缺氧状态下雌二醇对H9c2细胞钠泵活性及其亚单位表达的影响

目的应用H9c2心肌细胞系,力图发现雌二醇对缺氧状态下心肌细胞的钠泵活性及其β1亚单位表达的影响。方法使用0,1nm,100nm浓度的雌二醇分别作用正常培养状态和缺氧培养的H9c2细胞5min,10min,20min、30min作为雌二醇对钠泵活性的短效作用研究;使用0,0.01nm,1nm,100nm和1μm的雌二醇作用24h,作为雌二醇对钠泵活性及其β1亚单位表达影响的长效作用研究。结果两种浓度的雌二醇不存在对钠泵活性的短效作用。缺氧能显著降低钠泵活性及其β1亚单位的表达(P<0.05),同时100nm和1μm的雌二醇能有效逆转上述作用(P<0.05)。结论钠泵活性和表达的降低可能参与了缺氧状态下心肌细胞的病理生理改变,雌二醇可能对缺氧心肌细胞具有保护作用。     

过氧化氢对原代心肌细胞及H9c2细胞的损伤作用

目的:考察过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞损伤作用的相似性。方法:选用H9c2心肌细胞与新生大鼠原代心肌细胞,应用MTT法测定不同浓度过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞活性的影响,观察两株细胞对过氧化氢损伤的敏感性。结果:600～1 600μmol/L的过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞所造成的氧化损伤均具有浓度依赖性,1 200μmol/L的过氧化氢使H9c2心肌细胞的存活率降低40%～60%(P<0.01),表现出与原代心肌细胞相似的H2O2损伤敏感性(P>0.05)。结论:H9c2心肌细胞与原代心肌细胞对过氧化氢氧化损伤具有相似的作用和浓度依赖性。     

丙烯醛对缺氧复氧H9c2心肌细胞损伤的影响及机制初探

目的研究丙烯醛对缺氧复氧H9c2心肌细胞损伤的影响,并探讨其促凋亡作用机理。方法建立H9c2心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤模型,分为正常对照组、丙烯醛组(ACR)、缺氧复氧组(H/R)、丙烯醛+缺氧复氧组(ACR+H/R)。用10μmol/L丙烯醛预处理H9c2心肌细胞30min后2h缺氧16h复氧,采用MTT法检测细胞存活率,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染色检测细胞核凋亡的形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白cytochrome c(cyt c)、caspase 9和caspase 3的表达水平。结果与H/R组相比,ACR+H/R组H9c2细胞存活率下降、凋亡增加(P<0.05),cyt c的线粒体蛋白表达水平下调、细胞浆蛋白表达水平上调,caspase 9和caspase 3蛋白表达水平下调并出现明显裂解蛋白。结论作为一种来源于人类生活环境的心血管毒物,丙烯醛能加剧缺氧复氧H9c2心肌细胞的损伤,可能与cyt c由线粒体释放到细胞浆、激活caspase级联反应导致线粒体功能损伤有关。     

视黄酸对乳鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响

目的探讨视黄酸对乳鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因、蛋白表达的影响。方法原代培养Balb/c乳鼠心肌细胞,并纯化获得心肌细胞。用不同浓度视黄酸(0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L)进行处理,24h后倒置显微镜下观察各组心肌细胞的形态、搏动情况;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因———Fas,Fasl mRNA的表达。Western blot测定乳鼠心肌细胞Fas,Fasl蛋白的表达。结果不同浓度的视黄酸对心肌细胞的影响不同。与对照组相比,低浓度组(0.5、1.0μmol/L)对心肌细胞形态、搏动影响不明显,Fas、Fasl mRNA及蛋白表达增加,差异无统计学意义(P>0.05);当视黄酸的浓度大于2.0μmol/L时,心肌细胞损伤明显,搏动力减弱、凋亡增加,Fas、Fasl mRNA及蛋白表达均明显增高(P<0.05)。结论高浓度视黄酸对心肌细胞有明显的抑制及促凋亡作用,与Fas,Fasl介导的死亡受体信号转导途径密切相关。     

醛固酮对h9c2心肌细胞缝隙连接蛋白43的影响

目的：观察醛固酮对h9c2心肌细胞缝隙连接蛋白43（Connexin 43,Cx43）表达的影响。方法：将h9c2心肌细胞随机分为对照组和实验组,实验组用不同浓度（1×10^-8、1×10^-6、1×10^-4 mol/L）醛固酮处理24 h后,用RT-PCR和Western Blot观察不同浓度醛固酮下h9c2心肌细胞Cx43蛋白和mRNA的变化。结果：1×10^-8 mol/L醛固酮组Cx43mRNA和蛋白表达含量较对照组增加;1×10^-6 mol/L和1×10^-4 mol/L组的Cx43蛋白表达含量较对照组减少,而Cx43mRNA较对照组无明显改变。结论：醛固酮可能是通过对表达Cx43的双重影响来参与心肌细胞间隙连接重构的。     

