤物对H2O2致乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法 用高浓度的H2O2(400μmol/L)在 Wistar 乳鼠原代培养的心肌细胞上建立氧化损伤模型,用不同质量浓度的当归红芪超滤物 (3.75、7.5、15 mg/mL) 进行干预。在倒置显微镜下观察各实验组心肌细胞的搏动频率,用 MTT 法检测心肌细胞的存活率,用试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶 (LDH)、肌酸激酶 (CK) 的活性及细胞内超氧化物歧化酶 (SOD) 的活性、丙二醛 (MDA)、髓过氧化物酶 (MPO) 的量。RT-PCR 技术检测 caspase-3、hsp70 基因在心肌细胞中的表达情况。结果 当归红芪超滤物显著提高氧化损伤心肌细胞的细胞活力;与损伤组比较,当归红芪超滤物各干预组心肌细胞 LDH、CK、MPO、MDA 量显著降低 (P〖WT＜0.01),SOD 活性显著提高 (〖WTBX〗P〖WTBZ〗＜0.01),caspase-3 基因表达显著降低 (P＜0.05),hsp70 基因表达显著提高 (P＜0.05),差异具有统计学意义;并且当归红芪超滤物的抗氧化损伤作用呈剂量依赖性。结论 当归红芪超滤物具有良好的抗氧化损伤作用,其机制可能与清除自由基、上调 hsp70 表达、抑制 caspase-3 活性有关。     

耐热运动颗粒对热适应+应激大鼠的保护作用与热休克蛋白70表达的关系

目的　通过耐热运动颗粒 (主要成分为红参、黄芪、红景天等 )对热适应 +热应激机体的热休克蛋白 70 (HSP70 )表达影响的研究 ,以探寻该药提高机体的耐热能力的机理。方法　采用人工热气候室 (34℃± 1℃、RH6 0 % ) ,建立热适应和热应激动物模型。SD大鼠 2 0 0只分为对照组、热适应组、颗粒热适应组、热适应 +应激组 ,颗粒热适应 +应激组 ,每组又分为热适应 2d、 7d、 14d、 2 8d四个时段。采用免疫组化SP法染色 ,应用图像分析系统分析肝、心肌组织HSP70含量的变化。结果　①在热适应的四个阶段 ,肝与心肌细胞的HSP70表达强度变化呈现如下趋势 :颗粒热适应组 >热适应组 >对照组(P <0 0 1或 0 0 5 ) ,热适应 +应激组 >热适应组 (P <0 0 1或 0 0 5 ) ,在 2d时颗粒热适应 +应激组 <热适应 +应激组 (P <0 0 1)。②热适应 2d、 7d与 2 8d时血清中肝与心肌细胞内酶浓度明显增高 ,而颗粒热适应组血清酶浓度明显低于热适应组。结论　耐热运动颗粒可增强热适应机体肝与心肌细胞HSP70的表达强度 ,减轻热适应 +应激组机体的热损伤。耐热运动颗粒保护细胞的机理可能与增强HSP70的表达有关。     

KATP抑制剂对七氟醚诱导乳鼠心肌细胞HSP70表达的影响

目的探讨HSP70在七氟醚诱导乳鼠心肌细胞预适应中的作用及其内在联系. 方法第2代培养心肌细胞随机分为正常对照组、缺氧/复氧组、七氟醚组、优降糖组、优降糖+七氟醚组,每组均缺氧2 h,复氧48 h.分别取复氧0、1、12、24、36和48 h的细胞用免疫组化染色检测乳鼠心肌细胞HSP70的表达.结果在各个时点,七氟醚组的HSP70表达最强,显著高于正常对照组、缺氧/复氧组、优降糖组和优降糖+七氟醚组(P<0.01),随着复氧时间的延长,七氟醚组HSP70表达从1 h开始增加,24 h表达最强, 具有显著统计学意义(P<0.05).且优降糖+七氟醚组HSP70表达与正常对照组、缺氧/ 复氧组、优降糖组组间无显著性差异(P>0.05).结论 HSP70和K ATP 通道均参与了七氟醚诱导乳鼠心肌细胞产生预适应过程,阻止KATP通道则抑制HSP70 的表达.     

