心血管疾病基因治疗的基础研究Ⅲ．重组质粒fPGV－MT－LacZ在大鼠血管平滑肌细胞中的表达

为观察外源性基因在心血管细胞内的表达，本工作构建了含有外源性标记基因ＬａｃＺ的逆转录病毒质粒ｆＰＧＶ－ＭＴ－ＬａｃＺ。应用脂质体（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）包裹质粒，转染培养的大鼠主动脉平滑肌细胞，经Ｇ４ｌ８筛选、克隆以及β－半乳糖苷酶的酶活测定，证明外源性基因可以在血管平滑肌细胞中表达。揭示血管平滑肌细胞可作为心血管疾病基因治疗的一种靶细胞。     

重组β—半乳糖苷酶腺病毒载体的构建及其在血管闰滑肌细胞中的表达

目的构建表达β-半乳糖苷酶(β-gal)的重组腺病毒,以期为再狭窄的基因治疗研究提供一个对照载 体和为腺病毒介导的基因转移的安全性、可行性、转染效率的研究提供一有用的工具。方法采用基因重组方法构 建穿梭质粒pAd-β-gal,通过同源重组法制备出重组腺病毒Ad-β-gal,转染的293细胞用X-gal染色鉴定Ad-β -gal的正确与否。通过测定260nm的紫外光吸收值估计病毒高度。原代大鼠血管平滑肌细胞采用组织块培养 法。Ad-β-gal以100moi感染VSMCs并行X-gal染色,以观察β-gal在VSMCs中的表达情况。结果成功构建了 pAd-β-gal穿梭质粒和Ad-β-gal重组腺病毒,转染的293细胞和VSMCs经X-gal染为蓝色,病毒浓度为9×l011 pfu/ml,以100moiAd-β-gal转染VSMCs,其转染效率接近l00%。结论表达β-gal的重组腺病毒构建成功,并在 VSMCs中得到有效表达,本研究为将来再狭窄基因治疗研究提供了一对照载体,也为腺病毒介导的基因转移的安 全性、可行性、有效性的研究提供了一有用的工具。     

16肽－多聚赖氨酸携载β－LacZ基因向在体血管的导入与表达

１６肽－多聚赖氨酸携载β－ＬａｃＺ基因向在体血管的导入与表达北京医科大学心血管基础研究所赵民清，刘乃奎，周爱儒，汤健本实验室已报道ＢＱ１２３－多聚赖氨酸靶向地对血管平滑肌细胞转移外源基因，鉴于血管内皮细胞（ＥＣ）在心血管疾病中的重要作用，我们合成了内...     

PTEN基因对血管平滑肌细胞影响的研究进展

再狭窄严重制约了经皮冠状动脉介入治疗的远期疗效。其病理基础是新生内膜的形成;而血管平滑肌细胞增殖和迁移则是其主要成因。PTEN是至今发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因。对细胞的生长、增殖、分化、凋亡、黏附、迁移和血管生长等许多生物学行为有重要影响。近年来,对PTEN的研究逐渐从肿瘤领域延伸到一些非肿瘤领域中,随着研究的深入,人们发现其在再狭窄、心肌肥大、高血压、动脉粥样硬化中也发挥重要的作用。     

人组织激肽释放酶基因转移对血管平滑肌细胞迁移的影响

目的 探讨重组腺病毒介导的人激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)的血管平滑肌细胞(VSMCSHR)迁移的影响.方法 自行构建携带目的基因hKLK1和强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双顺反子重组腺病毒载体.采用组织贴块法培养SHR胸主动脉血管平滑肌细胞,接种第3～6代VSMCSHR于6孔板,分别加入含hKLK1重组腺病毒和对照病毒干预,3d后加入PDGF-BB诱导24h,采用改良Boyden 微孔膜双槽法测定VSMCSHR迁移,并加入缓激肽受体B2特异性阻断剂Hoe140.RT-PCR法测定缓激肽B1受体、B2受体的mRNA表达.结果 hKLK1基因转移可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR细胞迁移,抑制率为34.6%,且Hoe140干预不产生影响.PDGF-BB诱导的VSMCSHR缓激肽B2受体mRNA表达明显增加(P<0.001),而Hoe140可明显降低其表达(P<0.01).结论 重组腺病毒介导的hKLK1基因转移可抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR迁移,这一效应可能不通过B2受体途径介导.     