黄芪甲苷对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其自噬机制研究

目的 研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用,并探讨其潜在的作用机制.方法 提取并培养新生大鼠心肌细胞,随机分为6组:对照组,H/R组,H/R+低、中、高浓度AS-Ⅳ(AS-Ⅳ终浓度0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)组,和H/R+高浓度AS-Ⅳ(10μmol/L...     

槲皮素保护顺铂诱导的H9c2细胞损伤的作用机制

目的:探讨在化疗药物顺铂(CDDP)诱导的氧化应激损伤中,槲皮素(Que)对H9c2心肌细胞存活率、活性氧(ROS)产生、线粒体膜电位及核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶(HO)-1 mRNA的表达等关键因素的影响,初步阐明Que对心肌细胞的保护机制。方法:传代培养H9c2心肌细胞,分别给予Que 20,40,80μmol/L进行预处理4 h,再分别给予CDDP 20μmol/L处理24 h,观察各组细胞存活率、ROS产生、线粒体膜电位和Nrf2/HO-1 mRNA的表达。结果:Que预处理H9c2心肌细胞后,CDDP诱导的细胞毒性降低,ROS产生减少,线粒体膜电位回升,Nrf2/HO-1 mRNA表达上调,并具有浓度依赖性(P<0. 05)。结论:Que对CDDP诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制与抑制心肌细胞氧化应激和线粒体损伤有关。     

缺氧条件下谷氨酸对鼠脑星形胶质细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的观察谷氨酸在缺氧条件下对星形胶质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法原代培养SD大鼠星形胶质细胞,传代后分为4组:①对照组;②谷氨酸组(1μmol/L);③缺氧组;④缺氧+谷氨酸组。缺氧条件为:(94%N2,5%CO2和1%O2),每组包括6个时相点:0、2、4、6、8、12h(以缺氧后开始计时),②和④组加入1μmol/L的谷氨酸。在不同时间点提取细胞总RNA,用Real time FQ-PCR法检测VEGF mRNA表达变化;ELISA法检测培养上清液VEGF蛋白表达变化。结果对照组和谷氨酸组(1μmol/L)各实验时相点星形胶质细胞VEGF mRNA和蛋白表达无明显变化。而缺氧组和缺氧+谷氨酸组VEGF mRNA和蛋白表达却随实验时相逐步增高,分别在6和8h达最高,之后渐下降。缺氧+谷氨酸组VEGF mRNA和蛋白表达上调较单纯缺氧组更为显著。结论谷氨酸(1μmol/L)可在缺氧条件下增强星形胶质细胞VEGF mRNA和蛋白表达上调,这可能与缺氧状态下星形胶质细胞表面谷氨酸受体的表达变化有关。     

缺氧、缺氧/复氧对心肌细胞内ROS、MAPKs活性表达的影响

目的:研究缺氧、缺氧/复氧条件对大鼠心肌细胞(H9c2)活性氧(ROS)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)活性及对细胞凋亡的影响.方法:使用化学性低氧模型诱导剂氯化钴(CoCl2)处理H9c2心肌细胞建立缺氧、缺氧/复氧模型.在不同浓度CoCl2(150、300、450、600、900、1200、2400μmol/L)...     