白藜芦醇对H2O2所致乳鼠心肌细胞损伤的保护机制研究

目的 研究白藜芦醇(Res)在H2O2所致乳鼠心肌细胞损伤中的保护机制.方法 将原代培养的乳鼠心肌细胞分成3组:对照组,H2O2处理组和Res+ H2O2处理组,采用MTF比色法检测细胞活性,应用Real Time-PCR技术检测miR-34a的表达水平.结果 H2O2对乳鼠心肌细胞具有损伤作用,Res可明显缓解H2O2对乳鼠心肌细胞的损伤作用,经过H2O2处理后乳鼠心肌细胞内miR-34a的表达水平显著升高,Res可明显降低乳鼠心肌细胞内miR-34a的表达水平.结论 Res通过下调miR-34a的表达水平来发挥对H2O2所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用.     

左卡尼汀对心肌细胞H2O2损伤的保护作用

目的 研究左卡尼汀对H2O2引起的心肌细胞损伤的保护作用.方法 利用体外培养乳鼠心肌细胞,0.2 mM H2O2作用12 h建立氧化应激损伤模型,观察不同浓度左卡尼汀(50,100,200 mg/L)对心肌细胞活力、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响.结果 与正常组比较,模型组细胞活力下降,细胞MDA含量增加,SOD活性下降(P＜0.01);与模型组比较,不同浓度的左卡尼汀可以提高心肌细胞活力,降低细胞MDA含量,增加SOD活性.结论 左卡尼汀对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞损伤有保护作用.     

不同强度热休克预处理对氧化应激所致乳鼠心肌细胞损伤的影响

目的:探讨不同强度热休克预处理对氧化应激所致体外培养的乳鼠心肌细胞损伤的影响.方法:用热休克预处理原代培养的乳鼠心肌细胞,向心肌细胞中加入终浓度为0.5 mmol/L的过氧化氢(H20:),以模拟氧化应激造成心肌细胞损伤.将心肌细胞分为5组:对照组(Ctrl组)、H2O2损伤组(H2O2组)、低强度热休克预处理(42℃,15 min,恢复12 h) H2O2组(HSR15 min H2O2组)、中等强度热休克预处理(HSR45 min) H2O2组和高强度热休克预处(HSR90 min) H2O2组.四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察处理后各组细胞的活力;流式细胞仪测定细胞凋亡率;检测各组培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量.细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.结果:与Ctrl组比较,H2O2组的细胞活力和SOD活性都明显降低(P<0.01),而细胞凋亡率、LDH和MDA含量明显增高(P<0.01);与H2O2组比较,HSR15 min H2O2组和HSR45min H2O2组的细胞活力和SOD活性明显增高(P<0.01),而细胞凋亡率、LDH和MDA含量明显降低(P<0.01),HSR90 min H2O2组与H2O2组无明显差异(P>0.05);与HSR45 min H2O2组比较,HSR15 min H2O2组和HSR90 min H2O2组的细胞活力和SOD活性明显降低(P<0.01).而细胞凋亡率和MDA含量明显增高(P<0.01),LDH也明显增高(P<0.05或P<0.01).结论:热休克预处理能减轻过氧化氢所致体外培养的新生大鼠心肌细胞损伤,且不同强度热休克预处理对心肌细胞的保护作用不同.     