腺病毒介导gax基因转染对血管平滑肌细胞迁移的影响

目的以腺病毒介导gax基因转染血管平滑肌细胞(VSMC),探讨gax基因表达增强后VSMC迁移的变化.方法以携带大鼠gax基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(AdCMV-gax)常规转染VSMC后,应用免疫细胞化学染色检测gax基因表达的变化,Boyden's小室观察gax基因表达增强对VSMC迁移的影响.结果①AdCMV-gax转染前,PDGF-BB下调Gax蛋白的表达,接近正常生理浓度的PDGF-BB(2 ng/ml)即可使VSMC的Gax蛋白表达率由36.42%显著降低至22.83%(P＜0.05),随着PDGF-BB浓度的升高,gax基因表达下降程度更加显著;AdCMV-gax转染后,无论有无PDGF-BB刺激,VSMC中gax基因的表达均比转染前显著增高.②AdCMV-gax转染使VSMC表达gax增强后,VSMC迁移数较未转染组显著减少.结论增强gax基因表达,可抑制由有丝分裂原刺激所引起的VSMC迁移.     

Mfn2基因对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的促进作用及其机制

目的研究线粒体融合蛋白基因（mitofusion-2，Mfn2）促进大鼠血管平滑肌细胞（rVSMCs）凋亡的作用及其机制。方法以空载缺陷型腺病毒（Adv-GFP）为对照，以复制缺陷型腺病毒作为载体，将Mfn2转移到rVSMCs中，Western blot法观察感染后Mfn2基因的表达；TUNEL法检测凋亡细胞阳性率；琼脂糖凝胶电泳观察过表达Mfn2基因对细胞凋亡的影响；Western blot等检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-9的含量。结果高表达Mfn2基因促进rVSMCs凋亡，使rVSMCs线粒体Bcl-2蛋白表达减少、Bax增多，胞质Caspases-9被激活。结论Mfn2基因促进rVSMCs的凋亡，其机制与活化线粒体凋亡途径有关。     

逆转录病毒载体介导的人β－珠蛋白基因导入人骨髓造血细胞

用重组人β－珠蛋白基因及其增强子的逆转录病毒载体转染－２细胞及ＰＡ３１７细胞，分离出产病毒粒子的－２和ＰＡ３１７克隆。用这两种细胞克隆进行乒乓上清感染，得到能产生高滴度逆转录病毒载体的ＰＡ３１７细胞克隆，其滴度达５．９×１０~６ＣＦＵ／ｍｌ。用此高滴度的病毒载体，在加入造血生长因子的情况下，重复感染人骨髓单核细胞，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交显示人β－珠蛋白基因及其增强子已完整地整合到人骨髓造血细胞基因组上。     

p27基因对血管平滑肌细胞中连接蛋白43表达的影响

目的 研究连接蛋白43(Cx43)在p27基因抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用.方法 以携带大鼠p27基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(AdCMV-p27)转染VSMC后,应用免疫细胞化学染色检测p27和Cx43表达的变化;应用3H标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入试验观察p27基因表达增强对VSMC增殖的影响.结果 (1)Ad-CMV-p27转染前,血小板衍化生长因子BB(platelet.derived growth factor,PDGF-BB)下调P27蛋白的表达,AdCMV-p27转染后,无论有无PDGF-BB刺激,VSMC中P27蛋白的表达均比转染前显著增高.(2)AdCMV-p27转染使VSMC中Cx43蛋白的表达基本恢复至有丝分裂原刺激前状态.(3)AdCMV-p27转染使VSMC的.H.TdR掺入量均较未转染组显著降低.结论 p27基因对Cx43表达的调控,使细胞间连接通讯得到维护,是其抑制VSMC增殖的重要机制之一.     

