川芎嗪对BLM所致大鼠肺纤维化保护作用的电镜研究

目的 从细胞学超微结构变化观察川芎嗪对肺间质纤维化的治疗作用.方法采用气管内注入BLM方法制做肺间质纤维化动物模型.留取肺组织制备电镜标本.结果电镜可见：7天BLM组大鼠Ⅰ型肺泡上皮细胞受损,上皮基底膜水肿、裸露甚至断裂;Ⅱ型肺泡上皮细胞增生,微绒毛破坏,稀少或消失,其内板层小体增多增大,空泡样变,且分泌到肺泡腔内,线粒体肿胀,嵴断裂或消失甚至出现空泡样变.肺间质及肺泡腔内炎性细胞增多,可见巨噬细胞和淋巴细胞浸润,内含大量溶酶体及吞噬颗粒,7天即可见肺间质内束状胶原纤维.14、28天BLM组Ⅱ型细胞较7天BLM组减少,间质纤维组织增生明显,见大量纵横交错的胶原纤维束和纤维母细胞增生.7天川芎嗪组炎性细胞浸润较7天BLM组减轻,肺泡Ⅱ型细胞少数板层小体空泡样变,微绒毛存在且较丰富,而14、28天川芎嗪组肺间质中胶原原纤维总量不多.结论本文从超微结构变化证实了川芎嗪减轻BLM所致氧自由基对大鼠肺组织的损伤及纤维化程度.     

自噬调节EMT过程在间质性肺病中的作用机制探讨

目的 研究不同阶段肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬变化,并通过增强自噬水平,观察自噬对间质性肺炎上皮细胞-间充质转化(EMT)的作用与调控机制。方法 将小鼠随机分为A空白对照组、B模型组、C自噬增强组各10只。B组及C组气道滴注BLM建立模型,C组腹腔注射mTOR-siRNA。各组分别于干预第7天及第14天随机处死3只小鼠,第28天处死剩下的4只小鼠。记录每只小鼠体重。各组取肺组织进行电镜检查,计数肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬体数量,测定不同时期的小鼠肺泡组织中的Smad3、Smad7表达。结果 模型7 d组自噬体有所增加,模型14 d、28 d组较空白对照14 d、28 d组无明显变化;自噬增强组各时间组可减轻小鼠肺泡炎及纤维化程度;第14、28 d比较:自噬增强组小鼠Smad3蛋白表达较肺间质纤维化模型组明显降低(P0.01),较空白对照组小鼠增高(P0.01);自噬增强组Smad7蛋白表达较肺间质纤维化模型组增加(P0.05),相比空白对照组低(P0.01)。自噬增强组的各阶段的肺泡炎和肺纤维化程度与模型组(B组)对比减轻(P0.05)(除肺纤维化7 d组比较外)。结论肺泡Ⅱ型上皮细胞的自噬变化对EMT具有重要调控作用,mTOR-siRNA可通过调节Smad信号通路参与EMT过程的发生,减少肺间质纤维化形成。     

川芎嗪对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的保护作用

目的：观察川芎嗪对肺间质纤维化的保护作用.方法：将SD大鼠随机分为3组,即正常对照组、博莱霉素（BLM）组和川芎嗪＋BLM组.采用气管内注入BLM方法制作肺间质纤维化动物模型.分别于给药后7d、14d、28d光镜下观察肺组织.结果：7d时BLM组大鼠肺泡间隔有所增宽,视野中可见炎性细胞浸润增多,肺泡间质中成纤维细胞和胶原细胞增多,肺泡腔内分泌物多,而7d时川芎嗪＋BLM组较之明显减轻;14d、28d时BLM组大鼠肺泡炎症逐步减轻,炎性细胞减少,肺间质细胞增多,胶原纤维增多,间隔仍增宽,肉芽组织渐向瘢痕组织过渡,可见明显纤维化病变,而川芎嗪＋BLM组纤维化病变减轻.结论：川芎嗪在治疗肺纤维化中起重要作用.     