曲美他嗪对缺氧/复氧心肌细胞焦亡的影响

目的探讨曲美他嗪(TMZ)对急性缺氧/复氧(H/R)心肌细胞焦亡的影响。方法选择大鼠胚胎H9C2心肌细胞为研究对象,将细胞分为正常对照组、H/R组、H/R+50μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+100μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+500μmol·L~(-1)TMZ组。H/R组、H/R+50μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+100μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+500μmol·L~(-1)TMZ组细胞行缺氧12 h/复氧4 h处理模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤; H/R+50μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+100μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+500μmol·L~(-1)TMZ组细胞在构建H/R模型前分别给予50、100、500μmol·L~(-1)TMZ共孵育1 h;正常对照组细胞常规培养;采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测各组心肌细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组心肌细胞培养基中LDH活性,采用实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法检测心肌细胞中Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和Nod样受体蛋白3(NLRP3) mRNA及蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,H/R组心肌细胞活性降低,LDH活性显著升高,细胞中Caspase-1、NLRP3、ASC mRNA和蛋白表达水平升高(P <0. 05);与H/R组比较,H/R+50μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+100μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+500μmol·L~(-1)TMZ组细胞活性显著增加,LDH活性显著下降,细胞中Caspase-1、NLRP3、ASC mRNA和蛋白表达水平降低(P <0. 05);与H/R+50μmol·L~(-1)TMZ组和H/R+500μmol·L~(-1)TMZ组比较,H/R+100μmol·L~(-1)TMZ组细胞活性增加,LDH活性下降,细胞中Caspase-1、NLRP3、ASC mRNA和蛋白表达水平降低(P <0. 05); H/R+50μmol·L~(-1)TMZ组细胞活性、LDH活性、细胞中Caspase-1、NLRP3、ASC mRNA和蛋白表达水平与H/R+500μmol·L~(-1)TMZ组比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 TMZ能通过抑制细胞焦亡对H/R的心肌细胞起保护作用; TMZ处理心肌细胞的最适浓度为100μmol·L~(-1)。     

青葙苷A抑制缺氧乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭能力的研究

目的 探索中药青葙子中的齐墩果烷型三萜化合物青葙苷A(celosin A,CA)对缺氧人乳腺癌MDAMB-231细胞的抗肿瘤作用及其相关机制。方法 CoCl2造模MDA-MB-231细胞缺氧状态,建立细胞体外缺氧的CA给药培养体系。采用细胞计数试剂盒（MTT）检测细胞活力,免疫荧光法观察细胞形态学和核凋亡变化。流式细胞术（FCM）法检测细胞凋亡比例;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测CA对肿瘤细胞迁移和侵袭的抑制能力;Western blot实验检测缺氧相关蛋白表达水平和EMT标志蛋白表达水平。结果 在缺氧状态下,高剂量的CA(20、40μmol/L)能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,诱导肿瘤细胞核凋亡的形态学改变,并且能有效促进早晚期细胞的凋亡率（PI-Annexin V-FITC促凋亡率：20μmol/L:+6.09%;40μmol/L:+18.50%）,有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、单核细胞趋化蛋白（MCP）、血管内皮生长因子（VEGF）表达;同时低剂量的CA(5、10μmol/L)能抑制乳腺癌MDA-MB...     

乳鼠心肌细胞缺氧时survivin基因和凋亡的相关性

目的 应用氯化钴(CoCl2)诱导乳鼠心肌细胞缺氧凋亡,探讨缺氧条件下大鼠心肌细胞survivinmRNA和蛋白的改变以及与心肌细胞凋亡的相关性.方法 (1)不同浓度(0,10,100,200,500,1 000 μmol/L)CoCl2干预心肌细胞;(2)流式细胞仪(Annexin V FITC/PI)分析细胞凋亡率(AR)和死亡率(DR);(3)免疫细胞化学、Rt-PCR和Western blot方法 明确survivin的表达.结果 (1)与常氧(CoCl2 0 μmol/L)比较,除10μmol/LCoCl2(P=0.069)外,其余不同浓度CoCl2干预均可显著增加心肌细胞AR(P<0.01)和DR(P<0.01);(2)与常氧比较,不同浓度CoCl2干预均可显著增加心肌细胞survivin mRNA(0.127±0.004、0.186±0.011、0.154±0.008、0.146±0.003、0.141±0.005和0.137±0.004,P<0.01)和蛋白(0.353±0.012、1.588±0.021、1.016±0.019、0.899±0.042、0.823±0.018和0.549±0.011,P<0.01)的表达,均以10 μmoL/L CoCl2时表达最高,且随CoCl2干预浓度增加而呈下降趋势(P<0.05);(3)心肌细胞AR和survivin mRNA(r=-0.617,P=0.014)及蛋白(r=-0.549,P=0.009)显著负相关.结论 缺氧可致心肌细胞发生凋亡并表达survivin mRNA和蛋白,在其凋亡进程中,survivin基因可能减轻心肌细胞的凋亡.     