黄芪甲苷抑制NLRP3/IL-1β轴改善高糖诱导的血管平滑肌细胞炎症反应

目的:探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对高糖诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)炎症反应的作用及机制。方法:①采用不同浓度的葡萄糖(5.5、10、15、25 mmol/L)刺激VSMCs细胞24 h,或高浓度葡萄糖(25 mmol/L)处理VSMCs不同时间(0、6、12、24 h)。Western blot检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达;ELISA检测白介素-1β(IL-1β)含量。②采用不同浓度(0、10、20、40μg/ml)AS-Ⅳ干预VSMCs细胞24 h后,CCK8法检测并计算细胞活力。③将VSMCs细胞分为对照组、高糖组、AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+高糖组。先给予AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+高糖组20μg/ml AS-Ⅳ预孵育2 h后,再向高糖组和AS-Ⅳ+高糖组加入25 mmol/L葡萄糖刺激24 h。Western blot检测NLRP3蛋白表达;ELISA检测IL-1β含量。④构建si-NLRP3 RNA转染的VSMCs细胞。将细胞分为对照组、高糖组、si-NLRP3组和si-NLRP3+高糖组。细胞转染6 h后,高糖组和si-NLRP3+高糖组细胞加入25 mmol/L葡萄糖刺激24 h。PCR检测NLRP3 mRNA表达;ELISA检测IL-1β含量。⑤应用转染技术构建NLRP3过表达的VSMCs细胞。将细胞分为对照组、AS-Ⅳ组、NLRP3过表达组和NLRP3过表达+AS-Ⅳ组。细胞转染6 h后,AS-Ⅳ组和NLRP3过表达+AS-Ⅳ组加入20μg/ml AS-Ⅳ干预24 h。PCR检测NLRP3 mRNA表达;ELISA检测IL-1β含量。结果:①高糖刺激能够上调VSMCs细胞NLRP3和IL-1β蛋白表达(P0.01),且呈一定的浓度/时间依赖性,故选取25 mmol/L葡萄糖作用24 h进行后续研究。②10、20μg/ml AS-Ⅳ作用VSMCs细胞24 h后,细胞活力无显著变化(P0.05),选择20μg/ml浓度进行后续实验。③与对照组相比,AS-Ⅳ组细胞NLRP3蛋白表达量显著下调(P0.05),IL-1β含量显著降低(P0.05);与高糖组相比,AS-Ⅳ+高糖组NLRP3蛋白表达量显著减少(P0.01),IL-1β含量显著降低(P0.01)。④与对照组相比,si-NLRP3组细胞NLRP3 mRNA表达量显著降低(P0.01),IL-1β含量没有明显变化;与高糖组相比,si-NLRP3+高糖组NLRP3 mRNA表达量显著减少(P0.01),IL-1β含量显著降低(P0.01)。⑤与AS-Ⅳ组相比,NLRP3过表达+AS-Ⅳ组NLRP3 mRNA表达量显著增多(P0.01),IL-1β含量显著升高(P0.01)。结论:黄芪甲苷可能通过抑制NLRP3/IL-1β轴改善高糖诱导的VSMCs炎症反应。     

Aβ25-35对培养主动脉血管平滑肌细胞的毒性研究

目的 探讨β-淀粉样蛋白25～35(amyloid-beta protein 25～35,Aβ25-35)对体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)的毒性作用.方法 实验分对照组(生理盐水组)和Aβ25-35组(浓度分别为10、20、50、100 μmol/L),分别培养1、3、10 d,光镜下观察VSMC形态学改变;MTT法检测细胞活力;检测乳酸脱氢酶(LDH)活力.结果 VSMC在浓度为20 μmol/L的Aβ25-35孵育3d后即出现退行性改变,细胞存活率下降,LDH活力增高,其程度均呈Aβ25-35浓度、孵育时间依赖性.结论 Aβ25-35可致VSMC形态学改变、存活率降低、LDH活力增高,有细胞毒性作用.     