肺纤方对博莱霉素致肺间质纤维化大鼠肺系数与肺组织病理的影响

目的 观察肺纤方对博莱霉素致肺间质纤维化大鼠肺系数和肺组织病理的影响,研究肺纤方对肺间质纤维化的治疗作用.方法 雄性Wistar大鼠经气管插管灌注博莱霉素(1 mg/kg)复制大鼠肺间质纤维化模型,分为假手术组、模型组、泼尼松组和肺纤方组.造模后24 h开始常规每日1次灌胃给药.造模后第14、28、45天取材,计算肺系数,检测肺组织病理,进行肺组织病理学肺泡炎与肺间质纤维化分级;对Masson染色切片进行胶原纤维的面密度和数密度分析.结果 肺纤方组28 d和45 d时肺系数显著低于14 d(P<0.05),而其他各组不同时间点比较没有统计学意义.模型组、泼尼松组、肺纤方组均有肺泡炎和肺间质纤维化改变,45 d时肺纤方组的肺间质纤维化程度较模型组和泼尼松组轻.28 d时,肺纤方组肺泡炎显著低于模型组(P<0.05).45 d时肺纤方组与模型组比较肺间质纤维化程度明显降低(P<0.05).定量分析显示胶原纤维的面密度和数密度在45 d时肺纤方组与模型组和泼尼松组比较均显著降低(P<0.05).结论 肺纤方有一定的减轻博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的作用,并能在较短时间内降低博莱霉素致肺间质纤维化大鼠的肺系数.     

扶正剔邪搜络方对肺纤维化大鼠的防治作用及机制研究

目的探讨扶正剔邪搜络方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化不同时相的防治作用及其作用机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、激素组、扶正剔邪搜络组,气管内插管注射博莱霉素制备肺纤维化大鼠模型,假手术组注入等体积生理盐水作为正常对照,造模24 h后给予相应药物灌胃,于第7、14、28、45天分别处死,取肺组织行HE、Masson染色,ELISA法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)含量、RT-PCR法测定Smad3、Smad4、Smad7蛋白的表达。结果扶正剔邪搜络组大鼠第7、14天肺泡炎程度均较模型组明显减轻(P0.05),第14、28、45天纤维化程度较模型组明显减轻(P0.05);扶正剔邪搜络组大鼠各时相TGF-β1含量均低于模型组;扶正剔邪搜络组大鼠各时相Smad3/4蛋白表达明显减弱(P0.05),Smad7蛋白表达明显增强(P0.05)。结论扶正剔邪搜络方不仅可以早期预防博来霉素致大鼠肺泡炎、肺纤维化的形成,长期用药还可以延缓其病程的发展,其机制可能与Smad3、Smad4信号低表达及Smad7高表达,进而影响TGF-β1通路有关。     

实验性大鼠肺纤维化病理形态及超微结构观察

目的 从形态学上研究肺纤维化的形成过程，为防治研究和客观地评价用药物治疗肺纤维化的疗效提供依据。方法 向大鼠气管内一次性注入博莱霉素(5mg／kg)，观察注药后各模型组的肺系数、肺组织定量分析、肺组织病理及超微结构的变化。结果 模型组肺系数从第7d开始呈逐渐升高趋势；定量分析：7d组肺泡炎最严重，28d组肺泡腔明显缩小，胶原纤维成分增加；光镜下7d组肺泡腔及肺泡间质内以炎细胞浸润为主，14d时肺泡间质增宽，成纤维细胞增多，28d时胶原纤维增生，部分肺泡腔萎缩消失；电镜下3d和7d时肺泡上皮线粒体肿胀，空泡化，核固缩或核染色质边集，肺毛细血管基膜水肿或增厚，14d时Ⅱ型肺泡上皮细胞增生，其内板层小体增多，成纤维细胞增多；28d时肺间质增宽，巨噬细胞及成纤维细胞增多，胶原纤维呈灶性沉集。结论 建立的大鼠肺纤维化模型符合肺泡炎一纤维化的早期演变过程。     

肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠血管新生的影响

目的探讨肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠肺纤维化程度和肺微血管变化和血小板-内皮黏附因子31、34(CD31、CD34)表达的影响。方法将大鼠分为假手术组、模型组、泼尼松组、氯沙坦组和肺纤方大、中、小剂量组,共7组。除假手术组外,采用气管插管灌注博莱霉素3 mg/kg进行大鼠肺间质纤维化造模;造模第2天予以不同药物灌胃干预。于14、28 d分两批进行动物处理,电镜观察肺纤维化程度和肺微血管变化,免疫组化检测CD31、CD34表达。结果肺纤方大、中剂量组均能抑制肺泡炎、纤维化程度及微血管密度,较模型组有显著差异(P0.05)。结论肺纤方通过减轻肺纤维化微血管密度表达,减少肺泡炎时的异常血管新生,而具有抗肺间质纤维化作用。     

肺纤维化形成过程中肺泡Ⅱ型上皮细胞对肺成纤维细胞的影响及相关机制的探讨

目的:探讨肺间质纤维化形成过程中肺泡Ⅱ型上皮细胞对肺成纤维细胞FSP1,TGF-β,HGFmRNA表达的影响和调控作用机制.方法:28只SD大鼠随机分为平阳霉素组和生理盐水组,平阳霉素组气管内给药复制大鼠肺纤维化动物模型,生理盐水组气管内注射等量生理盐水.分别于7,28天各处死平阳霉素组大鼠10只,生理盐水组大鼠4只,其中平阳霉素组3只及生理盐水组3只提取肺泡Ⅱ型上皮细胞,平阳霉素组6只提取肺成纤维细胞,分别进行培养.至2种细胞到亚汇合状态时,实验组即:用平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞上清液培养平阳霉素组肺成纤维细胞48h;对照组即:用生理盐水组肺泡Ⅱ型上皮细胞上清液培养平阳霉素组肺成纤维细胞48h,然后用半定量RT-PCR法检测肺成纤维细胞FSP1,TGF-β,HGFmRNA表达量的变化.平阳霉素组及生理盐水组各余1只用作HE染色.结果:(1)实验组7天,28天FSP1mRNA,TGF-βmRNA,HGFmRNA表达均高于对照组(P＜0.01),(2)第7,28天实验组FSP1mRNA,TGF-βmRNA表达无明显差别(P＞0.05),实验组28天HGFmRNA表达高于第7天(P＜0.01).结论:平阳霉素诱导的肺纤维化大鼠的肺泡Ⅱ型上皮细胞能够促进肺成纤维细胞FSP1mRNA、TGF-βmRNA的表达,能够促进纤维化的进展.     

川芎嗪防治特发性肺纤维化的MMP表达

目的探讨川芎嗪对博来霉素诱导IPF模型的干预作用及相关机制。方法 80只SD大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、阳性药物对照组和川芎嗪组。除假手术组外其余各组气管灌注博来霉素诱导肺纤维化,假手术组灌注生理盐水。术后第2天开始灌胃给药,阳性药物对照组灌胃醋酸强的松1.5mg.kg-1.d-1,川芎嗪组给予川芎嗪20mg.kg-1.d-1,模型组和假手术组给予相应体积的生理盐水。分别于第14天和第28天每组各取10只处死,取肺组织,HE染色和Mallory染色观察肺泡炎和纤维化程度,免疫组化法检测MMP-1的表达。结果川芎嗪可改善IPF模型大鼠肺泡炎和肺纤维化程度。川芎嗪组MMP-1表达较模型组降低。结论川芎嗪可减轻博来霉素诱导的IPF大鼠肺纤维化程度,减少MMP-1表达,可能是其抗IPF的机制之一。     