去甲肾上腺素诱导热休克蛋白70保护心肌细胞的机制

目的探讨去甲肾上腺素预处理心肌细胞后诱导心肌热休克蛋白70(HSP70)的表达及其对心肌细胞保护作用机制。方法 Wistar大鼠乳鼠心肌细胞培养,分为3组:对照组:心肌培养3～5天未施加任何因素;缺氧/复氧组:心肌细胞培养3～5天后,模拟缺氧(加入饱和氮气pH 6.8 D-Hank’s液培养细胞)3 h,复氧(用含20%新生牛血清的DMEM液培养细胞)孵育6 h;去甲肾+缺氧/复氧组:模拟缺氧前30 min加入100 nmol/L去甲肾,其它同缺氧/复氧组。测定心肌HSP70和bcl-2以及相关的细胞凋亡指标。结果 HSP70和bcl-2的表达在去甲肾+缺氧/复氧组明显高于缺氧/复氧组,去甲肾+缺氧/复氧组的细胞凋亡率明显低于缺氧/复氧组。结论去甲肾上腺素预处理可能通过诱导心肌组织HSP70和bcl-2高表达,发挥其对供心的保护作用。     

HSPB1对H2O2诱导大鼠心肌细胞损伤中线粒体膜电位的影响

目的:观察热休克蛋白B1(heatshockproteinB1,HSPB1)对H2O2诱导的大鼠心肌细胞损伤过程中线粒体膜电位(DY)的影响,从线粒体水平阐明HSPB1保护心肌细胞抗氧化损伤机制。方法:以本室建立的稳定转染人HSPB1的大鼠心肌细胞系H9c2(HSPB1H9c2)和空载体转染的H9c2(CON)为实验对象,300μmol/LH2O2刺激2、4和8h后,倒置光学显微镜观察细胞形态学变化,荧光探针JC鄄1测定线粒体膜电位。结果:HSPB1高表达显著抑制了H2O2诱导的典型凋亡形态学改变;HSPB1高表达使线粒体膜电位升高42%以上(P<0.001);HSPB1高表达显著抑制线粒体膜电位下降,H2O2刺激2、4、8h后,HSPB1H9c2和CON的线粒体膜电位分别降至刺激前的69.5%和66.5%(P<0.05),74.4%和67.0%(P<0.05),70.7%和58.1%(P<0.05)。结论:HSPB1有效抑制了氧化应激诱导的以凋亡为主的细胞损伤和线粒体膜电位丧失,提示线粒体膜电位的稳定可能参与了HSPB1抗心肌细胞的氧化损伤机制。     

Akt参与热休克蛋白27保护大鼠心肌细胞过氧化损伤

目的:探讨小分子热休克蛋白27保护大鼠心肌细胞过氧化损伤的机制.方法:①以稳定转染 pCDNA3.1/Hsp27质粒并稳定高表达Hsp27的大鼠心肌细胞株H9c2(H9c2-Hsp27)为研究对象.对照组采用稳定转染pCDNA3.1质粒的H9c2(H9c2-Vector)细胞;②氧化应激诱导和检测:500 μmol/L H2O2处理细胞后进行如下分析:培养上清中的 LDH 活性、细胞形态学改变、细胞内Akt激活水平;③Akt在Hsp27保护 H2O2诱导H9c2损伤中的作用:以Akt抑制剂Triciribine处理H9c2-Hsp27,观察其对Hsp27保护H2O2诱导H9c2形态学变化的影响.结果:①H2O2诱导H9c2细胞向培养上清释放的LDH显著增加(P<0.01),但与对照组相比,Hsp27 高表达显著抑制了 H2O2诱导的LDH释放(P<0.01);②H2O2处理后,H9c2细胞Akt磷酸化水平增加(P<0.01或P<0.05),但与H9c2-Vector比较,H9c2-Hsp27的Akt磷酸化水平进一步增强(P<0.05);③Akt磷酸化被抑制后,Hsp27对H2O2诱导H9c2细胞形态学改变的保护作用消失.结论:Akt激活是Hsp27保护大鼠心肌细胞过氧化损伤的重要机制.     