羟基红花黄色素A对血管紧张素Ⅱ诱导H9c2心肌细胞焦亡的影响

目的 基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡信号通路探讨羟基红花黄色素A(Hydroxy saffloweryellow A,HSYA)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠H9c2心肌细胞焦亡及肥大的影响。方法 体外培养H9c2细胞,分别设空白对照组、模型组(1μmol/L AngⅡ)、HSYA低剂量组(1μmol/L AngⅡ+6.25μmol/L HSYA)、HSYA中剂量组(1μmol/L AngⅡ+12.5μmol/L HSYA)、HSYA高剂量组(1μmol/L AngⅡ+25μmol/L HSYA)、单给HSYA组(25μmol/L HSYA)。采用CCK-8法测定心肌细胞存活率;罗丹明标记的鬼笔环肽细胞染色法检测细胞面积;BCA法测定心肌细胞内总蛋白质含量;ELISA试剂盒检测细胞培养液中白细胞介素-1β(Interleukin1β,IL-1β)的分泌水平;Western blot法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18蛋白表达水平。结果 HSYA可明显提高AngⅡ诱导H9c2细胞活力下降;改善AngⅡ诱导的H9c...     

橙皮素对血管紧张素Ⅱ诱导H9C2心肌细胞肥大的影响

目的 探讨橙皮素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导H9C2心肌细胞肥大的影响.方法 使用不同浓度橙皮素（0.125、0.25、0.5、1μmol/L）和AngⅡ（1μmol/L）共同孵育H9C2心肌细胞12h,心肌细胞骨架骨骼α肌动蛋白（α-actinin）荧光染色评估H9C2细胞面积改变以及real-time PCR方法检测心肌肥厚标志物BNP、β-MHC的mRNA表达变化,以观察不同浓度橙皮素对AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大的影响,选择0.25 μmol/L橙皮素和AngⅡ（1μmol/L）共同孵育H9C2心肌细胞6、12、24h,观察橙皮素对AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大抑制作用的时间相关性.结果 橙皮素干预可以缓解AngⅡ诱导H9C2心肌细胞的细胞面积增大;橙皮素抑制了AngⅡ诱导的H9C2心肌细胞BNP、β-MHC的mRNA表达水平升高.结论 橙皮素能够抑制AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大,其有可能成为治疗心肌重构新的潜在药物.     

Damage Effect of Hydrogen Peroxide on Primary Cardiac Myocytes and H9c2 Cells

目的:考察过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞损伤作川的相似性.方法:选用H9c2心肌细胞与新生大鼠原代心肌细胞,应用MTT法测定不同浓度过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞活性的影响,观察两株细胞对过氧化氢损伤的敏感性.结果:600～1 600μ mol/L的过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞所造成的氧化损伤均具有浓度依赖性,1 200 μmol/L的过氧化氢使H9c2心肌细胞的存活率降低40％～60％ (P<0.01),表现出与原代心肌细胞相似的H2O2损伤敏感性(P>0.05).结论:H9c2心肌细胞与原代心肌细胞对过氧化氢氧化损伤具有相似的作用和浓度依赖性.     

热休克蛋白90对抗氯化钴引起的心肌细胞损伤

目的探讨热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在对抗氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用。方法应用不同浓度的CoCl2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Western-blot法检测HSP90的表达;双氯荧光素染色荧光显微镜照相检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)检测试剂盒分析SOD活性抑制率。结果在400～1000μmol/L浓度范围内,CoCl2处理H9C2心肌细胞36 h,呈剂量依赖性地抑制细胞存活率。在0.5～36 h时间范围内,600μmol/L CoCl2呈时间依赖性地促进H9C2心肌细胞HSP90的表达。2～16μmol/L HSP90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17demethoxygeldanamycin,17AAG)呈剂量依赖性地加重600μmol/L CoCl2对H9C2细胞存活率的抑制。...     

血管紧张素-(1-7)通过抑制ClC-3通道减轻高糖引起的心肌细胞损伤

目的 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]能否通过调控ClC-3通道保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤.方法 应用35 mmol/L葡萄糖处理H9c2心肌细胞24 h建立损伤模型.Ang-(1-7)或氯通道抑制剂与心肌细胞共处理24 h观察对高糖诱发的心肌细胞损伤的影响.应用细胞计数试剂盒8检测细胞存活率;Hoechst33258染色荧光显微镜照相术检测凋亡细胞的形态学改变;双氯荧光素染色荧光显微镜照相术测定细胞内活性氧水平;超氧化物歧化酶试剂盒测定活性;罗丹明123染色荧光显微镜照相术检测线粒体膜电位;Western blot法测定心肌细胞ClC-3通道蛋白的表达水平.结果 35 mmol/L葡萄糖处理H9c2心肌细胞24 h明显地增加ClC-3通道蛋白的表达水平(P<0.01);1μmol/LAng-(1-7)与葡萄糖共处理心肌细胞24 h显著地抑制葡萄糖对ClC-3通道蛋白表达的上调作用(P<0.01);1μmol/LAng-(1-7)或100μmol/L氯通道抑制剂氯通道抑制剂与葡萄糖共处理心肌细胞24 h减轻葡萄糖引起的损伤作用,表现为增加细胞存活率和超氧化物歧化酶活性,减小细胞凋亡数量,胞内活性氧水平及线粒体膜电位丢失(P<0.01).结论 ClC-3通道参与葡萄糖引起的心肌细胞损伤;Ang-(1-7)通过抑制ClC-3通道保护心肌细胞对抗葡萄糖引起的损伤.     