N-乙酰半胱氨酸和川芎嗪对博莱霉素诱导的肺纤维化和TGF-β的影响

目的:探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)和川芎嗪对博莱霉素所致小鼠肺间质纤维化的治疗作用及机制。方法:博莱霉素(BLM)制成小鼠肺间质纤维化模型。各组动物处死后提取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF),进行病理半定量分析,检测谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量、BALF中转化生长因子-β(TGF-β)水平。结果:NAC和川芎嗪治疗组肺泡炎、纤维化病变均较模型组减轻,7 d时肺组织GSH量较模型组高(P<0.05),MDA含量较模型组低(P<0.05),7、14 d时TGF-β蛋白水平较模型组低(P<0.05)。结论:NAC和川芎嗪可提高肺组织GSH含量,降低MDA生成,使肺泡炎和肺纤维化病变减轻。NAC和川芎嗪通过抗氧化作用,减少TGF-β产生,是其治疗肺纤维化的机制之一。     

肺纤方对博莱霉素大鼠肺纤维化层粘连蛋白及Ⅰ、Ⅲ胶原的影响

目的观察肺纤方与强的松对照抗大鼠肺纤维化的作用。方法采用气管内注入博莱霉素制造大鼠肺纤维化模型,观察造模后14、28、45 d模型组、假手术组、肺纤方组、强的松组肺组织匀浆液中层粘连蛋白及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量。结果肺纤方显著减轻肺纤维化大鼠层粘连蛋白及Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。结论肺纤方有显著抗大鼠肺间质纤维化作用。     

川芎嗪对博莱霉素致肺间质纤维化大鼠MMP-2表达的影响

目的研究川芎嗪对博莱霉素致肺间质纤维化大鼠MMP-2表达的影响。方法选SD雄性大鼠40只,随机分为4组即正常组、模型组、阳性药物对照组及川芎嗪组,每组10只。于28 d麻醉后取肺组织,进行HE、Mallary染色,并进行MMP-2的免疫组化染色。结果模型组MMP-2表达上调,川芎嗪组表达降低,表明川芎嗪可以降低博莱霉素所致肺纤维化大鼠MMP-2的表达。结论川芎嗪可能通过降低MMP-2表达发挥抗纤维化的作用。     

化瘀理肺方对大鼠肺间质纤维化时Smad7和TGF-β表达的影响

目的：探讨化瘀理肺方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的治疗作用及机制。方法:将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组,采用博莱霉素经气管内插管注入方法(5mg/kg)建立肺间质纤维化模型,对照组注入生理盐水（0.25ml/只）,从造模后的第2天起中药组给予化瘀理肺方药物灌胃（13410mg/kg）;对照组、模型组给予生理盐水灌胃（2ml/只）;激素组给予氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射（25mg/kg）,于给药后的第14、28天分别处死,称取肺重计算肺系数;取肺组织行苏木素-伊红（HE）染色观察病理变化情况;免疫组化法测定肺组织中TGF-β、Smad7蛋白的表达情况。结果:进入结果分析的大鼠44只：①大鼠纤维化程度比较：模型组肺泡炎和肺纤维化程度较重,且胶原纤维沉积较多;中药组可见炎性细胞较少,肺泡结构基本正常,肺泡炎与肺纤维化较轻;激素组肺泡炎及纤维化减轻不明显。②TGF-β、Smad7蛋白表达量比较：中药组TGF-β蛋白表达明显低于模型组和激素组;Smad7蛋白表达明显高于模型组和激素组。结论:化瘀理肺方可明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化的程度,可能通过促进Smad7蛋白的表达从而反馈抑制TGF-β蛋白的表达发挥作用。     

腹主动脉缩窄大鼠模型左室心肌血管紧张素Ⅱ-1型受体及其mRNA的表达

目的通过建立腹主动脉缩窄大鼠模型,研究腹主动脉缩窄大鼠左室心肌血管紧张素Ⅱ-1型（AT1）受体mRNA表达及其受体蛋白的改变。方法30只雄性SD大鼠随机分为假手术组（14只）和模型组（16只）。模型组根据Doering等的方法,用银夹造成腹主动脉部分狭窄（银夹内径0．7mm）。8周后免疫组化法进行AT1受体蛋白染色,并用灰度值作为其含量指标行图像分析,即时PCR扩增后分析并测定其mRNA表达。结果模型组造模8周时AT1受体蛋白及其mRNA表达较假手术组显著升高（P〈0．01）。结论腹主动脉缩窄大鼠所致心肌纤维化心肌AT1基因转录与翻译水平发生改变,通过AT1下游信号通路传导作用,促进心肌纤维化。     