自发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞异常增殖和自身肾素－血管紧张素系统的关系

目的以２０周龄自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常血压大鼠（ＷＫＹ）胸主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）为模型，探讨ＳＨＲＡＳＭＣ异常增殖和自身肾素－血管紧张素系统（ＲＡＳ）的关系。方法用３Ｈ－ＴｄＲ参入量和倍增时间（ＤＴ）反映ＡＳＭＣ的增殖能力，放射免疫法测定血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）浓度，紫外分光光度法测定血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性。结果（１）ＳＨＲＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ参入量显著高于ＷＫＹ，ＤＴ显著短于ＷＫＹ（Ｐ＜０．０１）。基础状态下，ＳＨＲＡＳＭＣ合成ＡｎｇⅡ、ＡＣＥ以及分泌ＡｎｇⅡ的量显著高于ＷＫＹ（Ｐ＜０．０１）。（２）在含２％ＦＣＳ的培养基中，１０－６ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ使ＳＨＲ、ＷＫＹ的３Ｈ－ＴｄＲ参入量分别提高到对照组的３．３倍、２．２倍（Ｐ＜０．０１），ＳＨＲＡＳＭＣ在不同浓度ＡｎｇⅡ刺激时的３Ｈ－ＴｄＲ参入量显著高于ＷＫＹ（Ｐ＜０．０１），１０－６ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ使ＳＨＲＡＳＭＣ细胞数增加７２．５±２３．１％（Ｐ＜０．０１），ＷＫＹＡＳＭＣ细胞数无显著增加，１０倍浓度ＡｎｇⅡ的Ｓａｒａｌａｓｉｎ对ＳＨＲ、ＷＫＹ３Ｈ－ＴｄＲ参入的抑制率分别为６６．７±３．３％，４４．７±９．９％（Ｐ＜０．０１）     

细胞外调节蛋白激酶介导的脂蛋白（a）促血管平滑肌细胞迁移作用

目的:研究细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)在脂蛋白(a)[Lp(a)]诱导的人血管平滑肌细胞(VSMC)迁移及细胞骨架构建中的作用.方法:用不同浓度的ERK激酶抑制剂PD98059抑制人VSMC内ERK的活化,再用Lp(a)诱导处理后的细胞,Western blot检测P-ERK的表达,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架构建变化,迁移试验观察VSMC迁移数量的变化.结果:Western blot检测显示PD98059的终浓度在10 μmol/L时,P-ERK表达无明显变化(P>0.05),从20～40 μmol/L,随其终浓度的逐渐升高,P-ERK的表达逐渐降低(P<0.01),达到40 μmol/L后,其抑制作用达到高峰.PD98059预处理人VSMC,Lp(a)诱导20 min后,细胞内未见明显的张力纤维、粘着斑及丝状伪足.对照组VSMC迁移细胞数为(78.87±7.43)个,PD98059处理组为(49.20±6.47)个, PD98059处理组较正常对照组明显减少(P<0.01).结论:Lp(a)诱导的VSMC细胞骨架构建及细胞迁移依赖于ERK的活化.     

β-细辛醚对PC12细胞、血管平滑肌细胞、人静脉内皮细胞缺氧损伤的影响

目的：探讨缺氧对脑神经细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞的损伤顺序及β-细辛醚干预后对上述损伤的影响。方法：观察β-细辛醚对PCI2细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞缺氧损伤形态变化,配合以MTF法和流式细胞分析法对各种细胞缺氧损伤后的存活和凋亡时间及状况进行分析。结果：在缺氧0．5h时神经细胞凋亡率达到40％,在缺氧1．5h时血管内皮细胞和血管平滑肌细胞凋亡率达到40％。β-细辛醚0．015mg／ml组,0．03mg／ml和0．06mg／ml组对PCI2细胞、血管平滑肌细胞均有保护作用,且呈剂量依赖性;β-细辛醚0．015mg／ml组对血管内皮细胞无保护作用;0．06mg／ml和0．03mg／ml组均有保护作用。结论：一定剂量的β-细辛醚具有保护脑神经细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞免受缺氧损伤,提高细胞存活率的作用。     

腺病毒介导TFPI基因转染诱导血管平滑肌细胞凋亡机制的探讨

目的 研究组织因子途径抑制物(TFPI)基因转染对大鼠血管平滑肌细胞凋亡通路的影响,探讨TFPI诱导细胞凋亡的机制.方法 将含有人TFPI基因的重组腺病毒或含β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的重组腺病毒或DMEM在体外分别转染大鼠血管平滑肌细胞,用ELISA方法检测转染后平滑肌细胞中TFPI蛋白的表达,Western blot方法测定基因转染后不同时间点细胞中JAK-2、p-JAK-2、STAT-3、p-STAT-3以及cyclinD1的表达.结果 基因转染后1天在血管平滑肌细胞中检测到TFPI蛋白的表达,而峰值出现在第3天;基因转染后3、5、7天,各组JAK-2和STAT-3的表达无明显差异(P＞0.05),而TFPI组p-JAK-2、p-STAT-3以及cyclinD1的表达与对照组相比明显减少(P＜0.05),且具有明显的时间依赖性.结论 TFPI可能通过抑制JAK-2/STAT-3通路来发挥诱导平滑肌细胞凋亡的作用,从而抑制再狭窄发生.     