TGF-β2对心肌细胞H9C2转录因子表达的影响及其组蛋白H3乙酰化调控机制

目的 探讨转化生长因子-β2(transforming growth factor beta2,TGF-β2)对心肌细胞H9C2转录因子Mef2c和GATA4的影响及其与组蛋白H3乙酰化的关系.方法 比较TGF-β2对细胞生长的影响.利用Real-time PCR检测心肌细胞的心脏相关转录因子Mef2c和GATA4mRNA的相对表达量,筛选合适的TGF-β2干预浓度.采用Western blot检测心肌细胞乙酰化组蛋白H3(acetylated histone H3,acH3)的表达差异.染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP) Real-time PCR检测Mef2c和GATA4启动子区与acH3结合DNA的相对表达水平.比色分析法检测TGF-β2对心肌细胞的总体组蛋白乙酰化酶(HATs)活性的影响.结果 ①TGF-β2干预组相对于对照组心肌细胞的增殖能力增强(P＜0.05).②心肌细胞的心脏相关转录因子Mef2c和GATA4mRNA的相对表达量随着TGF-β2浓度的升高呈现先升高后降低的趋势,在5 μg/L的浓度时均达到最高,Mef2c mRNA相对表达量是对照组的1.8倍,GATA4mRNA是对照组的2.3倍(P＜0.05).③TGF-β2干预72 h后acH3蛋白表达量是对照组的4倍(P＜0.05),HATs活性是对照组的1.34倍(P＜0.05).④TGF-β2干预组Mef2c和GATA4启动子区组蛋白H3的乙酰化水平分别是对照组的2.56和2.16倍(P＜0.05).结论 5μg/L TGF-β2可以促进心肌细胞H9C2的分裂与增殖,并上调心脏相关转录因子Mef2c和GATA4的表达,组蛋白H3乙酰化水平的升高可能是Mef2c和GATA4表达上调的机制之一.     

氟化钠对心肌细胞LC-3、Beclin-1、 STAT-3表达的影响

目的:观察氟化钠对大鼠心肌细胞中自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、哺乳动物ATG6同源蛋白(Beclin-1)、信号转导与转录激活因子3(STAT-3)基因表达的影响.方法:将大鼠H9c2心肌细胞加入不同浓度氟化钠(NaF)的培养基,培养48 h后提取心肌细胞的RNA,RT-PCR法比较各组心肌细胞中LC-3、STAT-3、Beclin-1 mRNA的表达情况.结果:48 h后,与对照组相比,加入2.5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L NaF的心肌细胞中LC-3、Beclin-1的表达量明显增高(P<0.05),STAT-3相对表达量降低(P<0.05).结论:心肌细胞LC-3和Beclin-1 mRNA表达量随NaF浓度的增加而增加,STAT-3 mRNA表达量随NaF浓度的增加而减少,提示氟中毒导致心肌细胞活力降低可能与自噬的过度激活有关.     

沉默CrkL对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和生存力的影响及其机制

目的探讨沉默CrkL对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和生存力的影响及其机制。方法分别用空白试剂、阴性慢病毒和CrkL RNAi慢病毒(沉默CrkL mRNA)感染H9C2心肌细胞,并进行缺氧/复氧(H/R)干预。实验分为空白组、阴性病毒组、CrkL沉默组、空白+H/R组、阴性病毒+H/R组、CrkL沉默+H/R组。用RT-PCR法检测心肌细胞CrkL mRNA的表达,蛋白印迹分析法检测心肌细胞CrkL蛋白、p-ERK1/2蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果 CrkL沉默组较空白组和阴性病毒组,CrkL沉默+H/R组较空白+H/R组和阴性病毒+H/R组CrkL mRNA、CrkL蛋白、p-ERK1/2蛋白、细胞增殖率均降低(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率均增加(P<0.01)。结论沉默CrkL能加重缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和生存力降低。该过程可能是由p-ERK1/2蛋白表达降低介导的。