查耳酮衍生物L2H24对H2O2诱导损伤的心肌细胞的保护作用

目的：探讨查耳酮衍生物L2H24 对H2O2 诱导氧化损伤的心肌细胞的抗氧化保护作用及其相关分子机制。方法：MTT法检测大鼠心肌细胞H9c2 活性;集落克隆实验检测细胞增殖能力;倒置显微镜下观察细胞焦亡形态学变化;硫代巴比妥酸显色反应检测细胞中脂质过氧化MDA水平;Western blot法检测HO-1、核/浆Nrf2、Caspase-1 p48、Caspase-1 p20、IL-1β的表达水平。结果：L2H24能上调H2O2氧化损伤的H9c2细胞的存活率（P ＜0.05）,促进其细胞集落形成,降低其MDA水平（P ＜0.05）,减少细胞中Caspase-1 p48、Caspase-1 p20、IL-1β的表达水平（P ＜0.05）,改善细胞焦亡现象;能促进细胞中Nrf2易位入核,并上调其下游抗氧化蛋白HO-1的表达水平（P ＜0.05）,对H2O2诱导氧化损伤的心肌细胞起到保护作用。结论：查耳酮衍生物L2H24具有抗氧化损伤作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

微波消融对小鼠肝癌细胞活性和HSP70表达的影响

[目的]探讨微波消融对小鼠肝癌细胞活性和HSP70表达的影响.[方法]建立C57BL/6J小鼠Hepa 1-6肝癌皮下移植模型,采用微波能量以不同的温度消融肝癌,分别用酶组织化学和Western blot检测被消融肝癌组织细胞琥珀酸脱氢酶（SDH）的活性和HSP70的表达,并观察消融后30 d肝癌局部残留率.[结果]经40℃、45℃或50℃,120 s的条件微波消融后,50℃组消融后24 h小鼠肝癌组织细胞的琥珀酸脱氢酶活性明显低于假消融组;该组消融后30 d肝癌局部残留率明显低于假消融组（均P＜0.01）.3个消融组消融后12 h和24 h肝癌组织HSP70的表达均明显高于相应的假消融组（均P＜0.01）,且随消融温度升高表达明显增强.[结论]微波消融可促进小鼠肝癌HSP70的表达,同时在一定消融条件下能明显降低肝癌细胞的活性.     

JNK抑制剂对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的 观察特异性JNK抑制剂对H2O2诱导凋亡的培养乳鼠心肌细胞的保护作用，探讨热休克蛋白70（HSPT0）对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用机制。方法 培养大鼠乳鼠心肌细胞，随机分为4组，即正常对照组、H2O2损伤组、热休克组和JNK抑制剂组。应用免疫组化技术检测HSP70的表达；用透射电镜观察心肌细胞超微结构变化；用流式细胞仪分析心肌细胞凋亡百分率。结果 热休克预处理后HSP70在细胞浆内大量表达。JNK抑制剂明显抑制心肌细胞的凋亡率。结论 热应激预适应和JNK抑制剂对心肌细胞都具有保护作用，其保护机制可能与热应激时HSP70在心肌细胞内大量表达从而抑制了JNK的信号转导有关。     

微波消融对小鼠肝癌细胞活性和HSP70表达的影响

 [目的]探讨微波消融对小鼠肝癌细胞活性和HSP70表达的影响.[方法]建立C57BL/6J小鼠Hepa 1-6肝癌皮下移植模型,采用微波能量以不同的温度消融肝癌,分别用酶组织化学和Western blot检测被消融肝癌组织细胞琥珀酸脱氢酶（SDH）的活性和HSP70的表达,并观察消融后30 d肝癌局部残留率.[结果]经40℃、45℃或50℃,120 s的条件微波消融后,50℃组消融后24 h小鼠肝癌组织细胞的琥珀酸脱氢酶活性明显低于假消融组;该组消融后30 d肝癌局部残留率明显低于假消融组（均P＜0.01）.3个消融组消融后12 h和24 h肝癌组织HSP70的表达均明显高于相应的假消融组（均P＜0.01）,且随消融温度升高表达明显增强.[结论]微波消融可促进小鼠肝癌HSP70的表达,同时在一定消融条件下能明显降低肝癌细胞的活性.