降钙素基因相关肽对血管平滑肌细胞脂质代谢及AMPK的影响

目的观察降钙素基因相关肽（CGRP）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖过程中细胞脂代谢的影响,探索影响脂代谢的腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号蛋白在该作用中的变化。方法贴块法体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞（VSMC）,取第3-10代用于实验。分别用CGRP或／和AngⅡ处理细胞。细胞计数法观察CGRP对AngⅡ诱导大鼠VSMC增殖的影响;油红O染色检测细胞内脂质含量;Western blot检测细胞p-AMPK、p-ERK1／2的表达。结果CGRP预处理能减少AngⅡ诱导的大鼠VSMC数目（P〈0．05）和细胞内脂质聚集的作用,在此过程中伴随细胞内p-AMPK、p-ERK1／2表达下调（P〈0．05）;CGRP8—37（CGRP受体拮抗剂）能拮抗CGRP对AngⅡ促增殖和脂代谢作用（P〈0．05）;PD98059（ERK1／2抑制剂）能部分拮抗CGRP对p—AMPK的抑制作用（P〈0．05）。结论CGRP能显著降低AngⅡ诱导大鼠VSMC增殖过程中的脂质代谢,其细胞内信号通路可能涉及到p—ERK1／2和p—AMPK信号蛋白。     

重组β-半乳糖苷酶腺病毒载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的 :构建表达 β -半乳糖苷酶 (β -gal)的重组腺病毒 ,以期为再狭窄的基因治疗研究提供一个对照载体和为腺病毒介导的基因转移的安全性、可行性、转染效率的研究提供一有用的工具。方法 :采用基因重组方法构建穿梭质粒pAd - β -gal,通过同源重组法制备出重组腺病毒Ad - β -gal,转染的 2 93细胞用X -gal染色鉴定Ad - β-gal的正确与否。通过测定 2 6 0nm的紫外光吸收值估计病毒高度。原代大鼠血管平滑肌细胞采用组织块培养法。Ad - β -gal以 10 0moi感染VSMCs并行X -gal染色 ,以观察 β -gal在VSMCs中的表达情况。 结果 :成功构建了pAd - β -gal穿梭质粒和Ad - β -gal重组腺病毒 ,转染的 2 93细胞和VSMCs经X -gal染为蓝色 ,病毒浓度为 9× 10 11pfu/ml,以 10 0moiAd - β-gal转染VSMCs,其转染效率接近 10 0 %。结论 :表达 β -gal的重组腺病毒构建成功 ,并在VSMCs中得到有效表达 ,本研究为将来再狭窄基因治疗研究提供了一对照载体 ,也为腺病毒介导的基因转移的安全性、可行性、有效性的研究提供了一有用的工具。     

β-榄香烯对血管内皮细胞功能紊乱和血管平滑肌细胞异常增殖的影响

研究β-榄香烯是否能改善低剪切力（LSS）诱导的血管内皮细胞功能紊乱和氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移。分别采用平行板流动腔和ox-LDL建立血管内皮细胞（ECs）功能紊乱模型和血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移模型,并检测β-榄香烯对ECs功能紊乱和VSMCs增殖迁移的影响。DHE法检测ECs中ROS的活性,DAF-FM DA法检测ECs中NO的活性。Western blot法检测ECs中Akt和ERK的蛋白磷酸化水平。MTT法检测VSMCs的增殖。细胞划痕实验和Transwell实验检测VSMCs的迁移。RT-qPCR法检测VSMCs中MMP-2和MMP-9的基因表达。在ECs中,β-榄香烯可以显著降低LSS诱导的ROS的升高,显著升高LSS诱导的NO的降低,并且降低ERK的磷酸化,并升高Akt的磷酸化。在VSMCs中,β-榄香烯可以显著降低ox-LDL诱导的VSMCs的增殖和迁移,降低MMP-2和MMP-9的基因表达。β-榄香烯可以改善LSS诱导的ECs功能紊乱和ox-LDL诱导的VSMCs增殖和迁移。     