肺间质纤维化大鼠体内明胶酶活性的变化

目的观察肺间质纤维化大鼠体内明胶酶活性的变化情况。方法雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组(n=40)和博莱霉素组(BLM组,n=40)。向BLM组大鼠气管内一次性注入BLM复制肺纤维化模型,假手术组大鼠则在气管内注入等量生理盐水。两组动物同步于气管内灌注后第1、3、7、14、28d分别随机处死8只。腹主动脉抽血分离血清,支气管肺泡灌洗收集肺泡灌洗液,冰浴匀浆肺组织制备匀浆液,-80℃冻存。采用明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶活性。结果与假手术组相比,BLM组各样品中MMP-9活性均有所增加;血清及肺组织匀浆中MMP-9的活性在BLM注入后1d开始升高,血清MMP-9活性在3d达高峰,肺组织匀浆MMP-9活性在7d达高峰,14及28d已与假手术组无明显差异;肺泡灌洗液中MMP-9活性在BLM注入后1d开始增加,7d达高峰,14d趋向平稳,28d回落。BLM组血清样品中MMP-2活性在各时间点均无明显改变;肺泡灌洗液样品中MMP-2活性从14d起开始升高,持续到第28d始终未见有回落;肺组织匀浆样品中MMP-2的活性升高较早,从3d起开始升高,至28d始终未见回落。结论MMP-2和MMP-9在BLM致大鼠肺纤维化过程中的来源及作用均不同。     

健脾益智胶囊对MCAO大鼠海马β-catenin表达的影响

目的 :探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠海马β-连环蛋白(β-catenin)基因与蛋白表达的影响。方法:SD大鼠120只,建立MCAO大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组,模型组、假手术组给予0.9%氯化钠溶液,中药组、西药组分别给予健脾益智胶囊、尼莫地平混悬液灌胃。采用蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR法于术后7 d、14 d、28 d观察海马β-catenin蛋白及m RNA表达情况。结果:术后7 d,中药组β-catenin蛋白及m RNA表达均高于其他各组(P0.05);术后14 d中药组蛋白及m RNA表达高于正常组、假手术组、模型组(P0.05);术后28 d中药组β-catenin蛋白及m RNA表达高于模型组(P0.05),低于中药组7 d、14 dβ-catenin蛋白及m RNA表达(P0.05)。结论:健脾益智胶囊可提高β-catenin蛋白及基因的表达,提示健脾益智胶囊能可能通过激活Wnt通路以促进缺血后神经干细胞增殖分化。     

博菜霉素诱导大鼠实验性肺纤维化肺泡Ⅱ型上皮细胞MMP-2和MT1-MMP mRNA表达的动态变化

目的探讨肺泡Ⅱ型上皮细胞MMP-2和MT1-MMP在肺纤维化中的表达及意义.方法气管内注射博莱霉素制备大鼠肺纤维化模型,在肺纤维化形成过程的不同阶段分离和提取肺泡Ⅱ型上皮细胞,应用RT-PCR方法,观察其MMP-2及MT1-MMPmRNA表达的动态变化.结果(1)在博莱霉素作用后1～7d大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞MT1-MMP转录水平明显增高,分别为对照组的1.8和1.9倍;(2)肺纤维化早期肺泡Ⅱ型上皮细胞MMP-2转录水平也增强.结论肺泡上皮不单是致纤维化因素的损伤对象,其损伤后活跃增生的肺泡Ⅱ型上皮细胞可以通过释放MT1-MMP,催化MMP-2,从而引起和(或)加重肺基膜的损伤.     