降压药物对未成年自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增生与凋亡及相关基因蛋白的影响

目的　观察不同种类降压药物对未成年自发性高血压大鼠 (SHR)主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)增生和凋亡的影响 ,探讨其在高血压早期血管重塑中的作用和意义。方法　 36只 4周龄SHR ,按随机化区组设计分成6组 ,分别应用普萘洛尔 ( 5 0mg·kg-1·d-1)、依那普利 ( 30mg·kg-1·d-1)、硝苯地平 ( 35mg·kg-1·d-1)、缬沙坦 ( 30mg·kg-1·d-1)、双氢氯噻嗪 ( 75mg·kg-1·d-1)干预 6周。另设一对照组 ,采用末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT)介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ;用免疫组化法检测Bcl 2、Bax基因蛋白 ;光镜下观察主动脉组织学改变。结果　 ( 1)依那普利、硝苯地平和缬沙坦组VSMC凋亡指数 (SMCAI)显著增高 (P <0 .0 1) ,而普萘洛尔、双氢氯噻嗪组与对照组相比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 ( 2 )依那普利和缬沙坦组Bcl 2基因表达较对照组显著下降 (P <0 .0 1) ,硝苯地平组也显著下降 (P <0 .0 5 ) ,而普萘洛尔、双氢氯噻嗪组与对照组比较无显著性差异 (P>0 .0 5 )。 ( 3)缬沙坦组Bax基因表达较对照组显著增高 (P <0 .0 1) ,余 4组与对照组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 ( 4 )依那普利、硝苯地平和缬沙坦组Bcl 2 /Bax较对照组显著下降 (P <0 .0 1) ,而普萘洛尔、双氢氯噻组与对照组比较     

人参、三七、川芎提取物对血管平滑肌细胞衰老相关β半乳糖苷酶及p16-cyclinD/CDK-Rb通路的影响

目的：观察人参、三七、川芎提取物延缓自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rat,SHR）血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）衰老的作用及其可能的细胞周期调控机制。方法：取大鼠胸主动脉用于分离VMSC,采用原代细胞培养的方法建立SHR大鼠VMSC模型,实验分为Wistar-Kyoto（WKY）大鼠对照组、SHR模型组、缬沙坦组、中药低剂量组和中药高剂量组。采用衰老相关β半乳糖苷酶（senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal）染色法观察细胞衰老情况,流式细胞仪分析细胞周期分布,逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测各组细胞p16、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（cyclin-dependent kinase4,CDK4）和成视网膜母细胞瘤蛋白（retinoblastoma protein,Rb）的表达。结果：SA-β-gal染色显示,与WKY组比较,SHR组SA-β-gal阳性细胞数明显增多（P〈0.01）,人参、三七、川芎提取物可使SHR VSMC SA-β-gal阳性细胞数明显减少（P〈0.01）;流式细胞仪检测显示,与WKY组比较,SHR组VSMC在G1期明显减少,S期细胞明显增加,中药干预后SHR的VSMC G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少（P〈0.05）;实时荧光定量聚合酶链式反应检测显示,与WKY组比较,SHR组VSMC的p16和Rb mRNA表达量明显减少,cyclin D1和CDK4mRNA表达增加;人参、三七、川芎提取物干预后SHR VSMC p16和Rb mRNA表达量增加,cyclin D1和CDK4mRNA减少。蛋白质印迹法显示,与WKY组比较,SHR组VSMC的p16蛋白表达量明显减少,cyclin D1、CDK4和磷酸化Rb蛋白表达量明显增加（P〈0.05）;中药干预后SHR VSMC p16蛋白表达增加,cyclin D1、CDK4和磷酸化Rb蛋白表达量减少（P〈0.05）。结论：人参、三七、川芎提取物通过改变p16-cyclin D/CDK-Rb通路因子的表达而发挥延缓SHR VSMC衰老的作用。