肺纤方对肺间质纤维化大鼠VEGF及VEGFR1、VEGFR2基因表达的影响

目的 探讨肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠血管新生的影响.方法 将大鼠分为假手术组、模型组、泼尼松组、氯沙坦组、肺纤方大剂量组、肺纤方中剂量组、肺纤方小剂量组7组,除假手术组外,其余6组采用气管插管灌注博莱霉素3 mg/kg进行大鼠肺间质纤维化造模;造模第2天各组予以相应药物灌胃干预.于第14天及第28天分2批进行取材,HE染色观察肺泡炎程度、MAS-SON染色观察肺纤维化程度,RT-PCR检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)l、VEGFR2mRNA表达.结果 肺纤方大中剂量均能抑制肺泡炎和纤维化程度、下调VEGF及VEGFR1、VEGFR2mRNA表达水平(P＜0.05).肺纤方中剂量作用更显著.结论 肺纤方通过下调VEGF及VEGFR1、VEGFR2基因表达水平,抑制血管新生,发挥抗肺纤维化作用.     

尾加压素Ⅱ和组织型转谷氨酰胺酶在大鼠肾间质纤维化组织中的表达及意义

目的：探讨尾加压素Ⅱ（UⅡ）和组织型转谷氨酰胺酶(tTG)在大鼠肾间质纤维化组织中的表达及意义,为进一步明确UⅡ致纤维化的机制提供实验依据。方法：雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（n=8）和模型组（n=8）,采用左侧输尿管结扎术制备肾间质纤维化模型。术后第2周末处死各组大鼠。采用HE和Masson染色观察肾组织病理学改变;采用免疫组化法检测肾间质中UⅡ、tTG和纤维连接蛋白(FN)的表达;采用RT-PCR技术检测UⅡ和tTG mRNA的表达水平。结果：HE和Masson染色可见,模型组大鼠肾间质增宽,胶原纤维明显增生。免疫组化显示,假手术组大鼠UⅡ、tTG和FN在肾小管、肾间质区有少量表达,肾小球内除UⅡ有微量表达外,tTG和FN无阳性表达;模型组大鼠UⅡ、tTG和FN在肾小管和肾间质区的表达信号较假手术组明显增强(P<0.01),模型组大鼠UⅡ的蛋白表达与FN的蛋白表达呈正相关关系（r=0.724,P<0.05）。模型组UⅡ和tTG的基因表达明显高于假手术组(P<0.05),模型组大鼠肾内UⅡ基因和蛋白表达与tTG基因和蛋白表达均呈正相关关系（r=0.647,P<0.05 ;r=0.787,P<0.01）。结论：UⅡ和tTG可能共同参与肾间质纤维化,UⅡ的致纤维化作用可能部分是通过tTG的活化而实现的。     

补肾益肺消癥方对特发性肺纤维化大鼠Caspase-12信号通路关键分子基因和蛋白表达的影响

目的探讨补肾益肺消癥方干预特发性肺纤维化大鼠含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-12信号通路关键分子基因和蛋白表达的作用机制。方法以博莱霉素造大鼠肺纤维化模型。吡非尼酮作为阳性对照药物,补肾益肺消癥方分别于造模中(预防组)、造模后(治疗组)及实验全程(防治组)进行干预。Masson染色观察大鼠病变肺组织纤维化改变的程度,Western blot、Real-time PCR检测病变肺组织中Caspase-12信号通路相关分子基因与蛋白表达的改变。结果阳性对照组和中药各组肺泡结构轻度改变,有少量胶原纤维沉积,纤维化程度较模型组明显改善。模型组大鼠肺组织中Caspase-12通路基因及蛋白表达比正常组明显升高(P0.05),阳性组及中药各组Caspase-12通路基因及蛋白表达较模型组明显降低(P0.05或P0.01),其中中药防治组效果更优。结论补肾益肺消癥方可以通过干预Caspase-12通路关键分子的表达,调控肺泡上皮细胞内质网应激反应,延缓和抑制特发性肺纤维化病理改变进程。